口腔鳞状细胞癌中自噬蛋白和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白的表达分析

目的比较口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)患者肿瘤及其临近组织的自噬相关蛋白和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)蛋白表达水平,并探讨自噬蛋白与m TOR通路蛋白表达的相关性。方法26例肿瘤标本来源于首都医科大学附属北京口腔医院确诊为OSCC并行病灶切除手术的患者,将标本组织分为3组,其中肿瘤组为肿瘤中心区域组织,正常组为距肿瘤组织边缘2 cm的正常组织,两者之间的组织为交界组。采用免疫荧光实验和蛋白免疫印迹实验检测各组样本的自噬相关蛋白微管蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)Ⅱ和p62的表达水平,采用免疫组织化学染色方法和蛋白免疫印迹实验检测m TOR通路相关蛋白的表达水平,并通过Spermann相关性分析方法探讨自噬相关蛋白与m TOR通路相关蛋白表达水平的相关性。结果免疫荧光实验结果显示,肿瘤组和交界组LC3-Ⅱ和p62的表达水平均高于正常组。蛋白免疫印迹实验结果亦表明,肿瘤组和交界组中LC3-Ⅱ和p62的表达水平均高于正常组(P<0.001),而肿瘤组与交界组LC3-Ⅱ和p62的表达水平之间的差异并无统计学意义(P>0.05)。免疫组织化学结果显示,交界组和肿瘤组的m TOR、4E-BP1的表达及其磷酸化4E-BP1水平均高于正常组。蛋白免疫印迹实验结果表明,交界组m TOR和4E-BP1及其磷酸化水平最高,肿瘤组次之,正常组最低(P<0.01);而p70S6K及其磷酸化水平在各组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Spermann相关性分析结果显示,LC3-Ⅱ与p62的表达水平在肿瘤组和交界组中均呈正相关(P<0.05),m TOR与LC3-Ⅱ和p62的表达水平在肿瘤组和交界组中均呈正相关(P<0.05)。结论OSCC患者的肿瘤中心区域和肿瘤与正常组织交界区域的m TOR通路活跃而自噬流过程受损,靶向抑制m TOR通路为OSCC患者的临床诊疗提供新的建议。

盐酸纳美芬对心肌缺血再灌注大鼠缺氧诱导因子1α/B细胞淋巴瘤-2/E1B-19kDa相互作用蛋白3通路及心肌自噬的影响

目的探讨盐酸纳美芬对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠缺氧诱导因子1α(Hif-1α)/B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)/E1B-19kDa相互作用蛋白3(BNIP3)通路及心肌自噬的影响。方法2020年3—4月采用结扎冠状动脉左前降支法复制心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠模型,将造模成功的大鼠使用随机数字表法分成模型组、盐酸纳美芬低、中、高(10μg/kg、15μg/kg、20μg/kg)剂量组和氯喹组(阳性对照,0.02 g/kg),每组15只,另取15只假手术组大鼠作为对照。模型组和假手术组给予等剂量生理盐水,其余各组给予相对应剂量药物,每天1次,连续3 d。给药结束24 h后,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测心肌梗死面积;苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织病理学变化;二氯荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)法检测心肌组织中活性氧水平;蛋白质印迹法(Western blotting)检测心肌组织中自噬相关蛋白Beclin1、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ及通路蛋白Hif-1α、BNIP3表达水平。结果假手术组大鼠心肌组织结构完整,无明显病理变化。与假手术组相比,模型组大鼠心肌组织结构异常、心肌细胞坏死、心肌损伤严重,心肌梗死面积、活性氧水平、Beclin1、LC3-Ⅱ、Hif-1α、BNIP3蛋白表达水平和LC3-Ⅱ/Ⅰ比值显著升高(P<0.05),其中Hif-1α和BNIP3蛋白表达水平分别为0.92±0.11和0.96±0.12,显著高于假手术组的0.10±0.02和0.08±0.01;与模型组相比,盐酸纳美芬低、中、高剂量组大鼠心肌组织病理损伤依次减轻,心肌梗死面积、活性氧水平、Beclin1、LC3-Ⅱ、Hif-1α、BNIP3蛋白表达水平和LC3-Ⅱ/Ⅰ比值依次降低(P<0.05),其中盐酸纳美芬高剂量组Hif-1α和BNIP3蛋白表达水平分别为0.17±0.03和0.12±0.03,显著低于盐酸纳美芬中剂量组的0.29±0.04和0.31±0.05,盐酸纳美芬中剂量组显著低于盐酸纳美芬低剂量的0.58±0.07和0.52±0.08。盐酸纳美芬高剂量组与氯喹组大鼠各项指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论盐酸纳美芬可能通过抑制Hif-1α/BNIP3通路,减弱MIRI大鼠心肌自噬,缓解心肌损伤。

多囊卵巢综合征病理机制中的颗粒细胞自噬

多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是育龄期女性最常见的生殖内分泌紊乱性疾病之一,病理机制尚未阐明。自噬参与卵泡发育的各个阶段,其中卵泡颗粒细胞自噬相对活跃。通过维持颗粒细胞自噬的稳态支持卵巢功能、调控卵泡发育,最终影响胚胎质量及妊娠结局。自噬相关基因和蛋白的异常表达可激活不同的自噬通路,抑制卵泡颗粒细胞发育、干扰内分泌稳态,参与PCOS的病理过程,并影响其预后。综述参与颗粒细胞自噬的关键分子及其在PCOS发生发展中的作用,以期为研究PCOS发生机制及探索临床治疗提供参考。

积雪草苷调控SIRT1-FOXO3-PINK1-Parkin通路介导的线粒体自噬保护肾缺血再灌注损伤的机制研究

目的探讨积雪草苷(AC)调控沉默信息调节因子1(SIRT1)-叉头盒转录因子O3(FOXO3)-PTEN诱导性激酶蛋白1(PINK1)-E3泛素连接酶(Parkin)通路介导线粒体自噬对肾缺血再灌注损伤(RIRI)的保护作用及机制。方法采用随机数字表法将50只雄性SD大鼠分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、AC组、AC+SIRT1抑制剂(EX-527)组、EX-527组,每组10只。构建RIRI模型;AC组造模前予以AC混悬液80 mg/(kg·d)连续灌胃4周;AC+EX-527组造模前3 d予以含EX-527(5 mg/kg)的1%DMSO溶液腹腔注射,术中再灌注前20 min腹腔注射1次,余处理同AC组;EX-527组仅予以等量含EX-527的1%DMSO溶液腹腔注射。造模24 h后取材,检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平,HE染色观察肾组织病理改变及评分,Western blot检测组织SIRT1、FOXO3、PINK1、Parkin通路蛋白和自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白轻链3(LC3)A/B-Ⅰ、LC3A/B-Ⅱ表达水平,并计算(LC3A/B-Ⅱ)/(LC3A/B-Ⅰ);紫外分光光度法检测组织ATP含量;JC染色法检测线粒体膜电位变化。结果与Sham组比较,Model组Scr、BUN水平升高,肾组织发生病理损伤,通路及自噬相关蛋白表达量出现不同程度升高,ATP含量减少,线粒体膜电位水平下降(P<0.05);相比Model组,AC组Scr、BUN水平明显降低,肾组织病理损伤减轻,通路及自噬相关蛋白表达水平升高,ATP含量增高,线粒体膜电位升高(P<0.05);与AC组比较,经EX-527干预的AC+EX-527、EX-527组Scr、BUN水平出现不同程度升高,组织病理损伤加重现象,通路及自噬相关蛋白表达量均减少,ATP含量减少,线粒体膜电位水平下降(P<0.05),EX-527组程度较为明显。结论AC通过上调SIRT1-FOXO3-PINK1-Parkin信号通路蛋白表达,促进线粒体自噬来改善肾组织细胞线粒体功能,抑制细胞凋亡,对RIRI起到保护作用。

自噬在子宫内膜异位症发病机制中的研究新进展

子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)是育龄期女性的常见良性疾病,严重影响患者的生活质量,且发病率呈逐年上升的趋势。自噬(autophagy)是一种不同于凋亡的程序性细胞死亡,其通过吞噬降解细胞内异常蛋白或细胞器产生能量,维持细胞生存和代谢,是细胞内成分降解和再循环的重要机制。近年来大量研究发现自噬可参与EMs的发生、发展。既往研究报道了EMs患者异位病灶中的自噬水平低于非EMs患者的正常子宫内膜组织的自噬水平,且EMs患者异位内膜组织自噬的周期性变化消失。然而,仍有少量研究证明EMs患者异位病灶中的自噬水平更高。EMs异位病灶的复杂环境中包括众多影响自噬水平的因素,如雌孕激素、缺氧和氧化应激,以及病原体感染和铁过载等。此外,自噬对EMs发生、发展有双重作用,既可以通过抑制炎症反应、增强免疫系统清除病灶能力和抑制病灶纤维化来阻碍EMs进展,又可以通过促进异位内膜间质细胞存活和迁移、侵袭来促进EMs进展。

双硫仑螯合铜对耐紫杉醇乳腺癌细胞增殖、迁移、凋亡及自噬的影响

目的 探讨双硫仑螯合铜(DSF-Cu)对耐紫杉醇乳腺癌细胞增殖、迁移、凋亡及自噬的影响。方法 2018年1月至2019年10月,培养MCF-7人乳腺癌细胞和耐紫杉醇乳腺癌MCF-7/紫杉醇细胞,用定量紫杉醇持续诱导MCF-7/紫杉醇细胞维持耐药性。通过CCK-8法检测MCF-7/紫杉醇细胞耐药指数;通过CCK-8法检测MCF-7/紫杉醇细胞在不同浓度DSF-Cu(5、10、15、20、25μmol/L)干预不同时间(24 h和48 h)后的抑制率,并分析细胞抑制率与DSF-Cu浓度和作用时间的关系;通过划痕实验检测DSF-Cu对MCF-7/紫杉醇细胞迁移能力的影响;通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测MCF-7和MCF-7/紫杉醇细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和自噬效应蛋白Beclin-1基因和蛋白的表达,并在紫杉醇和DSF-Cu单药及联合干预MCF-7/紫杉醇细胞中后,检测Bcl-2、Bax和Beclin-1蛋白的表达;通过流式细胞计数技术检测不同浓度DSF-Cu(5、10、15、20μmol/L)干预MCF-7/紫杉醇细胞不同时间(12 h、24 h和48 h)后细胞凋亡情况。结果MCF-7和MCF-7/紫杉醇细胞在紫杉醇干预24 h后IC_(50)值分别为1 394.79μmol/L和321.42μmol/L,MCF-7/紫杉醇细胞耐药指数为4.34;在不同浓度DSF-Cu(5、10、15、20、25μmol/L)DSF-Cu干预MCF-7/紫杉醇细胞24 h后细胞抑制率分别为(27.42±3.38)%、(42.71±0.77)%、(57.52±7.10)%、(73.83±1.76)%、(85.55±2.25)%,48 h后细胞抑制率分别为(51.27±4.59)%、(57.34±5.94)%、(71.50±1.80)%、(81.54±4.36)%、(90.96±2.13)%,DSF-Cu以浓度与时间依赖性抑制乳腺癌MCF-7/紫杉醇细胞增殖(P<0.05);划痕实验证实DSF-Cu能抑制乳腺癌MCF-7/紫杉醇细胞迁移;qRT-PCR结果显示,与MCF-7细胞相比,MCF-7/紫杉醇细胞中Bcl-2和Beclin-1基因表达升高,Bax基因表达降低(P<0.05);蛋白质印迹法结果显示,与MCF-7细胞比较,MCF-7/紫杉醇细胞中Bcl-2和Beclin-1蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低(P<0.05)。MCF-7/紫杉醇细胞在紫杉醇和DSF-Cu单药及联合干预后Bcl-2表达分别为1.81±0.28、1.25±0.09、0.87±0.10,Bax表达分别为0.65±0.15、1.07±0.15、1.34±0.04,Beclin-1表达分别为1.53±0.22、0.85±0.18、0.53±0.08,MCF-7/紫杉醇细胞在DSF-Cu干预后Bax蛋白表达升高,Bcl-2和Beclin-1蛋白表达降低(P<0.05);流式结果显示不同浓度DSF-Cu(0、5、10、15、20μmol/L)干预MCF-7/紫杉醇细胞24 h后,细胞凋亡率分别为(5.50±1.01)%、(11.03±1.04)%、(55.12±5.06)%、(68.86±3.36)%、(80.07±4.30)%,在IC浓度的DSF-Cu干预MCF-7/紫杉醇细胞不同时间(0 h、12 h、24 h、48 h)后,细胞凋亡率分别为(4.47±0.57)%、(15.92±2.63)%、(34.85±2.70)%、(74.94±1.13)%,MCF-7/紫杉醇在DSFCu干预后细胞凋亡情况与DSF-Cu呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。结论 DSF-Cu可通过诱导凋亡、抑制自噬来抑制乳腺癌MCF-7/紫杉醇细胞增殖和迁移,逆转乳腺癌MCF-7细胞对紫杉醇耐药性。

人BMSCs自噬水平和成骨分化能力比较

目的比较老年骨质疏松(osteoporosis,OP)和健康成年人椎体中骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)自噬水平和成骨分化能力。方法取从2组手术患者椎体中培养的BMSCs细胞,Western blot检测自噬相关基因LC3和P62蛋白表达。转染含LC3-GFP质粒的腺病毒后,激光共聚焦下观察代表自噬体的绿色荧光斑点数。细胞经成骨诱导分化培养基刺激后,碱性磷酸酶染色比较早期成骨指标,茜素红染色比较晚期成骨指标钙盐沉积的影响。荧光定量PCR(q-PCR)检测骨形成相关基因I(collagen type I,COL I)、骨钙素(osteocalcin,OCN)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)以及Runt相关转录因子2(RUNX2)。结果 Western blot结果显示OP组BMSCs的LC3-II/I表达明显降低,而P62表达明显增高(P<0.05);激光共聚焦观察进一步证实OP组中绿色荧光斑点数目显著下降,说明细胞内自噬体数目减少(P<0.05)。两组BMSCs经成骨诱导后,茜素红和碱性磷酸酶染色发现OP组阳性程度明显弱于正常对照组,而q-PCR结果显示成骨分化的一些关键指标COL I、OCN、OPN和RUNX2在OP组中均显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论骨质疏松的BMSCs中自噬水平较正常细胞低,且成骨分化能力更弱。

NLRX1相关机制研究进展

NLRX1是一种重要的模式识别受体,广泛分布在线粒体,结构与功能相对复杂,可用于识别内源性和外源性危险信号,并触发相应的信号传导通路,引发免疫反应,促进ROS生成,造成线粒体损失,促进细胞凋亡等一系列的生理活动。通过对NLRX1的结构、分布、功能以及其作用机制的研究,将为诊断糖尿病、恶性肿瘤等疾病带来新思路,为预防和治疗流感等相关疾病提供新靶点。

三邻甲苯磷酸酯染毒母鸡神经组织中自噬相关蛋白ATG4表达与磷酸化的变化

目的 研究三邻甲苯磷酸酯（TOCP）染毒母鸡以及提前应用苯甲基磺酰氟（PMSF）后神经组织中自噬相关蛋白ATG4A与p-ATG4A表达的变化,探讨迟发性神经病（OPIDN）的发病机制.方法 选取成年罗曼母鸡60只,其中30只动物用于TOCP染毒实验,即动物随机分为对照组,1、5、10、21 dTOCP染毒组,剂量为600 mg/kg,一次性灌胃染毒.另外30只动物随机分为对照组,1、5、10、21 d PMSF干预组,提前24 h皮下注射90 mg/kg PMSF,然后再染毒600 mg/kg TOCP,用免疫印迹法检测胫神经ATG4A与p-ATG4A的相对含量.结果 与对照组比较,TOCP染毒后第1、5、10天胫神经ATG4A含量分别下降36％、43.7％,41％,染毒后第1、5、10天胫神经p-ATG4A含量分别下降22.5％、25％,21％差异有统计学意义（P＜0.05）.PMSF干预组动物胫神经中ATG4A 、p-ATG4A与对照组相比没有明显改变.结论 TOCP染毒后干扰了自噬相关蛋白ATG4A、p-ATG4A表达的变化,可能与OPIDN中神经元自噬活性变化有关.

川陈皮素对急性肾损伤大鼠的改善作用及机制研究

目的探究川陈皮素(NOB)通过调节沉默信息调节因子1(SIRT-1)/叉头框转录因子O3a(FOXO3a)通路介导的自噬对急性肾损伤(AKI)大鼠的改善作用及其机制。方法采用一次性腹腔注射顺铂(20 mg/kg)的方法构建AKI大鼠模型。将60只SPF级SD雄性大鼠采用随机数字表法分为对照组(Control组)、AKI模型组(Model组)、低剂量NOB组(NOB-L组,200 mg/kg)、高剂量NOB组(NOB-H组,400 mg/kg)和高剂量NOB+SIRT-1抑制剂EX527组(NOB-H+EX527组,400 mg/kg NOB+5 mg/kg EX527),每组12只。末次给药后收集大鼠24 h尿液,检测24 h尿微量白蛋白含量、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖甘酶(NAG)含量和尿β2微球蛋白(β2-MG)含量;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)和肾脏中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;HE染色观察大鼠肾小管组织病理变化;TUNEL染色法检测肾小管细胞凋亡;实时荧光定量PCR(qPCR)法检测大鼠肾脏组织中SIRT1和FOXO3a mRNA表达;Western blot检测大鼠肾脏组织中SIRT1/FOXO3a通路和自噬相关蛋白的表达。结果与Control组相比,Model组大鼠肾脏组织病理损伤严重,24 h尿微量白蛋白、尿NAG、尿β2-MG、血BUN、血Scr、肾小管损伤评分、肾脏MDA水平、细胞凋亡率升高,肾脏SOD水平、SIRT1/FOXO3a通路和自噬相关蛋白表达降低(P<0.05);与Model组相比,NOB-L组和NOB-H组大鼠肾脏组织病理损伤减轻,24 h尿微量白蛋白、尿NAG、尿β2-MG、血BUN、血Scr、肾小管损伤评分、肾脏MDA水平、细胞凋亡率降低,肾脏SOD水平、SIRT1/FOXO3a通路和自噬相关蛋白表达升高(P<0.05)。结论NOB可能通过激活SIRT-1/FOXO3a通路,促进自噬,进而改善大鼠的AKI。

壬二酸对阿霉素诱导的心肌细胞损伤的保护作用及其机制

目的探讨壬二酸对阿霉素诱导的心肌细胞损伤的保护作用及其机制。方法取生长融合度达80%以上的H9c2心肌细胞随机分为正常组、模型组、壬二酸组,正常组以高糖DMEM培养基培养,模型组以5μmol/L阿霉素处理24 h,壬二酸组以10μmol/L壬二酸和5μmol/L阿霉素共处理24 h,采用CCK-8法和微量酶标法检测心肌细胞活力及乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,采用化学荧光法检测细胞内活性氧(ROS)水平及线粒体膜电位(ΔΨm)变化,采用荧光素酶法检测H9c2心肌细胞内三磷酸腺苷(ATP)水平,采用透射电子显微镜观察H9c2心肌细胞中自噬体的数量,采用免疫荧光染色分析细胞中Bcl-2/腺病毒E1B相互作用蛋白3(BNIP3)与线粒体荧光探针(Mitotracker)共定位的情况,采用Western blot实验检测H9c2心肌细胞中自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3-Ⅰ(LC3-Ⅰ)、LC3-Ⅱ、泛素结合蛋白(P62)、凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因相关启动子(Bad)及BNIP3的表达水平。24只C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组(仅第1天腹腔注射阿霉素10 mg/kg)、壬二酸组(在模型组处理基础上壬二酸20 mg/kg连续灌胃7 d),每组8只小鼠,采用超声心电图检测小鼠心功能的变化,采用Masson染色法检测小鼠心脏组织中心肌纤维化的情况。结果两组细胞LDH漏出量、ROS水平、ATP含量、ΔΨm、BNIP3与Mitotracker的Pearson系数、自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及Bad、BNIP3、P62蛋白表达水平与模型组比较,差异均具有显著性(t=2.54~17.37,P<0.05)。正常组、壬二酸组小鼠与模型组小鼠比较,EF%、FS%差异均具有显著性(t=3.41~6.49,P<0.05)。结论壬二酸对阿霉素诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,其作用可能是通过抑制细胞中BNIP3介导的线粒体自噬实现的。

自身免疫性肝炎患者外周血Beclin1、LC3水平及Th1/Th2平衡预测肝功能损伤的价值

【目的】探讨自身免疫性肝炎(AIH)患者外周血自噬相关基因Beclin1、LC3水平及Th1/Th2平衡预测肝功能损伤的价值。【方法】选取本院2017年4月至2020年6月收治的91例AIH患者为研究对象,按是否发生肝功能损伤分为损伤组(27例)和未损伤组(64例)。对比两组临床特征及外周血Beclin1、LC3水平及Th1/Th2平衡,分析影响AIH患者发生肝功能损伤的因素,以受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)评估Beclin1、LC3水平及Th1/Th2平衡预测AIH患者发生肝功能损伤的价值。【结果】损伤组C反应蛋白(CRP)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、血清总胆红素(TBIL)、谷氨酰转移酶(GGT)、碱性磷酸酶(ALP)、免疫球蛋白IgG、干扰素-γ(INF-γ)、Beclin1、LC3及Th1/Th2均高于未损伤组,白细胞介素-4(IL-4)水平低于未损伤组(P<0.05);Logistic回归分析显示,Beclin1、LC3及Th1/Th2是AIH患者发生肝功能损伤的影响因素(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,Beclin1、LC3、Th1/Th2及三者联合AUC分别为0.773、0.844、0.751、0.896,三者联合预测AUC最大。【结论】AIH患者外周血Beclin1、LC3水平过度表达,Th1/Th2平衡趋向于Th1,Beclin1、LC3与Th1/Th2联合检测对AIH肝功能损伤具有较高的预测价值。

SDSL-EPR技术检测LC3B蛋白功能结构域中特定位点的运动特性

目的用定点自旋标记-电子顺磁共振(SDSL-EPR)技术检测自噬相关蛋白LC3B功能结构域上特定氨基酸位点的运动特性。方法采用序列重叠延伸PCR(SOE-PCR)法对LC3B蛋白NHD结构域α1螺旋Q9位点、ULD结构域α3螺旋N59位点以及口袋结构内部β1折叠135位点引入半胱氨酸(cysteamine,Cys)突变,表达纯化获得LC3B突变体蛋白;甲烷硫代磺酸(2,2,5,5-tetramethyl-1-oxyl-3-methyl methanethiosulfonate,MTSL)自旋标记后进行电子顺磁共振(EPR)检测,通过计算EPR波谱旋转相关时间τc,分析不同氨基酸位点的运动特性。结果构建了LC3B突变体基因的原核表达载体pET-22b-LC3B,实现了蛋白的可溶性高效表达;Q9C和N59C位点EPR波谱呈现双成分叠加谱,Q9C位点不同运动成分的τc值分别为1和3.8 ns,N59C位点为1和3.4 ns;I35C位点为三成分叠加谱,其τc值分别为0.7、2.9和8.1 ns。结论存在于特定氨基酸位点的运动性差别,预示着溶液状态下LC3B蛋白各功能结构域的同一氨基酸位点处可能存在不同的构象特征。