2株生防菌与苏云金杆菌混配对茶园扁刺蛾的防治效果研究

为优选到一个对茶园扁刺蛾高防效的生防菌混配配方来替代化学药剂防治扁刺蛾,采用生防菌两两混配的方法,将前期从茶园发现的自然死亡扁刺蛾尸虫肠道内筛选到的2株生防菌(X-2、X-11)分别与苏云金杆菌(Bt)混配。室内毒力试验表明,筛选到的X-2和X-11生防菌与Bt制剂间具有协同增效作用,可以提高对扁刺蛾的防效,其中尤以1×10^(8)个/mL X-11+32 IU/mg Bt混配菌剂对扁刺蛾的防治效果最好,其药后72 h的死亡率最高可达81.50%,较单独施用1×10^(8)个/mL X-11菌液的死亡率提高了22.9个百分点。田间试验表明,将优选到的混配菌剂在茶园喷施10 d后对扁刺蛾的防效最高可达67.20%,比对照Bt菌剂防效提高了8.8个百分点。该研究可为今后茶园扁刺蛾生物防治制剂的开发利用提供理论基础。

苏云金杆菌微型颗粒剂对玉米鳞翅目害虫的防治效果

包括草地贪夜蛾、亚洲玉米螟、棉铃虫在内的鳞翅目害虫是安徽省夏玉米生产上发生最重、为害最大的一类虫害,为探索其高效绿色的防控技术,分别于心叶初期和心叶末期,施用两种苏云金杆菌G033A和PS3微型颗粒剂,研究其对玉米鳞翅目害虫防治效果、心叶保护效果及产量影响。结果表明:心叶初期以人工撒施方式,按300、450、600 g/667 m~2剂量施药后7 d,G033A微型颗粒剂对害虫的防效分别为71.62%、77.18%和81.54%,PS3微型颗粒剂的防效分别为75.00%、83.73%和86.91%;G033A微型颗粒剂对玉米心叶保护效果分别为59.42%、68.86%和71.72%,PS3微型颗粒剂分别为65.08%、72.64%和75.50%,持效期均可达14 d。心叶末期以无人机撒施方式,按照1、1.5、2 kg/667 m~2剂量施药后7 d,G033A微型颗粒剂对害虫的防效分别为76.90%、81.22%和86.02%,PS3微型颗粒剂分别为81.71%、84.89%和89.20%,药后14d防效均开始下降;挽回产量损失率G033A微型颗粒剂分别为5.17%、7.07%和9.09%,PS3微型颗粒剂分别为5.56%、7.47%和9.57%。相对于可湿性粉剂,微型颗粒剂产品持效期更长、防治效果更好;相同剂量处理下,药后7、14 d,PS3微型颗粒剂防效均高于G033A微型颗粒剂。G033A和PS3微型颗粒剂防治玉米鳞翅目害虫较好,可有效挽回产量损失,人工撒施推荐剂量均为300~600 g/667 m~2、无人机撒施推荐剂量均为1~2 kg/667 m~2。

8000IU/μL苏云金杆菌悬浮剂防治菜花小菜蛾田间药效试验

小菜蛾是菜花上常见的一种害虫,对蔬菜产量和质量影响较大。试验选择的菜花品种为“青梗松花65”,3个8000 IU/μL苏云金杆菌悬浮剂施用剂量,分别为100,200,300 g/667 m^(2),30 g/667 m^(2)的1%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐微乳剂为对照,另设空白对照。通过调查药前虫口基数及药后1,4,7 d残余活虫数,以确定药效。结果表明:8000 IU/μL苏云金杆菌悬浮剂100,200,300g/667 m^(2)处理防治菜花小菜蛾对菜花安全无药害,且制剂乳化性能良好。建议可使用8000 IU/μL苏云金杆菌悬浮剂防治十字花科蔬菜小菜蛾,宜在小菜蛾低龄幼虫盛发初期200~300 g/667 m^(2)兑水均匀喷雾施药,药效持续期7 d以上。

苏云金杆菌对淡色库蚊幼虫抗氧化酶的影响

目的测定苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)对淡色库蚊幼虫的毒力,以及Bt浸渍后淡色库蚊幼虫体内抗氧化酶浓度的变化。方法采用浸渍法测定Bt溶液对淡色库蚊幼虫的毒力;应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定4 mg/ml Bt处理24 h后未致死组(A)、致死组(B)和对照组(C)的抗氧化酶浓度。结果2、4和8 mg/L Bt溶液对淡色库蚊幼虫均有一定的毒力。A组、B组和C组的过氧化氢酶(CAT)浓度分别为(123.75±1.09)、(112.83±1.46)和(108.17±3.26)ng/ml,差异具有统计学意义(F=41.182,df=2,P<0.0001);超氧化物歧化酶(SOD)的浓度分别为(12.10±0.10)、(10.12±0.46)和(10.04±0.62)ng/ml,差异具有统计学意义(F=20.447,df=2,P=0.002);谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)浓度分别为(64.33±4.41)、(58.90±4.30)和(55.53±0.72)ng/ml,差异没有统计学意义(F=4.617,df=2,P=0.061)。结论淡色库蚊幼虫体内的抗氧化酶可能在抵抗Bt浸渍的过程中发挥重要作用。

苏云金杆菌WG-001工程菌发酵培养基的筛选

探讨了BtWG001工程菌以农副产品为主要碳、氮源的利用情况,为该菌株发酵培养基的筛选提供了广谱的原料资源。利用高速上升浓度加倍法进行了发酵培养基的优选,获得一个优良配方。发酵水平达到4024IU/μL,0.39%,与对照配方(2800IU/μL,0.26%)相比,分别提高44%,50%。证明该方法为一种筛选Bt发酵培养基配方的新模型。

高含量苏云金杆菌制剂防治高山甘蓝小菜蛾的田间药效

在鄂西北高山地区，采用喷雾法进行高含量苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis）制剂（50000IU／mg可湿性粉剂，晶体蛋白含量为8．3％）防治小菜蛾的田间药效试验。试验结果表明，50000IU／mg苏云金杆菌可湿性粉剂对小菜蛾防效显著，药后7d防效达到91．0％～95．9％，优于对照药剂1．8％阿维菌素乳油。苏云金杆菌作为一种全球公认的低毒、环保、安全生物农药，50000IU／mg苏云金杆菌可湿性粉剂可以在高山十字花科蔬菜种植区大面积推广．推荐使用剂量675-900g／hm^2。

苏云金杆菌杀虫晶体蛋白基因转化美洲黑杨的研究

本研究首先建立了美洲黑杨叶片外植体的再生系统，并利用Ｈｏｒｓｃｈ等人１９８５年发明的叶盘法，将分别带有嵌合基因ＮＰＴＩＩ和１．８ｋｂ或２．１ｋｂＢｔ．基因的土壤杆菌ＬＢＡ４４０４与美洲黑杨叶片共培养。采用３０ｍｇ／ｌ和５０ｍｇ／ｌ两种浓度的卡那霉素筛选转化子，约２８天左右的时间，有不定芽从外植体切口处形成。两种卡那霉素浓度下共形成２７５个伸长芽，存活了１８７株。这１８７株分别进入卡那霉素３０ｍｇ／ｌ，５０ｍｇ／ｌ的生根培养基后，生根率分别为９．６２％和８．０２％。ＰＣＲ反应证明部分植株已成功地进行了转化。

苏云金杆菌δ-内毒素基因在大肠杆菌中的克隆及表达

分离了苏云金杆菌肯尼亚亚种7404(Bacillus thuringiensis subsp. kenyae 7404)和库斯塔克亚种(Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki HD-1)的质粒。经凝胶原位杂交证明苏云金杆菌肯尼亚亚种7404的δ-内毒素基因位于约47Md大小的一个质粒上。用蔗糖密度梯度离心法从Sau 3 A1部分酶解的上述两种苏云金杆菌质粒DNA酶解片段中分离出大于4kb的DNA片段,将这些片段克隆到pBR332的Bam HI位点上并转化大肠杆菌HB101。通过菌落原位杂交、菌落原位放射免疫试验及Western blet分析等方法,选到了带有δ-内毒素基因并能在大肠杆菌中表达此毒蛋白的转化体。初步的生物学试验表明,在四个试验过的转化体中带有肯尼亚亚种δ-内毒素基因的转化体TK89及带有库斯塔克亚种δ-内毒素基因的转化体TH12和TH48对烟青虫(Heliothis assulta)有毒杀活性。

苏云金杆菌预处理小菜蛾对有机磷和氨基甲酸酯杀虫剂的增效作用

研究了小菜蛾Plutellaxylostella幼虫经苏云金杆菌Bacillusthuringiensis预处理后 ,对有机磷和氨基甲酸酯杀虫剂敏感性的变化以及预处理对小菜蛾幼虫体内乙酰胆碱酯酶、羧酸酯酶、谷胱甘肽S 转移酶和谷胱甘肽的含量的影响。结果表明 :苏云金杆菌预处理抗性小菜蛾幼虫后 ,其对甲胺磷、水胺硫磷和克百威的敏感性分别为未处理组的 6 74、 8 83和 8 5 0倍 ;处理敏感小菜蛾幼虫后则分别为未处理组的 2 96、 1 6 9和 3 88倍。苏云金杆菌预处理抗性小菜蛾 ,未处理组乙酰胆碱酯酶的Km 和Vmax值分别为预处理组的 1 86和 1 5 6倍 ,所使用的 6种杀虫剂对乙酰胆碱酯酶的Ki值 ,处理组为未处理组的 1 80～ 2 6 6倍 ,苏云金杆菌预处理抗性小菜蛾对羧酸酯酶的Km、Ki 影响不大 ,但能显著地抑制羧酸酯酶和谷胱甘肽S 转移酶的活性并导致谷胱甘肽含量下降 (对照分别为处理的 2 0 2、 1 76和 1 6 6倍 )。苏云金杆菌预处理敏感小菜蛾 ,对乙酰胆碱酯酶的Km 、Vmax、Ki 值和羧酸酯酶的Km 、Ki 值以及谷胱甘肽含量影响不大 ,但能显著地抑制羧酸酯酶和谷胱甘肽S 转移酶的活性 (对照分别为处理的 1 5 4和 1 6 4倍 )。

具杀线虫活性的苏云金杆菌筛选研究

Bioassay of 51 strains of Bacillus thuringiensis to Bursaphelenchus xylophilus had been studied in laboratory. Two of them had higher toxicity to B. xylophilus. Extraction of endotoxin and exotoxin of the two isolates to B. xylophilus showed the action of exotoxin higher than that of endotoxin.

电脉冲穿孔法将苏云金杆菌δ-内毒素基因导入野生型芽孢杆菌

利用电脉冲穿孔法将带有苏云金杆菌毒蛋白基因的穿梭质粒导入几株野生型芽孢杆菌中，它们是野生型的蜡状芽孢杆菌、短芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌。通过观察在新霉素和氨苄青霉素平板上长出的抗性菌落数，计算出转化效率为１０＾１－１０＾４转化子／μｇＤＮＡ．从转化子中分离到的质粒ＤＮＡ大小及其用ＨｉｎｄⅢ酶切的片段与原始质粒ＤＮＡ相同，毒性测试表明重组转化子对烟青虫六天的致死率达９０－１００％。

苏云金杆菌与高效氯氰菊酯对美国白蛾的协同作用

为了明确苏云金杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)和高效氯氰菊酯的协同作用,采用Bt预处理及直接混用2种方式施药,室内饲毒法测定了2种药剂对美国白蛾Hyphantria cunea(Drury)2龄幼虫的活性,同时研究了高效氯氰菊酯对Bt生长曲线的影响。结果表明:试虫先用每mL含1×106个孢子的Bt S19菌悬液预处理,1 d后再用系列浓度的高效氯氰菊酯处理,其48 h的LC50值为0.76 mg/L,而未经预处理,仅用高效氯氰菊酯处理48 h的LC50值为1.28 mg/L;2种处理在高效氯氰菊酯质量浓度为2.25 mg/L时对试虫的半致死时间(LT50值)分别为9.2 h和34.7 h,两者间增效作用明显。对于直接混用,采用1×106个/mL的Bt S19与6 mg/L的高效氯氰菊酯混剂处理,增效作用明显,72 h的共毒系数为122.5,此后再增加高效氯氰菊酯的浓度则表现出轻微的拮抗作用。高效氯氰菊酯处理可使Bt生长对数期延迟,且浓度越高影响越大,说明高效氯氰菊酯可影响Bt芽孢萌发,使菌体增殖延迟。研究表明,先用Bt预处理后再使用高效氯氰菊酯对美国白蛾的作用效果优于二者直接混用。

苏云金杆菌发酵培养基的研究

采用正交实验法研究了不同培养基对 Bt- HD1产毒能力的影响。优选出的培养基为 :发酵液芽孢数达 5.1× 1 0 9· m L-1,2 %发酵液 2 4 h致死 3龄小菜蛾幼虫 65% ,48h 达 89% ,72 h达1 0 0 %。普通培养基对应值分别为 6.0× 1 0 8· m L-1和 35% ,83% ,1 0 0 %。优选出培养基最佳碳氮比( C/N)为 2 .0 ,最佳含固量为 8%

苏云金杆菌和白僵菌可湿性粉剂研制及杀虫毒力测定

以苏云金杆菌和白僵菌为有效成分制成混配菌剂,采用高效小型粉碎机将筛选的助剂及原药混匀,在测定助剂对微生物活体的生物活性、制剂性能影响的基础上,进行混配菌剂助剂的筛选。通过生物测定筛选获得最佳混配比例,并将其加工成可湿性粉剂。结果表明:苏云金杆菌库斯塔克亚种和球孢白僵菌最佳混配质量比为3∶1,润湿分散剂为1%Morwet EFW、3%SDS、9%Morwet D425、9%TERSPERSE 2020;紫外保护剂为0.3%黄原胶,以凹凸棒土为载体补足100%。以此配方制备的混配菌剂的质量悬浮率72.73%,孢子悬浮率75.13%,润湿时间<1min,平均粒度为13.76μm。苏云金杆菌和白僵菌可湿性粉剂中各指标符合商品制剂的标准,对黄褐天幕毛虫毒力分别高于苏云金杆菌和白僵菌可湿性粉剂单剂,是一种具有高杀虫活性、持效期长、环境友好型绿色农药。

苏云金杆菌vip3 A基因的克隆、表达及杀虫活性分析

用全长PCR方法从野生型苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)菌株S184中克隆了 2 3kb大小的vip3A基因并进行了序列分析。将vip3A S184基因插入表达载体pQE30构建了表达质粒pOTP ,转化大肠杆菌M15 ,转化子经 1mmol LIPTG诱导后可表达 89kD大小的Vip3A S184蛋白 ,并得到Westernblot证实。蛋白可溶性试验表明 ,目的蛋白中约有 19%是可溶的 ,用透射电镜观察到大多数蛋白是以包涵体形式存在的。因此 ,可以在自然条件下进行目的蛋白的纯化和对家兔进行免疫制备多克隆抗体 ,用于苏云金杆菌Vip3A蛋白表达的检测。利用IPTG进行诱导培养的菌液对甜菜夜蛾 (Spodopteraexigua)、斜纹夜蛾 (S .litura)和棉铃虫 (Helicoverpaarmigera)等 3种害虫的初孵幼虫进行生物测定 ,结果表明 ,Vip3A

粘虫颗粒体病毒对苏云金杆菌增效作用初探

粘虫颗粒体病毒 (PuGV)对苏云金杆菌具有增效作用 ,Bt中加入 0 .17%的PuGV ,共毒系数达 137;灭活的PuGV对苏云金杆菌同样具有增效作用 。

苏云金杆菌与化学杀虫剂的联合作用测定

采用生物测定方法 ,测定苏云金杆菌与沙蚕毒素、苯甲酰脲等 5类化学杀虫剂混用对小菜蛾的毒力。结果表明 ,Bt与抑太保、杀虫单复配具有明显增效作用 ,共毒系数为 2 4 9.5和 2 37.2 ;与氯氰菊酯和阿维菌素间表现为增效和相加作用 ;与敌百虫混配则表现为拮抗作用。与杀虫单不同比例混配联合作用效果不同 ,共毒系数为 155.6～ 186 .5。

苏云金杆菌制剂防治细胸金针虫的初步研究

应用苏云金杆菌乳剂对地下害虫细胸金针虫进行了初步的防治研究 ,并对死虫进行了菌体培养检测。结果表明 ,细胸金针虫对苏云金杆菌较为敏感 ,在室内饲养条件下设不同浓度梯度毒土接入健壮供试虫体 ,在 4 8～ 96h之内虫体死亡率达到最高 ,其中低龄幼虫更敏感。通过死虫分离菌体培养检测可以看出 ,虫体死亡确因感染苏云金杆菌所致。培养菌落及菌体涂片镜检可以观察到苏云金杆菌不同发育历期的形态变化。苏云金杆菌可以作为高效的微生物杀虫剂用于地下害虫金针虫的防治。

苏云金杆菌制剂标准化的程序和方法

本文对以小菜蛾为供试虫,测定苏云金杆菌制剂标准化的程序和方法进行了详细描述。按此程序,以美国标准品HD-1-S-1980作对照,对中国标准品CS5ab—87进行效价标定。17次生物测定的平均效价为8633±915IU/mg,变异系数10.6％。表明使用该生物测定程序和方法测定的结果重复性好,易于推广应用。