目的:建立并优化二丁酰环磷腺苷钠有关物质检测方法。方法:在日本药局方基础上,对各实验条件进行优化,得到最优检测条件,色谱柱为CAPCELL PAK C 18,流动相为pH 6.0磷酸盐缓冲液-甲醇,梯度洗脱,检测波长为258 nm,并进行了方法学验证。结...目的:建立并优化二丁酰环磷腺苷钠有关物质检测方法。方法:在日本药局方基础上,对各实验条件进行优化,得到最优检测条件,色谱柱为CAPCELL PAK C 18,流动相为pH 6.0磷酸盐缓冲液-甲醇,梯度洗脱,检测波长为258 nm,并进行了方法学验证。结果:系统适用性溶液中,各破坏溶液中主峰与相邻峰之间的分离度均大于1.5;溶液在48 h内稳定;各杂质含量在其限度浓度的50%~150%范围内与峰面积均呈现良好的线性关系,R 2>0.9994;加标实验中,N6-丁酰3′,5-环磷腺苷钠平均回收率为99.4%~106.6%;2′-O-丁酰3′,5-环磷腺苷钠平均回收率为88.8%~103.6%,环磷腺苷钠平均回收率96.9%~102.5%,均符合要求,对3批样品进行检测,均检出上述杂质。结论:该方法灵敏度高,分离效果、准确性、耐用性好,可用于二丁酰环磷腺苷钠有关物质检测,为其质量控制提供依据。展开更多
目的:探讨小鼠哮喘早期气道炎症发展病理生理学机制,为开展气道炎症及气道重构干预提供基础。方法:C57BL/6野生型小鼠分别气道滴注0.9%氯化钠溶液或烟曲霉提取物,3周后进行肺组织切片染色,检测血管新生。烟曲霉提取物滴注第5天收集血清...目的:探讨小鼠哮喘早期气道炎症发展病理生理学机制,为开展气道炎症及气道重构干预提供基础。方法:C57BL/6野生型小鼠分别气道滴注0.9%氯化钠溶液或烟曲霉提取物,3周后进行肺组织切片染色,检测血管新生。烟曲霉提取物滴注第5天收集血清、肺泡灌洗液和肺叶组织,进行炎症和铁死亡的评估。分离小鼠气道上皮细胞与烟曲霉提取物共孵育,检测溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7,member 11,SLC7A11),抗氧化酶谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4),酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(acyl CoA synthetase long-chain family member 4,ACSL4)和转铁蛋白(transferrin,TRF)的mRNA表达水平和蛋白表达水平,检测细胞上清中ATP的浓度。分离骨髓来源的巨噬细胞给予烟曲霉提取物刺激,与ATP受体P2X7抑制剂共孵育,检测上清中趋化因子的表达。结果:烟曲霉提取物气道滴注小鼠,肺组织浸润的炎症细胞增殖增加,肺泡灌洗液中趋化因子和细胞因子增加,肺组织血管新生增加。烟曲霉提取物刺激小鼠气道上皮细胞后,气道上皮细胞铁死亡抑制分子SLC7A11,GPX4表达降低,ACSL4表达升高,TRF表达升高,释放ATP增加。烟曲霉提取物孵育巨噬细胞,趋化因子浓度升高,给于ATP受体P2X7抑制剂后,趋化因子浓度降低。结论:烟曲霉提取物促进气道上皮细胞发生铁死亡,气道上皮细胞分泌的ATP促进炎症早期巨噬细胞分泌趋化因子,促进小鼠气道肺组织血管新生。展开更多
文摘目的:建立并优化二丁酰环磷腺苷钠有关物质检测方法。方法:在日本药局方基础上,对各实验条件进行优化,得到最优检测条件,色谱柱为CAPCELL PAK C 18,流动相为pH 6.0磷酸盐缓冲液-甲醇,梯度洗脱,检测波长为258 nm,并进行了方法学验证。结果:系统适用性溶液中,各破坏溶液中主峰与相邻峰之间的分离度均大于1.5;溶液在48 h内稳定;各杂质含量在其限度浓度的50%~150%范围内与峰面积均呈现良好的线性关系,R 2>0.9994;加标实验中,N6-丁酰3′,5-环磷腺苷钠平均回收率为99.4%~106.6%;2′-O-丁酰3′,5-环磷腺苷钠平均回收率为88.8%~103.6%,环磷腺苷钠平均回收率96.9%~102.5%,均符合要求,对3批样品进行检测,均检出上述杂质。结论:该方法灵敏度高,分离效果、准确性、耐用性好,可用于二丁酰环磷腺苷钠有关物质检测,为其质量控制提供依据。
文摘目的:探讨小鼠哮喘早期气道炎症发展病理生理学机制,为开展气道炎症及气道重构干预提供基础。方法:C57BL/6野生型小鼠分别气道滴注0.9%氯化钠溶液或烟曲霉提取物,3周后进行肺组织切片染色,检测血管新生。烟曲霉提取物滴注第5天收集血清、肺泡灌洗液和肺叶组织,进行炎症和铁死亡的评估。分离小鼠气道上皮细胞与烟曲霉提取物共孵育,检测溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7,member 11,SLC7A11),抗氧化酶谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4),酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(acyl CoA synthetase long-chain family member 4,ACSL4)和转铁蛋白(transferrin,TRF)的mRNA表达水平和蛋白表达水平,检测细胞上清中ATP的浓度。分离骨髓来源的巨噬细胞给予烟曲霉提取物刺激,与ATP受体P2X7抑制剂共孵育,检测上清中趋化因子的表达。结果:烟曲霉提取物气道滴注小鼠,肺组织浸润的炎症细胞增殖增加,肺泡灌洗液中趋化因子和细胞因子增加,肺组织血管新生增加。烟曲霉提取物刺激小鼠气道上皮细胞后,气道上皮细胞铁死亡抑制分子SLC7A11,GPX4表达降低,ACSL4表达升高,TRF表达升高,释放ATP增加。烟曲霉提取物孵育巨噬细胞,趋化因子浓度升高,给于ATP受体P2X7抑制剂后,趋化因子浓度降低。结论:烟曲霉提取物促进气道上皮细胞发生铁死亡,气道上皮细胞分泌的ATP促进炎症早期巨噬细胞分泌趋化因子,促进小鼠气道肺组织血管新生。
