促性腺激素释放激素类似物对大鼠睾丸间质细胞膜联蛋白5和3β-羟类固醇脱氢酶mRNA表达的影响

目的:观察促性腺激素释放激素(GnRH)类似物对大鼠睾丸间质细胞annexin 5和3β-HSD mRNA表达的影响。方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞48 h后,分别用不同终浓度的GnRH激动剂(GnRH-agonist,GnRHa)(10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L)和GnRH拮抗剂(GnRH-antagonists,GnRHant)(10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L)处理细胞,提取细胞总RNA,反转录,设计特异性引物和Tagman探针,荧光定量PCR检测膜联蛋白5(annexin 5)和3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)mRNA表达的改变。结果:荧光定量PCR结果显示,与未加GnRH类似物的对照组相比,当GnRHa的终浓度为10-5mol/L、10-6mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5 mRNA分别升高了38.89%和35.29%,均具有统计学意义(P<0.05);当GnRHa的浓度为10-5mol/L时,3β-HSD mRNA也显著升高了46.43%(P<0.01)。同样,与对照组相比,当GnRHant的浓度为10-6mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5 mRNA下降了45.45%(p<0.05),当GnRHant的浓度为10-6mol/L,10-7mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA也分别显著地降低了63.64%(P<0.01)和50%(P<0.05),其余各组与对照组相比,差异无统计学意义。结论:GnRH类似物能够调控大鼠睾丸间质细胞annexin5和3β-HSD mRNA表达,GnRH类似物可能与睾丸间质细胞上GnRH受体结合后,通过特定的生理机制,进而影响annexin5和3β-HSDmRNA表达,为揭示GnRH类似物调控间质细胞分泌睾酮的作用机制提供了一定的依据,其内在的机制还有待进一步研究。

大鼠膜联蛋白5的重组表达及其对人精子体外运动功能的影响

目的:先前研究发现促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂对大鼠睾丸间质细胞中膜联蛋白5(annex-in5)的翻译和转录水平都有一定的影响,推测annexin5可能是睾酮分泌调节中的一个信号分子。为研究annexin5在雄性生殖调节中的作用,本研究拟获得具有活性的大鼠annexin5重组蛋白,并观察其对人精子运动功能的影响。方法:化学合成法合成大鼠annexin5的编码基因序列,将该基因插入组氨酸标签(HIS)融合表达载体pET28a中,在T7启动子控制下,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达HIS融合蛋白;以亲和层析法纯化表达融合蛋白并用活化部分凝血激酶时间(APTT)交叉试验法验证该蛋白的抗凝血活性。15例供精者的精液标本一式2份,1份加重组蛋白annexin5(终浓度为10-8mol/L),1份做对照,分别处理20和60min,用计算机辅助精液分析系统(CASA)分析精子活力、活动率;处理20min后,做精子爬高试验。结果:合成的目的基因产物长度为974bp,插入序列与annexin5的序列完全一致。在IPTG诱导下,BL21(DE3)重组菌高效表达出相对分子质量为36000的融合蛋白,经纯化获得95%纯度的融合蛋白,纯化蛋白具有很强的抗凝血活性。Annexin5处理20min后精子活动率提高了21%(P<0.05),活力提高了40%(P<0.01),而处理60min后精子活力、活动率与对照组比较均无显著性差异;精子爬高高度与对照组比较具有极显著差异[(37.84±6.35)mmvs(49.5±12.27)mm,P<0.01]。结论:成功构建了大鼠annexin5重组表达载体并在大肠埃希菌中高效表达annexin5蛋白,且该蛋白体外处理精子20min时提高精子的运动能力。

膜联蛋白5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌及3β-羟基类固醇脱氢酶表达的影响

目的先前研究发现促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)刺激Leydig细胞后,膜联蛋白5(annexin 5)及睾酮水平同时增加,推测annexin 5和睾酮之间可能存在某种内在的联系,3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)是间质细胞的标记酶。文中旨在研究annexin 5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌及3β-HSD表达的影响。方法原代培养大鼠睾丸间质细胞,用不同浓度的annexin 5(0、10-10、10-9、10-8mol/L)处理间质细胞24h和用10-9mol/L的annexin 5处理细胞不同时间(6、12、24、36h),收集培养液,用化学发光法测定培养液中的睾酮含量;Western blotting方法分析睾丸间质细胞中3β-HSD的表达变化。结果不同浓度的annexin 5处理间质细胞24h后,与对照组比较,终浓度为10-10mol/L和10-9mol/L时,睾酮水平分别升高了18%[(14.38±0.30)nmol/Lvs(12.12±0.74)nmol/L](P<0.01)和26%[(15.25±0.47)nmol/Lvs(12.12±0.74)nmol/L](P<0.01);浓度为10-8mol/L时,睾酮水平虽也有升高趋势,但无显著性差异;而Western blotting结果显示,浓度为10-9mol/L时,3β-HSD表达量升高了63%(2.19±1.00vs1.34±0.19,P<0.05),浓度为10-10mol/L和10-8mol/L时,3β-HSD表达量无显著性差异;睾酮分泌与3β-HSD的表达呈显著正相关(r=0.430,P<0.05)。10-9mol/L的an-nexin5处理细胞不同时间,与对照组相比,6h和12h后睾酮的分泌虽有升高,但无统计学意义(P>0.05);24h后睾酮的分泌量显著升高了18%[(12.59±0.41)nmol/Lvs(10.70±0.09)nmol/L](P<0.01);而处理36h后,睾酮分泌量下降了21%[(14.44±1.65)nmol/Lvs(17.46±0.31)nmol/L](P<0.01)。结论在大鼠睾丸间质细胞中,annexin 5对睾酮分泌具有调节功能且呈剂量和时间依赖性;3β-HSD是该调节过程中的关键酶之一。

去颌下腺对大鼠睾丸膜联蛋白5表达的影响

目的:观察切除颌下腺对大鼠睾丸膜联蛋白5(annexin 5)表达的影响。方法:切除大鼠颌下腺,分别于术后14、28和42 d处死大鼠,Western blotting和免疫组织化学分析大鼠睾丸annexin 5表达及分布的改变。结果:Western blotting结果显示,与对照组相比,切除颌下腺14 d和28 d后,实验组大鼠睾丸annexin 5的表达分别升高了27.5%和35.2%,具有显著性差异(P<0.05,P<0.01);切除颌下腺42 d后,实验组大鼠睾丸annexin 5又恢复到与对照组几乎相同的水平。免疫组织化学显示,annexin 5在大鼠睾丸中的分布未见明显改变,但实验组annexin 5免疫组化显色较深,说明annexin 5的表达升高,这与Western blotting的结果基本一致。结论:颌下腺切除影响大鼠睾丸annexin 5的表达,颌下腺切除早期(14、28 d)颌下腺分泌的某些生物活性物质缺乏,而造成睾丸内annexin 5表达的升高。颌下腺切除后期(42 d),机体内因颌下腺切除而缺乏的某些物质在体内又重新得到了补偿,对睾丸annexin 5的影响消除,睾丸annexin 5的表达也恢复到正常水平。其内在具体机制尚待进一步阐明。

膜联蛋白5对大鼠睾丸间质细胞中类固醇急性调节蛋白和睾酮合成相关酶表达的影响

目的:研究膜联蛋白5(annexin 5)对大鼠睾丸间质细胞(Leydig细胞)睾酮合成相关蛋白和酶表达的影响。方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞24 h后,用10-9mol/L的annexin 5处理间质细胞12 h和24 h,分别提取细胞总RNA和总蛋白;反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测类固醇急性调节蛋白(steroidogenic acute regulatory,StAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)、17α-羟化酶(17α-hydroxylase,CYP17A)、17β-羟基类固醇脱氢酶Ⅹ型(17β-HSD10)mRNA表达的改变,并用蛋白免疫印迹方法(Western blotting)检测蛋白表达水平的变化。结果:与对照组相比,在mRNA水平上,annexin 5处理细胞12 h后,只有17β-HSD10的表达升高了26%(P<0.05),其他差异均无统计学意义,而处理24 h后,StAR、P450scc和3β-HSD的表达分别升高55%、69%和59%(P<0.05),17β-HSD10升高了104%(P<0.01),17α-hydroxylase表达则无显著差异;在蛋白水平上,annexin 5处理细胞12 h后,17β-HSD的表达升高了39%(P<0.05),而处理24 h后发现,除StAR表达无显著变化外,P450scc、3β-HSD和17β-HSD的表达分别升高了35%、88%(P<0.05)和47%(P<0.01)。结论:Annexin 5对睾酮合成具有调节作用,这种作用是通过在基因水平和蛋白水平上影响P450scc、3β-HSD和17β-HSD的表达而实现的。

膜联蛋白5对雄性SD大鼠睾酮合成相关蛋白和酶表达的影响

目的研究注射膜联蛋白5后雄性SD大鼠睾丸类固醇急性调节蛋白(Steroidogenic acute regulatory protein,StAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450 cholesterol side-chain cleavage enzyme,P450scc)和3β-羟类固醇脱氢酶(3 beta-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)表达的改变,初步探讨膜联蛋白5影响睾酮分泌的机制。方法将20只SD大鼠随机分为对照组和实验组,实验组又分为7.5μg/kg组、15μg/kg组和30μg/kg组,每组5只。对照组大鼠腹腔注射等量的pH8.0 Tris-HCl,实验组腹腔注射不同剂量的膜联蛋白5,1次/d,连续20 d。用RT-PCR方法分别检测对照组和各实验组SD大鼠睾丸组织中睾酮合成相关的StAR、P450scc和3β-HSD mRNA的表达变化,并用Western blot方法检测以上3种物质蛋白质水平的变化。结果与对照组相比,在mRNA水平上,7.5μg/kg组和15μg/kg组大鼠睾丸组织P450 scc mRNA表达分别增加了25.9%[(0.68±0.04)vs(0.54±0.03),P<0.01]和27.8%[(0.69±0.04)vs(0.54±0.03),P<0.01];3β-HSD mRNA表达分别升高了32.9%[(1.05±0.07)vs(0.79±0.10),P<0.01]和53.2%[(1.21±0.07)vs(0.79±0.10),P<0.01];而30μg/kg组表达差异无统计学意义;在蛋白水平上,15μg/kg组大鼠睾丸组织P450 scc蛋白表达提高了34.2%[(0.37±0.04)vs(0.28±0.02),P<0.01],7.5μg/kg组和15μg/kg组的3β-HSD表达也分别增加了14.7%[(1.53±0.10)vs(1.34±0.05),P<0.01]和24.4%[(1.67±0.14)vs(1.34±0.05),P<0.01];而StAR的表达无论在转录水平还是在蛋白水平上,较对照组差异均无统计学意义。结论膜联蛋白5可通过调节P450scc与3β-HSD的表达来调节睾酮合成。

膜联蛋白5刺激大鼠Leydig细胞增殖过程中RhoA、RockⅠ的表达

目的研究RhoA、RockⅠ促进大鼠Leydig细胞增殖的机制,探讨膜联蛋白5调控Leydig细胞增殖的新途径。方法用1 nmol/L膜联蛋白5处理原代培养大鼠Leydig细胞12、24、48 h后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,western blot检测RhoA和RockⅠ的蛋白质表达情况。结果 MTT法结果显示,1 nmol/L膜联蛋白5呈显著的时间依赖的促进Leydig细胞增殖作用,且24 h组细胞增殖能力与对照组差异最为显著(0.251±0.019 vs 0.207±0.009,t=4.380,P<0.01);流式细胞分析发现,1 nmol/L膜联蛋白5作用于Leydig细胞,以作用24 h时对细胞周期的影响最为显著,可使G2+M期比例比对照组升高(12.24±0.84 vs 7.79±1.15,t=5.407),G0/G1期比例下降(67.61±0.37 vs 74.49±0.73,t=-14.64),P均<0.01;western bolt结果表明,膜联蛋白5作用12、24、48 h后Leydig细胞RhoA表达结果分别为1.39±0.29、2.21±0.38、1.46±0.19,与0 h组结果 0.89±0.41比较,均有升高(t=2.028,P<0.05;t=4.736,P<0.01;t=2.550,P<0.05);膜联蛋白5作用24、48 h后Leydig细胞RockⅠ表达结果分别为1.14±0.18、1.03±0.17,与0 h组结果 0.72±0.22比较均升高(t=2.944,P<0.01;t=2.246,P<0.05)。结论 RhoA、RockⅠ可能参与膜联蛋白5促进细胞周期G0/G1进程,最终促进Leydig细胞的增殖。

膜联蛋白5对大鼠睾丸间质细胞增殖过程中Ect2表达的影响

目的研究膜联蛋白5(annexin 5)对大鼠睾丸间质细胞增殖过程中上皮细胞转化序列2癌基因(epithelial cell transfor-ming sequence 2 oncogene,Ect2)表达的影响,探讨annexin 5影响睾丸间质细胞增殖的机制。方法原代培养大鼠睾丸间质细胞,不同剂量的annexin 5处理后,采用MTT法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期,RT-PCR检测Ect2的mRNA表达改变,western blot分析睾丸间质细胞中Ect2蛋白质表达变化。结果 MTT法检测结果显示,annexin 5对大鼠睾丸间质细胞增殖有明显的促进作用,且在2～3 d呈显著的剂量-时间依赖关系(P<0.01),在第5天细胞增殖作用已明显减弱。流式细胞分析发现,1 nmol/L annexin 5作用48 h时G2/M期细胞减少为24.49%,72 h时减少为16.43%,与对照组比较差异显著(P<0.05)。RT-PCR结果表明,0.1 nmol/L组和1 nmol/L组Ect2 mRNA表达[(0.77±0.06)和(0.85±0.04)]与对照组(0.67±0.06)比较,分别增加了14.9%(P<0.05)和26.9%(P<0.01),而10 nmol/L组Ect2 mRNA表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。western blot结果表明,1 nmol/L annexin 5作用组的Ect2蛋白质表达比对照组增加了20.9%[(1.50±0.15)vs(1.24±0.07),P<0.05],而0.1 nmol/L组和10 nmol/L组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 annexin 5对大鼠睾丸间质细胞增殖的促进作用是通过促进细胞周期由G2期向M期的转变来实现的。Ect2在基因和蛋白质水平均受annexin 5的影响,提示annexin 5调控睾丸间质细胞增殖可能通过增加Ect2的表达而实现。

膜联蛋白5对人精子膜及DNA完整性的影响

目的:研究膜联蛋白5(Annexin5)对人精子细胞膜及DNA完整性的影响。方法:①精子膜完整性测定:按精子浓度>20×106/ml;活率>60%选取标准收集精液标本53份,分为3组,实验组为47.5μl精液中加入2.5μl10-6mol/L的Annexin5;阴性对照组为47.5μl精液标本中加入2.5μl1mol/L的Tris-HCl(pH8.0,25℃);空白对照组为47.5μl精液标本中加入2.5μl0.01mol/L的PBS(pH7.4),作用20min后,通过精子低渗肿胀试验(HOS)检测精子膜的完整性。②DNA完整性测定:同方法①,3组实验标本作用20min后,每份标本加入2.5μl0.02mol/L的H2O2,作用60min,通过吖啶橙(AO)荧光染色检测精子核DNA的完整性。结果:An-nexin5处理20min后低渗肿胀精子百分率与空白对照组及阴性对照组比较均具有极显著差异[(66.17±12.02)%vs(58.13±13.08)%,P<0.01;(66.17±12.02)%vs(59.94±11.91)%,P<0.01];空白对照组与阴性对照组比较无显著性差异。加入H2O2后,Annexin5组的DNA碎片指数与空白对照组及阴性对照组比较均具有极显著差异[(6.39±1.07)%vs(11.16±1.16)%,P<0.01;(6.39±1.07)%vs(10.86±1.05)%,P<0.01],空白对照组与阴性对照组比较无显著性差异。结论:Annexin5蛋白能在体外提高低渗肿胀精子百分率,对精子膜的完整性具有保护作用,同时对HO作用引起的精子核DNA破坏起保护作用。

膜联蛋白5在大鼠消化器官中的细胞定位

目的:观察膜联蛋白5(Annexin 5)在大鼠部分消化器官中的细胞定位,为探讨Annexin 5在消化器官内可能发挥的生理学作用奠定基础.方法:选取健康SD大鼠,经Bouins液固定其消化器官(胃、小肠、肝脏、胰腺)后,应用特异的兔抗Annexin 5抗血清,采用免疫组织化学方法和免疫荧光化学方法,观察Annexin 5在大鼠消化器官中的细胞定位.结果:Annexin 5在大鼠的消化器官中呈细胞特异性分布.Annexin 5在胃上皮细胞、胃底腺部分细胞、小肠绒毛杯状细胞、胆管内皮细胞和血管内皮细胞中分布较多,同时在胃和肠的黏膜层和肌层的部分细胞、小肠固有层中某些细胞、肝内皮细胞、胰腺血管内皮细胞中也有分布.结论:Annexin 5存在于大鼠消化器官执行特殊功能的一些细胞内,提示Annexin 5可能在这些细胞发挥生理功能的过程中具有特定的作用.

外周血单个核细胞中微小RNA200c-3p、核因子κB mRNA和膜联蛋白-5 mRNA对儿童哮喘诊断价值的比较研究

目的比较外周血单个核细胞(PBMCs)中微小RNA200c-3p(miRNA-200c-3p)、核因子κB(NF-κB)mRNA和膜联蛋白-5(ANX-5)mRNA对儿童哮喘的诊断价值。方法纳入2022年12月至2023年12月间在唐山市妇幼保健院儿科就诊的95例哮喘儿童作为哮喘组,并分成轻度组(30例),中度组(36例),重度组(29例),同期来该院体检健康儿童40例为对照组。使用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测单个核细胞中miRNA-200c-3p、NF-κB mRNA和ANX-5 mRNA的表达量。测量肺功能、1s用力呼气量(FEV 1)、用力肺活量(FVC)、最大呼气流量(PEF)及FEV 1/FVC值。采用Spearman分析miRNA-200c-3p、NF-κB mRNA和ANX-5 mRNA与肺功能的相关性。使用受试者工作特征(ROC)曲线比较miRNA-200c-3p、NF-κB mRNA和ANX-5 mRNA对哮喘的诊断价值。结果miRNA-200c-3p和NF-κB mRNA表达水平在重度组、中度组、轻度组及对照组间差异显著(F=12.58和14.81,P<0.01),并依次降低。ANX-5 mRNA表达水平在四组间差异显著(F=16.34,P<0.01),并依次升高。哮喘患儿单个核细胞中miR-200c-3p和NF-κB mRNA,与FEV 1、PEF、FEV 1/FVC均呈负相关(r介于-0.80~-0.48,P<0.05),ANX-5 mRNA与FEV 1、PEF、FEV 1/FVC呈正相关(r介于0.48~0.83,P<0.001)。ROC曲线显示,外周血PBMCs中miR-200c-3p诊断儿童哮喘的AUC为0.858,敏感度为0.760,特异度为0.893,截断值为2.24,高于NF-κB mRNA和ANX-5 mRNA单独诊断儿童哮喘。结论单个核细胞中miRNA-200c-3p对儿童哮喘的诊断效能优于NF-κB mRNA及ANX-5 mRNA单独诊断,是儿童哮喘诊断的敏感分子标志物。

膜联蛋白A5在缺血性卒中诊疗中的研究进展

缺血性卒中是导致我国中老年人群残疾和死亡的重要病因之一,从诊断到治疗需要面临许多复杂的问题。目前,血管再通治疗已成为缺血性卒中最重要的治疗方法。但是,单纯行血管再通治疗后,部分患者的预后仍不理想。此外,目前针对单一靶点的神经保护药物治疗缺血性卒中的效果仍不显著。膜联蛋白A5具有多种生物学功能,其抗凝血、抗炎症、促进神经元存活等功能可用于减轻脑血管再通后再灌注损伤等神经保护治疗。膜联蛋白A5因其与磷脂酰丝氨酸具有紧密结合特性,可用于卒中诊断、靶向治疗载体构建等。作者总结膜联蛋白A5的多种功能,分析其在缺血性卒中中可能产生的影响,以期为后续研究提供参考。

抗膜联蛋白A5抗体在抗磷脂综合征中的临床意义

目的探讨抗膜联蛋白A5(annexin A5,ANX A5)抗体与抗磷脂综合征(APS)患者临床特征的相关性及其检测的临床价值。方法2014年10月至2020年4月北京协和医院序贯纳入符合2006年悉尼修订APS分类标准的APS患者,收集患者人口统计学信息、临床特征及实验室检查结果,比较抗体阴性及阳性两组患者的组间差异。结果研究共纳入140例APS患者,其中抗ANX A5抗体阳性组57例(40.7%),阴性组83例(59.3%)。两组患者性别、年龄、病程、继发性APS比例无显著差异。临床特征中,抗ANX A5抗体阳性组(IgG/M阳性)较抗体阴性组合并脑梗死比例显著增多(33.3%vs.12.0%,P=0.003),其OR值为3.650,95%CI=1.544~8.628;抗ANX A5抗体双阳组(IgG及IgM均阳)脑梗死比例高达38.5%,OR值4.563,95%CI=1.246~16.711;其余部位血栓事件及病理妊娠无显著差异。实验室检查方面,两组间的抗心磷脂抗体(ACL)、抗β_(2)糖蛋白Ⅰ(β_(2)GPI)抗体、狼疮抗凝物(LA)等抗磷脂抗体阳性率比较,差异无统计学意义。结论APS患者中抗ANXA5抗体与脑梗死相关;合并该抗体阳性患者应警惕神经系统损害。

膜联蛋白A5低表达对人宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨膜联蛋白A5(ANXA5)低表达对人宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭的影响。方法将细胞分为干扰组、阴性对照组、转染试剂对照组和空白对照组,采用脂质体转染法将siRNA转染干扰组HeLa细胞,在转染72h后采用RT-PCR和Western blotting检测各组ANXA5的表达以鉴定抑制效率;细胞划痕实验检测各组HeLa细胞的迁移能力;Transwell实验检测各组HeLa细胞的侵袭能力;RT-PCR和Western blotting分别检测ANXA5低表达对E-钙黏蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶(MMP)-9 mRNA及蛋白表达的影响。结果干扰组ANXA5蛋白及mRNA的表达均明显低于阴性对照组(P<0.05);其表达均被显著抑制,干扰组细胞的迁移及侵袭能力比阴性对照组明显增强(P<0.05),E-cadherin mRNA及蛋白的表达显著低于阴性对照组(P<0.05);干扰组MMP-9mRNA及蛋白的表达均显著高于阴性对照组(P<0.05)。结论靶向ANXA5的siRNA可有效抑制ANXA5的表达,且ANXA5低表达可能通过影响E-cadherin和MMP-9的表达来促进HeLa细胞的迁移和侵袭能力。

膜联蛋白A5在人子宫颈鳞癌组织中的表达

目的探讨人子宫颈鳞癌发生发展过程中,膜联蛋白A5(ANXA5)表达的变化。方法收集人子宫颈鳞癌组织25例和人正常子宫颈组织15例,细胞裂解液裂解组织细胞,蛋白定量试剂盒进行蛋白定量后,Western blotting法检测ANXA5在人子宫颈鳞癌组织和人正常子宫颈组织中的表达;为进一步确定ANXA5的表达部位及其变化,我们收集人子宫颈鳞癌蜡块45例和人正常子宫颈组织蜡块20例,用免疫组织化学ABC法对两种组织ANXA5的表达进行检测,原位杂交法在RNA水平进行检测。结果Westen blotting显示人子宫颈鳞癌组织ANXA5比人正常子宫颈组织表达增强;免疫组织化学及原位杂交均显示人子宫颈癌组织中ANXA5的染色比人正常子宫颈组织染色重,阳性信号分布于细胞质和细胞膜。结论ANXA5在人子宫颈鳞癌组织中的表达比在人正常子宫颈组织中的表达增高;ANXA5与人子宫颈鳞癌的发生有密切联系。

膜联蛋白A5过表达对宫颈癌细胞系SiHa细胞凋亡的影响

目的:构建膜联蛋白A5的重组表达质粒,转染宫颈癌细胞使其过表达后检测宫颈癌细胞的凋亡情况。方法:PCR法从pJLA503膜联蛋白A5中获得膜联蛋白A5基因;磷酸钙共沉淀法转染宫颈癌细胞系SiHa细胞,免疫印迹法和免疫组织化学ABC法检测了细胞中膜联蛋白A5蛋白的过表达;对过表达膜联蛋白A5的细胞采用免疫荧光法检测其细胞凋亡情况。结果:重组质粒中膜联蛋白A5基因序列正确;转染重组质粒后的SiHa细胞过表达膜联蛋白A5蛋白;过表达膜联蛋白A5的SiHa细胞凋亡显著增多。结论:膜联蛋白A5可促进宫颈癌细胞系SiHa细胞的凋亡。

膜联蛋白A5在不同临床分期结肠癌患者中的表达及意义

目的检测膜联蛋白A5(Annexin A5)在结肠癌患者外周血清中的含量及癌组织中的表达以及临床意义。方法收集81例结肠癌患者外周血清和35例正常人外周血清,采用酶联免疫吸附法测定血清中Annexin A5的含量;取本组结肠癌患者的癌组织81例,运用免疫组织化学法检测Annexin A5在癌组织中的表达情况。结果 TNMⅢ/Ⅳ期的结肠癌患者血清Annexin A5含量高于TNMⅠ/Ⅱ期和正常人,差异有统计学意义(P<0.05),Annexin A5表达与淋巴结转移密切相关(P<0.05)。Annexin A5在结肠癌癌组织中主要表达于肿瘤细胞或间质细胞胞浆,并随结肠癌TNM分期升高其阳性表达率逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05)。血清Annexin A5含量与结肠癌组织Annexin A5表达相关,其阳性检出率明显高于癌胚抗原阳性检出率(P<0.05)。结论结肠癌患者血清Annexin A5的含量与癌组织Annexin A5表达相关,与结肠癌的分期、转移等临床病理学指标密切关联,具有一定的潜在诊断价值。

膜联蛋白A5低表达对人宫颈癌细胞系HeLa细胞增殖与凋亡的影响

目的观察宫颈癌细胞系HeLa细胞在膜联蛋白A5表达降低后，细胞增殖和凋亡的情况。方法采用RNA干扰的方法，通过免疫印迹法筛选出对HeLa细胞中膜联蛋白A5的表达抑制效率最高的siRNA，脂质体法将siRNA转染入细胞48h后，用MTr法检测细胞增殖的改变情况，用细胞凋亡光学检测试剂盒检测细胞的凋亡。结果HeLa细胞中膜联蛋白A5的表达被显著抑制，其增殖速度与未转染siRNA的普通HeLa细胞相比，无显著性差异；细胞凋亡显著减少，与未转染siRNA的普通HeLa细胞相比，有显著性差异。结论膜联蛋白A5低表达对宫颈癌细胞系HeLa细胞的增殖未见显著影响，但可能影响了细胞的凋亡。

膜联蛋白A5与宫颈黏膜上皮细胞癌变的关系

目的：确定在宫颈癌细胞系Hela细胞和SiHa细胞中是否有膜联蛋白A5(anxA5)的表达,为研究anxA5的功能及其与宫颈癌的关系奠定基础。方法：培养Hela细胞和SiHa细胞。TRIzol法提取细胞总RNA,RT- PCR法检测anxA5在mRNA水平的表达并将其基因片段连接于T载体,测序仪测序；Western印迹法和免疫细胞化学ABC法检测anxA5的表达。结果：两种宫颈癌细胞的RT-PCR结果和Western印迹法均显示目的条带；免疫细胞化学染色可见胞质和核膜被染成棕黄色；测序并经NCBI的BLAST进行比对,显示为人anxA5。结论：anxA5在宫颈癌细胞系Hela细胞和SiHa细胞的mRNA水平和蛋白质水平均有表达。

膜联蛋白A5对胶质瘤细胞侵袭和迁移的调节作用及机制

目的研究膜联蛋白A5对胶质瘤细胞侵袭和迁移的调节作用及机制。方法免疫组化法检测100例神经胶质瘤组织和20例正常脑组织中膜联蛋白A5的表达。对人神经胶质瘤细胞系(U251)转染靶向膜联蛋白A5的siRNA(si-Annexin A5组),并通过RT-PCR和蛋白印迹分析验证膜联蛋白A5表达下调。MTT实验和集落形成实验检测U251细胞的增殖能力,流式细胞术和Hoechst 33258染色检测U251细胞凋亡,伤口愈合实验和Matrigel Transwell侵袭实验观察U251细胞的迁移和侵袭能力。蛋白印迹分析U251细胞中Raf、p-Raf、MEK1/2、p-MEK1/2、ERK1/2、p-ERK1/2、c-Myc和E-Cadherin的表达。结果与正常脑组织相比,胶质瘤组织中的膜联蛋白A5的mRNA表达升高了2.45倍,蛋白表达升高了2.87倍(P<0.001);Pearson相关分析显示,随着肿瘤级别的升高,膜联蛋白A5阳性率逐渐升高,并且肿瘤级别与阳性率呈正相关(r=1.000,P<0.001)。与对照组相比,si-Annexin A5组的U251细胞在培养48、72 h的细胞活力分别降低了29.46%和40.43%(P<0.001)。与对照组相比, si-Annexin A5组的集落形成率降低了68.58%,而细胞凋亡率升高了24.41倍(P<0.001);si-Annexin A5组的迁移细胞率降低了65.35%,侵袭细胞率降低了68.80%(P<0.001);si-Annexin A5组的p-Raf、p-MEK1/2、p-ERK1/2和c-Myc的蛋白表达均明显降低(依次降低54.67%、70.37%、60.26%、54.95%),而E-Cadherin升高了3.58倍(P<0.001)。结论下调膜联蛋白A5通过抑制Raf/MEK/ERK信号通路抑制胶质瘤细胞的生长和运动能力,并诱导细胞凋亡。