抵当汤对高速泳动族蛋白B1/Toll样受体4/核因子κB通路的调控作用

目的:探讨抵当汤及其拆方对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎症反应的影响及作用机制。方法:将体外培养的HUVECs随机分为空白血清组、LPS组、LPS+抵当汤组、LPS+植物药组、LPS+动物药组;抑制Toll样受体4(TLR4)后分为TAK-242组、抵当汤TAK-242组、植物药TAK-242组、动物药TAK-242组,给予相应处理后,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清中高速泳动族蛋白B1(HMGB1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量;蛋白质免疫印迹法检测HUVECs中HMGB1、TLR4和核因子κB p65的蛋白表达水平,实时定量PCR(RT-qPCR)法检测HMGB1、TLR4和核因子κB p65的基因表达情况,免疫荧光法测定HMGB1、TLR4和核因子κBp65的荧光强度。结果:与A组比较,LPS组细胞上清液及HUVECs中HMGB1、IL-6、TNF-α、TLR4和核因子κB p65表达均增强(均P<0.01)。与LPS组比较,LPS+抵当汤组细胞上清液及HUVECs中的HMGB1、IL-6、TNF-α、TLR4和核因子κBp65的表达均减弱(P<0.05,P<0.01)。与LPS+抵当汤组比较,LPS+植物药组和LPS+动物药组细胞上清液及HUVECs中的HMGB1、IL-6、TNF-α、TLR4和核因子κBp65表达显著增强(P<0.05,P<0.01)。LPS+植物药组中的HMGB1、IL-6和TNF-α表达低于LPS+动物药组(P<0.05,P<0.01),TLR4和核因子κBp65表达高于LPS+动物药组(P<0.05)。抑制TLR4后,与LPS组比较,TAK-242组的HMGB1、TLR4、核因子κBp65表达减弱(P<0.05,P<0.01)。与TAK-242组比较,抵当汤TAK-242组各指标表达低于TAK-242组(P<0.05,P<0.01)。与抵当汤TAK-242组比较,植物药TAK-242组和动物药TAK-242组各指标表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论:抵当汤及其拆方可通过抑制细胞炎症反应对HUVECs发挥保护和改善作用,其作用机制可能与抑制HMGB1/TLR4/核因子κB信号通路活化有关。

基于癌症基因组图谱数据库分析芳香烃受体核转运体样2在肺腺癌中的表达及其预后意义

目的研究芳香烃受体核转运体样2(ARNTL2)在肺腺癌及其癌旁组织中的表达及临床意义。方法从癌症基因组图谱数据库下载337例肺腺癌组织(肺腺癌组)与59例癌旁组织(癌旁对照组)RNA seq数据及对应的肺腺癌患者临床数据。通过单因素分析,比较ARNTL2表达与肺腺癌患者预后的关系,并通过Cox比例风险模型进行多因素分析,判断影响肺腺癌患者预后的独立危险因素。结果ARNTL2在肺腺癌组中的表达高于癌旁对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析结果显示,肺腺癌患者的年龄、Stage分期和N分期是影响ARNTL2表达的相关因素(P<0.05)。生存预后分析结果显示,ARNTL2表达与肺腺癌患者总生存期存在相关性(P=0.001)。单因素分析结果显示,Stage分期和ARNTL2表达是影响肺腺癌患者总生存期的相关因素(P<0.05)。Cox比例风险模型结果显示,Stage分期和ARNTL2表达是肺腺癌患者总生存期的独立危险因素(P<0.05)。结论ARNTL2可能通过多种途径促进肺腺癌的发生发展,进而影响肺腺癌患者的预后生存。因此,ARNTL2可作为肺腺癌患者的预后标志物或潜在治疗靶点。

脑和肌肉芳香烃受体核转运样蛋白1基因调控口腔及全身骨代谢的作用

近日钟基因调控哺乳动物的昼夜节律,脑和肌肉芳香烃受体核转运样蛋白1(Bmal1)基因作为其核心组分之一,与多种生物行为活动密切相关,近年来,其在调控骨代谢方面具有的重要作用也受到越来越多的关注。Bmal1基因可通过下游多种信号通路的介导,分别参与调节骨相关成骨细胞、破骨细胞及软骨细胞等细胞的生理活动,进而影响如骨质疏松、骨关节炎等骨代谢相关疾病,同时也在颌骨的生理病理过程中发挥作用。本文就Bmal1基因调控骨代谢的研究进展作一综述,为口腔及全身相关骨代谢疾病的诊疗提供可能思路。

血清微小RNA-34a和芳香烃受体核转录样蛋白1在宫颈癌中的临床价值研究

目的研究血清微小RNA-34a(miR-34a)和芳香烃受体核转录样蛋白1(BMAL1)在宫颈癌中的临床价值及其与高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染的关系。方法回顾性分析济宁医学院附属医院2022年1—12月76例宫颈癌患者和50例宫颈良性疾病患者的临床资料。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-34a和BMAL1表达水平,采用流式荧光杂交法检测HR-HPV感染情况。患者随访截至2023年12月,记录死亡和预后不良(指随访1年时出现死亡、肿瘤复发进展、严重并发症)情况。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-34a、BMAL1及相关指标评估宫颈癌患者1年预后不良的效能。采用多因素Cox回归分析影响宫颈癌患者死亡的独立危险因素。采用Kaplan-Meier生存曲线分析miR-34a和BMAL1表达与生存期的关系,比较采用log-rank检验。结果宫颈癌患者血清miR-34a表达水平明显低于宫颈良性疾病患者(0.46±0.08比0.67±0.11),血清BMAL1表达水平明显高于宫颈良性疾病患者(0.58±0.07比0.41±0.07),差异有统计学意义(t=12.40和13.34,P<0.01)。宫颈癌患者血清miR-34a和BMAL1表达水平与肿瘤分化程度、肌层浸润深度、淋巴结转移、远处转移和国际妇产科联合会(FIGO)分期有关,差异有统计学意义(P<0.05或<0.01),与年龄、绝经、病理类型无关,差异无统计学意义(P>0.05)。宫颈癌患者中,HR-HPV感染阳性患者(60例)miR-34a表达水平明显低于HR-HPV感染阴性患者(16例)(0.41±0.07比0.49±0.08),BMAL1表达水平明显高于HR-HPV感染阴性患者(0.65±0.09比0.53±0.06),差异有统计学意义(t=3.68和4.24,P<0.05或<0.01)。宫颈良性疾病患者中,HR-HPV感染阳性患者(7例)与HR-HPV感染阴性(43例)患者miR-34a和BMAL1表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线分析结果显示,miR-34a联合BMAL1评估宫颈癌患者1年预后不良的灵敏度(90.4%)、特异度(89.9%)和曲线下面积(0.911)最高(P<0.01),miR-34a和BMAL1表达水平的最佳截断值为≤0.39和≥0.64。多因素Cox回归分析结果显示,低分化、肌层浸润深度≥1/2、有淋巴结转移、有远处转移、FIGO分期Ⅲ+Ⅳ期、miR-34a表达水平≤0.39、BMAL1表达水平≥0.64是影响宫颈癌患者死亡的独立危险因素(OR=1.857、2.125、2.337、2.751、2.457、3.885和3.666,95%CI 0.845~5.788、0.726~5.924、0.709~5.631、0.693~5.727、0.801~5.936、1.244~6.423和1.031~5.612,P<0.01)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,miR-34a表达水平≤0.39且BMAL1表达水平≥0.64宫颈癌患者(21例)中位生存期明显低于其他宫颈癌患者(miR-34a表达水平>0.39或BMAL1表达水平<0.64,55例)[(26.4±4.2)个月比(34.2±5.6)个月,log-rankχ2=17.12,P<0.05]。结论宫颈癌患者血清miR-34a表达水平明显降低而BMAL1表达水平明显升高,与宫颈癌病情、预后及HR-HPV感染有关,可作为宫颈癌患者病情和预后评估的标志物,两者联合检测可提高评估效能。

乌司他丁基于高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4/核因子-κB通路对急性胃肠损伤家兔肠屏障功能保护机制

目的探讨乌司他丁基于高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路对严重多发伤并急性胃肠损伤家兔模型肠屏障功能保护机制。方法40只家兔,平均分为4组,对照组(未建立严重多发伤并急性胃肠损伤),损伤组、药物对照组和干预组均建立严重多发伤并急性胃肠损伤模型。建模成功后药物对照组注射丙氨酰谷氨酰胺1.2 g/kg,干预组腹腔注射100000 U/kg的乌司他丁,8 h一次,连续7 d。其余家兔同部位注射等体积生理盐水。抽取静脉血检测肠黏膜屏障、炎症及应激指标,HE染色检测小肠病理形态,HMGB1、TLR4、NF-κB检测采用免疫印迹及聚合酶链式反应法。结果损伤组肠脂肪酸结合蛋白、二胺氧化酶、D乳酸、降钙素原和C反应蛋白均高于对照组(P<0.05),药物对照组和干预组上述指标均低于损伤组,且干预组低于药物对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,损伤组丙二醛(MDA)升高,超氧化物岐化酶(SOD)降低;与损伤组比较,药物对照组和干预组MDA降低,SOD升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。各组家兔小肠组织中HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白及mRNA比较存在差异,损伤组HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白及mRNA高于对照组,与损伤组比较,药物对照组和干预组上述指标降低,且干预组低于药物对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论乌司他丁能够提高严重多发伤并急性胃肠损伤家兔模型肠屏障功能,改善炎症及应激,并具有浓度依赖性,其作用机制与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路相关。

Toll样受体2、基质金属蛋白酶9、低氧诱导因子1α与心房颤动发生和维持的关系

目的探讨Toll样受体2(TLR2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、低氧诱导因子1α(HIF-1α)作为免疫炎症因子与心房颤动(房颤)发生和维持的关系。方法入选125例房颤患者,其中阵发性房颤34例,持续性房颤49例,永久性房颤42例,选择窦性心律者38例作为对照组。比较各组患者血清中TLR2、MMP-9、HIF-1α的表达水平,同时测量左心房内径及射血分数。结果 TLR2表达水平在永久房颤组和持续房颤组明显高于对照组847.3(1 047.7)ng/L、757.2(1 032.5)ng/L vs 744.8(652.3)ng/L(P<0.05);永久房颤组TLR2高于阵发房颤组847.3(1 047.7)ng/L vs 796.6(849.1)ng/L(P<0.05)。MMP-9表达水平在永久房颤组明显高于对照组447.1(491.9)ng/L vs 308.9(200.7)ng/L(P<0.05);永久性房颤组和持续房颤组MMP-9高于阵发房颤组447.1(491.9)ng/L、307.7(678.0)ng/L vs 264.2(303.3)ng/L(P<0.05)。HIF-1α表达水平在永久房颤组和持续房颤组高于对照组57.2(48.8)ng/L、61.4(46.3)ng/L vs 46.7(29.6)ng/L(P<0.05);永久性房颤组和持续房颤组HIF-1α高于阵发房颤组57.2(48.8)ng/L、61.4(46.3)ng/L vs 52.5(42.8)ng/L(P<0.05)。永久房颤组和持续房颤组左心房内径较对照组和阵发性房颤组增加(45.70±6.71)mm、(42.67±6.83)mm vs(38.55±4.51)mm、(40.82±5.45)mm(P<0.05)。而持续房颤组左心室射血分数较对照组和阵发性房颤组明显降低(49.47±7.14)%vs(54.89±6.25)%、(53.90±8.02)%(P<0.05);永久性房颤组左心室射血分数较持续性房颤组明显降低(45.60±8.02)%vs(49.47±7.14)%(P<0.05)。结论 TLR2、HIF-1α、MMP-9作为免疫炎症因子水平的升高可能与房颤的发生及维持有关,提示炎症参与了房颤的发生与维持。

盘状结构域受体1通过调控NF-κB/NLRP3信号通路介导的细胞焦亡对高糖诱导血管内皮功能障碍的影响

目的 探究盘状结构域受体1 (discoidin domain receptor 1,DDR1)对高糖诱导血管内皮细胞功能障碍的作用机制。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HU VECs),首先分为对照组(Control)、高糖诱导组(high glucose,HG),采用33 mmol·L^(-1) D-glucose处理48 h构建HUVECs功能障碍。碘化丙啶染色(PI)检测细胞焦亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、IL-1β、IL-18水平;Western blot检测DDR1、NF-κB/NLRP3信号通路蛋白及细胞焦亡相关蛋白表达;随后,实验分为C ontrol组、HG组、HG+DDR1 NC组、HG+DDR1 siRNA组。转染DDR1 siRNA 24 h后观察HG对HUVECs增殖和迁移能力的影响;ELISA检测内皮型一氧化氮合成酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)、血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)、细胞间黏附分子-1 (intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)及LDH、IL-1β、IL-18水平;PI检测细胞焦亡情况;Western blot检测DDR1、NF-κB/NLRP3信号通路蛋白及细胞焦亡相关蛋白表达。结果 与Control组相比,HG组细胞eNOS含量降低,VCAM-1、ICAM-1含量升高,细胞活力及迁移能力降低,DDR1、p-NF-κB、NLRP3及细胞焦亡相关蛋白表达均明显升高,且LDH、IL-1β、IL-18水平及细胞焦亡率均增加(P<0.05)。与HG组相比,DDR1siRNA能够促进eNOS分泌,降低VCAM-1、ICAM-1、LDH、IL-1β、IL-18水平,增加细胞活力和迁移能力,降低p-NF-κB、NLRP3及细胞焦亡相关蛋白表达,抑制高糖诱导的HU VECs焦亡(P<0.05)。结论基因沉默DDR1能够改善高糖诱导的血管内皮细胞功能障碍,其机制与抑制NF-κB/NLRP3信号通路介导的细胞焦亡相关。

大承气汤抑制高迁移率族蛋白1-Toll样受体4信号通路减轻炎症反应改善重症胰腺炎大鼠肾损伤

目的研究大承气汤(DCQD)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肾损伤的作用及机制。方法60只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(Sham)、SAP组,DCQD治疗组和r-HMGB1组各15只。经胰胆管逆行注射牛磺胆酸钠构建大鼠SAP模型。评估各组肾脏病理形态,血清中淀粉酶(AMS)、脂肪酶(LIS)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)和高迁移率族蛋白1(HMGB1)含量,血清和肾脏白介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达及肾脏HMGB1、乙酰化HMGB1(Acetyl-HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)、Myd88、p-p65和p65蛋白表达。结果与Sham组比较,SAP组肾脏病理损伤加重,AMS、LIS、Cr、BUN、HMGB1、IL-6、MCP-1、TNF-α、Acety-HMGB1、TLR4、Myd88和p-p65的表达增高(P<0.05);与SAP组比较,DCQD组肾脏病理损伤减轻,AMS、LIS、Cr、BUN、HMGB1、IL-6、MCP-1、TNF-α、Acety-HMGB1、TLR-4、Myd88和p-p65的表达降低(P<0.05);与DCQD组比较,r-HMGB1组肾脏病理损伤加重,AMS、LIS、Cr、BUN、HMGB1、IL-6、MCP-1、TNF-α、Acety-HMGB1、TLR-4、Myd88和p-p65的表达增高(P<0.05)。四组间p65表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论大承气汤对SAP诱发的肾损伤有保护作用,其作用机制与促进HMGB1去乙酰化修饰,继而抑制HMGB1-TLR-4/NF-κB介导的炎症反应相关。

人血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1双顺反子表达载体的构建及其在293T细胞中的表达

目的尝试构建人血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)基因双顺反子表达载体并检测其在293T细胞中的表达情况和生物学活性,为深入探讨LOX-1在动脉粥样硬化中的作用和以LOX-1为靶点建立干预机制治疗动脉粥样硬化奠定基础。方法首先根据Primer5.0软件设计引物,采用聚合酶链反应法以LOX-1 c DNA片段为模板扩增LOX-1基因完整编码区,克隆至T载体,经测序成功后亚克隆到双顺反子真核表达载体p IRES2-Ac GFP1-Nuc。利用脂质体转染法将双顺反子重组表达质粒转染至293T细胞,倒置荧光显微镜检测质粒转染情况。采用逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法鉴定LOX-1基因在核酸和蛋白水平的表达,采用激光共聚焦检测LOX-1基因在293T细胞膜上的表达,激光共聚焦和流式细胞术检测表达在293T细胞膜上的LOX-1结合氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的生物学活性。结果成功构建p IRES2-LOX-1双顺反子重组表达载体,将其转染293T细胞后,观察到绿色荧光蛋白基因的表达,初步表明LOX-1基因转染至293T细胞。进一步分子水平鉴定结果表明LOX-1基因在293T细胞核酸和蛋白水平均得到表达,激光共聚焦结果证明LOX-1基因在293T细胞膜上表达。最后激光共聚焦和流式细胞术结果证实表达在293T细胞膜上的人LOX-1基因可以结合氧化型低密度脂蛋白。结论成功构建人LOX-1基因双顺反子表达载体,在此基础上证明其在293T细胞膜上得到表达,并且具有结合ox-LDL的生物学活性,为后续体外研究其在动脉粥样硬化中的作用以及以此为靶点建立干预机制奠定了基础。

G蛋白偶联胆汁酸受体1调控机体炎症信号通路的研究进展

G蛋白偶联胆汁酸受体1(GPBAR1)与胆汁酸(BAs)及其衍生物结合后,激活下游通路传导,调控动物的多种代谢过程。GPBAR1通过核转录因子κB(NF-κB)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体信号转导通路,调节动物体炎症反应。因此,本文重点阐述GPBAR1对动物炎症通路的调控进展,为BAs及其衍生物成为治疗炎症性疾病的潜在药物提供参考。

毛蕊异黄酮靶向高迁移率族蛋白1对心肌缺血再灌注损伤大鼠保护作用实验研究

目的:探讨毛蕊异黄酮对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠的保护作用及机制。方法:SPF级SD大鼠,建立心肌缺血再灌注损伤大鼠模型。随机分为四组:假手术组、心肌缺血再灌注损伤组、毛蕊异黄酮低剂量组、毛蕊异黄酮高剂量组。将H9C2细胞分为四组:对照组、缺氧/复氧组、毛蕊异黄酮组、重组高迁移率族蛋白1(HMGB1)蛋白组。超声心动图评估大鼠心功能,ELISA法测定心肌标志酶,HE染色观察心肌组织病理变化,TUNEL染色测定心肌组织和H9C2细胞凋亡情况,PPI网络分析毛蕊异黄酮的靶点预测和分子对接,胆囊收缩素八肽(CCK)8检测细胞活力,免疫荧光检测心肌HMGB1的表达量,Western blot检测高迁移率族蛋白1(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB p65(NF-κB p65)和半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)相对表达水平。结果:心肌缺血再灌注损伤组较假手术组左心室舒张阶段末期内径(LVEDD)、左心室收缩阶段末期内径(LVESD)均上调(均P<0.05),而左心室射血分数(LVEF)和左心室短轴缩短率(LVFS)均下调(均P<0.05);心肌纤维断裂,炎性细胞浸润增多;血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)和肌钙蛋白(cTnI)水平显著升高;TUNEL阳性细胞数量升高,Cleaved caspase-3水平上调;HMGB1表达量增加(均P<0.05)。与心肌缺血再灌注损伤组比较,毛蕊异黄酮低、高剂量组LVEDD、LVESD均下调(均P<0.05),而LVEF和LVFS均上调(均P<0.05);心肌组织纤维排列尚规则,炎性细胞数量较少;血清CK-MB、LDH和cTnI水平降低;TUNEL阳性细胞数量降低,Cleaved caspase-3水平下调;HMGB1表达量降低(均P<0.05)。PPI和分子对接显示毛蕊异黄酮与HMGB1能较好的结合。缺氧/复氧组较对照组H9C2细胞TUNEL细胞阳性数量显著升高,Cleaved caspase-3、HMGB1、TLR4、NF-κB p65表达上调(均P<0.05)。毛蕊异黄酮组较缺氧/复氧组H9C2细胞TUNEL细胞阳性数量降低,Cleaved caspase-3、HMGB1、TLR4、NF-κB p65表达下调(均P<0.05)。而毛蕊异黄酮组基础上给予rHMGB1后,毛蕊异黄酮的保护作用被逆转。结论:毛蕊异黄酮能够明显改善大鼠心肌缺血再灌注损伤,这可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路有关。

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体与高血压病的研究进展

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体作为固有免疫的重要组成部分,在高血压的发生发展中起着重要的作用。核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3可促进白介素-1β、白介素-18等促炎细胞因子的分泌。白介素-1β可上调血管紧张素Ⅱ受体的表达,使血管紧张素Ⅱ的作用增强,促进钠离子在血管及肾脏中的潴留,进而引起血管的收缩及重建,最终导致高血压的发生发展。现就核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体与高血压关系的研究进展做一综述。

基于TLR-4/NF-κB信号通路及水通道蛋白1表达探讨大陷胸汤干预重症急性胰腺炎早期肺损伤的效应机制

目的:探讨大陷胸汤对重症急性胰腺炎(SAP)早期肺损伤的影响及作用机制。方法:将60只大鼠随机分为实验组、模型组和对照组,每组20只。实验组予大陷胸汤灌胃,对照组及模型组予蒸馏水灌胃,在连续灌胃7 d后,模型组与实验组以胰胆管注射牛磺胆酸钠的方式制备SAP模型,于造模后12、24、48、72 h各时间点分别处死5只大鼠取材,观察大鼠一般情况、胸腹水量、肺湿干重比、胰腺组织及肺组织病理学改变、肺组织白细胞介素(IL)-1及Toll样受体4(TLR-4)水平、肺组织核因子(NF)-κB及水通道蛋白1(AQP1)表达水平。结果:与对照组相比,模型组大鼠一般情况较差,胰腺炎症反应以及肺损伤程度较重,胸腹水量、肺湿干重比、肺组织NF-κB表达水平、IL-1及TLR-4水平升高(P<0.05),肺组织AQP1表达水平下降。与模型组相比,实验组大鼠一般情况较好,肺损伤程度较轻,胸腹水量、肺湿干重比、肺组织NF-κB表达水平、IL-1及TLR-4水平下降(P<0.05),肺组织AQP1表达水平升高,造模后72 h后,胰腺组织坏死程度与同期模型组相比明显好转。结论:大陷胸汤可在一定程度上减轻SAP大鼠早期肺损伤,其机制可能与抑制TLR-4/NF-κB炎症信号通路,增强AQP1表达有关。

半胱氨酰白三烯受体1调节APP/PS1小鼠原代神经元β淀粉样蛋白生成及机制

目的探究半胱氨酰白三烯受体1(CysLT_(1)R)对体外培养的APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠(APP/PSI小鼠)皮质原代神经元β淀粉样蛋白(Aβ)生成的影响及机制。方法①将携带CysLT_(1)R的慢病毒-绿色荧光蛋白载体(LV-CysLT_(1)R-EGFP)或空载体(LV-EGFP)转染至APP/PS1小鼠皮质原代神经元,使神经元过表达CysLT_(1)R(CysLT_(1)R-OE),采用Western印迹法检测神经元CysLT_(1)R蛋白表达水平。②分别以CysLT_(1)R激动剂YM17690(1μmol·L^(-1))单用或与CysLT_(1)R拮抗剂普仑司特(Pran 1μmol·L^(-1))联用处理CysLT_(1)R-OE神经元12 h;采用ELISA检测细胞培养基内Aβ_(1-40)和Aβ_(1-42)水平;Western印迹法检测神经元中淀粉样前体蛋白(APP)、β淀粉样前体蛋白切割酶1(BACE1)、早老素(PS)1和PS2表达水平。以YM17690(1μmol·L^(-1))单用或与Pran(1μmol·L^(-1))联用处理CysLT_(1)R-OE神经元2 h后,采用Western印迹法检测CysLT_(1)R和NF-κB P65亚基在细胞内的分布。③采用渗透差法在CysLT_(1)R-OE神经元中导入核定位序列多肽(NLS-pep,10 g·L^(-1))竞争性抑制CysLT_(1)R核转位或阴性对照多肽(NON-pep,10 g·L^(-1)),随即以YM17690(1μmol·L^(-1))处理CysLT_(1)R-OE神经元12 h,采用Western印迹法检测CysLT_(1)R激活后细胞培养基内Aβ水平、胞质中APP和BACE1表达水平;以YM17690(1μmol·L^(-1))处理导入多肽后的CysLT_(1)R-OE神经元2 h,采用Western印迹法检测CysLT_(1)R和NF-κB P65亚基在细胞内的分布。结果①CysLT_(1)R-OE神经元CysLT_(1)R蛋白表达水平较对照组显著增加(P<0.01)。②与CysLT_(1)R-OE组相比,CysLT_(1)R-OE+YM17690组神经元分泌Aβ_(1-40)和Aβ_(1-42)显著增加(P<0.05),胞质中BACE1及细胞核中CysLT_(1)R和NF-κB P65亚基表达水平显著增加(P<0.05),而神经元中APP,PS1和PS2表达水平无明显改变。YM17690和Pran联用(CysLT_(1)R-OE+YM17690+Pran组)可消除上述改变。③与CysLT_(1)R-OE+YM17690组相比,CysLT_(1)R-OE+NLS-pep+YM17690组CysLT_(1)R和NF-κB P65亚基在细胞核内的表达水平显著下降(P<0.05),神经元分泌Aβ_(1-40)和Aβ_(1-42)显著下降(P<0.05),胞质中BACE1表达水平下调(P<0.05),APP未见显著改变。结论CysLT_(1)R被激活后,通过上调BACE1表达从而促进Aβ的生成,其机制可能是通过CysLT_(1)R发生核转位并激活NF-κB信号通路介导。

BMAL1减轻H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞损伤机制研究

目的探讨脑和肌肉组织芳香烃受体核转运蛋白的类似蛋白1(BMAL1)通过核因子E2相关因子2(NRF2)调节活性氧(ROS)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体通路对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的心肌细胞损伤的影响。方法体外培养H9c2细胞和BMAL1稳定过表达的H9c2细胞,建立H_(2)O_(2)诱导的H9c2细胞损伤模型,并将细胞分为对照(Control)组、H_(2)O_(2)组、BMAL1过表达(BMAL1-OE)组、BMAL1过表达+H_(2)O_(2)(BMAL1-OE+H_(2)O_(2))组、BMAL1过表达+NRF2抑制剂(BMAL1-OE+ML385)组、BMAL1过表达+NRF2抑制剂+H_(2)O_(2)(BMAL1-OE+ML385+H_(2)O_(2))组。采用CCK-8法检测细胞活力,荧光探针2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯检测ROS生成,Western blot检测BMAL1、NRF2和NLRP3蛋白表达,酶联免疫吸附试验法检测白细胞介素(IL)-1β释放。结果与Control组相比,H_(2)O_(2)组H9c2心肌细胞活力减弱,ROS生成增多,BMAL1和NRF2蛋白表达水平降低,NLRP3蛋白表达水平升高,IL-1β释放增多(P<0.05);与H_(2)O_(2)组相比,BMAL1-OE+H_(2)O_(2)组H9c2心肌细胞活力升高,ROS生成减少,BMAL1和NRF2蛋白表达水平升高,NLRP3蛋白表达水平降低,IL-1β释放减少(P<0.05)。与BMAL1-OE+H_(2)O_(2)组相比,BMAL1-OE+ML385+H_(2)O_(2)组H9c2心肌细胞活力减弱,ROS生成增多,NLRP3蛋白表达水平升高,IL-1β释放增多(P<0.05)。结论BMAL1可减轻H_(2)O_(2)诱导的H9c2心肌细胞损伤,其机制可能与NRF2调节ROS/NLRP3炎症小体通路有关。

Toll样受体-2、核因子-κB在Aβ诱导的阿尔茨海默病中的作用

目的探讨Toll样受体2(TLR-2)、核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β与β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的阿尔茨海默病(AD)中的作用。方法将雄性Wistar大鼠50只,随机分为A、B、C、D、E组,每组10只;A组大鼠双侧海马CA1区注射5μl生理盐水,B^E组双侧海马注射5μl Aβ(分别含Aβ25~350.5、1、5、10μg);ELISA检测TNF-α、IL-1β含量;免疫组化(IHC)检测海马CA1区TLR-2表达;实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测TLR-2、NF-κB基因的mRNA表达。结果 IHC检测TLR-2主要聚集在Aβ斑块周围,D组(0.036 6±0.007 3)、E组(0.044 8±0.010 8)TLR-2阳性表达明显高于A组(0.018 7±0.005 8)、B组(0.010 0±0.003 4)、C组(0.015 1±0.006 0)(P<0.01);ELISA检测大鼠血清TNF-α含量D组(568.65±44.66)pg/ml、E组(685.06±29.92)pg/ml明显高于A组(426.87±55.91)pg/ml、B组(432.99±28.09)pg/ml、C组(488.14±39.04)pg/ml(P<0.01),IL-1β含量D(104.60±9.32)pg/ml、E组(143.38±17.09)pg/ml明显高于A(49.13±8.46)pg/ml、B(60.89±14.71)pg/ml、C(79.81±9.94)pg/ml三组(P<0.01);qRT-PCR检测大鼠海马组织内TLR-2 mRNA表达D组(2.185 9±0.381 4)、E组(2.977 7±0.390 7)明显高于A组(1.000 0±0.000 0)、B组(1.178 5±0.106 6)、C组(1.463 3±0.127 3)(P<0.01);NF-κB mRNA表达D组(1.747 0±0.125 6)、E组(2.271 9±0.533 2)明显高于A组(1.000 0±0.000 0)、B组(1.274 3±0.165 1)、C组(1.429 1±0.077 7)(P<0.01)。结论随着Aβ剂量不断增加,TLR-2促进小胶质细胞吞噬和清除Aβ的能力不足使Aβ积聚体并激活NF-κB,促进更多的TNF-α、IL-1β释放,最终导致大鼠脑内神经元损伤。

NF-κB对冠心病患者外周血单核细胞LOX-1 mRNA和蛋白表达的影响

目的探讨核因子-κB(NF-κB)对冠心病患者外周血单核细胞凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)mRNA表达的影响。方法分离收集冠心病患者外周血单核细胞,分为3组:对照组在不含血清的RPMI-1640中孵育24h;ox-LDL组在不含血清的RPMI-1640中加ox-LDL(40μg/ml)孵育24h;PDTC(NF-κB抑制剂)组:先加PDTC(10^(-5)mol/L)培育1h之后加ox-LDL(40μg/ml)继续孵育24h,之后收集单核细胞及细胞上清液,采用异硫氰酸胍—酚—氯仿抽提法提取总RNA,扩增目的基因LOX-l,并采用ELISA法测定上清液中sLOX-1蛋白浓度。结果与对照组比较,ox-LDL组单核细胞LOX-1 mRNA表达增加(0.304±0.047vs0.813±0.131,P<0.05),细胞上清液中sLOX-1蛋白含量(ng/ml)增加(7.277±1.979 vs 16.517±2.064,P<0.05);PDTC组单核细胞LOX-1 mRNA表达及细胞上清液中sLOX-1蛋白含量均增高(分别为0.502±0.140和11.997±1.757,P<0.05)。与ox-LDL组相比,PDTC组单核细胞LOX-1 mRNA表达减少,细胞上清液中sLOX-1蛋白含量显著减少(P<0.05)。结论 ox-LDL可诱导人单核细胞LOX-1表达增加,NF-κB也参与了ox-LDL对LOX-1表达并有促进作用。

膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa单抗通过抑制HMGB1/TLR4途径减轻ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化(英文)

观察膜糖蛋白(GP)Ⅱb/Ⅲa单抗对小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)病变和HMGB1/TLR4途径基因表达变化的影响,以探讨膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂对As进程的影响及其机制.30只5周龄雄性ApoE-/-小鼠随机均分为3组:溶剂对照组(生理盐水50μl,腹腔注射),IgG对照组(50μg,腹腔注射),GPⅡb/Ⅲa单抗组(50μg,腹腔注射).实验ApoE-/-小鼠均已高脂、高胆固醇饲料喂养,10周后处死动物.油红O染色观察主动脉窦As病变;活体荧光显微镜观察颈总动脉As病变处血小板黏附;Western blot检测HMGB-1、TLR4与NF-κB蛋白的表达;免疫组化观察主动脉窦As病变部位MOMA-2和VCAM-1的表达;ELISA法检测血浆中HMGB-1、IL-1β、TNF-α与MCP-1的含量.研究结果表明:与对照组相比,GPⅡb/Ⅲa单抗组ApoE-/-小鼠As病变和血小板黏附显著减少(P<0.05);且该组小鼠主动脉TLR4与NF-κB蛋白的表达明显降低;其血清中的HMGB-1、IL-1β、TNF-α与MCP-1的水平也明显下降(P<0.05).此外,GPⅡb/Ⅲa单抗治疗显著减少As病变处MOMA-2和VCAM-1的表达(P<0.05).GPⅡb/Ⅲa单抗减轻ApoE-/-小鼠As病变可能与抑制HMGB1/TLR4途径介导的炎症有关.

过表达BMAL1对脓毒症小鼠心肌损伤的保护作用及机制研究

目的:探究生物钟基因大脑和肌肉芳香烃受体核转运蛋白样蛋白1(BMAL1)过表达对脓毒症小鼠心肌损伤中线粒体自噬途径的影响。方法:将40只小鼠随机分为模型对照组、模型组、阴性对照(NC)组、BMAL1组,每组10只。超声心动图检测小鼠心功能指标左室短轴缩短率(LVFS)、左室射血分数(LVEF)、左室舒张末期内径(LVIDd)、左室收缩末期内径(LVIDs),ELISA检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白I(cTnI)水平,HE染色观察心肌组织病理变化,TUNEL染色检测心肌细胞凋亡,透射电镜观察心肌线粒体超微结构变化,Western blotting测定心肌组织中微管相关蛋白1轻链3(LC3)、BH3域自噬蛋白(Beclin1)、PTEN诱导激酶(Pink1)、E3泛素-连接酶活性帕金森病蛋白2(Parkin)、电压依赖性阴离子通道蛋白1(VDAC1)表达水平。结果:与模型组和NC组比较,BMAL1组小鼠LVFS、LVEF升高(P<0.05),LVIDd、LVIDs减小(P<0.05),血清中CK-MB、cTnI降低(P<0.05),心肌组织病变得到改善,TUNEL阳性细胞率减少(P<0.05),线粒体损伤减轻,心肌组织中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值升高(P<0.05),Beclin1、Pink1、Parkin、VDAC1蛋白表达上调(P<0.05)。结论:BMAL1过表达能够明显改善脓毒症小鼠心功能,减轻心肌损伤,该作用可能与其促进线粒体自噬有关。