HPLC-MS/MS法测定茶叶中花青素类活性物质含量

花青素类物质作为茶叶的主要生物活性成分,其含量和种类代表着茶叶的食用价值。由于茶叶富含蛋白质、糖类、茶多酚、黄酮类、生物碱、矿物质、维生素、色素等多种成分,采用国内现有相关标准测定茶叶基质中花青素类活性物质时,存在难以同时准确定量多种花青素物质含量的实际问题,因此,文章首先对样品前处理条件和色谱、质谱条件进行优化,然后采用高效液相色谱–串联质谱法测定茶叶中6种花青素类物质的含量。其结果表明,该方法在浓度范围为25~2500μg/L内线性关系良好,相关系数R均大于0.99,回收率的范围为91.95%~106.99%,精密度RSD均小于10%,满足同时准确定量分析的要求。该方法操作简便、灵敏度和准确度高,可为茶叶中花青素含量检测标准方法的制定提供参考。

花青素类色素纯化技术研究进展

食用色素是一种重要的食品添加剂,高色价、高安全性的天然食用色素备受生产者和消费者的青睐,因而具有非常好的发展前景。本文综述了花青素类色素分离纯化的主要方法,对目前常见的几种重要的分离纯化方法进行了较为系统、详细的介绍,对其优点和存在的主要问题进行了详细阐述,并对未来的技术发展趋势进行了分析,旨在为花青素类色素的纯化研究提供较为全面、系统的参考。

花青素类提取物对光诱导的大鼠视网膜功能和结构损伤的保护作用

背景长期光照能诱发自由基和脂质过氧化物形成，造成视网膜损伤，探讨保护视网膜免受光损伤的方法和药物具有重要的意义。目的评价花青素对视网膜光损伤后大鼠视网膜组织形态和功能损伤的预防作用。方法将18只清洁级雄性成年sD大鼠以随机数字表法随机分为生理盐水组、花青素组及混合组，每组6只。各组大鼠于实验前记录视网膜电图（ERG）国际标准五项基本反应，然后3个组大鼠分别连续5d腹腔内注射5ml／kg生理盐水、花青素或花青素＋氢饱和生理盐水（HRS）混合液。各组大鼠均用（5000±300）lx光照度于19：00～次日7：00持续照射大鼠右眼3h，左眼遮盖，制作右眼单眼光损伤模型，完成后继续饲养5d，重复记录大鼠ERG国际标准化五项反应。检测结束后立即处死大鼠并制作视网膜切片，对各组大鼠视网膜损伤进行组织学定位，并比较不同干预组大鼠视网膜结构和功能的变化。结果造模前及造模后5d，3个组大鼠的体质量差异均无统计学意义（造模前：F=0．472，P=0．841；造模后：F=0．658，P=0．762）。造模前3个组大鼠左眼、右眼间暗适应0．01ERGb波、暗适应3．0ERGa波和b波、暗适应3．0震荡电位的总幅值、明适应3．0ERGb波及3．0闪烁光反应P，波的差异均无统计学意义（P〉0．05）。造模后5d，各组大鼠损伤眼与自身对照眼相比，上述ERG五项检测各波的振幅值均出现明显下降，差异均有统计学意义（P〈0．05），尤以生理盐水组更为明显，表明光损伤模型建立成功。3个组间暗适应0．01ERG的b波、暗适应3．0ERG的a波和b波、暗适应3．0震荡电位的总幅值差值的差异均有统计学意义（F=4．594，P=0．029；F=3．834，P=0．037；F=12．823，P=0．000；F=3．976，P=0．032），而明适应3．0ERG的b波差值的差异无统计学意义（F=1．488，P=0．259），其中与生理盐水组比较，花青素组与混合组双眼间暗适应0．01ERGb波，暗适应3．0ERGa波、b波，暗适应3。0震荡电位总幅值的差值明显降低，差异均有统计学意义（P〈0．05）。3个组大鼠光照眼的视网膜外核层细胞层数均有所减少，部分位置的数据与对照眼相比，差异均有统计学意义（P〈0．05），尤其以视盘周边区域以及上部1～2mm处最为明显；花青素组及混合组大鼠损伤视网膜外核层平均细胞层数均明显多于生理盐水组损伤眼，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论花青素类提取物能够预防光照引起的大鼠视网膜结构和功能损伤，花青素与HRS混合物的作用与单纯花青素类提取物作用相似。

花青素类抗结肠癌研究进展

结肠癌全球发病率呈加速上升趋势,且手术难度大,易转移。近年来,植物提取物在其防治中显示出独特优势。花青素类是一类天然的水溶性色素苷元,红紫色水果和蔬菜的颜色基础,也是饮食摄取的主要黄酮类化合物。目前研究发现,它们因其特殊的化学结构和药理作用可抑制结肠癌的发生发展。本文总结了花青素对结肠癌的体内外抑制作用、代谢特点和相关的临床试验研究进展,同时介绍其可能的分子作用机制,为花青素的进一步临床应用提供参考。

两种新疆地产越橘的生药鉴别及花青素类成分的测定

目的对分布于新疆阿尔泰山脉的黑果越橘和越橘进行系统的生药学鉴别研究,同时分别测定两者花青素类成分的总含量。方法粉末制片法、薄层色谱法和p H示差法。结果得到了果实的性状特征、粉末显微特征、以矢车菊素-3-O-葡萄糖苷为对照品的薄层色谱鉴别特征以及黑果越橘和越橘果实中花青素类成分的总含量分别为624mg/100g和352mg/100g,高于市售蓝莓的含量。结论所得结果可作为两种药材的鉴别依据,两种植物果实有高含量的花青素类成分,为研发和利用这一自然资源提供参考。

枸杞化学成分和药理作用研究进展及质量标志物的预测分析

枸杞是一种药食两用药材,被广泛应用于保健食品的加工中。研究表明其含有多糖类、黄酮类、花色苷类、原花青素类、生物碱类等多种化学成分,且具有免疫调节、抗衰老、降糖调脂、降压、抗肿瘤等药理作用。通过对枸杞的主要化学成分和药理作用进行综述,在此基础上,结合质量标志物(Q-marker)理论的研究思路,从传统功效、植物亲缘学、化学成分有效性等方面进行枸杞质量标志物预测,为枸杞的进一步开发利用提供科学依据。

莲房原花青素对人肝癌细胞HepG2生长及凋亡的作用

目的:观察莲房原花青素(LSPC)对人肝癌细胞HepG2生长及凋亡的作用。方法:以四甲基噻唑蓝来分析不同浓度LSPC对人肝癌细胞HepG2存活率的影响,用流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡,RT-PCR分析LSPC引起的生长抑制和DNA损伤基因GADD45β、GADD153、GADD34表达水平的变化。结果:LSPC可诱导HepG2细胞凋亡,抑制其生长,促进其凋亡(P<0.05),且呈浓度依赖性。生长抑制损伤基因GADD45β、GADD153、GADD34表达水平随着LSPC浓度增加而增加。结论:LSPC可抑制人肝癌细胞HepG2,具有抗肿瘤的药理作用。

原花青素对多囊卵巢综合征合并动脉粥样硬化模型大鼠的作用

目的探究原花青素对多囊卵巢综合征(PCOS)合并动脉粥样硬化模型大鼠的作用及其机制。方法2015年1—10月,采用随机数字表法从20只健康雌性清洁级SD大鼠中选取15只为建模组,在其颈背部皮下埋置双氢睾酮(DHT)缓释片,并且定期更换DHT缓释片的同时,给予高脂饲料配方,给予充分的颗粒饲料和水,建立PCOS合并动脉粥样硬化模型大鼠;其余5只大鼠为对照组,常规饲养。16周后,分别检测两组大鼠体质量、雄激素、瘦素、胰岛素水平,光学显微镜下观察其主动脉内膜病理情况,以验证PCOS合并动脉粥样硬化模型大鼠成功与否。将建模成功的15只大鼠采用随机数字表法分为模型组、辛伐他汀组、原花青素组,各5只。对照组与模型组大鼠给予0.9%氯化钠溶液,辛伐他汀组大鼠给予辛伐他汀片,原花青素组大鼠给予原花青素。治疗4周后,检测4组大鼠脂代谢指标[总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)]水平、脂代谢关键基因[过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMG-Co A还原酶)、ATP结合盒转运子A1(ABCA1)、肝脏X受体α(LXR-α)、法尼醇受体(FXR)]mRNA表达水平。结果建模组体质量、雄激素、瘦素、胰岛素水平均低于对照组(P<0.05)。光学显微镜下观察大鼠主动脉内膜病理情况,结果显示,与对照组相比,建模组大鼠主动脉内膜出现大量粥样斑块及胆固醇结晶。模型组TC、TG、LDL水平高于对照组(P<0.05);辛伐他汀组TC、TG、LDL水平低于模型组,HDL水平高于对照组、模型组(P<0.05);原花青素组TC、TG、LDL水平低于模型组,TC、LDL水平低于辛伐他汀组,HDL水平高于对照组、模型组(P<0.05)。模型组PPAR-γ、HMG-Co A还原酶、FXR mRNA表达水平低于对照组(P<0.05);辛伐他汀组PPAR-γ、HMG-Co A还原酶、ABCA1、LXR-α、FXR mRNA表达水平高于模型组,HMG-Co A还原酶、ABCA1、LXR-α、FXR mRNA表达水平高于对照组(P<0.05);原花青素组PPAR-γ、HMG-Co A还原酶、ABCA1、LXR-α、FXR mRNA表达水平高于对照组、模型组,HMG-Co A还原酶mRNA表达水平高于辛伐他汀组(P<0.05)。4组大鼠主动脉内膜病理情况:与对照组相比,模型组大鼠主动脉内膜出现大量粥样斑块及胆固醇结晶;与模型组相比,辛伐他汀组大鼠主动脉内膜粥样斑块缩小,同时胆固醇结晶也减少;与辛伐他汀组相比,原花青素组大鼠主动脉内膜粥样斑块缩小更多,同时胆固醇结晶也减少更多。结论原花青素可改善PCOS合并动脉粥样硬化模型大鼠脂代谢水平并缩减动脉粥样斑块。

原花青素对脑缺血后抑凋亡基因蛋白Bcl-2和促凋亡基因蛋白Bax的影响

目的:观察原花青素对局灶性脑缺血大鼠大脑皮质抑凋亡基因蛋白Bcl-2和促凋亡基因蛋白Bax表达的影响,并分析该影响是否存在剂量依赖性。方法:实验于2004-11/2006-01在锦州医学院药理实验室和免疫组化实验室完成。①选用健康成年SD大鼠30只,雌雄各半,体质量200～250g。②按随机抽签法将大鼠分为5组:假手术组,模型组,原花青素低、中、高剂量组,每组6只。除假手术组不插入线栓外,余下各组均以线栓法阻塞大鼠右侧大脑中动脉,制成局灶性脑缺血模型。以大鼠即刻出现右侧Horner征为造模成功。原花青素低、中、高剂量组:于术前2周分别按100,200,300mg/kg剂量灌胃原花青素混悬液(原花青素粉剂,由天津尖峰天然产物研究开发有限公司提供,批号:20040719),1次/d,共2周,并于术前1h再灌胃1次。假手术组和模型组:于术前2周灌胃等量生理盐水。③术后24h用免疫组化SABC法染色统计大脑皮质每高倍镜视野Bcl-2和Bax表达阳性细胞数。④多组间计量资料差异比较采用单因素方差分析检验,两组间比较采用LSD检验。结果:大鼠30只均进入结果分析。①大鼠大脑皮质Bcl-2阳性细胞数:原花青素低、中剂量组分别为(34.33±8.16)和(31.44±7.09)个,比模型组[(15.72±5.03)个]分别增加了118%,100%,差异明显(P<0.01);原花青素高剂量组与模型组相近[(16.33±5.48)个,P>0.05];原花青素低、中剂量组间差异不明显(P>0.05)。②大鼠大脑皮质Bax阳性细胞数:原花青素低、中剂量组分别为(11.83±4.57)和(12.56±4.31)个,明显少于模型组[(20.5±4.40)个,P<0.01];原花青素低、中剂量组间差异不明显(P>0.05);原花青素高剂量组与模型组相近(P>0.05)。结论:中、小剂量(100,200mg/kg)原花青素可对局灶缺血性脑损伤起到预防性保护作用,其保护作用发生可能与提高Bcl-2表达、抑止Bax表达有关。

葡萄皮渣中原花青素对临床常见分离菌的抗菌效应分析

目的探讨葡萄皮渣中的原花青素对临床常见分离菌大肠杆菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、肠球菌及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的抗菌作用。方法应用琼脂平板法测定原花青素对临床分离出的30株大肠杆菌、28株铜绿假单胞菌、15株鲍曼不动杆菌、32株屎肠球菌、25株粪肠球菌、70株MRSA的最低抑菌浓度（MIC）,并计算半数抑菌浓度（MIC50）和90%抑菌浓度（MIC90）,用统计软件SPSS16.0对结果进行统计分析。结果 3-8mg/mL的原花青素对大肠杆菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌等革兰阴性杆菌均无抑菌作用;3-8mg/mL的原花青素对粪肠球菌无抑菌作用,对屎肠球菌的抑菌率仅为6.3%;用原花青素对70株MRSA进行抑菌检测：4mg/mL原花青素的抑菌率为65.7%,8mg/mL抑菌率为95.7%,MIC50为4.221mg/mL、MIC90为6.260mg/mL。结论葡萄皮渣中的原花青素对常见革兰阴性杆菌如大肠杆菌、铜绿假单胞菌及鲍曼不动杆菌无抑菌作用,对革兰阳性球菌如MRSA、肠球菌有一定的抑菌效果,特别是对MRSA抑菌作用非常明显（P〈0.05）。

原花青素预防大鼠亚硒酸钠性白内障的机制研究

目的:研究原花青素(PC)对大鼠亚硒酸钠性白内障的预防作用并探讨其作用的时效关系。方法:SD大鼠45只,随机分为正常组、模型组和药物组,药物组在给予亚硒酸钠的同时给予80 mg.kg-1原花青素。给药第6,11,16天,分别放血处死每组动物的5只。测定晶状体中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量。结果:第10,15天的药物组晶状体中MDA含量有显著性降低(P<0.01),第15天的药物组晶状体中SOD,GSH-Px含量有显著性增高(P<0.01)。其作用机制与其良好的抗氧化作用有关。结论:原花青素可明显抑制大鼠晶状体白内障发生发展,而且晶状体中MDA,SOD,GSH-Px含量在本实验中呈现明显的时间效应关系,推荐给药时间是15 d。

花青素对电离辐射引起骨髓c-kit阳性细胞损伤防护作用的体外研究

目的观察花青素对电离辐射致小鼠骨髓c-kit阳性细胞损伤的防护作用及可能的作用机制。方法经磁珠细胞分选法获得小鼠骨髓c-kit阳性细胞,分为对照组和花青素组,每组再分成3份,分别接受0、1及4 Gy的137Csγ射线照射。对照组加700μL细胞悬液及等体积的无血清造血干/祖细胞扩增培养基,花青素组加700μL细胞悬液及含2×10-5mol/L花青素的等体积无血清造血干/祖细胞扩增培养基(37℃,5%CO2),照射前30 min加入,照射后继续培养18 h。采用化学发光法检测小鼠骨髓c-kit阳性细胞的细胞活力,以相对荧光强度(RLU)表示。甲基纤维素半固体培养法检测克隆形成数目(CFU-GM)。流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)及磷酸化组蛋白H2AX(γ-H2AX)平均荧光强度。结果组内比较:与0 Gy比较,经1 Gy和4 Gy照射后小鼠骨髓c-kit阳性细胞活力下降,CFU-GM下降,细胞内ROS增加,γ-H2AX平均荧光强度增加(P<0.05)。组间比较:与1 Gy和4 Gy对照组比较,花青素1 Gy和4 Gy组骨髓c-kit阳性细胞活力增加,CFU-GM增加,细胞内ROS降低,DNA损伤程度(γ-H2AX平均荧光强度)降低(P<0.05)。结论花青素通过降低细胞内ROS水平及DNA损伤程度起到对受照射小鼠骨髓c-kit阳性细胞的防护作用。

原花青素预处理对体外人源细胞辐射损伤的防护作用

目的:探讨原花青素(PC)预处理对体外人淋巴母细胞AHH-1和肠腺上皮细胞HIEC电离辐射损伤的防护效果及可能的作用机制。方法:采用CCK-8法检测原花青素预处理对γ射线照射后AHH-1、HIEC细胞存活率的影响,Annexin-Ⅴ/PI染色和流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期的变化,蛋白质印迹法检测细胞Bcl-2蛋白表达变化。结果:PC预处理的细胞辐照后存活率明显升高(P<0.01),4Gy照射用药组AHH-1细胞凋亡率(11.78%)显著低于单纯照射组(26.38%,P<0.01),8Gy照射用药组HIEC细胞凋亡率(5.32%)亦显著低于单纯照射组(12.45%,P<0.01)。PC预处理组AHH-1、HIEC细胞受照射后其Bcl-2蛋白表达下降受到抑制。结论:PC预处理对细胞的辐射损伤具有较好的防护效果,可能与其促进受损细胞Bcl-2蛋白表达有关。

葡萄原花青素对乙醇诱发小鼠肝细胞增殖活性损伤的防护作用

目的研究葡萄原花青素(GPC)对乙醇诱发小鼠肝细胞增殖活性损伤的防护作用。方法将小鼠随机分为5组,乙醇对照组和各剂量GPC组小鼠均每天经口灌胃乙醇4 g/kg体质量,低、中、高剂量GPC组同时分别给予GPC 50、100和200 mg/kg体质量,连续4周。眼球取血,颈椎脱臼处死小鼠,取肝组织用MTT法检测各组小鼠的肝细胞增殖活性,苏木精-伊红染色光镜下观察肝组织切片病理学改变,用免疫组织化学法检测肝细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达水平,用全自动生化分析仪检测血清中谷丙转氨酶(ALT)活性,用ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果高、中剂量GPC组ALT水平均显著低于乙醇对照组(F=14.05,q=4.29、5.53,P<0.05),细胞增殖活性显著高于乙醇对照组(F=68.68,q=5.71、8.57,P<0.05)。与乙醇对照组比较,高剂量GPC组Bcl-2/Bax比值显著升高(F=388.03,q=4.90,P<0.05),高、中剂量GPC组血清TNF-α浓度显著降低(F=10.09,q=3.01、5.68,P<0.05)。同时,GPC能不同程度改善肝脏病理损伤。结论 GPC可通过调整肝组织中Bcl-2/Bax比值,降低血清中TNF-α浓度,从而对乙醇诱发的小鼠肝细胞增殖活性损伤起到防护作用。

葡萄籽原花青素提取物对膳食诱导肥胖小鼠氧化应激的影响

目的观察强抗氧化剂葡萄籽原花青素提取物(grape seed procyandins extract,GSPE,低聚物>85%)对肥胖伴氧化应激小鼠抗氧化能力的影响。方法选用C57BL/6J小鼠,观察高、中、低剂量GSPE(400mg/kg·d-1、200mg/kg·d-1和100mg/kg·d-1)对膳食诱导肥胖(diet-inducedobesity,DIO)小鼠成模过程中体重、体脂、血清游离脂肪酸、血清肿瘤坏死因子α、肝谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、肝过氧化物歧化酶(SOD)、肝总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)的影响。结果GSPE能显著降低DIO小鼠的体重、体脂比,降低血清游离脂肪酸、血清肿瘤坏死因子α的水平,提高肝GSH-Px、SOD、T-AOC活性。结论GSPE有良好的预防DIO小鼠肥胖及其相伴的氧化应激的作用。

原花青素对肿瘤抑制作用的研究进展

近年来,肿瘤的发病率逐年增高,其死亡率在众多疾病中居首位,特别是恶性肿瘤目前的治疗手段多为手术切除并放、化疗,这种治疗方式副作用大,患者生存质量差,而且大部分患者治疗效果都较差,患者往往在发病后3～5年内死亡,所以人们迫切需要找到一种新的肿瘤治疗手段.而近几年来相关的研究发现,原花青素,尤其是葡萄籽中提取的原花青素抗癌效果良好.

原花青素对老年痴呆患者脑功能的影响

目的:研究葡萄籽原花青素(OPC)对老年痴呆患者脑功能的影响。方法:对30例老年痴呆患者予以口服固定剂量的OPC 2个月,采用脑电超慢涨落图仪(ET)记录患者服药前后的12导脑电波并分析其脑电功率和ETS谱线的各项指标的变化。结果:与服药前相比,患者服用OPC 2个月后,多项ETS谱线(S1,S2,S4,S5,S7)有显著性变化(P<0.05)。结论:OPC能显著改善老年痴呆患者的脑功能,其机制可能是通过调节脑内神经递质含量,保护胆碱能神经起作用的。

龙眼核中原花青素的提取工艺研究

目的优选龙眼核中原花青素的提取工艺。方法采用超声提取法提取龙眼核中原花青素,通过单因素及正交试验考察乙醇浓度、料液比、提取时间、提取温度、提取次数5个因素对原青花素提取率的影响。结果确立最佳提取工艺为乙醇浓度60%,提取温度70℃,提取时间40 min,料液比1∶10,提取次数2次。在该条件下,原花青素提取率为0.652%。结论该研究为龙眼核中原花青素的有效提取与利用提供了一定的理论依据。

葡萄皮渣中原花青素对HL-60细胞作用的研究

目的探讨原花青素(GPC)在体外对人白血病细胞(HL-60细胞)增殖抑制及细胞凋亡的诱导作用。方法体外培养HL-60细胞,分别用100、200、300、400、500μg/mL GPC作用。MTT法检测不同浓度GPC作用24、48、72h后HL-60细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测24h后HL-60细胞的凋亡情况。结果随着GPC药物浓度的增加,其对HL-60细胞的增殖抑制率逐渐增高,呈时间-剂量依赖效应关系;GPC在低浓度(200μg/mL)时可引起少量的细胞发生凋亡,随着GPC浓度的增加,细胞凋亡率也在不断增加,呈明显的量效关系。结论 GPC可在体外抑制HL-60细胞的增殖,并诱导HL-60细胞凋亡。