苍术酮通过调节Nrf2-NLRP3通路减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤实验研究

目的研究苍术酮调节核因子NF-E2相关因子(Nrf2)-NLRP3通路对LPS诱导急性肺损伤(ALI)小鼠的保护作用。方法构建ALI小鼠模型,实验分为对照组、模型组、地塞米松组及苍术酮低、中、高剂量组。ELISA测定各组小鼠血清及肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)水平;通过测定肺组织湿/干质量比重(W/D),评估其水肿程度,检测肺组织抗髓过氧化物酶抗体(MPO)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)超氧化物歧化酶(SOD)及丙二酮(MDA)含量以评估其体内抗氧化损伤的作用;HE染色法检查肺损伤情况,并进行评分;RT-qPCR测定各组小鼠肺组织Nrf2、HO-1、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18mRNA水平。结果苍术酮对LPS诱导的小鼠ALI具有较好的保护作用,可降低小鼠血清及肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1β、IL-6水平和W/D比值、肺组织MPO、MDA及NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18mRNA水平,提高血清IL-10水平及肺组织GSH-Px、SOD及Nrf2、HO-1 mRNA水平,明显改善肺组织学病理表现,降低肺组织病理评分,且呈剂量依赖性(P<0.05)。结论苍术酮可通过调节炎症因子及氧化应激以缓解ALI小鼠肺损伤,其机制可能与调节Nrf2-NLRP3通路有关。

苍术酮对肥胖斑马鱼的降脂作用

目的 探究苍术酮对肥胖斑马鱼的降脂作用。方法 斑马鱼幼鱼随机分为正常组、模型组和苍术酮低、中、高浓度组(0.2、0.4、0.8μg/mL),蛋黄液干预72 h后给药24 h。记录幼鱼体质量,试剂盒检测TC、TG、HDL-C水平,HE染色和油红O染色观察肝脏形态学变化,转录组测序和PCR技术分析相关信号通路及基因表达情况,Pearson相关性分析对相关差异基因与各脂质指标进行相关性分析。结果 与模型组比较,苍术酮高浓度组体质量和TC、TG水平均降低(P<0.05,P<0.01),HDL-C水平均升高(P<0.01),苍术酮各浓度组均可改善斑马鱼肝脏脂质累积状态。苍术酮可上调PPAR信号通路中apoa1a mRNA表达(P<0.01),下调fabp2 mRNA表达(P<0.01)。TC及TG水平、肝脏脂肪变性率、肝脏脂质沉积面积比与apoa1a基因呈负相关(P<0.05,P<0.01),与fabp2基因呈正相关(P<0.05,P<0.01);HDL水平与apoa1a基因呈正相关(P<0.01),与fabp2基因呈负相关(P<0.01)。结论 苍术酮对肥胖斑马鱼有较好的降脂作用,可能与调控PPAR通路以调节脂质代谢,从而抑制脂肪累积有关。

基于HPLC法测定参苓白术散中苍术酮、白术内酯Ⅰ和甘草苷的含量

基于HPLC法测定参苓白术散中苍术酮、白术内酯Ⅰ和甘草苷的含量,通过建立溶液制备和色谱条件,对目标成分进行准确测定,并对测定方法进行了专属性、线性关系、精密度、重复性、稳定性和加样回收率等方面的分析。研究结果可为参苓白术散中关键成分的含量测定提供了可靠的方法和数据支持。

苍术酮对人肝癌细胞MHCC97-H增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及机制研究

目的探讨苍术酮对人肝癌细胞MHCC97-H增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及机制。方法体外培养人肝癌细胞MHCC97-H,采用CCK-8法检测细胞活性,计算苍术酮的半数抑制浓度(IC50)。将MHCC97-H细胞分为对照组和苍术酮5、10、20μmol·L^(-1)浓度组,分别干预24 h。采用克隆形成实验(培养2周)检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;Western Blot法检测细胞上皮-间质转化(EMT)及凋亡相关蛋白的表达情况。结果苍术酮干预MHCC97-H细胞24 h的IC50为24.97μmol·L^(-1)。与对照组比较,苍术酮10、20μmol·L^(-1)组的MHCC97-H细胞集落数显著减少(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),MHCC97-H细胞E-钙黏蛋白(E-cad)表达显著上调(P<0.01);苍术酮5、10、20μmol·L^(-1)组的MHCC97-H细胞迁移数及侵袭数均显著减少(P<0.05,P<0.01),MHCC97-H细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cad)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)蛋白表达显著下调(P<0.01),金属蛋白酶组织抑制因子2(TIMP-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved caspase-3)蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01)。结论苍术酮能够抑制人肝癌细胞MHCC97-H增殖、迁移和侵袭,并促进其凋亡,可能与调控细胞EMT及凋亡相关蛋白表达有关。

基于Notch1通路探讨苍术酮对肝癌细胞化疗耐药的作用机制研究

目的:基于Notch1通路探讨苍术酮对肝癌细胞化疗耐药的影响。方法:不同浓度苍术酮作用人肝癌氟尿嘧啶耐药细胞株Bel/Fu 48 h,采用CCK8法检测细胞存活情况,并选择最适抑制浓度。人肝癌耐药细胞株Bel/Fu随机分为空白组、5-氟尿嘧啶组、苍术酮组、联合组,各组分别以对应培养液培养48 h。光学显微镜下观察各组细胞状态;CCK-8法、流式细胞术检测细胞存活情况及凋亡水平,Transwell实验检测细胞侵袭能力;RT-qPCR技术检测各组细胞中P糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白1(MRP1)的mRNA相对表达量;Western blotting法检测各组细胞中P-gp、MRP1、Notch1、Hes1、Jagged1、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白相对表达量。结果:Bel/Fu细胞存活率随苍术酮作用浓度增大而降低(P<0.05),苍术酮作用浓度为32μmol/L时,细胞存活率接近50%。与空白组比较,5-氟尿嘧啶组细胞存活率,凋亡率,侵袭数,P-gp、MRP1的mRNA和蛋白相对表达量,以及Notch1、Hes1、Jagged1、Bcl2、Bax蛋白相对表达量均无明显变化(P>0.05),镜下细胞形态、结构及密度无较大差异。与5-氟尿嘧啶组比较,苍术酮组及联合组细胞存活率,侵袭数,P-gp、MRP1的mRNA和蛋白相对表达量,以及Notch1、Hes1、Jagged1、Bcl2蛋白相对表达量均显著降低,细胞凋亡率及Bax蛋白相对表达量显著升高(P<0.05),镜下细胞变形,密度变小,大量呈凋亡状态;5-氟尿嘧啶对Bel/Fu细胞的作用效果不及苍术酮,苍术酮单独作用效果不及5-氟尿嘧啶联合苍术酮时的作用效果(P<0.05)。结论:苍术酮可促进Bel/Fu细胞凋亡,抑制其存活及侵袭,增强肝癌细胞的化疗敏感性,其作用机制可能与抑制Notch1通路激活有关。

微管液相色谱法同时测定白术中的白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ和苍术酮

采用微管液相色谱法同时测定白术中的白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ和苍术酮。采用美国Micro-tech Ultra plusⅡTM微管柱通用型二元梯度高效液相色谱仪和Microsil C18微管色谱柱(150mm×1.0mm),以甲醇-乙腈-水(A相体积比为90∶5∶5;B相体积比为55∶5∶40)为流动相,梯度洗脱,流速50μL/min,在220nm波长下检测。在上述色谱条件下,3种组分分离良好,在相应的进样质量范围内具有良好的线性关系。白术内酯Ⅲ、Ⅰ和苍术酮的加标回收率分别为96.86%,97.13%和98.06%;相对标准偏差分别为1.63%,1.31%和0.39%。该法简便、快捷,能够用于白术的质量控制。

GC法测定苍术药材中苍术素及苍术酮

苍术为菊科植物茅苍术Atractylodes lancea（Thunb．）DC．或北苍术A．chinensis（DC．）Koidz．的干燥根茎，具有燥湿健脾、祛风散寒、明目、解郁辟秽之功，用于脘腹胀满、泄泻、水肿、脚气痿蹙、风湿痹痛、风寒感冒、夜盲、疟疾等。药理研究表明，苍术有抑制溃疡、利胆、抑制小肠蠕动等作用，还能保肝、降血糖、抗菌、抗病毒。但苍术药材的质量标准研究薄弱，《中国药典》仅有苍术素的薄层鉴别，而无明确的定量分析标准。针对挥发油的分析较多，而对于其有效成分苍术素、苍术酮的定量分析较少。本实验以苍术素和苍术酮为指标，采用毛细管气相色谱法建立了苍术中有效成分苍术素和苍术酮的定量测定方法，为苍术的质量标准研究提供了依据。

白术挥发油中苍术酮氧化反应的动力学

利用GC/MS法跟踪分析了苍术酮纯品的分解过程,得到5种分解产物——与文献报道的苍术酮转变成2种产物存在较大的差异;研究了苍术酮的氧化反应机理:苍术酮与水易进行1,4加成反应,生成半羧醛羟基。水的存在使半羧醛羟基开环并导致C—O键断裂,生成羰基,羰基进一步被氧化成羧基。由于羧基上的碳原子为sp2杂化,羟基可从杂化轨道平面两侧进攻羧基,并与羧基进行分子内脱水反应,故而可生成白术内酯Ⅰ及表白术内酯Ⅰ,而白术内酯Ⅰ的7位C上的—H很活泼,易被—OH取代而生成白术内酯Ⅲ,白术内酯Ⅲ不稳定,易使分子内脱水生成白术内酯Ⅱ。此外,白术内酯Ⅲ与白术内酯Ⅰ可进行分子间脱水反应,生成双白术内酯。通过定量分析纯品和白术原药材中苍术酮在氧化过程中的相对含量,计算反应的动力学参数,得出苍术酮纯品的反应速率方程为Rate1=k′1[x]1.84,活化能为58.05kJ/mol;原药材中苍术酮的反应速率方程为Rate2=k′2[x]1.89,活化能为63.17kJ/mol。

孟河医派苍术特色炮制品与其他炮制品中β-桉叶醇、苍术酮和苍术素含量差异的研究

目的:探讨孟河医学特色炮制(泔浸麻油拌炒、黑芝麻拌蒸)及其他炮制方法对苍术中β-桉叶醇、苍术酮和苍术素含量的影响,为苍术及其不同炮制品的质量评价、炮制机制的阐释提供科学依据。方法:制备麸炒苍术、米泔水制苍术、焦苍术、泔浸麻油拌炒苍术、黑芝麻拌蒸苍术,超声提取样品,采用气相色谱-质谱联用方法,同时对生苍术和各种苍术炮制品中的β-桉叶醇、苍术酮和苍术素进行定量分析。结果:与生苍术比较,不同炮制品中β-桉叶醇、苍术酮和苍术素的含量均有不同程度的降低,其中泔浸麻油拌炒苍术的β-桉叶醇、苍术酮含量最低,焦苍术的苍术素含量最低。结论:苍术经孟河医学特色炮制后β-桉叶醇、苍术酮和苍术素含量降低,为苍术不同炮制品的临床合理应用提供理论支撑。

苍术酮对结直肠癌细胞HT29凋亡的机制

目的探讨苍术酮对结直肠癌细胞HT29细胞的凋亡作用及其可能的相关机制。方法应用细胞计数-8(cell counting kit-8,CCK-8)试剂盒法观察1、3、10、30、100 mmol/L苍术酮对结直肠癌细胞HT29的抑制作用,并应用流式细胞术AV-PI法检测苍术酮介导细胞的凋亡作用;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-q PCR)检测苍术酮作用HT29细胞后卷曲螺旋结构域12(CCDC12)基因和蛋白表达,RT-q PCR和蛋白印迹(Western blot)检测苍术酮作用HT29细胞后磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3 K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)基因和蛋白表达变化。结果苍术酮能抑制HT29细胞的增殖作用,并呈现剂量依赖性。苍术酮介导的凋亡率与对照组相比显著增加。苍术酮作用后HT29细胞的CCDC12基因表达下降,而PI3K、p-AKT和m TOR基因和蛋白表达下降(P<0.05)。结论苍术酮抑制结直肠癌HT29细胞的增殖,并能介导凋亡,其机制可能通过降低CCDC12和PI3K、p-AKT和m TOR表达来介导的。

TLCS法测定白术炮制前后苍术酮的含量

目的:比较白术药材炮制前后苍术酮的含量变化。方法:采用薄层扫描法比较3批不同产地白术炮制前后苍术酮的峰面积变化。结果:3批不同产地的白术麸炒品中苍术酮的含量均低于生品。结论:炮制后苍术酮的含量有所降低,为白术炮制前后质量控制提供依据。

苍术酮对急性肺损伤小鼠血清细胞因子和TLR7信号通路的影响

目的观察苍术酮对急性肺损伤(ALI)小鼠血清细胞因子和TRL7信号通路的影响。方法通过呼吸道感染甲型流感病毒,诱导小鼠ALI模型。将144只雄性SPF级ICR小鼠,随机分为正常组24只,模型组120只。模型组在乙醚麻醉下通过鼻内接种IAV诱导感染,这种病毒在小鼠中引起肺炎,然后随机平均分为5组,每组24只,分别为模型对照组,利巴韦林治疗组,苍术酮低剂量、中剂量和高剂量治疗组。在造模2 h后,阳性药物组给予利巴韦林50 mg/kg灌胃给药,苍术酮高、中、低剂量治疗组分别给予苍术酮40 mg/kg、20 mg/kg、10 mg/kg灌胃给药,每日1次,连续5 d。5 d后处死动物,采集血清以及肺组织样本。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中IFN-β、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;PCR法测定小鼠肺组织中TLR-7、My D88、TRAF6、IFN-βm RNA表达水平;Western blot法检测NF-κB p65蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组小鼠血清中IFN-β、IL-6、TNF-α、IL-1β水平显著升高(P<0.01)。与模型对照组比较,利巴韦林组和苍术酮组IL-6、TNF-α、IL-1β炎症因子水平均显著下降,而IFN-β水平显著升高(P<0.01),苍术酮高、低剂量组差异有统计学意义(P<0.05)。与模型对照组相比,苍术酮治疗组TLR7及其下游基因My D88,TRAF6和IFN-β的m RNA表达显著上调(P<0.01)。此外,Western印迹分析结果显示,模型对照组的核因子κB(NF-κB)p65蛋白表达水平与正常组相比显著增加(P<0.01);与模型组相比,利巴韦林及苍术酮各剂量组的蛋白表达显着减少(P<0.01)。结论苍术酮能够明显减轻ALI小鼠的肺部炎症,其作用机制依赖于TLR7信号通路的激活,诱导I型干扰素的产生和对NF-κB p65表达的抑制。

高效液相色谱法测定白术挥发油中苍术酮的含量

目的建立白术挥发油中主要活性成分苍术酮的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,Alltima HPC18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),柱温为室温,流动相为甲醇-水(95∶5),流速:1.0mL·min-1,检测波长为220nm。结果在上述色谱条件下,苍术酮在0.24～2.04μg具有良好的线性关系(r=0.9998),平均回收率为98.62%,RSD=1.4%。结论该方法简便、准确、快速,可用于白术挥发油及其制剂的质量控制。

白术挥发油中苍术酮的稳定性研究

目的:考察不同条件下白术挥发油中苍术酮的稳定性。方法:采用高效液相色谱法测定挥发油中苍术酮及白术内酯含量,以苍术酮及白术内酯的相对含量作为衡量苍术酮变化的指标。结果:白术挥发油纯品中的苍术酮在室温日光条件下,第6天分解率达到12%以上,在室温避光条件下基本不变。挥发油吐温-80溶液在室温避光条件下,苍术酮在第5天的分解率达到30%以上,在冷冻避光条件下基本不变。挥发油中的苍术酮在人工胃液及人工肠液中均不稳定,其变化符合一级动力学过程。结论:在不同条件下,白术挥发油中苍术酮的稳定性不同,稀溶液中48小时内比较稳定,苍术酮较其纯品稳定性好。

紫外分光光度法测定白术中苍术酮的含量

用紫外分光光度法对白术中苍术酮的含量进行测定，结果表明：以正已烷提取法测得挥发油含量为２．０１９％，油中苍术酮含量为３７．１２％，而以水蒸汽蒸馏法测得的挥发油含量为０．８８５％，油中苍术酮含量为３１．９３％，说明不同的提取方法得到的挥发油含量不同，而油中所含的苍术酮含量却基本接近。以紫外分光光度法测定白术中苍术酮含量，为保证白术生药的品质提供了一个更为可靠的依据。

高效液相色谱法测定不同产地麸炒白术中苍术酮、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ的含量

目的采用高效液相色谱法测定不同产地麸炒白术中苍术酮、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ的含量,对不同产地麸炒白术进行质量评价。方法色谱柱为Dikma Diamonsil C8(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为水-乙腈(梯度洗脱),流速1.0 mL/min,检测波长为220和275 nm,柱温30℃,进样量20μL。结果在上述色谱条件下,苍术酮、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ浓度分别在47.600~142.800、1.304~3.912、1.126~3.378、1.740~5.220 mg/L内线性关系良好,平均加样回收率分别为99.98%、99.63%、99.15%、99.79%,相对标准偏差(RSD)分别为0.03%、1.70%、1.57%、1.10%。结论该方法分离度好、专属性强、重现性好、简单易行,可作为不同产地麸炒白术饮片的质量控制方法;测定结果表明,浙江磐安产麸炒白术饮片中4种成分含量相对较高。

HPLC法测定白术及其炮制品中苍术酮等四种有效成分含量

目的:使用高效液相色谱法对白术及其炮制品中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和苍术酮进行含量测定,并比较炮制对白术指标性成分的含量影响,阐明炮制机制。方法:使用Kromasil C18-5μm(Φ4.6×150mm)色谱柱,水-乙腈为流动相梯度洗脱,柱温30℃,流速1.0mL·min^-1,由峰面积求得白术及几种炮制品中有效成分的含量。结果:白术生品中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和苍术酮含量分别为0.375、0.334、0.578、1.36mg·g^-1,白术炒黄品中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和苍术酮含量分别为0.409、0.297、0.675、0.694mg·g^-1,白术炒焦品中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和苍术酮含量分别为0.315、0.134、0.177、0.283mg·g^-1,白术麸炒品中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和苍术酮含量分别为0.434、0.300、0.344、0.337mg·g^-1。结论:经过炒黄和麸炒白术内酯Ⅰ、Ⅲ含量略升高,苍术酮含量降低;炒焦白术各成分含量均降低,苍术酮的变化幅度最大,提示与苍术酮结构不稳定易分解有关。

白术挥发油中苍术酮不同提取方法的薄层对比

比较不同的提取方法对白术挥发油中苍术酮的提取效果 ,对提取后的样品经薄层色谱鉴别并与对照品比较 ,发现超临界流体萃取法和渗漉法得到的提取液有效成分较为完全。