芍药苷调节丝氨酸/苏氨酸激酶/鼠双微基因2/p53信号通路对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响实验研究

目的:探讨芍药苷(PAE)调节丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)/鼠双微基因2(MDM2)/p53信号通路对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:以OCI-LY3细胞为研究对象,分别设置PAE低浓度组(15μmol/L PAE)、PAE中浓度组(30μmol/L PAE)、PAE高浓度组(60μmol/L PAE)、PAE高浓度+SC79(AKT激活剂)组(60μmol/L PAE+8μg/ml SC79),同时以未经处理的细胞为对照组。48 h后,分析细胞增殖、克隆形成能力及细胞周期和凋亡变化,检测AKT/MDM2/p53信号通路相关蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,PAE低浓度组、PAE中浓度组、PAE高浓度组细胞凋亡率、p53表达、G_(0)/G_(1)期增加,细胞克隆形成数和细胞增殖率,p-AKT/AKT和p-MDM2/MDM2表达水平,以及G_(2)/M、S期降低(均P<0.05)。与PAE高浓度组比较,PAE高浓度+SC79组细胞凋亡率、p53表达、G_(0)/G_(1)期降低,细胞克隆形成数和细胞增殖率,p-AKT/AKT和p-MDM2/MDM2表达水平,以及G_(2)/M、S期增加(均P<0.05)。结论:PAE通过抑制AKT/MDM2上调p53表达,抑制DLBCL细胞增殖、细胞周期进展,诱导其凋亡。

雷公藤甲素通过丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶/糖原合成酶激酶-3β通路对MGC803细胞增殖、侵袭与迁移的影响

目的 探讨雷公藤甲素通过丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶/糖原合成酶激酶-3β(AKT/GSK-3β)通路对MGC803细胞增殖、侵袭与迁移的影响。方法 体外培养MGC803细胞,确定雷公藤甲素的干预剂量和干预时间。将细胞分为阴性对照组(A组,不进行处理),阳性对照组(B组,10μmol/L顺铂),雷公藤甲素高、中、低剂量组(C组、D组、E组)。干预48 h,采用Transwell法检测细胞侵袭能力,采用划痕试验法检测迁移能力,采用免疫印迹(Western blot)法检测检测相关蛋白的表达。结果 随着雷公藤甲素浓度的增加,MGC803细胞增殖率降低(P <0.05);48 h时半数抑制浓度(IC50)最小,选择干预时间为48 h,C组、D组、E组的干预剂量分别为80,40,20 nmol/L。与B组比较,C组、D组、E组侵袭细胞数、细胞迁移距离及波形蛋白(vimentin),snail,p-AKT/AKT,p-GSK-3β/GSK-3β表达水平均显著升高(P <0.05),上皮钙黏素(E-cadherin)、β-联蛋白(β-catenin)表达水平均显著降低(P <0.05),且呈剂量依赖关系。结论 雷公藤甲素可通过抑制AKT/GSK-3β信号通路而抑制MGC803细胞增殖、侵袭与迁移。

低蛋白日粮补充苏氨酸对肉鸭生长性能、肌肉发育及经济效益的影响

文中旨在探究低蛋白日粮补充苏氨酸对肉鸭生长性能、肌肉发育及经济效益的影响。试验将1000羽1日龄的健康肉鸭分为4组,每组10个重复,每重复25羽,对照组(Ⅰ组)饲喂正常蛋白质水平日粮,试验组Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ在基础日粮基础上降低约2%的粗蛋白质水平的同时补充蛋氨酸(Met)和赖氨酸(Lys)以使各组间Met和Lys水平保持一致。并分别额外补充0%、0.10%和0.20%苏氨酸(Thr)的试验日粮。与对照组相比,降低2%的粗蛋白质水平组肉鸭FBW显著降低5.76%(P<0.05);与低蛋白日粮组相比,添加0.20的Thr组肉鸭末体重(FBW)显著提高2.70%(P<0.05),但仍低于对照组3.21%(P<0.05);低蛋白日粮组,添加0%~0.20%Thr组肉鸭平均日增重(ADG)分别显著降低5.89%、4.52%和3.29%(P<0.05)料重比(F/G)分别显著提高7.65%、5.09%和3.91%(P<0.05)。与对照组相比,低蛋白日粮组补充0%~0.20%的Thr组肉鸭的胸肌率显著降低(P<0.05);低蛋白日粮组补充0%~0.20%的Thr组肉鸭的腿肌率显著降低(P<0.05),与0%和0.10%的Thr组相比,0.20%的Thr组肉鸭腿肌率显著提高(P<0.05);低蛋白日粮组补充0%~0.20%的Thr组肉鸭的肌肉粗蛋白含量显著降低(P<0.05),与0%的Thr组相比,0.10和0.20%的Thr组肉鸭肌肉粗蛋白含量显著提高(P<0.05)本试验各组饲料价格分别为3.2701、3.1783、3.1855和3.1927元/kg;低蛋白日粮添加0%~0.0820%的Thr组饲料总成本较对照组显著降低,且组内差异不显著(P>0.05);综合计算后,本试验各组毛利润分别为15.33、13.51、14.15和14.51元,低蛋白日粮添加0%~0.0820%的Thr组毛利润较对照组显著降低(P<0.05)。总之,日粮蛋白质水平对肉鸭生长影响显著,补充0.10%的Thr能部分恢复低蛋白质水平导致的生长发育迟缓。

补喂赖氨酸和苏氨酸对泌乳期湖羊血液生化指标的影响

为研究日粮中添加赖氨酸和苏氨酸对泌乳期湖羊血液生化指标的影响,本试验选择产羔日期相近、2岁龄、平均体重为(51.29±4.96)kg及泌乳10 d的母湖羊18只,随机分为3组,对照组饲喂基础饲粮,试验Ⅰ组每只湖羊在基础日粮中添加苏氨酸9 g/d+赖氨酸15 g/d,试验Ⅱ组每只湖羊在基础日粮中添加苏氨酸12 g/d+赖氨酸20 g/d,每组6只羊,试验期为45 d。使用全自动生化分析仪检测湖羊血液生化相关指标。结果表明:试验Ⅱ组湖羊血液中总蛋白(TP)浓度显著高于对照组和试验Ⅰ组(P<0.05);试验Ⅰ组和试验Ⅱ组湖羊血液中甘油三酯(TG)浓度显著低于对照组(P<0.05);试验Ⅱ组湖羊血液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)浓度显著高于试验Ⅰ组(P<0.05);试验Ⅰ组湖羊血液中碱性磷酸酶(ALP)的浓度显著低于对照组(P<0.05),试验Ⅱ组湖羊血液中ALP浓度低于对照组,但差异不显著(P>0.05);各组湖羊血液中相关矿物元素指标差异均不显著(P>0.05)。本试验条件下,在每只泌乳期湖羊日粮中添加苏氨酸12 g/d+赖氨酸20 g/d效果较好。

全反式维甲酸联合小剂量阿糖胞苷对急性髓系白血病细胞磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶信号通路的作用机制研究

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)联合小剂量阿糖胞苷(Ara-C)对急性髓系白血病细胞磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(AKT)信号通路的作用机制。方法:选取人急性髓系白血病细胞HL-60,分为空白对照组(未经任何处理的HL-60细胞)、Ara-C组(加入0.5μmol/LAra-C)、ATRA组(加入2μmol/LATRA)、ATRA+Ara-C组(加入2μmol/LATRA和0.5μmol/LAra-C),继续培养24、48、72h,采用CCK8检测HL-60细胞活力,AnnexinV双染法检测HL-60细胞凋亡,qRT-PCR检测PI3K、AKT-mRNA表达,Westernblot检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达,并进行细胞形态学观察。结果:空白对照组HL-60细胞活力高于Ara-C+ATRA组、Ara-C组、ATRA组,Ara-C组、ATRA组HL-60细胞活力高于Ara-C+ATRA组(均P<0.05)。Ara-C+ATRA组HL-60细胞凋亡率高于Ara-C组、ATRA组,Ara-C组、ATRA组HL-60细胞凋亡率高于空白对照组(均P<0.05)。HL-60细胞胞体多呈圆形,可见瘤状突起,胞核多为类圆形,Ara-C组、ATRA组染色质凝聚,颜色变深,部分胞核变小,Ara-C+ATRA组染色质凝聚,颜色变深,可见核固缩、核碎裂。空白对照组HL-60细胞PI3K、AKTmRNA表达高于Ara-C组、ATRA组,Ara-C组、ATRA组HL-60细胞PI3K、AKTmRNA表达高于Ara-C+ATRA组(均P<0.05)。空白对照组HL-60细胞P-PI3K、P-AKT蛋白表达高于Ara-C组、ATRA组,Ara-C组、ATRA组HL-60细胞P-PI3K、P-AKT蛋白表达高于Ara-C+ATRA组(均P<0.05)。结论:Ara-C+ATRA能通过抑制PI3K/AKT信号通路激活,促进HL-60细胞凋亡。

苏氨酸二次母液的脱色工艺优化

以苏氨酸二次母液为研究对象,采用氨基酸分析仪对母液中的氨基酸进行定量分析。结果表明,苏氨酸质量浓度为7.82 g/100 mL。以苏氨酸二次母液脱色率和苏氨酸损失率为评价指标,通过对比活性炭、大孔吸附树脂、阴、阳离子交换树脂共9种脱色剂对苏氨酸二次母液的脱色效果,确定最佳脱色剂种类,并通过设计单因素试验与响应面试验对苏氨酸二次母液的脱色工艺进行优化。结果表明,粉末活性炭对苏氨酸二次母液的脱色效果优于其他脱色剂,选用粉末活性炭作为苏氨酸二次母液的脱色剂;通过响应面优化,得到最佳脱色工艺条件为自然pH值、脱色温度35℃、脱色时间40 min、活性炭添加量25%,在此条件下,得到的苏氨酸二次母液脱色率为97.69%,苏氨酸损失率为5.02%。

辛开苦降法对多囊卵巢综合征胰岛素抵抗患者卵巢功能、子宫内膜容受性及磷脂酰肌醇3激酶/丝苏氨酸蛋白激酶通路的影响

目的 观察辛开苦降法对多囊卵巢综合征(Polycystic ovarian syndrome,PCOS)胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)患者卵巢功能、子宫内膜容受性及磷脂酰肌醇3激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(Phosphatidylinositol 3 kinase/serine threonine protein kinase,PI3K/AKT)通路的影响。方法 选取2018年11月—2020年1月期间四川中医药高等专科学校附属绵阳市中医医院收治的PCOS-IR患者83例,按随机数字表法分为对照组41例和治疗组42例。对照组采用炔雌醇环丙孕酮联合二甲双胍治疗,治疗组采用中医辛开苦降法(中药),均连续治疗12周。观察比较两组患者治疗前后体质量指数(Body mass index,BMI)、卵巢功能[卵泡刺激素(Follicle stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(Luteinizing hormone,LH)、LH/FSH与抗缪勒管激素(Anti-mullerian hormone,AMH)]、血糖[空腹胰岛素(Fasting insulin,FIN)、空腹血糖(Fasting blood glucose,FPG)、餐后2 h血糖(2 hours postprandial blood glucose,2 h PBG)与胰岛素抵抗指数(Homeostasis model assessmentinsulin resistance,HOMA-IR)]、子宫内膜容受性[收缩期峰值流速(Vmax)、搏动指数(Pulse index,PI)、阻力指数(Resistance index,RI)、血流参数血管化指数(Vascularity index,VI)、血流指数(Flow index,FI)与血管化血流指数(Vascularity flow index,VFI)]、外周血PI3K/AKT通路(PI3K、AKT mNRA),治疗期间不良反应情况。结果 治疗后两组患者BMI、FPG、FIN、2 h GLU、HOMA-IR水平均较治疗前明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组BMI、FPG、FIN、2 h GLU、HOMA-IR水平均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者AMH、LH、LH/FSH水平均较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);FSH较治疗前无显著变化,差异无统计意义(P>0.05);且治疗组AMH、LH、LH/FSH明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者子宫内膜厚度、子宫容积、Vmax、VI、FI、VFI均较治疗前明显升高,PI、RI均较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组子宫内膜厚度、子宫容积、Vmax、VI、FI、VFI均明显高于对照组,PI、RI均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者PI3K、AktmRN表达均较治疗前升高,差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组PI3K、AktmRN表达均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗期间,两组患者均未发生严重不良反应。结论 中医辛开苦降法不仅能改善PCOS-IR患者胰岛素抵抗,还可改善其卵巢功能、子宫内膜容受性,激活PI3K/AKT通路,安全性高。

补喂赖氨酸和苏氨酸对放牧条件下泌乳母马血液生化指标的影响

通过给放牧条件下泌乳母马补饲赖氨酸和苏氨酸,探究其对泌乳母马血液生化指标的影响,为氨基酸调控泌乳期母马的健康提供参考依据。选择产驹日期相近(5月份),年龄7~9岁,胎次4~5胎,平均体重(428.00±33.42)kg,泌乳30 d的伊犁马母马24匹,随机分为4个组,每组6匹,分别为对照组、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组。在相同的放牧条件下(放牧时间、饮水时间、挤奶时间和放牧草场完全相同),对照组不进行任何氨基酸补喂,试验Ⅰ组每匹马补饲赖氨酸40 g/d+苏氨酸20 g/d,试验Ⅱ组每匹马补饲赖氨酸60 g/d+苏氨酸40 g/d,试验Ⅲ组每匹马补饲赖氨酸80 g/d+苏氨酸60 g/d。整个补饲期为120 d,定期采集母马血液,测定相关生化指标。结果:在蛋白质代谢方面,试验Ⅰ~Ⅲ组母马血液中总蛋白和白蛋白含量均显著低于对照组(P<0.05),尿酸含量分别比对照组提高16.33%、37.20%和17.58%;在糖脂代谢方面,试验Ⅰ~Ⅲ组的总胆红素均极显著高于对照组(P<0.01),葡萄糖和甘油三酯含量均低于对照组;在酶活力方面,试验Ⅰ~Ⅲ组的谷丙转氨酶和谷草转氨酶活力均极显著低于对照组(P<0.01),碱性磷酸酶和肌酸激酶的活力随着赖氨酸和苏氨酸剂量的增加而呈上升趋势;在矿物质方面,Ca^(2+)、无机磷和Mg^(2+)的含量各组之间均无显著差异(P>0.05),但试验Ⅱ组Fe^(2+)含量最高,与其他3组有显著或极显著差异。综上,在放牧条件下给泌乳母马补饲赖氨酸和苏氨酸可降低其血液中葡萄糖、甘油三酯含量以及谷草转氨酶和谷丙转氨酶的活力,提高总胆红素、无机磷、Mg^(2+)和Fe^(2+)的含量,促进泌乳母马的健康,以每匹泌乳母马摄入60 g/d的赖氨酸和40 g/d的苏氨酸效果最佳。

汉黄芩素调节磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶/核因子κB信号通路对慢性阻塞性肺疾病大鼠辅助性T细胞17/调节性T细胞平衡的影响

目的探讨汉黄芩素(Wog)调节磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)/核因子κB(NF-κB)信号通路对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的影响。方法2022年8-12月,大鼠采用随机数字表法分为Model组、低剂量Wog组(Wog-L组,50 mg/kg)、高剂量Wog组(Wog-H组,100 mg/kg)、阳性药物氨茶碱组(Ami组,2.3 mg/kg)、IGF-1(PI3K激活剂)组(1.33 mg/kg)、Wog-H+IGF-1组(100 mg/kg+1.33 mg/kg)、对照组(CK组),每组12只。除CK组外,其他组大鼠均需利用烟熏法联合气管滴注脂多糖(LPS)的方法构建COPD模型,建模成功24 h后,进行给药处理,每天1次给药,持续4周。检测呼气峰流量(PEF)、每分钟通气量(MV)、吸气峰流量(PIF);流式细胞术检测外周血中Th17/Treg;HE染色检测肺组织病理;酶联免疫吸附法检测大鼠肺组织中白细胞介素(IL)-17、IL-10水平;蛋白质印迹法检测肺组织中维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)、叉头框蛋白P3(Foxp3)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白。结果与CK组比较,Model组大鼠PEF(12.56±0.47比8.72±0.39)、PIF(9.35±0.32比7.24±0.17)、MV(132.26±5.78比96.63±3.28)、Treg(31.18±2.62比15.52±1.01)比例、IL-10(23.35±1.16比8.85±0.27)明显降低(均P<0.05);Th17(3.14±0.13比18.86±1.67)比例、Th17/Treg(0.10±0.01比1.22±0.11)、肺泡间隔(33.36±1.48比49.78±1.73)、气道炎症评分(0比4.56±0.23)及IL-17(75.83±3.60比185.56±8.62)水平明显升高(均P<0.05)。与Model组比较,Wog-L组、Wog-H组PEF(9.66±0.40,11.49±0.51)、PIF(8.28±0.19,9.03±0.22)、MV(105.54±4.11,126.67±5.72)、Treg(19.93±1.18,27.73±2.05)比例、IL-10(11.56±0.33,20.72±0.59)水平明显升高(均P<0.05);Th17(3.14±0.13比18.86±1.67)比例、Th17/Treg(0.10±0.01比1.22±0.11)、肺泡间隔(43.45±1.26,35.78±1.12)、气道炎症评分(3.75±0.17,0.86±0.07)、IL-17(162.27±7.14,103.35±4.33)水平明显降低(均P<0.05)。与CK组比较,Model组大鼠RORγt(0.15±0.01比1.34±0.11)、p-PI3K(0.22±0.01比0.86±0.07)、p-Akt(0.18±0.01比0.75±0.06)、p-NF-κB p65(0.11±0.01比0.69±0.06)蛋白表达升高,Foxp3(1.45±0.27比0.35±0.02)蛋白表达降低(均P<0.05)。与Model组相比,Wog-L组、Wog-H组RORγt(1.08±0.10,0.36±0.02)、p-PI3K(0.71±0.06,0.35±0.03)、p-Akt(0.62±0.06,0.28±0.02)、p-NF-κB p65(0.52±0.05,0.26±0.02)蛋白表达明显降低,Foxp3(0.57±0.04,1.13±0.09)蛋白表达明显升高(均P<0.05)。Wog-H组与Ami组大鼠上述各指标水平近似,均差异无统计学意义(P>0.05)。IGF-1逆转了高剂量Wog对COPD大鼠Th17/Treg的影响。结论Wog促进COPD大鼠Th17/Treg平衡的机制可能与下调PI3K/Akt/NF-κB通路有关。

晶体苏氨酸和微囊苏氨酸对幼建鲤生长性能和消化吸收能力影响的比较研究

本试验旨在通过60 d的饲养试验比较饲料中添加晶体苏氨酸和微囊苏氨酸对幼建鲤(Cyprinus carpiovar.Jian)生长性能和消化吸收能力的影响。选取平均初重为(13.61±0.02)g的健康幼建鲤300尾,随机分成2组,每组3个重复,每个重复50尾,分别饲喂在基础饲料中添加晶体苏氨酸和微囊苏氨酸的试验饲料,试验饲料中苏氨酸的有效含量均为1.25%。结果表明:微囊苏氨酸组幼建鲤的特定生长率(SGR)、摄食量(FI)、蛋白质沉积率(PPV)和脂肪沉积率(LPV)均显著高于晶体苏氨酸组(P<0.05);同时,微囊苏氨酸组幼建鲤的肝胰脏和肠重及蛋白质含量、肠长、肝体指数(HIS)和肠体指数(ISI)亦显著高于晶体苏氨酸组(P<0.05)。微囊苏氨酸组幼建鲤的各肠段皱襞高度和碱性磷酸酶(AKP)活性以及中肠、后肠Na+,K+-ATP酶和γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活力均显著高于晶体苏氨酸组(P<0.05)。微囊苏氨酸组肝胰脏和肠道胰蛋白酶以及肠道脂肪酶的活力均显著高于晶体苏氨酸组(P<0.05)。微囊苏氨酸组肝胰脏和肌肉中谷草转氨酶(GOT)和谷丙转氨酶(GPT)活力以及血浆氨浓度显著低于晶体苏氨酸组(P<0.05),而血清中GOT活力则显著高于晶体苏氨酸组(P<0.05)。体外溶解速率试验结果表明:晶体形式的L-苏氨酸在15 min内完全释放,而包被处理的微囊苏氨酸释放速率较慢,在120 min后才完全释放。由此得出,幼建鲤对微囊苏氨酸的利用效果优于晶体苏氨酸;与晶体苏氨酸相比,微囊苏氨酸能有效提高幼建鲤对营养的消化吸收能力。

DL-苏氨酸的化学合成

使用化学方法制备 DL-苏氨酸 ,再拆分制备 L-苏氨酸工业化 ,以降低瓶颈氨基酸 - L -苏氨酸的价格 ,主要原料有甘氨酸、乙醛等 ,采用的路线为甘氨酸铜路线。改进了操作工艺 ,并对产品及中间体进行了初步鉴别。红外光谱中有各自的特征峰 ,产物的熔点、红外光谱与苏氨酸的文献值相符 ,证实了产物为苏氨酸。

尾式苏氨酸卟啉及其锌配合物的合成和光谱性质

合成了尾式苏氨酸卟啉——— [5 (对苏氨酸丁氧苯基 ) 10 ,15 ,2 0 三苯基卟啉及其锌 (Ⅱ )的配合物 (Zn[Thr TPP]) ,用元素分析、红外光谱、电子吸收光谱和激光拉曼光谱等手段对其结构进行了表征 ,研究了咪唑 (Im)对Zn[Thr

DL－苏氨酸辐照效应的谱学研究

用电子自旋（ＥＳ）波谱、固体高分辨核磁共振１３ＣＮＭＲ谱以及Ｘ－衍射光谱，探讨了ＤＬ－苏氨酸（Ｔｈｒ）的γ辐照稳定性。Ｔｈｒ的１３ＣＮＭＲ化学位移和Ｘ－射线衍射数据结果表明，Ｔｈｒ多晶固体在１００ｋＧｙ剂量范围内的化学结构是稳定的。ＥＳＲ谱强度和１３Ｃ共振谱线宽随着剂量的增加而增大，是辐照自由基浓度的变化所致。

N-乙酰-苏氨酸合成的初探

以L-苏氨酸为原料，采用在碱性条件下用乙酸酐作为乙酰化试剂合成N-乙酰-L-苏氨酸的新工艺。获得较适宜的合成工艺条件为：苏氨酸与乙酸酐最佳的摩尔比为1．00：1．00～1．00：1．05，反应的pH值控制在7～9，反应温度为10～20℃，反应最佳时间通常为反应液产生浑浊后1．0h之内。

苏氨酸醛缩酶的研究进展

苏氨酸醛缩酶(TAs)以磷酸吡哆醛为辅酶,催化不同的醛与α-氨基酸发生醇醛缩合反应,形成具有2个手性中心的β-羟基-α-氨基酸。TAs在不对称催化过程中可以控制产物α-碳位的立体构型,而对β-碳位的立体构型控制相对较弱。增强TAs在β-碳位的立体选择性是近年来研究TAs不对称催化的热点。本文重点阐述了TAs的结构与作用机制、定向进化,以及在生物催化合成中的应用,对TAs的研究与开发进行了展望。

DL-苏氨酸的合成研究

研究了苏氨酸的合成工艺。甘氨酸与硫酸铜络合后，在减催化下与乙醛进行羟醛缩合，经铵型离子交换树脂脱铜，浓缩、醇析制得DL-苏氨酸。试验经正交设计，得出最佳方案，以甘氨酸计产率可达77％。探讨了物料配比、pH值、反应温度及离子交换脱铜等因素对产率的影响，并论证了两种反应机理的可信性。结果表明，本研究与国内外现行工艺相比具有操作简单、生产周期短、后处理简便、废液回收切实可行、产率高等优点，具有一定的工业价值。

硝酸锌-L-α-苏氨酸-水体系(25℃)的相平衡研究

用半微量相平衡方法研究了 Ｚｎ（ＮＯ３）２─Ｔｈｒ─Ｈ２Ｏ三元体系的溶度图和他和溶液折光率曲线，并绘制了相图，合成制备了未见文献报道的三种配合物：Ｚｎ（Ｔｈｒ）（ＮＯ３）２·２Ｈ２Ｏ（Ａ）、Ｚｎ（Ｔｈｒ）２（ＮＯ３）２· Ｈ２Ｏ（Ｂ）、Ｚｎ（Ｔｈｒ）３（ＮＯ３）２· Ｈ２Ｏ（Ｃ）。

以L-苏氨酸为发酵底物的2,5-二甲基吡嗪高产菌株构建

构建一种以L-苏氨酸为发酵底物的高值化学品2,5-二甲基吡嗪(2,5-dimethylpyrazine,2,5-DMP)生产菌株,为解决L-苏氨酸产能过剩,实现2,5-DMP生物法生产提供可靠思路。通过利用Bacillus subtilis 168(B.subtilis 168)外源表达不同微生物种属来源的L-苏氨酸脱氢酶(L-threonine dehydrogenase,TDH),并比较其利用L-苏氨酸为底物合成2,5-DMP的产量,挑选出2,5-DMP高产菌种,在此基础上进一步外源表达NADH氧化酶(NADH oxidase,NOX),以促进辅因子再生。实验构建了1株高产2,5-DMP的基因工程菌株B.subtilis 168/pMA0911-tdh(E.c)-nox。该菌株以5.83 g/L的L-苏氨酸为底物,发酵24 h后2,5-DMP的产量高达616.04 mg/L,与对照菌株B.subtilis 168/pMA0911相比,产量提高了22.5倍。在TDH过表达的基础上,NOX的参与有利于2,5-DMP产量的提高。该研究首次实现了2,5-DMP高效的生物转化,一方面缓解了L-苏氨酸产能过剩的困境,另一方面有助于实现高值风味化合物2,5-DMP的生物法生产。

草鱼幼鱼的饲料苏氨酸需要量

选用初始体质量为(8.35±0.06)g的草鱼(Ctenopharyngodon idella)540尾,随机分成6组,每组3个重复,每个重复30尾鱼,分别饲喂苏氨酸水平为0.72%、1.02%、1.32%、1.62%、1.92%和2.22%(占饲料的质量分数)的6组等氮半精制饲料(蛋白质质量分数35%),经60d生长实验确定草鱼幼鱼的苏氨酸需要量。实验结果表明,随着饲料苏氨酸水平增加,草鱼的增重率、特定生长率、蛋白质效率、蛋白质沉积率、肌肉RNA/DNA比值和血氨水平显著升高(P<0.05),均在1.62%组达到最大值;饲料系数和肝脏谷氨酸脱氢酶活力显著降低(P<0.05),均在1.62%组达到最小值;随着饲料苏氨酸水平进一步提高,上述指标不再发生显著变化(P>0.05)。随饲料中苏氨酸水平的增加,草鱼血清总蛋白浓度显著升高,1.32%、1.62%和1.92%3组显著高于0.72%和1.02%组(P<0.05),2.22%组达最大值,并显著高于其他各组(P<0.05);血清甘油三酯和胆固醇浓度在饲料苏氨酸水平为1.32%～2.22%的4组间没有显著差异(P>0.05),但显著高于0.72%组和1.02%组(P<0.05)。饲料中苏氨酸水平为1.62%时,草鱼肌肉苏氨酸含量和肌肉氨基酸总量均为最大值,显著高于其他各组(P<0.05)。饲料苏氨酸适宜水平能使草鱼全鱼水分显著降低,增加蛋白质、脂肪和灰分含量(P<0.05),同时降低草鱼肌肉水分,增加蛋白质含量(P<0.05),但不影响脂肪含量(P>0.05)。饲料中苏氨酸水平对草鱼肝脏谷丙转氨酶、谷草转氨酶活力无显著影响(P>0.05)。以特定生长率、饲料系数、蛋白质沉积率、肌肉RNA/DNA和谷氨酸脱氢酶活力分别对饲料苏氨酸水平进行折线回归分析,并以这些指标达95%最佳值时为判断依据,得出草鱼幼鱼饲料中苏氨酸适宜需要量以占饲料的质量分数计为1.42%～1.61%(饲料蛋白质质量分数35%)或以占饲料蛋白质的质量分数为4.07%～4.60%。

大肠杆菌L-苏氨酸脱氢酶的高效表达及其酶学性质分析

为提高L-苏氨酸脱氢酶(L-threonine dehydrogenase,L-TDH)催化L-苏氨酸脱氢合成L-2-氨基乙酸乙酯效率,通过基因挖掘的手段挖掘出来自大肠杆菌(Escherichia coli)的L-TDH,再借助pACYCDuet-1表达系统将其在E. coli BL21(DE3)中进行可溶性表达及鉴定。结果表明,L-TDH在E. coli BL21(DE3)中实现了高水平的可溶性表达,其裂解液中的酶活力为19.13 IU/mL,约为E. coli BL21(DE3)本底表达水平的79倍。纯化后的比活力为12.77 IU/mg,它的最适反应温度为45℃,最适反应pH值为9.0,在35℃和40℃保温120 min,残留酶活力仍能达到90%以上。此外,Ec TDH动力学参数也优于其他已报道的L-TDH,在转化L-苏氨酸合成2,5-二甲基吡嗪(2,5-dimethylpyrazine,2,5-DMP)的过程中具有更大优势,也为实现转化L-苏氨酸合成2,5-DMP的工业化生产奠定了理论基础。