大鼠肠道致敏模型的建立及其内脏敏感性的评估

目的:内脏高敏感性是肠易激综合征(IBS)的重要病理 生理特征之一,本研究旨在建立一个内脏高敏性的动物模型,

全不相合与全相合骨髓细胞在致敏模型的归巢与植入

【目的】探讨全不相合与全相合供者骨髓细胞在致敏模型的归巢与植入情况。【方法】以异基因脾细胞输注致敏的BALB/c小鼠作为移植受者,致敏模型经8 Gy 60Co照射后分别经尾静脉移植1×107 C57BL/6或BALB/c供者的骨髓细胞。予CFSE标记供者骨髓细胞,并分别在移植后不同时间点(2、12及48 h),通过病理切片及组织细胞悬液动态示踪供者细胞在致敏受者各组织的分布。移植后记录各组的生存情况,每周监测造血重建与骨髓恢复情况。【结果】归巢实验表明C57BL/6骨髓细胞在致敏受者股骨的分布随时间推移先增加而后减少,在脾脏的分布随时间推移呈进行性减少。BALB/c骨髓细胞在致敏模型股骨及脾脏的分布均随时间推移而增加。接受C57BL/6骨髓细胞的致敏模型于移植第12～15天内全部死亡,血象及骨髓象呈进行性下降;而接受BALB/c骨髓细胞的能长期存活,血象及骨髓象能迅速恢复。【结论】全不相合的供者骨髓细胞在致敏模型中完全被排斥,而全相合供者的骨髓细胞能在致敏模型中能进行有效的归巢与植入。

异基因骨髓细胞在致敏模型体内归巢示踪与植入分析

目的:探讨异基因供者骨髓细胞在致敏模型体内的归巢示踪与植入分析。方法:以异基因脾细胞输注方法建立致敏的BALB/c小鼠模型,同时取正常BABL/c小鼠作为非致敏模型。致敏或非致敏模型经8 Gy[60Co]照射后分别经尾静脉移植1×107 C57BL/6小鼠骨髓细胞。用绿色荧光染料CFSE标记供者骨髓细胞,并分别在移植后不同时点(2 h、12 h及48 h),通过组织细胞悬液动态示踪供者细胞在致敏受者各组织的分布。移植后记录各组的生存情况,每周监测造血重建与骨髓恢复情况。予H-2Db进行标记移植后受者骨髓细胞,检测供者嵌合百分比。结果:CFSE能标记供者骨髓细胞并用于体内示踪实验。动物体内归巢示踪实验表明,与非致敏组相比,异基因供者骨髓细胞在致敏受者体内的外周血、脾脏及股骨的分布均明显减少。植入分析结果发现,非致敏受者于移植后能长期存活,外周血及骨髓细胞均能迅速恢复;而致敏组中,小鼠均于移植后2周左右全部死亡,生存中位数为13 d,外周血及骨髓细胞均随时间推移呈进行性减少。嵌合分析显示移植后第7 d,非致敏受者与致敏受者的供者骨髓细胞百分比分别为(48.07±4.70)%和(0.77±0.11)%,两者差异显著(P<0.01)。结论:异基因供者骨髓细胞在致敏受者体内脾脏及股骨等部位被清除,不能有效植入。

骨髓腔输注造血干/祖细胞在致敏模型应用的实验研究

本研究旨在致敏模型中通过骨髓腔输注异基因造血干/祖细胞方法探讨致敏移植的新策略。应用脾细胞输注方法建立的致敏BABL/c小鼠作为致敏模型,取正常BALB/c小鼠作为非致敏受者,通过骨髓腔输注同种异基因造血干/祖细胞,观察移植后受者的生存及血象恢复情况。同时分离致敏及非致敏小鼠的血清,应用补体依赖细胞毒性反应方法检查血清抗体对异基因造血干/祖细胞损伤的影响。结果显示:非致敏受鼠经骨髓腔输注造血干/祖细胞后能长期存活,血象随时间推移而逐渐恢复正常。而致敏移植受鼠中有1只小鼠于移植前由于麻醉意外而死亡,其余90%致敏受鼠(9/10)经骨髓腔注射骨髓细胞后于2周内死亡,血象随时间推移而逐渐下降。取濒死的致敏受鼠组织行病理切片检查,证实致敏受鼠死于骨髓衰竭。补体依赖细胞毒性反应实验结果显示,非致敏组和致敏组的造血干/祖细胞死亡细胞百分比分别为(7.80±1.93)%和(50.80±3.12)%,两组差异有明显统计学意义(p<0.05),提示致敏血清对异基因造血干/祖细胞具有损伤作用。结论:通过骨髓腔输注造血干/祖细胞的方法并不能促进异基因供者细胞在致敏受者体内植入。

牡蛎Cra g 1蛋白大鼠致敏模型的建立与分析

为了建立并分析牡蛎致敏大鼠模型,利用牡蛎过敏原Cra g 1,通过灌胃和腹腔注射相结合的方式致敏雌性棕色挪威大鼠(BN大鼠)。观察各组BN大鼠过敏反应及体重、体温、脏器指数、血象指标变化;通过ELISA法检测抗体、组胺变化;通过苏木精-伊红(HE)及甲苯胺蓝染色观察组织器官变化。结果显示,实验组动物均发生过敏反应,对照组无明显症状;实验组动物体重显著低于对照组,脏器指数显著高于对照组,血液中细胞数量发生变化;另外,致敏期间实验组抗体及组胺水平均高于对照组;染色结果表明实验组大鼠脏器出现明显的病变损伤,肠道肥大细胞脱颗粒现象严重。该研究获得了Cra g 1蛋白致敏血清,同时证明BN大鼠是良好的动物致敏模型,为研究食物过敏原致敏机制及其体内免疫调节提供较好的依据。

致敏动物模型的建立及其对造血干细胞植入的影响

本研究目的是建立致敏的动物模型,探索致敏动物体内免疫功能的改变,并探讨致敏对造血干细胞植入的影响。经尾静脉分别输注不同数量的C57BL/6脾细胞(1×105、1×106、1×106,连续注射2次,间隔7天)于BALB/c小鼠,通过补体依赖淋巴细胞毒性实验、混合淋巴细胞反应和ELISA等方法检测致敏模型的免疫功能。致敏BALB/c模型经8Gy60Coγ-线照射后通过尾静脉或骨髓腔移植1×107C57BL/6骨髓细胞,观察移植后生存情况。结果表明:致敏BALB/c模型均产生不同强度的供者反应性抗体,1×106及1×106连续注射2次,间隔1周的致敏组脾细胞体外增殖均明显高于正常小鼠。各组致敏模型小鼠经尾静脉注射C57BL/6骨髓细胞后,均于移植后第9-15天死亡,1×106连续注射2次,间隔1周的致敏BALB/c模型经骨髓腔注射骨髓细胞后亦于2周内死亡。结论:通过同种异基因的脾细胞输注建立不同致敏程度的动物模型,该致敏模型小鼠体内免疫功能的变化与致敏程度有关。脾细胞输注致敏使受者对供者造血干细胞产生排斥作用,而骨髓腔注射方法并不能改善植入。

雷公藤多甙供体预处理对致敏大鼠供心移植成活影响

目的用大鼠皮肤致敏模型研究用雷公藤多甙（ＴⅡ）供体预处理对移植心脏成活的影响。方法ＳＤ大鼠作供体，Ｗｉｓｔａｒ大鼠作受体，Ａ、Ｂ两组所有受体在心脏移植前均先用供体皮肤致敏，Ａ组作单纯心脏移植，Ｂ组作经供体预处理后的供心移植，Ｃ组在单纯心脏移植前不作致敏处理。结果在细胞和体液免疫均较强的内环境中，Ｂ组移植供心成活时间均较其相应的对照组Ａ组明显延长。结论ＴⅡ供体预处理能明显延长移植供心成活时间，该法简单实用，对降低术后免疫抑制剂用量及毒副作用有一定的意义。

氨甲蝶呤供者预处理对致敏大鼠移植心脏成活的影响

目的 用大鼠皮肤致敏模型研究氨甲蝶呤供者预处理对移植心脏成活的影响及其与术后抗排斥治疗的协同效果。 方法 ＳＤ 大鼠作供者，Ｗｉｓｔａｒ 大鼠作受者，所有受者在心脏移植前均先用供者皮肤致敏，依据受者治疗和供者预处理情况的不同，将４８ 只Ｗｉｓｔａｒ 大鼠随机分成对照组、供者预处理组、受者治疗组和协同治疗组，每组各１２ 只。（１） 对照组作非供者预处理的供者心脏移植；（２） 供者预处理组作经供者预处理后的供者心脏移植；（３） 受者治疗组作非供者预处理的供者心脏移植后用环孢素Ａ（ＣＳＡ）１００ｍｇ／ｋｇ·ｄ 治疗３ 天；（４） 协同治疗组作经供者预处理后的供者心脏移植，再用ＣＳＡ 治疗３ 天。观察４ 组手术前后红细胞免疫指标的动态变化，供者心脏移植后存活时间，淋巴细胞增殖反应，供者心脏超微结构等变化。 结果 在细胞和体液免疫均较强的内环境中，供者预处理组和协同治疗组的移植供者心脏成活时间均较对照组和受者治疗组明显延长。 结论 氨甲蝶呤供者预处理能明显延长移植供者心脏成活时间，并与术后对受者的免疫抑制治疗有协同效果，该法简单、实用，对降低术后免疫抑制剂用量和毒副作用有一定的意义。

骨髓间充质干细胞在致敏与非致敏BALB/c小鼠造血干细胞移植中的应用

背景:造血干细胞移植对多种疾病具有治疗作用,但其取材不便,且细胞数量受年龄限制等原因,故而应用具有一定局限性。目的:探索骨髓间充质干细胞在致敏与非致敏BALB/c小鼠造血干细胞移植中的应用价值。方法:将BALB/c小鼠骨髓细胞在体外进行分离,采用贴壁培养的方法获得间充质干细胞,使用流式细胞仪对细胞表面的分子标记进行检测。应用异基因脾细胞输注方法建立致敏动物模型,用绿色荧光染料标记骨髓间充质干细胞,分别移植到致敏和非致敏的受体小鼠体内,并在移植后的不同时间点对间充质干细胞的归巢情况进行检测。对致敏BALB/c小鼠进行照射预处理,联合应用异基因骨髓细胞与同基因间充质干细胞移植,观察BALB/c小鼠的生存情况。结果与结论:移植48 h后,间充质干细胞在致敏受体和非致敏受体小鼠分别归巢于脾脏和骨髓。在造血干细胞的移植实验中,致敏BALB/c小鼠接受异基因骨髓细胞与同基因骨髓间充质干细胞联合移植,结果显示致敏BALB/c小鼠全部在移植后12-15 d死亡,生存的中位时间是14 d,而仅接受异基因骨髓细胞移植的致敏BALB/c小鼠的中位生存时间为13 d。说明细胞移植后在致敏受体内间充质干细胞主要归巢为脾脏和骨髓,联合应用间充质干细胞移植对异基因造血干/祖细胞植入致敏受体体内并没有起到有效的促进作用。

致敏小鼠血清代替过敏患者血清筛选Jug r 1 IgE线性抗原表位的可行性研究

目的:利用核桃过敏患者和核桃过敏原Jug r 1致敏小鼠血清筛选Jug r 1的IgE线性抗原表位,比较两者所筛选的表位的差异性,为今后利用小鼠血清替代人血清筛选食物过敏原表位提供理论依据,对食物过敏原研究及治疗具有重要意义。方法:利用固相合成肽法合成44个覆盖了Jug r 1一级序列的重叠短肽,通过圆点印迹试验利用核桃过敏患者血清和核桃过敏原Jug r 1致敏小鼠血清分别筛选出IgE抗原表位。结果:核桃过敏患者可以识别的IgE结合的线性抗原表位分别是肽段~1AALLVALLFVANAAA^(15)、4LVALLFVANAAAFRT18、^(16)FRTTITTMEIDEDID^(30)及^(125)CGISSQRCEIRRSWF^(139);核桃过敏原Jug r 1致敏小鼠所识别的抗原表位分别是1AALLVALLFVANAAA15和^(125)CGISSQRCEIRRSWF^(139)。结论:通过小鼠过敏血清筛选出的两个IgE线性抗原表位存在于过敏患者血清筛选出的4个IgE抗原表位中,提示在利用致敏小鼠血清代替过敏患者血清筛选IgE抗原表位时,可能出现假阴性结果,即有部分IgE线性抗原表位没有被识别。

缬草波春对非炎症性结肠致敏大鼠模型大脑海马旁回GABA-B受体表达的影响

目的研究缬草波春对非炎症性结肠致敏大鼠模型大脑海马旁回(hippocampal convolution)γ-氨基丁酸-B受体(γ-aminobutyric acid-B receptor,GABA-B receptor)表达的影响。方法用正丁酸盐灌肠法诱导非炎症性结肠致敏大鼠模型,设药物实验组、模型对照组及空白对照组3组(n=8),药物实验组用缬草波春对模型组灌胃2周,对照组灌注等量生理盐水,2周后分别处死空白对照组、模型对照组及药物实验组大鼠,取相关海马旁回,用免疫组化半定量的方法检测组织GABA-B受体表达。结果空白对照组(0.235±0.014)、模型对照组(0.161±0.017)及药物实验组(0.238±0.019)的大脑海马旁回有GABA-B受体表达;模型对照组GABA-B受体表达较空白对照组减少,差异有统计学意义(t=2.86,P<0.01);缬草波春使模型GABA-B受体表达上调,与模型对照组比较差异有统计学意义(t=3.28,P<0.01),与空白对照比较差异无统计学意义(t=1.45,P>0.05)。结论非炎症性结肠致敏大鼠模型大脑海马旁回GABA-B受体表达减少,缬草波春使非炎症性结肠致敏大鼠模型大脑海马旁回GABA-B受体表达增加。

无针青霉素皮试法取代传统有针皮试的实验研究

目的:开展无针青霉素皮试法与传统皮试方法的比较研究,为无针青霉素皮试法提供实验依据。方法:建立青霉素致敏豚鼠模型,并以无针和有针皮试法检测致敏豚鼠及对照豚鼠,比较其阳性检出率、假阳性率、漏检率和皮肤病理损伤评价等临床指标。结果:无针及有针皮试法对豚鼠致敏模型的阳性检出率均为100%,无假阳性及漏检;且相较于传统有针皮试,无针皮试阳性结果更明显,造成的皮肤病理损伤更小。结论:无针青霉素皮试对过敏豚鼠检出精确,皮试阳性结果相比于传统有针注射更明显,并且无恐针情绪,造成法人皮肤病理损伤也更小,有望在临床上取代针头青霉素皮试法。

颗粒物对卵清蛋白致敏动物模型影响的研究进展

颗粒物对卵清蛋白(OVA)致敏动物模型影响的研究是近年国际上研究热点之一。该文对不同品系动物、不同的动物致敏和染毒过程和不同性质颗粒物对卵清蛋白致敏动物的影响进行分析,并综述了柴油机颗粒物(DEP)、碳纳米颗粒物、炭黑颗粒、浓缩大气颗粒物和香烟烟雾等不同类型颗粒物对卵清蛋白致敏动物的影响,研究提示颗粒物对卵清蛋白致敏动物的免疫因子、气管炎症、氧化损伤和基因表达等均有影响,并就颗粒物对卵清蛋白致敏动物影响的研究进行了展望。