氧化苦参碱对牙周膜干细胞干性标志物表达和成骨分化的作用

背景:人牙周膜干细胞是牙周再生组织工程潜在的功能细胞,然而长期体外培养会导致牙周膜干细胞干性减低并发生复制性衰老,从而影响其治疗效果。目的:探讨氧化苦参碱在体外对牙周膜干细胞干性维持和骨向分化的影响,并寻找潜在的影响机制。方法:采用组织块酶消化法从人牙周膜组织中分离、培养得到牙周膜干细胞,并使用流式细胞仪进行间充质细胞表面标志物鉴定。用0,2.5,5,10μg/mL氧化苦参碱孵育牙周膜干细胞,通过CCK8实验检测氧化苦参碱对牙周膜干细胞增殖活性的影响,筛选后续实验合适的药物质量浓度,采用Western blot检测牙周膜干细胞中干细胞非特异性蛋白SOX2和OCT4的表达,采用qRT-PCR、Western blot检测牙周膜干细胞中成骨相关基因和蛋白表达水平。结果与结论:①CCK8实验结果显示2.5μg/mL氧化苦参碱对牙周膜干细胞增殖活性有显著增强作用,后续实验选用2.5μg/mL氧化苦参碱进行干预;②与空白对照组相比,氧化苦参碱组牙周膜干细胞的干性标志物SOX2蛋白表达水平变化不明显(P>0.05),OCT4蛋白表达明显上调(P<0.05);③与成骨诱导组相比,氧化苦参碱+成骨诱导组牙周膜干细胞成骨相关基因ALP、RUNX2 mRNA表达及成骨相关蛋白ALP蛋白表达明显下调(P<0.05);④氧化苦参碱上调牙周膜干细胞干性标志物表达,抑制牙周膜干细胞骨向分化,高通量测序结果表明可能与WNT2、WNT16、COMP、BMP6有关。

脱细胞软骨细胞外基质匀浆联合氧化苦参碱治疗大鼠骨关节炎

背景:脱细胞软骨细胞外基质治疗骨关节炎具有一定的效果,但其单独应用时的治疗效果有限。氧化苦参碱可缓解白细胞介素1β诱导的软骨细胞凋亡和细胞外基质降解。目的:观察不同剂量氧化苦参碱与脱细胞软骨细胞外基质联合膝关节腔注射对大鼠骨关节炎的治疗作用。方法:获取SD大鼠股骨软骨,采用物理、化学与酶相结合的方法制备脱细胞软骨细胞外基质。取50只SD大鼠,利用随机数字表法分为假手术组、骨关节炎组、单纯材料组、低剂量药物组、高剂量药物组,每组10只,后4组采用改良Hulth法建立大鼠骨关节炎模型。造模成功后,单纯材料组大鼠膝关节腔注射脱细胞软骨细胞外基质匀浆,低剂量药物组、高剂量药物组膝关节腔分别注射含50,100μg氧化苦参碱的脱细胞软骨细胞外基质匀浆。注射4周后取材进行相关检测。结果与结论:①与假手术组比较,骨关节炎组关节腔积液中白细胞介素1β、肿瘤坏死因子ɑ、丙二醛水平升高(P<0.05),超氧化物歧化酶水平降低(P<0.05);与骨关节炎组比较,低剂量药物组、高剂量药物组关节腔积液中白细胞介素1β、肿瘤坏死因子ɑ、丙二醛水平降低(P<0.05),超氧化物歧化酶水平升高(P<0.05),其中高剂量药物组变化更显著。②Tunel染色显示,与假手术组相比,骨关节炎组凋亡软骨细胞增多;与骨关节炎组相比,单纯材料组、低剂量药物组、高剂量药物组凋亡软骨细胞减少,其中高剂量药物组减少更显著。③苏木精-伊红与免疫组化染色显示,骨关节炎组大鼠膝关节软骨严重退变,软骨组织中Ⅱ型胶原表达降低(P<0.05)、基质金属蛋白酶9表达升高(P<0.05);与骨关节炎组相比,单纯材料组、低剂量药物组、高剂量药物组大鼠膝关节软骨退变明显改善,软骨组织中Ⅱ型胶原表达升高(P<0.05)、基质金属蛋白酶9表达降低(P<0.05),其中高剂量药物组改善最显著。④Western blot检测显示,与假手术组相比,骨关节炎组软骨组织中Nrf2、HO-1、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-9、Bax蛋白表达升高(P<0.05);与骨关节炎组相比,低剂量药物组、高剂量药物组Nrf2、HO-1、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05),Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-9、Bax蛋白表达降低(P<0.05),其中高剂量药物组改善更显著。⑤结果表明,膝关节腔内联合注射脱细胞软骨细胞外基质与氧化苦参碱可通过促进细胞外基质的合成、抑制炎症与氧化应激反应、抑制软骨细胞凋亡发挥骨关节炎治疗作用,该治疗作用可能与激活Nrf2/HO-1通路有关。

基于SVR模型的MIV法的复方苦参抗菌成分的辨识研究

由苦参、蛇床子、黄柏和白鲜皮四味中药材组成的复方苦参外用洗剂,因其抗菌效果而广泛应用于临床.然而,目前尚不明确复方苦参洗剂中哪些成分对于抗菌是显著有效的.本文以复方苦参洗剂为研究对象,应用化学计量法建立复方苦参中化学成分与其对金黄色葡萄球菌抑制活性之间的组效关系模型,并通过支持向量回归(SVR)的平均影响值(MIV)法识别出复方苦参中作用显著的抑菌成分.采用HPLC-UV法建立复方苦参醇提物的指纹图谱的检测方法,用该检测方法检测了43批次不同配方或不同提取工艺得到的复方苦参醇提物,并采用内标法对43批次样品中35个共有峰进行了定量分析,采用UPLC-MS/MS对共有峰进行了定性分析.采用分光光度法测定了该43批次样品对金黄色葡萄球菌的抑制率,然后利用PSO-SVR模型建立各成分与抗菌效果的组效关系模型.在该PSO-SVR模型的基础上,采用平均影响值法识别出复方苦参洗剂中抑菌效果显著的成分.结果表明,显著抑菌活性成分为异苦参酮、非洲防己碱、小檗碱、异茴芹内酯、苦参新醇O、黄柏碱、木兰花碱、苦参酮和蛇床子素,这些成分的抑菌作用均有文献报道.本文抑菌活性成分的识别结果可为今后抑菌药物的研发提供参考.

苦参总黄酮改善非酒精性脂肪肝的作用机制及斑马鱼实验验证

背景:苦参总黄酮具有抗炎、调节免疫、抗氧化、抗肝损伤等多种药理作用,其对非酒精性脂肪肝的治疗效果和作用机制尚不明确。目的:利用生物信息学、网络药理学方法及斑马鱼实验验证苦参总黄酮治疗非酒精性脂肪肝的作用机制。方法:构建非酒精性脂肪肝斑马鱼模型,观察苦参总黄酮治疗后斑马鱼肝脏脂质累积情况、病理形态改变,以及脂质累积、炎症基因的表达变化。通过TCMSP、Swiss Target Prediction、Bat-man数据库获取苦参总黄酮活性成分与非酒精性脂肪肝相关靶点;利用STRING数据库进行蛋白互作网络分析,GO功能富集和KEGG通路富集分析。基于GSE33814数据集,筛选出“苦参总黄酮-非酒精性脂肪肝”交集靶点的差异表达基因并运用R4.3.2软件进行相关性分析、受试者操作特征曲线分析,通过验证集GSE89632验证核心基因;RT-qPCR和Western blot实验验证核心通路相关基因和蛋白表达。结果与结论:①苦参总黄酮能够改善非酒精性脂肪肝斑马鱼肝脏脂质累积,显著抑制斑马鱼脂质和转氨酶水平的升高(P<0.05);调节炎症和脂代谢相关基因的表达;②网络药理学中获得168个共同靶点,Cytoscape拓扑分析综合筛选出排名前10的核心基因分别为HSP90AA1、STAT3、PIK3R1、MAPK1、AKT1、RXRA、PIK3CA、EGFR、JAK2、ESR1;GO和KEGG分析通路主要集中在胰岛素抵抗、脂质与动脉粥样硬化方面;生物信息分析共获得59个“苦参总黄酮-非酒精性脂肪肝”差异表达基因,受试者操作特征曲线分析及验证集验证得到6个核心靶点在健康人与非酒精性脂肪肝患者间有显著差异(P<0.01);③RT-qPCR和Western blot实验结果表明苦参总黄酮能够抑制非酒精性脂肪肝斑马鱼JAK2/STAT3信号通路的激活。以上结果表明,苦参总黄酮通过调节JAK2/STAT3信号通路减轻炎性反应,抑制脂质累积从而改善非酒精性脂肪肝。

复方苦参注射液减轻肝癌大鼠5-氟尿嘧啶化疗不良反应的机制研究

目的探讨复方苦参注射液对肝癌大鼠5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗不良反应的影响及其作用机制。方法通过二乙基亚硝胺(DEN)构建肝癌大鼠模型,将其分为肝癌组,化疗组和化疗+复方低(L)、中(M)、高剂量(H)组。化疗组、化疗+复方组大鼠成模后24 h腹腔注射5-FU 100 mg/kg,1次/周,化疗+复方L、M、H组分别腹腔注射复发苦参注射液0.7、1.4、2.8 mL/kg,1次/d,连续8周。比较各组心功能、心肌损伤标志物水平和心肌组织病理改变,酶联免疫吸附试验检测血清脑钠肽(BNP)、肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平,Western blot检测心肌组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、激活转录因子6(ATF6)、内质网应激相关蛋白(CHOP)蛋白表达,比较各组免疫功能指标变化。结果相比肝癌组,化疗组的左室射血分数(LVEF)、左室收缩末期前壁厚度(LVAWs)降低(P<0.05),左室收缩末期内径(LVEDs)和BNP、cTnI、CK-MB水平升高(P<0.05),心肌组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)‑1β、IL-6水平和GRP78、ATF6、CHOP蛋白表达升高(P<0.05),CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)和IgG、IgM、IgA水平降低(P<0.05),心肌组织排列杂乱、空泡和炎性细胞浸润。相比化疗组,化疗^(+)复方L、M、H组的上述指标水平和心肌病理变化有明显改善,且高剂量组改善作用更明显。结论复方苦参注射液减轻5-FU所致肝癌大鼠心脏毒性损伤可能与缓解内质网应激有关,还能缓解免疫抑制情况。

黄芩苷与苦参碱分子间相互作用的量子化学计算与验证

为探究苦参碱能极大增强黄芩苷在水中的溶解度的原因,采用量子计算对二者反应过程及共存状态进行分析,并使用单晶衍射和红外图谱验证计算结果.本研究表明,黄芩苷和苦参碱并非简单的以非共价作用相结合,二者存在质子转移现象,反应生成黄芩苷阴离子和苦参碱阳离子,以静电作用为主导形成共无定型物,导致水溶性极大增加.

苦参碱对子宫肌瘤细胞凋亡和自噬的影响

目的探究苦参碱对子宫肌瘤细胞凋亡和自噬的影响。方法将原代子宫肌瘤细胞分为3组,对照组利用常规培养基培养,低剂量组在常规培养基中加入0.5 g/L苦参碱,高剂量组加入2 g/L苦参碱。分别利用流式细胞仪和多核苷酸链断裂检测技术检测细胞凋亡水平,利用免疫荧光技术检测细胞中自噬斑点,利用投射电镜检测细胞中自噬体,利用蛋白质印迹法检测凋亡及自噬相关蛋白含量。结果对照组相对凋亡比为1.00±0.02,低剂量组相对凋亡比为2.97±0.13,高剂量组相对凋亡比为3.18±0.17,与对照组相比,低剂量组和高剂量组细胞凋亡增加(t_(低剂量组比对照组)=26.07,P_(低剂量组比对照组)=1.286×10^(−5);t_(高剂量组比对照组)=22.73,P_(高剂量组比对照组)=2.219×10^(−5)),而低剂量组和高剂量组细胞凋亡差异无统计学意义(t_(高剂量组比低剂量组)=1.73,P_(高剂量组比低剂量组)=0.158);对照组自噬细胞比例为3.33±0.70,低剂量组自噬细胞比例为53.44±5.61,高剂量组自噬细胞比例为56.51±6.48。与对照组相比,低剂量组和高剂量组自噬荧光斑点细胞比例增加(t_(低剂量组比对照组)=15.36,P_(低剂量组比对照组)=1.048×10^(−4);t_(高剂量组比对照组)=14.12,P_(高剂量组比对照组)=1.458×10^(−4)),而低剂量组和高剂量组差异无统计学意义(t_(高剂量组比低剂量组)=0.62,P_(高剂量组比低剂量组)=0.569)。结论苦参碱可增强子宫肌瘤细胞的凋亡和自噬。

苦参凝胶联合甲硝唑、乳酸菌阴道胶囊治疗滴虫性阴道炎的效果及对炎症反应的影响

目的 探讨苦参凝胶联合甲硝唑、乳酸菌阴道胶囊治疗滴虫性阴道炎的效果及对炎症反应的影响。方法选取2020年1月至2023年1月收治的100例滴虫性阴道炎患者,以随机数字表法将其分为对照组(50例,甲硝唑联合乳酸菌阴道胶囊)和观察组(50例,苦参凝胶联合甲硝唑、乳酸菌阴道胶囊)。比较两组的治疗效果。结果 观察组的治疗总有效率高于对照组(P<0.05)。观察组的白带恢复正常时间、阴道疼痛消失时间、外阴瘙痒消失时间、黏膜充血消失时间短于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组的白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平低于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组的超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)水平高于对照组,丙二醛(MDA)水平低于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组的阴道pH值低于对照组,乳酸杆菌含量高于对照组(P<0.05)。结论 苦参凝胶联合甲硝唑、乳酸菌阴道胶囊治疗滴虫性阴道炎的效果良好,可促进症状改善,减轻炎症反应、氧化应激反应,改善阴道内环境。

仙方活命饮加减联合苦参洗剂及康复新液治疗肛周脓肿术后患者的效果

目的:探究仙方活命饮加减联合苦参洗剂及康复新液治疗肛周脓肿术后患者的临床效果。方法:纳入2019年9月—2023年9月大田县中医院收治的70例肛周脓肿患者作为研究对象,按随机数表法将患者分为对照组与观察组,各35例。对照组予以苦参洗剂熏洗及康复新液治疗,观察组在对照组基础上给予仙方活命饮加减内服治疗,两组均治疗2周。比较两组临床疗效、疼痛程度、创缘水肿评分、炎症因子水平、肛门功能。结果:观察组治疗总有效率较对照组高,术后3 d、7 d、14 d视觉模拟评分法(VAS)评分、创缘水肿评分较对照组低,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗后C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平较对照组低,肛管静息压、肛管舒张压、肛管最大收缩压较对照组高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:仙方活命饮加减内服联合苦参洗剂熏洗及康复新液外用治疗肛周脓肿术后患者效果显著,能减轻疼痛及炎症反应,加快水肿消退,改善肛门功能。

复方苦参注射液抗肝癌细胞作用机制的研究进展

复方苦参注射液(CKI)是一种临床上常用于治疗肿瘤和缓解癌痛的中药制剂,主要成分为苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱、氧化槐果碱、槐定碱等生物碱类成分。本文综述了CKI及其主要成分对抗肝癌细胞的作用机制,以期为CKI治疗肝癌的临床研究提供参考。

苦参方有效部位成分分析及配伍机制研究

目的对苦参方有效部位成分进行定性定量分析,研究方剂配伍对有效成分的影响。方法采用LC-MS、GC-MS联用技术确定苦参方的有效成分;采用HPLC色谱法对苦参方生物碱进行定量分析,考察方剂配伍后的成分变化。结果苦参方挥发油中的主要成分有胡薄荷酮、薄荷酮等,苦参方所含苦参生物碱主要有苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱、氧化槐果碱;苦参方的方剂配伍后有效成分发生了转化,氧化苦参碱部分转化成苦参碱,氧化槐果碱部位转化为槐果碱,挥发油在配伍后成分及量也有所变化。结论确定了苦参方的有效成分及各成分的量,明确了该方剂配伍后的成分改变。

正交试验优选苦参生物碱提取工艺研究

目的优选苦参中生物碱的提取工艺。方法采用正交试验,以苦参中苦参碱和氧化苦参碱提取总量为考察指标。结果最佳提取工艺条件是:以60%乙醇为溶媒,加醇量为12、10、10倍,提取3次,每次2h。结论优选得到的工艺稳定可行,适合工业大生产。

苦参凝胶对痔疮模型大鼠的治疗效果及机制研究

目的:探究苦参凝胶对痔疮模型大鼠的治疗效果及炎症反应、肛门直肠组织病理学损伤的影响。方法:将120只大鼠随机分为空白对照组、痔疮模型组、阳性对照组、阴性对照组、苦参凝胶低剂量组和苦参凝胶高剂量组,每组20只。除空白对照组外,其余各组使用巴豆油制剂涂抹肛门直肠区诱导大鼠痔疮模型,然后给药治疗3 d。采用伊文思蓝染料外渗实验评估血浆渗出量;酶联免疫吸附法检测血清中炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;对肛门直肠系数进行分析;苏木素伊红染色观察肛门直肠组织病理学变化,并进行肛门直肠组织病理学评分;荧光定量PCR法检测肛门直肠组织中环氧化酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA表达水平。结果:与空白对照组相比,痔疮模型组大鼠肛门直肠组织出现严重水肿,白细胞浸润,腺上皮、黏膜层和黏膜下层变性坏死,且炎症区黏膜增厚,血管严重扩张,伊文思蓝血浆渗出量、血清中IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α含量、肛门直肠系数、肛门直肠组织病理学评分、COX-2、iNOS和VEGF mRNA表达水平增高(P<0.05);与痔疮模型组相比,阳性对照组、苦参凝胶低、高剂量组大鼠涂抹巴豆油制剂部位附近的腺上皮部分不完整、增生,但黏膜增厚、血管充血均有减轻,伊文思蓝血浆渗出量、血清中IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α含量、肛门直肠系数、肛门直肠组织病理学评分、COX-2、iNOS mRNA表达水平降低,VEGF mRNA表达水平增高(P<0.05);苦参凝胶高剂量组对上述指标的改善效果优于苦参凝胶低剂量组(P<0.05)。结论:苦参凝胶高剂量组对痔疮模型大鼠的治疗效果明显,可改善炎症反应和肛门直肠组织病理学损伤,并可增高VEGF表达。

苦参碱对特应性皮炎炎症、氧化应激和伤口愈合的影响

目的评估苦参碱对体外特应性皮炎(AD)模型中HaCaT角质形成细胞的炎症、氧化和迁移反应及伤口愈合的影响。方法采用MTT法评估苦参碱的细胞毒性,依据实验结果,将HaCaT细胞分为对照组,模型组,苦参碱0.05、0.1和0.2 mmol/L组,模型组采用10μg/L肿瘤坏死因子-α(TNF-α)/干扰素-γ(IFN-γ)刺激HaCaT细胞24 h,苦参碱0.05、0.1和0.2 mmol/L组分别用相应浓度的苦参碱预处理细胞1 h,然后用10μg/L TNF-α/IFN-γ刺激24 h。酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定白细胞介素(IL)-6、IL-8和IL-1β和胸腺和活化调节趋化因子(TARC)、巨噬细胞衍生趋化因子(MDC)、调节活化正常T细胞表达和分泌的因子(RANTES)的水平;实时荧光定量PCR检测抗氧化基因表达水平;划痕愈合实验分析细胞迁移;免疫组织化学分析核因子(NF)-κB p65的核易位;Western blot检测p38、细胞外调节蛋白激酶(ERK)和p65蛋白的磷酸化水平。结果与模型组比较,苦参碱0.1和0.2 mmol/L组降低IL-6、IL-1β、IL-8和趋化因子的表达,增强超氧化物歧化酶(SOD)1、SOD2、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的表达,并促进划痕愈合率(P<0.05)。此外,苦参碱0.1和0.2 mmol/L可抑制p38、ERK和p65蛋白的磷酸化及p65的核易位。结论苦参碱具有抗炎和抗氧化特性,并刺激角质形成细胞AD模型的伤口闭合。

苦参碱对心血管系统疾病药理作用及机制的研究进展

目的:对苦参碱的药理作用及机制进行综述,为进一步研究苦参碱对心血管作用奠定基础。方法:对国内外相关文献进行梳理总结,分类阐述苦参碱对心血管的药理作用及相关机制。结果:苦参碱具有抗心律失常、抗心肌损伤、抑制心肌细胞肥大、抗心肌细胞纤维化、抗柯萨奇病毒、改善心衰等心血管作用,其治疗心血管疾病的优势日益凸显。结论:通过对苦参碱治疗心血管疾病药理作用及机制研究的讨论,以期为今后以苦参碱为基础的新药开发和临床应用提供参考。

苦参及其不同炮制品水煎液对抗葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠溃疡性结肠 炎作用比较

目的比较苦参及其不同炮制品水煎液对溃疡性结肠炎小鼠的治疗作用。方法将70只C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、生苦参组、苦参炭组、醋苦参组、麸炒苦参组、米泔制苦参组,每组10只。实验前5 d,除空白组自由饮用无菌水外,其余各组均自由饮用含2.5%葡聚糖硫酸钠(DSS)的无菌水造模,第6天饮用水全部换成蒸馏水。空白组、模型组每日灌胃生理盐水0.1 mL/10 g,各给药组每日灌胃相应药液(5 g/kg),自实验第1天起连续给药12 d,每天观察小鼠体质量、粪便性状、隐血便血情况,评分并计算疾病活动指数(DAI);第13天,摘取结肠,测量长度,苏木素-伊红(HE)染色后显微镜下观察结肠病理变化;ELISA法检测小鼠血清中的IL-17、IL-6、TNF-α、MPO的水平;测定小鼠结肠中caspase-1、NLRP3、IL-1β、NF-κBp65表达。结果与模型组比较,各给药组DAI评分降低(P<0.05、P<0.01),血清中IL-17、IL-6、TNF-α、MPO及结肠中caspase-1、NLRP3、IL-1β、NF-κBp65的水平降低(P<0.05、P<0.01);麸炒苦参及米泔水苦参较生苦参组指标降低(P<0.05、P<0.01)。结论苦参及其不同炮制品均能有效减轻小鼠实验性溃疡性结肠炎,缓解炎症反应,麸炒苦参和米泔水苦参作用更好,其机制可能与抑制NF-κB信号通路,减少炎症因子释放相关。

苦参总黄酮对D-半乳糖致神经细胞衰老的改善作用及相关机制

目的探讨苦参总黄酮对D-半乳糖致神经细胞衰老的改善作用及相关机制。方法D-半乳糖处理PC12神经元细胞建立细胞衰老模型,分为模型组,10、20、40μg/ml苦参总黄酮组,同时设置空白对照组。检测各组细胞存活率、衰老细胞情况、凋亡率、细胞周期分布情况;测定细胞中抗氧化指标:超氧化物歧化酶、丙二醛、乳酸脱氢酶浓度;Western印迹检测细胞中B淋巴细胞瘤(Bcl)-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素(Cyt)-C、Bcl-2、人核因子E2相关因子(Nrf)2、血红素氧合酶1蛋白表达水平。结论模型组细胞存活率明显低于空白对照组,β-半乳糖苷酶阳性染色率、细胞凋亡率明显高于空白对照组(P<0.01);苦参总黄酮组细胞存活率明显高于模型组,β-半乳糖苷酶阳性染色率、细胞凋亡率明显低于模型组,且随着苦参总黄酮给药浓度的增加变化逐渐明显(P<0.05)。各组G0/G1期、S期细胞比例差异有统计学意义(P<0.01);模型组G0/G1期细胞比例明显高于空白对照组,S期细胞比例明显低于空白对照组(P<0.01);苦参总黄酮组G0/G1期细胞比例明显低于模型组,S期细胞比例明显高于模型组(P<0.05)。模型组超氧化物歧化酶浓度明显低于空白对照组,丙二醛、乳酸脱氢酶浓度明显高于空白对照组(P<0.01);苦参总黄酮组超氧化物歧化酶浓度明显高于模型组,丙二醛、乳酸脱氢酶浓度明显低于模型组,且随着苦参总黄酮给药浓度的增加变化逐渐明显,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组相比,模型组Bax蛋白表达明显升高(P<0.01),Cyt-C、Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.01);苦参总黄酮组Bax蛋白表达水平明显低于模型组,Cyt-C、Bcl-2蛋白表达水平明显高于模型组,且随着苦参总黄酮给药浓度的增加变化逐渐明显,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组相比,模型组Nrf2、血红素氧合酶1蛋白表达明显升高(P<0.01);苦参总黄酮组Nrf2、血红素氧合酶1蛋白表达水平明显低于模型组,且随着苦参总黄酮给药浓度的增加变化逐渐明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论苦参总黄酮可改善D半乳糖诱导的神经细胞衰老,且呈剂量依赖性,可能与激活Nrf2抗氧化信号途径、抑制氧化应激反应、降低细胞凋亡有关。

LC-MS/MS法测定鲤鱼中苦参碱和氧化苦参碱

建立基于前处理技术结合液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)对鲤鱼基质中苦参碱和氧化苦参碱残留量测定的分析方法.样品采用乙腈均质提取的萃取方式,用硫酸钠作为除水剂,样品经过C18色谱柱分离,以水-乙腈为流动相,基质匹配标准曲线外标法定量.苦参碱和氧化苦参碱在质量浓度范围1—50 ng·mL^(−1)内,具有良好的线性关系,相关系数R^(2)均大于0.99.苦参碱方法检出限为0.21 ng·mL^(−1),定量限为0.69 ng·mL^(−1);氧化苦参碱方法检出限为0.17 ng·mL^(−1),定量限为0.52 ng·mL^(−1).添加浓度水平1.0、2.0、5.0 ng·mL^(−1),平均回收率为72.5%—108.7%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD,n=6)为4.2%—8.2%.苦参碱和氧化苦参碱的基质效应均表现为抑制.该方法前处理方法简单,灵敏度高,稳定性好,适合鲤鱼基质苦参碱和氧化苦参碱残留量的测定,同时为后续同类样品检测提供参考,也为今后相关标准制定提供数据积累.

苦参碱通过Hippo信号通路促进大鼠皮肤创面愈合及血管生成

目的探讨苦参碱(MT)对皮肤创面愈合的影响及可能机制。方法在48只大鼠中成功建立全层皮肤切除创伤模型,将模型大鼠随机分为阴性对照组(模型组,涂抹100μL等渗盐水)、阳性药物组(PD组,涂抹100μL的京万红软膏)、苦参碱组(MT组,涂抹浓度为200 ng/mL的苦参碱混合液100μL)、苦参碱+维替泊芬组(MT+VP组,涂抹苦参碱混合液100μL后,腹腔注射100 mg/kg维替泊芬),每组12只。各组每日给药1次,持续7 d。比较各组大鼠的创面愈合率、病理组织损伤情况、CD31阳性染色细胞比例,以及血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平。蛋白免疫印迹检测(Western blot)Hippo通路相关蛋白表达。结果造模后3、7、14 d时,与模型组创面愈合率[(14.02±1.87)%、(36.23±3.62)%、(65.53±3.85)%]相比,PD组[(21.36±2.51)%、(61.86±3.13)%、(94.26±0.26)%]和MT组[(21.57±2.24)%、(54.35±3.66)%、(94.18±3.13)%]均明显升高(P<0.05);与MT组相比,MT+VP组创面愈合率[(18.35±2.03)%、(43.68±3.54)%、(74.26±3.55)%]均明显降低(P<0.05)。造模后7 d,与模型组(186.75±18.53、85.73±10.15、57.96±5.85)相比,PD组(89.75±9.75、43.12±5.75、8.76±1.13)和MT组(92.57±23.62、46.62±6.54、12.36±1.06)的IL-1β、IL-6、TNF-α水平均明显降低(P<0.05),CD31阳性染色细胞百分比明显升高(P<0.05),MST1、LAST1和YAP蛋白磷酸化水平明显升高(P<0.05),而YAP核移位明显降低(P<0.05)。与MT组相比,MT+VP组IL-1β、IL-6、TNF-α水平均明显升高,CD31阳性染色细胞百分比明显降低,MST1、LAST1和YAP蛋白磷酸化水平明显降低,而YAP核移位明显增加(P<0.05)。与模型组皮肤创面完全愈合时间[(26.33±0.94)d]和瘢痕厚度[(0.58±0.11)mm]相比,PD组[(19.50±0.82)d、(0.24±0.04)mm]和MT组[(19.00±0.50)d、(0.25±0.04)mm]明显减少(P<0.05);与MT组相比,MT+VP组创面完全愈合时间[(22.33±0.94)d]和瘢痕厚度[(0.41±0.04)mm]均明显增加(P<0.05)。结论苦参碱能够通过抑制炎症反应、促进血管生成加速全层皮肤切除创伤大鼠的皮肤创面愈合,这一过程可能涉及苦参碱对Hippo-Yap通路的激活效应。

苦参碱对缺血性脑卒中大鼠神经炎症的影响

目的探究苦参碱调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)-晚期糖基化终末产物受体(RAGE)信号通路对缺血性脑卒中(IS)大鼠神经炎症的影响。方法将75只SD大鼠随机分为模型组、苦参碱低剂量组(10 mg/kg)、苦参碱高剂量组(20 mg/kg)、苦参碱高剂量+晚期糖基化终末产物(AGE)血清蛋白组(20 mg/kg苦参碱+100 mg/kg AGE血清蛋白)和假手术组,每组15只。采用线栓法构建大鼠大脑中动脉闭塞模型。用Longa评分评估大鼠神经功能缺损;氯化三苯四氮唑染色检测脑梗死情况;苏木精-伊红染色观察海马组织病理变化;酶联免疫吸附测定海马组织白细胞介素(IL)1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。Western blot检测海马组织HMGB1、RAGE蛋白表达。结果苦参碱高剂量组Longa评分、脑梗死面积、IL-1β、IL-6、TNF-α、HMGB1和RAGE蛋白表达明显低于模型组和苦参碱低剂量组(P<0.05)。苦参碱高剂量+AGE血清蛋白组Longa评分、脑梗死面积、IL-1β、IL-6、TNF-α、RAGE蛋白表达明显高于苦参碱高剂量组[(2.93±0.30)分vs(1.10±0.12)分,(38.18±4.04)%vs(15.52±1.74)%,(78.57±8.33)pg/ml vs(39.27±4.76)pg/ml,(203.14±24.39)pg/ml vs(92.45±11.23)pg/ml,(243.53±26.81)pg/ml vs(150.49±18.79)pg/ml,0.73±0.07 vs 0.44±0.04,P<0.05]。结论苦参碱可能通过抑制HMGB1-RAGE信号通路减轻IS大鼠的神经炎症。