腺病毒为载体的单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦系统联合光动力治疗口腔恶性肿瘤的初步观察

目的应用腺病毒为载体的单纯疱疹病毒胸苷激酶(ADV-TK)/更昔洛韦(GCV)系统联合光动力疗法对口腔恶性肿瘤复发患者进行治疗,探讨此法治疗口腔恶性肿瘤的临床效果。方法选取10名口腔不同部位的恶性肿瘤复发患者,用光敏剂——血卟啉衍生物(HPD)静脉给药,选择相应激光输出功率定时照射,以ADV-TK基因行瘤体及周边注射,经GCV静脉输入治疗后,通过影像学及瘤体血流动力学分析进行临床疗效评估。结果经联合法治疗后,患者肿瘤明显缩小(甚至完全消失),瘤体内血流量降低,影像结果对比改变明显,治疗效果理想。结论将ADV-TK/GCV系统联合光动力治疗口腔恶性肿瘤具有显著的抗肿瘤效应,具备副作用轻微、临床安全性高的特点,为系统性治疗相关肿瘤提供了一种安全可靠的治疗手段。

腺病毒为载体的单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦联合手术治疗艾滋病合并唾液腺恶性肿瘤的初步观察

艾滋病患者免疫功能低下,可发生唾液腺恶性肿瘤，且常难以承受术后放、化疗带来的不良反应[1]。为降低术后高复发率和远处转移率．我们对2008年7月至2014年8月收治的8例唾液腺恶性肿瘤的艾滋病患者．应用腺病毒为载体的单纯疱疹病毒一胸苷激酶（ADV—TK）／更昔洛韦（GCV）系统代替放、化疗，取得初步疗效,报告如下。

单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦系统联合化疗药物治疗前列腺癌

目的探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦(HSV-TK/GCV)系统联合几种临床常用的化疗药物对激素非依赖性人前列腺癌(HRPC)细胞PC-3m的杀伤效应。方法将HSV-TK基因导入PC-3m细胞,采用活细胞拒染法、四甲基偶氮唑盐酶反应比色法(MTT法)检测单独给予GCV(10μmol/L)和顺铂(CDDP,10μmol/L)、足叶乙甙(VP-16,10μmol/L)、长春新碱(VCR,135 nmol/L)、氨甲喋呤(MTX,5 nmol/L)、5-氟尿嘧啶(5-Fu,1μmol/L)及苏拉明(100μmol/L)等物质,以及GCV联合上述药物对PC-3m细胞的体外杀伤效应,并用流式细胞术(FCM)检测GCV联合5-Fu或苏拉明后细胞坏死和凋亡状况。结果HSV-TK/GCV联合VP-16、VCR、5-Fu和苏拉明后杀伤PC-3m细胞的效应增强,联合CDDP后杀伤效应降低,联合MTX后则杀伤效应无明显改变。FCM检测显示,GCV联合5-Fu和苏拉明后72 h出现较大比例的细胞凋亡和细胞坏死,细胞凋亡比例分别为36.38%和35.51%,细胞坏死比例分别为33.05%和28.87%。结论HSV-TK/GCV系统联合某些化疗药物后可对前列腺癌(PCa)细胞发挥协同的杀伤效应。

肝移植联合腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦治疗肝细胞癌的研究探索

目的分析肝移植(liver transplantation,LT)联合腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦(adenovirus-mediated delivery of herpes simplex virus thymidine kinase/ganciclovir,ADV-TK/GCV)治疗肝细胞癌的临床疗效,希望能使更多超米兰标准的肝细胞癌患者从中获益。方法收集笔者团队2007年至今采用LT治疗的肝细胞癌患者的临床病理资料,根据是否联合ADV-TK/GCV将患者分为单纯LT组和LT+ADV-TK/GCV组,比较总体肝细胞癌患者及其中超米兰标准患者行单纯LT和LT+ADV-TK/GCV治疗后的5年累积总生存率和无复发生存率,同时采用Cox回归多因素分析影响肝细胞癌患者LT术后长期总生存时间和无复发生存时间的危险因素。结果本研究共收集到符合纳入条件的肝细胞癌患者216例,其中单纯LT组134例、LT+ADV-TK/GCV组82例,单纯LT组和LT+ADV-TK/GCV组累积5年总生存率分别为52.9%和48.5%、累积无复发生存率分别为41.5%和44.5%。216例肝细胞癌患者中超米兰标准患者162例,超米兰标准患者中单纯LT者101例、LT+ADV-TK/GCV者61例。所有肝细胞癌患者和超米兰标准肝细胞癌患者的单纯LT组和LT+ADV-TK/GCV组的基线资料比较差异均无统计学意义(P>0.05)。对所有肝细胞癌患者分析的5年总生存率和无复发生存率比较差异均无统计学意义(P>0.05);对超米兰标准肝细胞癌患者的生存分析发现,LT+ADV-TK/GCV患者的5年总生存率优于单纯LT患者(χ^(2)=4.11,P=0.047),但未发现二者的5年无复发生存率比较差异有统计学意义(以27个月生存时间为界,P=0.46、P=0.06)。Cox回归多因素分析影响肝细胞癌患者LT术后总生存率和无复发生存率的危险因素发现,患者的年龄小、累积肿瘤直径大及术前TNM分期晚降低LT术后患者无复发生存概率(P<0.05),而未发现联合ADV-TK/GCV治疗对长期无复发生存率的影响(P>0.05);同时发现累积肿瘤直径越小、术前TNM分期早、术前血清甲胎蛋白≤400μg/L及联合ADV-TK/GCV治疗能提高LT术后患者长期总生存率(P<0.05)。结论从本研究结果看,LT+ADV-TK/GCV治疗能改善超米兰标准肝细胞癌患者LT术后的长期总生存率,从而使更多LT患者从中获益。

hMAM-EP调控HSV-TK腺病毒载体的构建及其对乳腺癌细胞的靶向杀伤

目的:分别构建人乳腺珠蛋白(human mammaglobin,hMAM)基因增强子和启动子(enhancer and promoter ofhMAM,hMAM-EP)调控的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)报告基因和单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simple virus thymidine kinase,HSV-TK)自杀基因两种重组腺病毒载体,探讨hMAM-EP调控的HSV-TK在乳腺癌细胞特异性表达及其对乳腺癌的靶向治疗作用。方法:构建hMAM-EP-EGFP和hMAM-EP-TK重组质粒载体,将重组质粒目的基因转移到腺病毒骨架黏粒载体pAxcwit2,并转染HEK 293细胞获得重组腺病毒载体Ad-EP-EGFP和Ad-EP-TK。将Ad-EP-EGFP感染乳腺癌细胞T-47D、ZR-75-30和鼻咽癌细胞5-8F,荧光显微镜观察EGFP的表达。将Ad-EP-TK感染T-47D细胞,给予1、10、20、50μg/ml前药更昔洛韦(ganciclovir,GCV),观察TK基因对乳腺癌细胞的特异杀伤作用。结果:成功构建hMAM-EP调控的重组腺病毒载体Ad-EP-EGFP和Ad-EP-TK。Ad-EP-EGFP感染后,乳腺癌T-47D细胞可见EGFP表达,但ZR-75-30细胞和5-8F细胞无表达。与未感染组或感染Ad-EP-EGFP组相比,Ad-EP-TK重组腺病毒联合GCV(50μg/ml)组T-47D细胞存活率显著降低[(35.69±0.07)%vs(91.74±0.02)%,(87.69±0.11)%;P<0.05],且随GCV质量浓度的增加,T-47D细胞存活率逐渐下降,在MOI=100、GCV质量浓度分别为1、10、20、50μg/ml条件下,细胞存活率分别为(94.34±0.04)%、(86.26±0.02)%、(66.51±0.09)%、(35.69±0.07)%。结论:hMAM-EP调控的HSV-TK自杀基因在乳腺癌T-47D细胞中特异性表达,Ad-EP-TK联合GCV可靶向杀伤乳腺癌T-47D细胞。

胸苷激酶基因系统杀伤前列腺癌细胞的流式细胞术分析

目的 探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦(HSV-TK/GCV)自杀基因系统诱导人-前列腺癌细胞死亡的机制。方法利用脂质体介导的基因转染技术将携带HSV-TK基因的EB病毒表达载体导入激素非依赖性人前列腺癌(HRPC)细胞系PC-3m并给予GCV,采用流式细胞术(FCM)观察PC-3m细胞周期变化以及细胞坏死和凋亡情况。结果HSV-TK/GCV系统可使PC-3m细胞周期S期比例升高,高浓度GCV组尤其明显,S期细胞比例由16.73％升至33.60％;10和100μmol/L GCV作用72 h后,PC-3m细胞可出现较为明显的细胞坏死和凋亡,比例分别为13.54％、12.45％、34.70％和10.11％。结论细胞坏死和凋亡均参与了HSV-TK/GCV系统诱导的PCa细胞死亡,以细胞坏死比例稍高;TK自杀基因系统杀伤前列腺癌细胞时可能不依赖于其p53表达背景,因而具有更广阔的应用前景。