同步荧光法对三种芳香族氨基酸的测定

建立同时测定混合体系中色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸的同步荧光分析方法。以波长差Δλ=70nm进行同步荧光扫描,色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸的同步特征峰(以激发波长表示)分别位于280、228、206nm。酪氨酸和苯丙氨酸可直接由同步特征峰的信号强度进行定量;色氨酸的同步特征峰略受酪氨酸的弱峰影响,采用一阶导数处理后,即可消除干扰,实现定量分析;检出限分别为6.9×10-9、3.8×10-8、4.2×10-7mol/L。该方法无需预分离过程,用于啤酒及氨基酸注射液样品的测定,结果满意。

高效液相色谱法快速测定血清中的芳香族氨基酸

采用高效液相色谱 紫外检测法分离测定了血清中的芳香族氨基酸。采用的色谱柱为WatersNova PakC18柱(4μm,150mm×3 9mmi d ),流动相为乙腈 水(体积比为6∶94,pH3 4)溶液,流速为1 0mL/min,检测波长为215nm。血清标本经5%(体积分数)高氯酸溶液去除蛋白质后取上清液直接进样,10min内完成测定。探讨了流动相的pH及其有机相的比例、蛋白质沉淀剂以及检测波长等因素对分离度和灵敏度的影响。考察了其他10余种氨基酸、多巴胺类等物质对目标组分检测的干扰。该方法的日内、日间测定的相对标准偏差均小于5%,芳香族氨基酸测定的线性范围、检测限、回收率等均满足临床检验的要求。结果表明:该方法简便、快速、准确、可靠,适用于临床和科研工作。

7-羟基香豆素与三种芳香族氨基酸作用的荧光光谱研究

运用荧光光谱和紫外光谱研究7-羟基香豆素UBM分别与色氨酸Trp,酪氨酸Tyr和苯丙氨酸Phe三种芳香族氨基酸的相互作用。结果表明在模拟人体生理条件下,UMB能引起上述氨基酸发生荧光猝灭,最大猝灭波长依次为347,303和282nm,猝灭机制均为静态猝灭,相互之间均以摩尔比1:1形成了复合物,且得到两种温度下UMB与Trp,Tyr和Phe反应的表观平衡常数Kc分别为298.15K时2.993×106,7.858×104和1.186×103 L.mol-1,310.15K时2.702×104,1.063×105和8.352×103 L.mol-1。热力学函数变化表明UMB与以上三种氨基酸结合作用较强,其中UMB-Trp相互作用力是氢键或范德华力,UMB-Tyr和UMB-Phe相互作用主要以疏水作用为主,同时都可能存在偶极-偶极之间的相互作用。

同步导数荧光光谱法测定食品中3种芳香族氨基酸

提出了同步导数荧光光谱法同时测定食品中色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸的方法。试验表明:为排除干扰,色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸的特征同步导数荧光波长宜选定279,224,256 nm,波长差Δλ为55,70,25 nm条件下进行同步扫描。3种芳香族氨基酸的浓度分别在一定范围内与其导数荧光强度呈线性关系,检出限(3s/k)分别为6.3×10^(-9),1.6×10^(-8),4.0×10^(-7)mol·L^(-1)。方法用于蜂蜜、羊奶粉和啤酒样品中3种芳香族氨基酸的测定,回收率在92.3%～103%之间。

人芳香族氨基酸脱羧酶基因的克隆及测序

【目的】用RT PCR法获得人类神经元性芳香族氨基酸脱羧酶 (AADC)基因全序列 ,并建立优化方法。【方法】从人嗜铬细胞瘤中提取组织总RNA ,自行设计引物 ,采用两步RT PCR法扩增出长约 15 5 0bp的基因片断 ,凝胶回收后与高效克隆PCR产物的新型载体T 载体连接 ,并转化入大肠杆菌 ,通过蓝白斑反应筛选出重组体 ,质粒提取后进行重组体的酶切鉴定及基因测序。【结果】BamHⅠ和HindⅢ酶切证实了目的基因同克隆载体进行了有效的连接 ,基因测序证实了所克隆的片断为人AADC基因。【结论】本实验通过对引物 ,Taq酶的选择及反应条件的优化 ,保证了扩增的有效性和特异性。新型的克隆载体明显提高了克隆效率。基因测序证实了AADC基因扩增的成功。本研究为AADC基因治疗帕金森病等多巴胺能缺乏疾病的研究打下了基础。

生物合成芳香族氨基酸及其衍生物的研究进展

现代生物化工主要以廉价可再生资源为底物生产高附加值的精细化学品、大宗化学品、药品及营养品。合成生物学研究是生物化工领域的重要发展方向和支撑体系之一,是在功能基因组学、计算生物学和系统生物学等基础上,将工程化理念应用在生物学中,定向创造新型生物产品和生物过程整体优化的新的研究方向。合成生物学发展十几年以来,创造出了很多强有力的工具被应用于微生物、植物及动物的研究。以微生物生产芳香族氨基酸及其衍生物为主要内容,系统的综述合成生物学在以微生物生产高附加值产物方面的研究进展。

反相高效液相色谱法直接检测芳香族氨基酸

用反相高效液相色谱-变波长紫外检测法直接测定了芳香族氨基酸。流动相为磷酸盐缓冲溶液(pH6)和甲醇的混合溶液,其体积配比为7030,流速为0.6ml/min,变波长紫外检测,10min内完成。酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸的线性范围分别为50～500μg·mL-1、200～20000μg·mL-1、20～2000μg·mL-1,三者的检测限分别为10μg·mL-1、150μg·mL-1、5μg·mL-1。

米曲霉氨基酰化酶酶法拆分制备D型芳香族氨基酸

以DL-苯丙氨酸为起始原料,乙酸酐乙酰化后得到N-乙酰DL-苯丙氨酸,利用米曲霉氨基酰化酶立体结构专一催化水解N-酰基-L-氨基酸的酰胺键的特点,分别得到L-苯丙氨酸和N-乙酰D-苯丙氨酸.通过结晶法分离两者后,N-乙酰D-苯丙氨酸经6mol/LHCl水解得到D-苯丙氨酸.由此拆分DL-苯丙氨酸得到光学纯度分别为98%的L-苯丙氨酸(收率84.8%,以原料N-乙酰-DL-苯丙氨酸的0.5倍摩尔量为理论产率)和92.3%的D-苯丙氨酸(收率89.5%).

水溶液中几种芳香族氨基酸π-π自堆叠作用

利用精密的流动混合微量热法测定了298.15K时D/L-色氨酸、L-色氨酸、L-组氨酸和L-苯丙氨酸四种天然芳香族氨基酸水溶液的稀释焓,根据所建立的拟等步自堆叠作用的化学模型对实验数据进行了处理,计算得到模型参数KΔHm.该化学作用参数与McMillan-Mayer理论模型中的焓对作用系数具有高度一致性,即hxx=KΔHm.结合文献报道的结果,认为芳核π-π自堆叠作用在本质上是一种特殊的疏水-疏水作用,一般表现为吸热效应;取代基空间位阻、芳核以外部分的静电。

高效毛细管电泳法直接测定红豆杉悬浮培养细胞中游离芳香族氨基酸

建立了红豆杉悬浮培养细胞中游离芳香族氨基酸的高效毛细管电泳的分离直接紫外吸收测定方法。在优化的实验条件下 ,以间苯二酚为内标 ,未涂层融硅毛细管 (75 μmi.d .,总长 37cm ,有效分离长度 30cm)为分离通道 ,40mmol/L磷酸缓冲液 (pH10 .46 )为电泳介质 ,3sec(0 .5 psi)压力进样 ,15kV恒压电泳 ,2 0 0nm检测 ,在 9min内三种氨基酸得到分离测定。色氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸的线性范围分别为 2 .5 0～ 2 5 0 μmol/L(r =0 .996 2 ,RSD =2 .5 2 % )、1.2 5～ 2 5 0 μmol/L(r =0 .996 6 ,RSD =2 .12 % )和 2 .5 0～ 2 5 0 μmol/L(r=0 .9940 ,RSD =2 .93% ) ,苯丙氨酸回收率为 96 .8%± 1.37% ,酪氨酸回收率为 99.2 %± 3.0 4%。

芳香族氨基酸对沼泽红假单胞菌合成CoQ_(10)的影响(英文)

CoQ10具有呼吸链电子传递者、抗氧化性、调控基因表达等多种生理生化功能，目前不仅用作药物也用作食品添加剂。微生物发酵法是当前生产CoQ10的主要方法。在细菌中．芳香族氨基酸和CoQ10的苯核环都是通过莽草酸途径合成；它们在生物体中各自的合成存在着相互调控作用。本试验通过在培养过程中添加芳香族氨基酸来考察了其对沼泽红假单胞菌J001合成CoQ10的影响。结果表明：当色氨酸添加量≥15mg／L时对CoQ10的合成具有强列的抑制作用；苯丙氨酸添加量≥50mg／L时对CoQ10的合成具有一定的抑制作用但当添加量≥75mg/L后对CoQ10的合成变为一定的促进作用；酪氨酸添加量为75～175mg/L时对CoQ10的合成具有一定的促进作用．但当添加量≥200mg／L后对CoQ10的合成变为一定的抑制作用。当添加苯丙氨酸100mg/L＋酪氨酸150mg/L时．CoQ10含量达最高（25．6±1．3mg CoQ10/g干细胞）．比不添加对照提高52．2％。以上结果说明：该菌株CoQ10的合成受到3种芳香族氨基酸的调控，3-脱氧-D-阿拉伯己酮糖-7-磷酸合成酶是同工酶系统并主要受色氨酸调控．无色氨酸培养基及在培养期间添加适量的苯丙氨酸与酪氨酸对该菌株合成CoQ10有利，

芳香族氨基酸对运动性疲劳的影响

氨基酸与运动性疲劳的关系,已往文献仅涉及甘氨酸、天冬氨酸、谷氨酸及γ-氨基丁酸。近年来国外学者研究表明:长时间大强度运动使血浆内芳香族氨基酸(aromatic aminoacids,AAA)含量升高,支链氨基酸(branc-hed-chain amino acids,BCAA)含量下降,促进AAA转运入脑。

芳香族氨基酸及其衍生物的细胞工厂构建策略

芳香族氨基酸及其衍生物由于其特定的生理活性,已广泛应用于医药、食品、饲料和化工等行业。利用重组微生物发酵生产芳香族氨基酸及其衍生物是满足全球日益增长需求的有效途径。通过将代谢工程策略与合成生物学、系统生物学和生物工程的发展相结合,在菌株的改造及优化方面取得了显著的进展。然而,合成芳香族氨基酸及其衍生物的代谢途径长且调控机制复杂,通过简单的代谢途径改造难以大幅提高产量,因此,近年来出现了很多相关的改造方法,为克服代谢途径中的限速问题提供了很好的借鉴意义。本文回顾和比较了最近在芳香族氨基酸及其衍生物合成方面应用的成熟技术和策略,包括常用的代谢途径改造策略(如增加前体供给、解除关键酶和阻遏蛋白的反馈抑制和阻遏抑制、改造转运系统、全局调节系统)以及菌株生长与生产产品耦联和菌株构建方法(如基于生物传感器的高通量筛选以及对培养基和培养条件的优化等),未来相关前沿技术如计算机辅助途径酶改造技术和筛选高产菌株的定向进化技术将助力芳香族氨基酸及其衍生物高产菌株的构建。

芳香族氨基酸二肽金属配合物与DNA作用研究

芳香族氨基酸二肽类配体,具有特殊的芳香性侧链结构、良好的理化性质及生理相容性等优势,使芳香族氨基酸二肽金属配合物成为新型金属配合物抗癌药物研究的热点。通过系统研究芳香族氨基酸二肽金属配合物与DNA作用,可为设计、开发新型抗癌药物奠定基础。重点综述芳香族氨基酸直链二肽类金属配合物、芳香族氨基酸环二肽类金属配合物和芳香族氨基酸二肽有机金属配合物与DNA作用的研究进展。

耐力训练对长时间负荷芳香族氨基酸引起的运动性中枢疲劳的适应性影响

笔者通过对普通小学生男生和男游泳运动员进行90min踏车功量计上50％Vo2max的持续性定量负荷运动,观察血清中芳香族氨基酸和支链氨基酸水平的变化。结果表明:两组芳香族氨基酸/支链氨基酸和色氨酸/支链氨基酸的比值升高,提出存在运动性中枢疲劳的物质基础;同时,在色氨酸/支链氨基酸的比值上,专业游泳组显著低于学生组,可能与它们对支链氨基酸的依赖程度的差异有关。结论:长期耐力训练对缓解由于长时间运动的芳香族氨基酸变化所引起的运动性中枢疲劳有适应性变化。

芳香族氨基酸羟化酶家族结构与催化功能

芳香族氨基酸羟化酶(AAAH)家族是一类单加氢酶,包括苯丙氨酸羟化酶(PAH)、酪氨酸羟化酶(TH)和色氨酸羟化酶(TPH).在辅因子四氢生物蝶呤、铁原子及氧存在下,分别催化苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸的羟化反应.多种疾病如苯丙酮尿症、帕金森氏病以及神经相关疾病的发病机制均与这类酶有关.本文综述近年来对芳香族氨基酸羟化酶家族蛋白结构功能、底物特异性、催化机制等方面的研究进展,为该类酶的定向进化及功能应用提供新思路.

芳香族氨基酸脱羧酶及其与帕金森病基因治疗的关系

帕金森病 (PD)是一种以黑质纹状体多巴胺能神经元减少为特征的疾病 ,给予左旋多巴可以提高帕金森病人脑内纹状体多巴胺的水平。芳香族氨基酸脱羧酶 (AADC)在脑内多巴胺神经递质合成过程中将L -DOPA转换成为多巴胺 ,它在基因表达和蛋白活性上分别受到调节。PD病程中 ,与L -DOPA的波动相关的AADC基因调节对疾病的治疗有重要作用。

成年小白鼠排卵前后卵巢内芳香族氨基酸含量变化

用丹磺酰氯(DNS-Cl)荧光方法测定了成年小白鼠排卵前后芳香族氨基酸含量变化。结果表明,苯丙氨酸和色氨酸含量无显著变化。酪氨酸含量在排卵后明显高于排卵前。这表明卵巢中酪氨酸含量变化与排卵有关。

热量限制对大鼠血清支链氨基酸、芳香族氨基酸、甘氨酸水平的影响及意义

目的观察热量限制(CR)对大鼠血清支链氨基酸[缬氨酸(Val)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)]、芳香族氨基酸[酪氨酸(Tyr)、苯丙氨酸(Phe)]及甘氨酸(Gly)水平的影响,并探讨其与胰岛素敏感性的关系。方法将20只雄性SD大鼠随机分为观察组和对照组各10只,对照组给予自由饮食,观察组限制热量摄入为对照组的60%。喂饲12周后称取两组体质量及附睾旁脂肪垫质量;行胰岛素耐量试验,绘制血糖值曲线并计算曲线下面积。采用液相色谱串联质谱法检测两组血清Val、Ile、Leu、Tyr、Phe及Gly。结果观察组体质量、附睾旁脂肪垫质量均低于对照组,P均<0.01。观察组血糖值曲线下面积为728.1±65.7,对照组为955.1±39.0,P<0.01。观察组血清Ile、Leu、Tyr水平均低于对照组,Gly水平高于对照组,P均<0.05。两组血清Val、Phe水平比较,P均>0.05。结论 CR可能通过升高大鼠血清Gly水平,降低Ile、Leu、Tyr水平而提高其胰岛素敏感性。