膜片钳技术在生物医学研究中的联合应用及其发展趋势

膜片钳技术是研究离子通道电活动的“金标准”,不仅用于研究生理和病理条件下细胞膜离子通道电生理特性和膜电位的变化,还广泛应用于分析药物作用离子通道机制、优化化合物结构以及评价药物毒性等方面。目前,膜片钳技术已成为现代细胞电生理学研究的常规方法,广泛应用于神经科学、心血管科学、药理学、细胞生物学等领域并取得了丰硕的研究成果。近年来,随着基因组学、光遗传学、质谱技术和芯片技术等的不断涌现和日益完善,这些新技术与膜片钳技术的联合应用极大促进了以离子通道为靶点的药物研发和对疾病发病机制的深入理解,进一步拓宽了生命现象的研究维度,促进了生命科学研究的发展。

穿孔膜片钳技术在离子通道电流研究中的应用

目的:传统的全细胞膜片钳技术在离子通道电流的记录中存在机械稳定性差,对细胞的损伤大,以及胞内液的被渗析影响与细胞内信号转导和离子通道调控有关的第二信使物质的正常运行。而穿孔全细胞膜片钳技术应用二性霉素B或制霉菌素在细胞膜上形成特定的孔道,选择性地允许一些离子和大分子物质,从而使细胞内环境保持相对稳定,在一定程度上弥补了上述缺陷,实验成功率也相应提高。本文就穿孔膜片钳技术在全细胞离子通道电流记录中的应用进行探讨。

小鼠海马神经元急性分离和膜片钳技术的应用

为了获得适用于膜片钳实验技术的单个海马神经元,应用酶消化及机械分离法,急性分离出生10～13 d的昆明小鼠得到单个海马神经元.通过倒置显微镜直接观察和全细胞膜片钳技术分别对分离得到的海马细胞的形态学和电生理学特征进行研究.通过实验可得,急性分离所得活性较好的海马神经元胞体具有锥形胞体和顶树突特征,立体感强.在全细胞膜片钳记录模式下可记录到全细胞电流及钠、钾通道电流.由实验结果可知,该方法可以得到形态和生理特征良好的单个海马神经元,证实该方法适用于膜片钳技术的研究,对深入探讨药物、物理因子等对海马离子通道及信号转导机制的作用有重要的应用价值.

Amphotericin B在全细胞穿孔膜片钳技术中的应用研究

目的:为研究海德氏突触的电生理特性,建立用amphotericin B穿孔的膜片钳技术。方法:本文应用两性霉素B(amphotericin B)在小鼠脑干的calyx细胞上进行穿孔膜片钳技术的研究。结果:应用amphotericin B进行穿孔后,通道电流衰减现象显著变慢。Amphotericin B的最适浓度为400μg/ml。结论:本研究摸索出了一种稳定的穿孔膜片钳全细胞记录技术,可以更有效,更真实的反应神经元通道电流的电生理特性。为穿孔膜片钳技术在听觉信息传导和调控研究中的应用提供了基础资料。

适于膜片钳技术的大鼠肝Kupffer细胞急性分离和鉴定

目的:建立一种适于膜片钳技术(PCT)的大鼠肝Kupffer细胞的急性分离方法.方法:经门静脉插管,用无Ca2+,Mg2+K-H原位灌注液冲洗后,IV型胶原酶原位循环灌注消化,Percoll不连续密度梯度离心,分离制备大鼠肝Kupffer细胞,选择性贴壁纯化.用体内、体外吞噬功能(炭素墨水或聚苯乙烯乳珠)实验鉴定制备的肝Kupffer细胞.用全细胞膜片钳记录技术测定Kupffer细胞电流.结果:分离获得的大鼠肝Kupffer细胞形态多样,典型的为多角形或星形,细胞分离产量为2.5-3.5×106/g,细胞纯度90%,贴壁率为39.4%.用台盼蓝染色鉴定,细胞活性大于90%,多数细胞明显吞噬颗粒.易用于PCT,且记录到钙池操纵的Ca2+通道电流(store-operatedCa2+channelcurrents,Isoc).结论:用胶原酶原位循环灌注消化,结合Percoll不连续密度梯度离心和选择性贴壁纯化,成功分离制备出高产、纯度高的适于PCT的肝Kupffer细胞.

膜片钳技术在心肌细胞药理效应研究中的应用

目的 介绍和阐述目前国内外利用膜片钳技术及其它相关方法在心肌细胞药理学研究的现状和发展趋势 ,探讨膜片钳技术在心肌细胞药理学及生理学等领域的应用前景。方法 以国内外有影响力和代表性的期刊上所发表的文献为基础 ,对膜片钳技术应用于心肌细胞药理效应研究的状况进行分类、分析、归纳和综述。结果与结论 膜片钳技术的理论和方法学在近 10年的快速发展以及与其它技术的结合 ,拓宽了心肌细胞药理研究的领域。在此基础上进行以人心肌细胞为重点研究对象的药理学和生理学等研究将是今后的热点和趋势 ,具有现实性。

膜片钳技术在心血管及药理学研究中的应用

膜片钳技术是一种以记录通过细胞膜上的各种离子通道的离子电流来反映细胞膜上单一的或多个的离子通道活动的技术。通过微电极与细胞膜之间形成紧密接触，采用电压钳或电流钳技术对生物膜上离子通道的电活动进行记录。可测量1μA的电流灵敏度，1μm的空间分辨率和10μs的时间分辨率，为从分子水平了解生物膜离子通道的开启和关闭、动力学选择性和通透性等膜信息提供了直接的手段。膜片钳技术的发展不过20多年时间，但却广泛的应用于心血管生理学、病理生理学及药理学的研究中，

膜片钳技术的新进展及其在药物高通量筛选中的应用

作为先进的细胞电生理技术,膜片钳一直被奉为研究离子通道的“金标准”。应用膜片钳技术可以证实细胞膜上离子通道的存在并能对其电生理特性、分子结构、药物作用机制等进行深入的研究。基因组学、蛋白质组学研究表明,以离子通道为靶标的药物研究在未来具有很大的发展空间。为了突破由于筛选技术所造成的针对离子通道为靶标的药物研发的瓶颈,近年来,对膜片钳技术进行了改进以适合药物高通量筛选的需求,由此产生了一些新的技术。本文就最近几年膜片钳技术的新进展及其在药物高通量筛选中的应用进行了综述。

膜片钳技术结合血清药理学方法揭示中药作用机理

目的:介绍和阐述目前国内外利用膜片钳技术及血清药理学方法在中药研究中的现状和发展趋势,探讨二者在中药研究领域的应用前景。方法:以国内外有影响力和代表性的期刊上所发表的文献为基础,对膜片钳技术和血清药理学方法应用于中药研究的状况进行分析、归纳和综述。结果与结论:膜片钳技术近年来渗透到中医药研究的各个领域,对中医药研究水平的提高起到了很大的推动作用。运用血清药理学方法,借助现代化手段,中医药研究将向更深层发展,中药作用及机制将可能被全面揭示。

膜片钳技术在动脉粥样硬化研究中的应用

膜片钳技术是一种先进的电生理技术,在生命科学研究中已得到了广泛的应用.最近几年已把它运用于研究动脉粥样硬化血管平滑肌细胞离子通道电生理特性的改变.研究发现血管平滑肌细胞的凋亡与K+通道活动增加有关,在动脉粥样硬化发生与发展过程中大电导型钙激活钾通道起着重要的功能作用.某些药物影响动脉粥样硬化血管平滑肌细胞离子通道而发挥作用.膜片钳技术给动脉粥样硬化发病机理研究带来了新的亮点.

血清药理学与膜片钳技术对川芎扩冠离子机制的探讨

目的通过观察分析川芎灌胃动物后分离的含药血清(含川芎血清)对猪冠状动脉血管条及平滑肌细胞BKCa的作用,旨在从细胞分子水平阐述其扩冠机制,也为探索建立血清药理学与膜片钳技术结合于中药研究的联合技术奠定基础。方法用膜片钳实验及冠状动脉血管条实验观察含川芎血清、川芎主要活性成分川芎嗪(阳性对照)和空白血清(阴性对照)对BKCa的作用以及对离体猪冠状动脉血管条的影响。结果在内面向外式和贴附式膜片上,含川芎血清和空白血清对BKCa通道无激活作用,但在内面向外式膜片上,阳性对照川芎嗪对BKCa通道具有激活作用,且川芎嗪具有对抗高钾(45mM)去极化所致的冠脉血管条收缩的作用,含川芎血清和空白血清无此作用。结论川芎嗪对BKCa通道具有直接激活作用,含川芎血清在体外实验中对BKCa通道无明显激活作用。

膜片钳技术在高血压研究中的应用

膜片钳技术（patch-clamp technique）是1976年由Nehetr和Sakroann在电压钳的基础上发展而来的一种记录细胞膜离子通道电生理活动的技术。通过微电机与细胞膜之间形成紧密接触,采用电压钳或电流钳技术对生物膜上离子通道的电活动进行记录。

物理因子对神经系统影响的研究现状和膜片钳技术的应用

人们生活的环境中物理因子的影响无处不在,物理因子对人神经系统的影响也是十分的突出。目前这方面的研究也很多,但是方法各不相同并且只是在生物整体或器官水平上的。膜片钳技术是一种先进的电生理技术,通过该技术研究物理因子对神经系统的影响,可以在细胞和分子水平上揭示物理因子作用下神经系统的某些重要的生理功能。文中回顾了国内外物理因子对神经系统的研究方法和现状,简要介绍神经系统结构和功能以及膜片钳的基本原理,提出了膜片钳技术在研究物理因子对神经系统影响中的可能应用与前景。

膜片钳技术原理及在中药研究中的应用

通过探讨记录细胞离子通道中的离子电流来反映细胞膜单一或多个离子通道分子活动的膜片钳技术和工作原理,以及其在中药单一提取成分、中药单味药以及中药复方研究中的应用,为中药在不同应用情况下的药效分析和研究提供依据。

细胞电生理与膜片钳技术

本讲座介绍细胞电生理的基本知识及其基本方法。包括细胞的简单结构、细胞膜的化学组成和生物电信号的产生机制。膜片钳技术是现代电生理研究的基本方法 ,它涉及实验系统的组建和实验过程中的关键技术。

膜片钳技术在昆虫毒理学研究中的应用

膜片钳技术是现代电生理研究的基本方法 ,它以细胞膜上的离子通道为研究对象。离子通道是多种杀虫剂的作用靶 ,因此作为研究离子通道基本手段的膜片钳技术在药剂神经性作用机理研究中越来越受到重视。

膜片钳技术在经络信息传递研究中应用探讨

膜片钳技术自上世纪70年代建立以来,被广泛应用于生理学、药理学等多种学科的基础研究和应用研究中,为解决生物信息的跨膜信号转导问题提供了最先进的研究手段。针灸通过经络从多方面、多水平、多途径产生的治疗效应,也是一种生物信息的传递,其作用是否与药物一样引起了细胞电生理、细胞生物学的变化,应用此技术予以深入研究,将会阐明其原理。