苜蓿夜蛾人工饲养技术

在 (2 6± 1)℃、光周期 14∶ 10 (光照∶黑暗 )、相对湿度 5 0 %～ 75 %的人工气候箱中 ,用以黄豆、小麦、酵母粉为主要原料 ,配以蔗糖、琼脂、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯 (尼泊金 )、维生素 C、复合维生素液、KOH液、乙酸液、甲醛液配制成的人工饲料饲养各虫态苜蓿夜蛾 ,连续饲养 17代 ,单雌产卵量、孵化率、幼虫成活率、幼虫期、蛹期、蛹重、化蛹率和羽化率等未出现退化现象。成虫补充糖分加复合维生素等营养成分 。

诱导因子对苜蓿夜蛾和大豆食心虫嗅觉与产卵选择的影响

测定了苜蓿夜蛾和大豆食心虫对昆虫取食等诱导处理的大豆植株的嗅觉反应与产卵选择。结果表明:食性范围不同的2种昆虫对诱导大豆产生了相似的行为反应,喷施1mmol/L和10mmol/L茉莉酸甲酯、10mmol/L水杨酸甲酯的大豆植株对2种昆虫的雌虫有明显的驱避作用,触角电位反应值明显高于对照植株,而雄虫嗅觉反应敏感性低于雌虫,作出驱避选择的数量也少于雌虫。1mmol/L水杨酸甲酯处理的植株有引诱作用,植株上2种昆虫的着卵量明显高于其他处理,与对照相当。

甲胺基阿维菌素对甜菜夜蛾、棉铃虫、粘虫和苜蓿夜蛾的活性研究

甲胺基阿维菌素对甜菜夜蛾、棉铃虫、粘虫和苜蓿夜蛾的致死中浓度分别为 0 384、0 0 4 8、0 0 73和 1 2 38μg/g。甲胺基阿维菌素对甜菜夜蛾、棉铃虫和粘虫的杀虫活力明显高于阿维菌素、高效氯氰菊酯和辛硫磷。甲胺基阿维菌素对棉铃虫的毒力高于粘虫 ,对上述两害虫的毒力又明显高于甜菜夜蛾和苜蓿夜蛾。甲胺基阿维菌素是防治甜菜夜蛾、棉铃虫和粘虫较高效的药剂 。

双价抗虫转基因大豆抗苜蓿夜蛾分析

苜蓿夜蛾是影响我国大豆生产的重要食叶性害虫之一。在实验室和网室人工接虫条件下,对已获得的遗传稳定的双价抗虫转基因大豆抗苜蓿夜蛾能力进行了分析。结果表明,与对照非转基因大豆相比,抗虫转基因大豆株系T5-150和T5-195的叶片损害程度明显减轻;同时,苜蓿夜蛾幼虫食叶量显著下降、存活天数缩短,发育变慢,蛹化数也显著降低。表明抗虫转基因大豆抗苜蓿夜蛾能力显著提高。

苜蓿夜蛾触角感器的扫描电镜观察

[目的]为了明确苜蓿夜蛾雌雄成虫触角和感觉器的外部形态特点。[方法]利用电子扫描显微镜,对苜蓿夜蛾雌雄成虫触角的形态特征、感觉器的类型、形态和分布特点进行扫描电镜观察,并且对雌蜂、雄蜂触角感觉器进行性别间差异进行比较。[结果]苜蓿夜蛾触角类型属于线状触角,由柄节、梗节和鞭节组成。触角上着生有毛形感器(STⅠ和STⅡ型)、刺形感器、腔锥形感器(SCOⅠ和SCOⅡ型)、耳形感器、鳞形感器、栓锥形感器、锥形感器和Bhm氏鬃毛。其中,仅雌雄虫触角上的耳形感器形态有所差异。触角感器主要分布于触角鞭节的迎风面和侧面,以毛形感器数量最多,刺形感器排列较整齐和规律,鞭节背风面有半包围状整齐排列的鳞片,鳞片结合处有零星分布的磷形感器、刺形感器。柄节和梗节周围被鳞片包被并分布着Bhm氏鬃毛感器。通过对雌雄触角感器的测量,发现雌雄虫大部分感器大小存在显著差异。[结论]苜蓿夜蛾触角属于线状触角,共有8种类型感器。除耳形感器外,其他触角感器雌雄间形态一致,而且雄虫触角感器明显比雌虫触角感器发达。

苜蓿夜蛾hsp90基因cDNA序列的克隆与表达研究

热休克蛋白（heat shock proteins,HSPs）是生物体适应外界不良环境条件的关键蛋白。热休克蛋白90（HSP90）是HSP家族的重要成员。本试验以苜蓿夜蛾为材料提取虫体总RNA,利用RT-PCR和RACE技术,扩增得到hsp90基因全长cDNA序列,命名为Hvhsp90（GenBank登录号KF636495）。该序列含有2 472个碱基,包括一个2 154个碱基的开放阅读框,编码一个含717个氨基酸的蛋白,分子量约为82.5ku,等电点为4.97,且含有5个标签序列及胞质特征序列MEEVD,推导的氨基酸序列与鳞翅目其他昆虫HSP90相似性85%~99%之间。RTPCR结果表明,该基因在苜蓿夜蛾不同发育时期和不同组织均有mRNA水平的特异性表达。该基因在大肠杆菌表达系统中进行了诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot检测结果表明,HvHSP90能够高效表达,并与预测的融合蛋白分子量相符。

苜蓿夜蛾核型多角体病毒超微结构的电镜观察

昆虫核型多角体病毒形态发生的研究,国内外均有许多报导,但关于苜蓿夜蛾核型多角体病毒(简称HdNPV)形态发生的研究还未见报导。本文主要介绍了应用电镜超微技术研究苜蓿夜蛾核型多角体病毒在感染脂肪体细胞中的形态发生及装配过程。图A.示HdNPV多角体外形。图B.经碱解后多角体内的病毒粒子。图C.

苜蓿夜蛾中肠丝氨酸蛋白酶cDNA的克隆、序列分析及原核表达

【目的】本研究旨在从苜蓿夜蛾Heliothis viriplaca中肠克隆出丝氨酸蛋白酶（serine protease,SP）基因的cDNA序列,测定原核表达后的蛋白经纯化及复性后的活性。【方法】运用RT-PCR和cDNA末端快速扩增方法（rapid amplification of cDNA ends,RACE）克隆苜蓿夜蛾幼虫中肠丝氨酸蛋白酶cDNA全序列,用大肠杆菌Escherichia coli表达系统进行表达。重组蛋白经纯化后,利用梯度透析法进行复性,以BApNA为底物,进行活性测定。【结果】克隆获得的苜蓿夜蛾中肠丝氨酸蛋白酶基因命名为HvSP（GenBank登录号：JX866720）,该基因全长880 bp,开放阅读框长762 bp,编码254个氨基酸,推测分子量和pI值分别为26.9 kDa和9.49。由HvSP推导的氨基酸与鳞翅目昆虫SP氨基酸序列的一致性在52%~95%之间,其中与棉铃虫Helicoverpa armigera SP（GenBank登录号：CAA72962）的氨基酸序列一致性最高,达95%。成功构建重组载体pET21b-HvSP进行原核表达,Western-blot鉴定确定为目的蛋白。蛋白可溶性分析发现重组蛋白为包涵体。在Glycine-NaOH缓冲液中,当pH为10.0时,复性的重组蛋白活性达到最高,为35.74 U/mL。【结论】本研究在苜蓿夜蛾体内获得了一个新的丝氨酸蛋白酶基因,且原核表达后的重组蛋白经过变性、纯化及复性后具有活性。该结果为进一步研究丝氨酸蛋白酶在鳞翅目昆虫体内的生理功能奠定了基础。

专一地切割苜蓿夜蛾核多角体病毒多角体蛋白mRNA的ribozyme的设计与性质

本文针对苜蓿夜蛾Autographa californica核多角体病毒的多角体蛋白mRNA设计并合成了两个ribozyme。体外实验结果表明它们都能准确、高效地切割体外转录得到的mRNA片段。实验表明,在一定的范围内,切割百分率随着温度的升高、时间的延长和ribozyme浓度的提高而增加。Ca^(2+)、Mn^(2+)可以代替Mg^(2+)作为ribozyme切割反应所必需的二价金属离子。

苜蓿夜蛾促前胸腺激素基因的克隆与原核表达

促前胸腺激素(Prothoracicotropic hormone,PTTH)是一类重要的昆虫激素,它对昆虫生长、蜕皮、变态、滞育具有重要调控作用。以苜蓿夜蛾5龄幼虫为材料提取总RNA,利用RT-PCR和RACE技术,扩增得到苜蓿夜蛾促前胸腺激素基因的cDNA序列,该序列含有823个碱基,包括1个681个碱基的开放阅读框,编码1个含226个氨基酸的蛋白,分子量约为26.3 kD,等电点为8.51。序列分析表明,苜蓿夜蛾PTTH的氨基酸序列与其他昆虫,尤其是鳞翅目夜蛾科昆虫的PTTH高度同源。获得的基因已登录GenBank,登录号为JF731347。利用原核表达载体pET21b在大肠杆菌中成功表达了苜蓿夜蛾PTTH基因,并用Ni-NTA亲和层析柱将带His-tag的目的蛋白进行纯化。

苜蓿夜蛾对黄芩的危害与防治

黄芩（Scutellaria baicalensis Georgi）以根入药,是我国常用中药材[1]。主产河北、山西、内蒙古,在中药材中栽培面积最为广泛,是我国常用大宗中药材之一,承德地区栽培面积已近6700hm2。近年随着人工栽培面积的不断扩大,黄芩病虫为害问题已日渐突出[2]。

苜蓿夜蛾的发生与防治

苜蓿夜蛾又名甜菜夜蛾,杂食,主要危害大豆、豌豆、芸豆、甜菜、菠菜等。该虫具假死性和吐丝、卷叶的特性,三龄以后叶片张开时,已错过最佳防治时期,防治起来十分困难,类似于棉铃虫,往往是当天晚上打药虫不见了,但第2天又满地皆是,群众称之为“神虫”,今后几年可能要上升为阜阳市的主要害虫。

2种新型杀虫剂对大豆田苜蓿夜蛾幼虫的防效试验

2003年经在白银市平川区采用10%除尽胶悬剂300ml/hm2、20%米螨胶悬剂600ml/hm2对水450kg进行防治大豆田苜蓿夜蛾幼虫的药效试验。结果表明,10%除尽胶悬剂具有良好的速效性和持效性,喷施后2d、5d和8d校正防效分别达80.57%、83.71%、84.09%;20%米螨胶悬剂喷施也有较好的防效,施后2d、5d、8d校正防效分别达76.28%、81.12%、80.90%;两种药剂的防效均显著高于对比药剂2.5%溴氰菊酯乳油600ml/hm2和40%辛硫磷乳油750ml/hm2。

苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒与Bt混合试剂对葡萄花翅小卷蛾的毒力分析

为测定野生型和重组型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,Ac MNPV)在葡萄花翅小卷蛾生物防治中的应用潜力,本文以野生型和重组型Ac MNPV及其与苏云金杆菌(Bt)的混合试剂为试验材料,分别测定病毒及其与Bt的混合试剂对葡萄花翅小卷蛾幼虫的室内生物活性。研究结果表明:感染WT(野生型Ac MNPV)、WT-31(Ac MNPV携带苹果蠹蛾颗粒体病毒Cydia pomonella granulovirus(CpGV)orf31)、WTgp64-31(Ac MNPV缺失gp64基因、携带Cp GV orf31)的幼虫逐日死亡率呈现逐渐上升趋势,但作用速率缓慢;WT与WT-31的校正死亡率分别为80.36%、71.43%,并显著高于WTgp64-31(58.93%),但前两者之间差异不显著性。以WT和WT-31为基础,在混合有1000 IU/mL Bt的情况下,进一步分析表明,WT-31的LC50和LC90分别为1.66×10^(3)PIB/mL、3.07×10^(5)PIB/mL;浓度为104PIB/mL、105PIB/mL的WT-31的LT50分别为5.67 d、4.24 d,LT90分别为11.62 d、9.33 d;Ac MNPV能够感染葡萄花翅小卷蛾,较低浓度的Bt能够显著促进重组Ac MNPV(WT-31)的杀虫效率。研究结果将为葡萄花翅小卷蛾的生物防治提供理论依据。

人参总皂苷对苜蓿夜蛾幼虫的拒食作用

目的:测定了人参茎叶总皂苷对苜蓿夜蛾Heliothis dipsacea幼虫的拒食活性。方法:在室内模拟苜蓿夜蛾幼虫的自然生长条件,在此基础上采用叶碟法测定人参茎总皂苷对其的拒食活性。结果:人参总皂苷对苜蓿夜蛾幼虫的取食具有明显的抑制作用,2.0%,1.0%,0.5%的人参总皂苷分别处理大豆叶片后饲喂苜蓿夜蛾3龄幼虫,8 h后,3种不同浓度的人参总皂苷的非选择性拒食率分别为93.40%,83.42%,75.19%,选择性拒食率分别为77.53%,73.58%,58.86%。结论:人参总皂苷对苜蓿夜蛾幼虫的取食具有显著抑制作用,并且抑制效果随着浓度的增加而增大。

14种杀虫剂对苜蓿夜蛾的毒力比较

苜蓿夜蛾Heliothis viriplaca(Hǖfnagel)为杂食性害虫,主要危害棉花、大豆、苜蓿、蔬菜、甜菜、甘薯、玉米、花生、向日葵和烟草等作物,在我国分布广泛,日本、印度、欧洲等地也有发生.由于该虫具有偶发性,各年度发生轻重差别较大,长期以来一般不作为目标害虫进行化学防治.近年来,由于作物改制和保护地种植面积逐年扩大等原因,致使该虫在内蒙古、新疆等地的甜菜、棉花上有加重发生趋势.本研究的目的不仅在于为防治苜蓿夜蛾推荐有效药剂,在对该虫尚未广泛进行化学防治之前,通过对不同背景种群的毒力测定,也可为今后抗性监测提供一些科学依据.

苜蓿夜蛾保幼激素酯酶cDNA的克隆、序列分析及表达研究

【目的】研究苜蓿夜蛾Heliothis viriplaca保幼激素酯酶(Juvenile hormone esterase,JHE)的功能和作用机理。【方法】本试验提取苜蓿夜蛾的总RNA,并利用RT-PCR和RACE技术,扩增得到苜蓿夜蛾保幼激素酯酶基因的全长c DNA序列,命名为Hvjhe(Gen Bank登录号:JQ901384)。【结果】该基因含有3 106 bp,包括一个1 746 bp的开放阅读框,编码一个含581个氨基酸的多肽,分子量约为63.9 ku,多肽的等电点为5.11,且氨基酸序列具含有5个保幼激素酯酶特有的氨基酸保守模块。推导的氨基酸序列与烟芽夜蛾Heliothis virescens和棉铃虫Helicoverpa armigera中获得的保幼激素酯酶相似性较高,分别达到83%和82%。荧光定量PCR结果表明,该基因在苜蓿夜蛾不同发育时期和不同组织中都有m RNA水平的特异性表达,且在预蛹期表达量相对较高,取食期、蛹期期和成虫期表达量相对较低;在中肠和脂肪体内的表达量相对于其它组织较高。该基因在大肠杆菌Escherich coli表达系统中进行了诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot检测结果表明,表达出与预测的蛋白分子量相符的融合蛋白。【结论】研究结果表明本试验获得了苜蓿夜蛾中一个新的保幼激素酯酶基因的c DNA序列。

黄芩上苜蓿夜蛾发生规律观察及药剂防治试验

对黄芩上苜蓿夜蛾的发生规律进行了观察,并对防治用药进行了筛选试验。结果表明,苜蓿夜蛾在承德每年发生2代。以蛹在土中越冬。幼虫取食为害黄芩叶片,8月下旬至9月中旬为害最重。苜蓿夜蛾的自然天敌主要有螳螂、蜘蛛、白僵菌、绿僵菌等。其中白僵菌对幼虫的自然寄生率高低主要与当年8～9月份的降雨总量有关。雨量过大则寄生率高;药剂防治以每667 m2用30%乙酰甲胺磷EC 33 g的效果最好。

苜蓿夜蛾葡萄糖氧化酶cDNA的克隆、表达及特性研究

【目的】从苜蓿夜蛾Heliothis viriplaca体内克隆葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase,GOX)基因cDNA序列,并进行原核表达及活性测定。同时对GOX在不同组织的特异表达及对葡萄糖诱导反应的特性进行研究。【方法】以苜蓿夜蛾为材料提取总RNA,利用RT-PCR和cDNA末端快速扩增技术,扩增苜蓿夜蛾GOX基因全长cDNA序列。利用原核表达载体p ET-21b在大肠杆菌中表达苜蓿夜蛾的GOX基因,并用Ni-NTA亲和层析柱将带His-tag的目的蛋白进行纯化,再利用梯度透析法进行复性,以葡萄糖为底物进行酶的活性测定。同时利用Real-time PCR分析GOX的组织特异性表达和对葡萄糖的诱导反应。【结果】该cDNA序列有2 154个碱基,开放阅读框1 824个碱基,编码607个氨基酸组成的多肽,分子量为67.04 ku,多肽的等电点为5.13。该序列命名为Hv GOX,在Gen Bank的登录号为KT907054。序列分析表明,Hv GOX的氨基酸序列与其他昆虫的GOX氨基酸序列高度同源。该基因在大肠杆菌表达系统中成功地进行了诱导表达,表达出与预测的蛋白分子量相符的融合蛋白。由原核表达载体表达后的蛋白经过变性、纯化和复性后有活性。Real-time PCR结果表明,该基因在苜蓿夜蛾的不同组织均有m RNA水平的特异表达,其中在唾腺中的表达量最高;同时用0.01%、0.1%、1%和10%葡萄糖溶液浸泡的大豆叶喂食的幼虫,幼虫体内的GOX的表达均被诱导,且在10%的浓度时诱导表达量最高。【结论】本研究在苜蓿夜蛾体内获得一个新的葡萄糖氧化酶基因,该结果为进一步研究葡萄糖氧化酶在昆虫体内的生物功能奠定基础。