采用荧光素钠验证柑橘木虱的膜饲喂法

为了建立防治柑橘木虱的生防细菌筛选技术平台,本研究利用荧光素钠在491 nm下有吸收峰的原理,用含有荧光素钠的处理液通过膜饲喂法让柑橘木虱成虫取食,以九里香提取液为空白对照,3种处理九里香1:1荧光素钠(低压)、荧光素钠(低压)、九里香1:1荧光素钠(高压)分别测到吸光度值分别为0.142、0.158、0.139,表明柑橘木虱能够通过膜饲喂法对处理液进行取食。

褐飞虱中肠内膜结合短肽P2S的筛选

【目的】筛选与褐飞虱Nilaparvata lugens中肠内膜相结合的短肽,探索能阻断褐飞虱传播水稻病毒的新方法。【方法】通过改良的膜饲喂法和噬菌体短肽文库展示技术,模拟褐飞虱正常取食的行为,筛选能够与其中肠内膜结合的短肽。将筛选到的短肽与加强绿色荧光蛋白进行融合表达,经纯化后,将融合蛋白饲喂给褐飞虱若虫,通过荧光显微镜观察饲喂后若虫的中肠。【结果】使用改良的膜饲喂法,16h后褐飞虱若虫的取食率达到91%,24h后达到95%。经形态学验证,确定了一种短肽与褐飞虱中肠内膜具有结合活性,并将其命名为P2S。【结论】改良了针对褐飞虱的膜饲喂法,筛选并验证了能够与褐飞虱中肠内膜结合的活性短肽P2S。研究结果为阻断相关的水稻病毒与褐飞虱中肠内膜间的相互作用研究提供了科学依据,也为褐飞虱新型膜穿孔毒素蛋白的研究提供了理论基础。

白背飞虱体内RNA干扰技术体系的建立

应用双链RNA(dsRNA)诱导的RNA干扰(RNAi)技术原理,将体外合成的源于白背飞虱肌动蛋白(Actin)基因的dsRNA通过膜饲喂法饲喂其2龄若虫.通过优化人工饲料、dsRNA浓度和饲喂时间,成功地干扰了白背飞虱Actin基因的表达,并引发白背飞虱的死亡,从而建立了白背飞虱体内的RNAi体系.

西花蓟马不同RNA干扰技术比较研究

【目的】西花蓟马Frankliniella occidentalis (Pergande)是一种重要的外来入侵害虫,其繁殖能力强、寄主范围广、抗药性强,给我国蔬菜、花卉等经济作物造成了严重危害。本研究旨在评估膜饲喂和显微注射dsActin对西花蓟马Actin基因的沉默效率,以期为蓟马类等小型昆虫基因功能的研究提供方法和依据。【方法】通过膜饲喂和显微注射的方法将体外合成的dsActin导入西花蓟马二龄若虫体内,用RT-qPCR方法检测Actin基因的mRNA表达;通过单头饲养方法观察统计西花蓟马成虫体长、成虫翅膀或胸腹部畸形率及死亡率。【结果】dsActin膜饲喂后24、48、72 h,Actin基因的相对表达量分别为对照组的97%、91%和98%;通过显微注射将dsActin注入西花蓟马体腔,在注射后24、48、72 h,Actin基因的表达量分别为对照组的68%、56%和53%。注射dsActin的西花蓟马在第24~120 h死亡率为44%~98%,显著高于ds GFP对照组;此外,dsActin组个体体长仅为ds GFP对照组的90%,且翅膀或胸腹部出现畸形率为41%。【结论】显微注射dsActin能显著沉默西花蓟马Actin基因mRNA水平的表达,并引起西花蓟马个体不正常发育和死亡,从而建立蓟马类小型昆虫RNAi体系。