pH/光热双重响应的纳米递送系统构建及对耐药膀胱癌细胞的联合治疗

以介孔聚多巴胺(MPDA)的制备为出发点,通过搭载化疗药物阿霉素(DOX)和包覆相变材料1-十四醇(PCM),构建了pH/光热双重响应的MPDA-DOX@PCM纳米递送系统,实现了对耐药膀胱癌细胞(BIU-87/ADR)的光热治疗(PTT)和化疗。结果表明,MPDA-DOX@PCM尺寸约为179 nm,DOX的最大搭载率为22%,光热转换效率高达49.1%。在pH=7.4和温度为25℃的条件下,DOX的累积释放率为4.57%;当pH值降为5.5和温度升高到45℃时,DOX的累积释放率可提高到60.13%。在808 nm激光辐照下,MPDA-DOX@PCM孵育的BIU-87/ADR细胞存活率降低至9.5%,证明了其优异的PTT/化疗联合治疗性能。

人参皂苷Rg3诱导膀胱癌细胞系EJ的凋亡作用

目的:探讨Rg3抑制膀胱癌细胞的作用及其诱导凋亡的机制。方法:用一定质量浓度的Rg3处理膀胱癌细胞系EJ细胞,MTT法检测细胞增殖活力和抑制率50%的时候药物的浓度(IC50);Hoechst33258荧光染色观察凋亡细胞的形态;流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡率;免疫细胞化学观察caspase-3的表达变化;琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯状带。结果:Rg3抑制EJ细胞生长,呈浓度依赖关系,Rg3处理细胞48 h的IC50为125.5 mg.L-1;经150 mg.L-1Rg3处理细胞24 h和48 h后,观察到典型的凋亡细胞形态,即染色质凝集、核片段化、凋亡小体、核内致密的颗粒状荧光及caspase-3的表达增加;并呈时效依赖关系;用75 mg.L-1Rg3处理细胞24,48,150 mg.L-1的Rg3处理细胞48 h后,Rg3诱导了细胞凋亡和调节细胞周期,S期和G2/M期的细胞比率增加,G0/G1的细胞比率下降;凋亡率从对照组的(1.05±0.17)%分别上升到(8.41±0.98)%,(18.57±2.20)%和(33.98±1.64)%,琼脂糖凝胶电泳检测出典型的DNA梯形条带,其效应随药物浓度的增加和作用时间的延长而增强。结论:Rg3可通过诱导EJ细胞凋亡而发挥其抑制细胞增殖的作用。

猪苓多糖对膀胱癌细胞钙离子浓度的影响

目的 观察猪苓多糖对人T2 4膀胱癌细胞内钙离子 (Ca2 +)浓度的影响 ,探讨猪苓多糖抗癌机理。方法 体外培养人T2 4细胞经钙荧光指示剂 (calciumcrimson AM )负载后 ,用激光扫描共聚焦显微镜测定猪苓多糖作用前后细胞内Ca2 +随时间的变化。结果 猪苓多糖低剂量 (0 .2mg·L- 1)使T2 4细胞内Ca2 +降低 ,高剂量 (>1mg·L- 1)使T2 4细胞内Ca2 +升高 ,最后维持在高钙水平上。猪苓多糖主要促进细胞核内Ca2 +升高 ,细胞浆Ca2 +无明显改变。结论 猪苓多糖可引起T2 4细胞内Ca2 +水平的显著变化 ,而且这种变化主要表现在细胞核内 。

华蟾素诱导膀胱癌细胞凋亡的实验研究

目的:探讨华蟾素对人膀胱癌细胞株BIU87细胞凋亡的影响。方法:采用MTT法测定华蟾素对体外膀胱癌细胞的抑制作用,倒置显微镜、TUNEL法观察细胞形态变化,用流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期的变化;半定量RT-PCR法检测凋亡相关基础Bcl-2、bax、caspase-3mRNA表达的变化,比色法测定caspase-3活性变化。结果:MTT法显示,华蟾素对膀胱癌细胞有显著的增殖抑制作用与华蟾素的浓度和作用时间有关,0.2mg/L华蟾素作用72h可以杀死50%以上的细胞;可诱导BIU87细胞凋亡,细胞周期停滞在S-和G2期;凋亡相关基因Bcl-2表达减少,bax无明显变化,caspase-3表达及活性增高。结论:华蟾素在体外有较强的抗膀胱癌作用,细胞凋亡的发生可能与细胞周期阻滞,Bcl-2和caspase-3基因表达及活性变化有关。

水飞蓟宾对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用及其机制

目的研究水飞蓟宾(Silibinin,SB)在体外对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用及其相关机制。方法采用MTT法观察不同浓度SB对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用;倒置显微镜下观察细胞形态变化;RT-PCR检测凋亡抑制因子Survivin的mRNA表达变化。结果MTT检测发现:随着SB浓度增加和作用时间延长,对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用增强,且各组间比较均有显著性差异(P<0.01),并呈时间-剂量依赖关系;倒置显微镜发现应用SB干预后,5637细胞体积缩小,变形,胞浆浓缩,核固缩深染;人膀胱癌细胞株5637中Survivin的mRNA表达随着SB浓度增加和时间延长相应下降。结论SB可抑制人膀胱癌细胞株5637的增殖;并下调凋亡抑制因子Survivin的mRNA表达。

IL-18基因转染膀胱癌细胞的建立及其抑瘤作用研究

目的将IL-18基因转染膀胱癌细胞(T24),检测该细胞体内外的凋亡变化,探讨IL-18的抗肿瘤作用机制。方法用含IL-18的基因IL-18/PA317转染T24细胞,经G418筛选后获得IL-18/T24阳性克隆。采用RT-PCR鉴定转染细胞mRNA的表达;用ELISA法检测IL-23/MA-891细胞培养上清中IL-18的分泌;用MTT比色法检测细胞体外增殖能力;观察IL-18/T24细胞生长情况、移植瘤的生长情况;用流式细胞技术检测体外和体内的细胞凋亡率。结果成功将IL-18基因转染T24细胞获得高表达IL-18细胞IL-18/T24。转染IL-18基因不影响T24细胞的体外生长和细胞凋亡,但体内IL-18基因转染组肿瘤生长明显受到抑制,肿瘤组织细胞凋亡率增高(P<0.01)。结论转染IL-18基因后对膀胱癌细胞(IL-18/T24)的体外凋亡无影响,但在体内IL-18能够诱导细胞凋亡,产生抗明显肿瘤作用。

光动力作用对膀胱癌细胞株BIU-87凋亡发生率的影响

目的 :研究光动力抑癌作用机制。方法 :采用流式细胞仪检测光动力作用后人膀胱癌细胞株BIU -87凋亡发生率。结果 :光动力实验组人膀胱癌细胞株BIU -87凋亡发生率达 2 6.11± 2 .5 9% ,与对照组相比 ,差异非常显著性 (P <0 .0 1)。结论 :光动力作用能有效诱导人膀胱癌细胞株BIU -87的凋亡发生。这可能是其抑癌作用机制之一。

原苏木素B对膀胱癌细胞BTT和T24的增殖抑制作用

苏木为豆科云实属植物苏木（Caesalpinia sappan L）的干燥心材,具有行血祛瘀,消肿止痛的功能。近年来的研究结果表明,苏木提取物对多种肿瘤细胞具有显著的抑制作用[1-3]。原苏木素B是苏木中主要成分之一[4,5],也是中国药典中苏木药材的质量标准检测指标[6],目前尚未见到关于原苏木素B的抑癌作用报道,本文以小鼠膀胱癌细胞BTT和人膀胱癌细胞T24肿瘤细胞为靶细胞。

北五味子多糖对人膀胱癌细胞体外增殖和凋亡作用的研究

目的探讨北五味子多糖(Schisandra chinensis polysaccharide,SCP)对体外培养的人膀胱癌细胞T24的作用.方法采用SCP 50、100、200μg/mL 3个剂量处理体外培养的人膀胱癌细胞T24,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测SCP对T24细胞增殖的抑制效应,显微镜下观察细胞的形态学改变;流式细胞仪(FCM)检测SCP对细胞周期百分率的影响;Hoechst33258荧光染色法检测SCP对T24细胞凋亡的影响;Western blot(WB)法检测SCP对T24细胞中cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响.结果与对照组比较,SCP可显著抑制T24细胞增殖(P<0.05),促进T24细胞凋亡;FCM结果显示:与对照组比较,SCP能明显促进凋亡,增加凋亡率(P<0.05);SCP能明显降低T24细胞中Bcl-2蛋白表达,提高Bax蛋白表达,增加cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9的蛋白表达,与对照组比较差异显著(P<0.05).结论SCP能抑制人膀胱癌T24细胞增殖,并促进其凋亡,其机制可能与诱导细胞凋亡和调控相关基因表达有关.

人参皂苷Rg3对膀胱癌细胞血管生成相关蛋白的表达及癌细胞生长和转移的影响

目的探讨人参皂苷Rg3对表皮生长因子受体酪氨酸蛋白激酶(EGFR-TPK)和DNA拓扑异构酶I(DNA TOP I)的抑制作用,并阐明其对膀胱癌细胞增殖、侵袭和血管生成的抑制作用机制。方法不同浓度人参皂苷Rg3加入到EGFR-TPK、DNA TOP I和人膀胱癌细胞株S637中,用ELISA法研究人参皂苷Rg3对EGFR-TPK和DNA TOP I的抑制作用;溴化3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑(MTT)法测定人参皂苷Rg3对人膀胱癌细胞株S637细胞和人正常膀胱上皮细胞(SV-HUC-1)生长的抑制作用;Transwell法检测人参皂苷Rg3对S637细胞侵袭的抑制作用;酶标仪法检测人参皂苷Rg3对细胞凋亡蛋白Caspase-3活性的影响;Western blot法检测人参皂苷Rg3存在下,人膀胱癌细胞株S637中还氧化酶-2(COX-2)、血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、小窝蛋白-1(CAV-1)及干细胞标志物(SOX-2)的表达。结果人参皂苷Rg3对EGFR-TPK和DNA TOP I(半抑制率IC_(50)分别为35.32±3.12和8.32±1.21μmol·L^(-1))、S637细胞生长(半抑制率IC_(50)为35.11±2.32μmol·L^(-1))都具有良好的抑制能力,但对于SV-HUC-1细胞,人参皂苷Rg3则表现了较低的毒性;人参皂苷Rg3与空白对照组比较能够诱导肿瘤细胞穿过滤膜的数量减少(P<0.01);与空白对照组比较,人参皂苷Rg3能显著提高S637细胞中Caspase 3活性(P<0.05);人参皂苷Rg3能够下调HIF-1α、COX-2、SOX-2及VEGF的表达,上调CAV-1的表达(P<0.05,P<0.01)。结论低毒性的人参皂苷Rg3通过多靶向的降低EGFR-TPK、DNA TOP I活性和HIF-1α、COX-2、SOX-2及VEGF的表达,上调CAV-1的表达和激活Caspase 3活性的方式,对膀胱肿瘤细胞的侵袭、增殖和血管生成产生抑制作用。

CD3AK细胞联合BCG对膀胱癌细胞的体外杀伤活性研究(英文)

目的 探讨CD3AK细胞对膀胱癌细胞的体外杀伤活性,以及CD3AK细胞与BCG联合作用于膀胱癌细胞的效应。方法 采用抗CD3单抗和IL-2共同刺激健康人外周血单个核细胞诱导出CD,AK细胞;以流式细胞仪测定细胞表型;用MTT法测定CD,AK以及CDaAK联合BCG对膀胱癌细胞系(T24)的杀伤活性。结果 CD3AK细胞为异质细质细胞群,其细胞类型主要是CD8+细胞;在效靶比为10∶1及20∶1时,培养4d的CD,AK细胞BCG联合作用于T24细胞的杀伤率高于二者分别对T24细胞的杀伤率。结论 CD3AK细胞是一种高效的抗肿瘤效应细胞,对膀胱癌细胞具有较强的杀伤作用;CD3AK细胞与BCG对膀胱细胞呈协同杀伤作用。CD3AK细胞在膀胱癌过继免疫治疗中具有重要的临床应用前景。

硒化麒麟菜多糖对膀胱癌细胞生长、凋亡的作用及Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白表达的影响

目的研究硒化麒麟菜多糖对膀胱癌T24细胞生长、凋亡的作用及Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白表达的影响。方法体外培养T24膀胱癌细胞,分别利用0、0.125、0.25、0.5、1 mg/mL的硒化麒麟菜多糖处理T24细胞24h、48h、72h,利用噻唑蓝(MTT)检测各组细胞增殖情况,0.25、0.5、1mg/mL的硒化麒麟菜多糖处理细胞48h后,流式细胞仪检测T24细胞周期分布及细胞凋亡,Western-blot检测T24细胞Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase-3)蛋白表达。结果与0mg/mL处理相比,0.25、0.5、1mg/mL的硒化麒麟菜多糖处理抑制T24细胞增殖,差异有非常显著性统计学意义(P<0.01);使用0.125mg/mL硒化麒麟菜多糖处理,作用24h时对细胞增殖抑制不显著(P>0.05),作用48h、72h时对细胞增殖具有较为明显抑制作用(P<0.05)。1mg/mL的硒化麒麟菜多糖作用后细胞凋亡率高达(23.56±0.96)%。与0 mg/mL处理相比,0.25、0.5、1 mg/mL的硒化麒麟菜多糖作用后,处于G0/G1期的细胞从(52.12±1.74)%分别增加至(64.32±2.42)%、(70.72±1.71)%、(76.09±2.28)%。处于G2/M期和S细胞明显减少(P<0.05),Bcl-2蛋白的表达明显降低(P<0.01),Bax、Cleaved-caspase-3蛋白的表达明显升高(P<0.01)。结论硒化麒麟菜多糖可能通过调控Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3蛋白表达抑制T24细胞增殖,阻滞细胞周期进程,促进细胞凋亡。

CpG寡聚脱氧核苷酸抑制人膀胱癌细胞在裸鼠体内的生长

目的:观察不同剂量的CpG ODN 1668对裸鼠皮下接种人膀胱移行细胞癌T24细胞生长的抑制作用,并与卡介苗的作用进行比较。方法:通过皮下接种T24细胞,建立裸鼠皮下接种人膀胱癌细胞的动物模型。将裸鼠随机分为5组,(1)对照组;(2)BCG组;(3)小剂量CpG ODN 1668组;(4)中等剂量CpG ODN 1668组;(5)大剂量CpG ODN 1668组。自肿瘤细胞接种后第1天起给药,共4次(第1、8、15、22天),在肿瘤周围多点注射相应药物(早期给药);同样方式另设5组动物,自肿瘤细胞接种后第7天起(第7、14、21、28天)于肿瘤周围多点注射相应药物(延迟给药)。观察肿瘤体积和裸鼠的生存率。结果:早期给药时,在CpG ODN 1668各剂量组和BCG组,肿瘤生长均被抑制,裸鼠的生存期得到延长。中等剂量和大剂量CpG ODN 1668组对肿瘤细胞生长的抑制作用强于BCG组。延迟给药时,CpG ODN 1668各剂量组肿瘤体积和裸鼠的生存率,与对照组和BCG组的差异无显著统计学意义。结论:CpG ODN 1668的早期应用,可抑制人膀胱癌细胞T24在裸鼠体内的生长,并表现为剂量依赖性;其抗肿瘤效应是非T细胞依赖的。当加大使用剂量时,CpG ODN 1668对膀胱癌细胞生长的抑制作用强于BCG。而当肿瘤负荷较大时,CpG ODN 1668和BCG的延迟使用对膀胱肿瘤细胞在裸鼠体内的生长无抑制作用。

大蹼铃蟾蛋白提取物对膀胱癌细胞株的抑制作用及对端粒酶的影响

目的 探讨大蹼铃蟾蛋白提取物对膀胱癌细胞株的抑制作用及对端粒酶的影响。方法 采用肿瘤细胞培养方法 ,检测大蹼铃蟾蛋白提取物对膀胱癌细胞株T2 4、BIU 87、ScaBer的抑制作用 ;以TRAP PCR ELISA方法检测大蹼铃蟾蛋白提取物对膀胱癌细胞株端粒酶表达的影响。结果 大蹼铃蟾蛋白提取物表现出对膀胱癌细胞株有较强的抑制作用 ;对膀胱癌细胞株端粒酶表达则无影响。结论 大蹼铃蟾蛋白提取物对多个膀胱癌细胞株具有直接细胞杀伤作用 。

光敏化BPD-MA后膀胱癌细胞凋亡的研究

为了研究光动力抑癌作用机制,采用流式细胞仪和TUNEL法检测激光光敏化BPD-MA后人膀胱癌细胞株B IU-87细胞凋亡的发生状况。激光光敏化BPD-MA后人膀胱癌细胞株B IU-87组细胞凋亡发生率明显增高,许多细胞核呈棕黄色,高倍镜下可见细胞核内有大量棕褐色颗粒,与阳性对照中凋亡细胞核的特征相符合,而对照组此种细胞少见。TUNEL阴性对照中细胞核均呈蓝色。结果表明,激光激活BPD-MA光动力作用明显诱导人膀胱癌细胞株B IU-87细胞发生凋亡,这可能是其抑癌作用机制之一。

人端粒酶催化亚基启动子联合mad1基因体外抑制膀胱癌细胞的研究

目的探讨人端粒酶催化亚基(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)启动子联合mad1基因对膀胱癌细胞T24和EJ细胞的生长抑制作用及机制。方法采用细胞计数、电子显微镜、流式细胞术、RT-PCR及免疫组化等方法,观察hTERT启动子联合mad1基因表达质粒转染T24和EJ细胞后的膀胱肿瘤细胞的增殖能力、生长周期、细胞超微结构的变化以及hTERT和TGF-β1mRNA基因和蛋白表达影响。结果转染hTERT启动子联合mad1基因后对T24和EJ细胞生长有明显抑制作用、出现凋亡小体和细胞周期相的改变,S期细胞明显减少,G0/G1期细胞明显增多,下调T24和EJ细胞hTERT和TGF-β1的mRNA表达,并能抑制hTERT和TGF-β1蛋白表达。结论hTERT启动子联合mad1基因能够抑制膀胱肿瘤细胞的增殖能力,可望为膀胱癌基因治疗提供新思路。

环孢素A对膀胱癌细胞系FasL表达的调节及免疫学作用

目的探讨环孢素A(CSA)对膀胱癌BIU-87细胞表达FasL的调节作用 。方法CSA分别与BIU-87和Jurkat T细胞共同培养，以MTT法检测2种细胞的存 活 数。再将CSA与BIU-87细胞和Jurkat T细胞共同培养，以免疫组化和免疫荧光流式细胞术 检 测BIU-87细胞FasL的表达；以FCM分析Jurkat T细胞的凋亡。结果CSA ≤ 50 μg/mL时对两细胞系均无毒性作用（P>0.05）；CSA作用后的BIU-87细胞FasL阳性 表达百 分率和平均荧光指数及 FasL介导 Jurkat T细胞凋亡百分率与对照组间有显著性差异(P <0.01)。结论CSA≤50 μg/mL时对BIU-87和Jurkat T细胞的活性和 增殖无 影响，但能使BIU-87细胞FasL的表达下调，阻止膀胱癌细胞对机体免疫的逃逸作用。

光动力作用对膀胱癌细胞线粒体相关调控蛋白Bcl-2/Bax表达的影响

目的探讨激光活化BPD-MA光动力诱导肿瘤细胞凋亡的可能机制。方法应用免疫组织化学染色检测激光活化BPD-MA光动力作用后人膀胱癌细胞B IU-87线粒体相关调控蛋白Bc l-2和Bax蛋白表达水平。结果激光活化BPD-MA光动力作用后膀胱癌细胞线粒体相关调控蛋白Bc l-2表达显著低于对照组(P<0.05),而Bax蛋白表达水平无明显改变(P>0.05),但Bax/Bc l-2比值较对照组明显上升(P<0.05)。结论激光活化BPD-MA光动力作用后人膀胱癌细胞B IU-87线粒体相关调控蛋白Bc l-2表达水平的下降、Bax/Bc l-2比值的上升。激光活化BPD-MA光动力作用可能通过调控线粒体相关调控蛋白Bc l-2和Bax蛋白表达水平诱导人膀胱癌细胞株B IU-87发生凋亡。

大蒜素诱导人膀胱癌细胞株BIU87细胞凋亡的研究

【目的】探讨大蒜素对人膀胱癌细胞株BIU87细胞凋亡的影响。【方法】MTT法检测大蒜素对BIU87细胞生长的影响;倒置显微镜、TUNEL法观察细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期的变化;半定量RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-2,bax,caspase-3mRNA表达的变化,比色法测定caspase-3活性变化。【结果】大蒜素能明显抑制BIU87细胞的生长,与大蒜素的浓度和作用时间有关,5mg/L大蒜素作用5d可以杀死50%以上的细胞;可诱导BIU87细胞凋亡,细胞周期阻滞在S-和G2期;凋亡相关基因bcl-2表达减少,bax无明显变化,caspase-3表达及活性增高。【结论】诱导细胞凋亡是大蒜素发挥抗瘤效果的一种重要机制;凋亡发生可能与细胞周期阻滞、bcl-2和caspase-3基因表达及活性变化有关。

青春双歧杆菌细胞壁免疫调节作用及其对膀胱癌细胞抑制作用研究

目的探讨青春双歧杆菌细胞壁对小鼠腹腔巨噬细胞的激活作用及其对人移行细胞膀胱癌细胞的体外抑制作用。方法①选择KM小鼠,随机分成BCW注射组和对照组。采用超声波细胞粉碎法提取双歧杆菌细胞壁(BCW),BCW注射组小鼠腹腔注射BCW悬液,对照组腹腔注射生理盐水,连续7天。第8天处死小鼠,无菌收集腹腔巨噬细胞,以ELISA法分别测定腹腔巨噬细胞产生的细胞因子IL-2、IFN-γ的含量;②采用MTT法测定双歧杆菌细胞壁体外对人移行细胞膀胱癌细胞的抑制作用:将处于对数生长期的人移行细胞膀胱癌细胞(T24)接种于细胞培养板中,加入不同浓度的BCW,继续培养,1、3、5天换液,每孔加入MTT,继续培养4h,每孔加入DMSO,振荡匀,在酶标仪上测定490nm处的A值,计算抑瘤率;镜下观察细胞生长状态:将处于对数生长期的T24细胞接种于内含玻片的细胞培养板中,培养24h后,加入BCW,继续培养24h、72h、120h,取出玻片,染色,镜下观察细胞形态的改变。对照组不加BCW,每次更换培养液。结果①青春双歧杆菌细胞壁注射组腹腔巨噬细胞产生的IL-2、IFN-γ的含量均高于对照组,两者比较具有显著性差异(P<0.01);②不同浓度双歧杆菌细胞壁在体外均能抑制T24细胞生长,且浓度越大,对该细胞的抑制作用越强,且镜下观察到T24细胞的生长状态逐渐减弱。结论青春双歧杆菌细胞壁成分能激活小鼠腹腔巨噬细胞,使之分泌多量的IL-2、IFN-γ,并且在体外能抑制人移行细胞膀胱癌细胞的生长。