苦豆碱对脓毒血症大鼠肺组织TREM-1、TREM-2表达的影响

目的探讨苦豆碱对脓毒血症大鼠肺组织TREM-1、TREM-2表达的影响。方法将大鼠随机分为对照组、模型组和苦豆碱低、中、高剂量组(25、50、100 mg/kg)。给药组在造模前0.5 h腹腔注射相应剂量苦豆碱,造模后24 h检测大鼠Penh、Cdyn、EF50,HE染色观察大鼠肺组织病理损伤情况,RT-qPCR法检测大鼠肺组织TREM-1、TREM-2、TNF-α、IL-1β、IL-10 mRNA表达;Western blot法检测大鼠肺组织TREM-1、TREM-2、TNF-α、IL-1β、IL-10、p-p65、p-PI3K、p-Akt蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠Penh升高(P<0.01),Cdyn和EF50降低(P<0.01);肺组织结构破坏,肺泡间隔增厚;肺组织TREM-1、TNF-α、IL-1βmRNA和蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),TREM-2、IL-10 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),p-p65、p-PI3K、p-Akt蛋白表达升高(P<0.01)。与模型组比较,苦豆碱组Penh降低(P<0.01),Cdyn和EF50升高(P<0.01);肺组织结构得到改善,肺泡壁变薄;TREM-1、TNF-α、IL-1βmRNA和蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),TREM-2、IL-10 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),p-p65、p-PI3K、p-Akt蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论苦豆碱可通过下调TREM-1表达和上调TREM-2表达起到缓解脓毒血症大鼠炎症反应的作用,其作用可能与抑制PI3K信号通路活化有关。

苦豆碱通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3通路改善香烟烟雾诱导的人支气管上皮细胞损伤

目的探究苦豆碱(Alo)对香烟烟雾诱导的人支气管上皮细胞损伤的作用及其可能的作用机制。方法16HBE人支气管上皮细胞经100 mL/L香烟烟雾提取物(CSE)和(50、100、200)μmol/L Alo共处理后,CCK-8法检测细胞活力,试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)活性;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)、Western blot法检测细胞凋亡,ELISA检测炎性因子水平;2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针和相关试剂盒检测氧化应激水平;Western blot法检测Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)通路相关蛋白表达水平。16HBE细胞经100 mL/L CSE和200μmol/L Alo共处理后,采用上述方法检测过表达TLR4对TLR4/NF-κB/NLRP3通路、细胞LDH活性、凋亡、炎症反应及氧化应激的影响。结果CSE暴露可降低16HBE细胞活力,增加LDH释放和细胞凋亡,增强炎症反应和氧化应激水平,且激活TLR4/NF-κB/NLRP3通路;经Alo处理后,细胞活性升高,LDH释放减少、凋亡降低、炎症减轻、氧化应激水平下降,且TLR4/NF-κB/NLRP3通路失活;TLR4过表达可逆转Alo处理对CSE诱导的16HBE细胞损伤的保护作用。结论Alo可通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3通路减轻CSE诱导的人支气管上皮细胞损伤。

苦豆碱抑制胃癌HGC-27细胞和AGS细胞增殖的作用机制

目的探讨苦豆碱(Aloperine,ALO)抑制胃癌HGC-27细胞、AGS细胞增殖的作用机制。方法用不同浓度ALO处理胃癌HGC-27细胞、AGS细胞。应用细胞毒性实验、细胞增殖实验和平板克隆实验评估增殖活性,应用划痕实验评估迁移与修复能力,应用侵袭实验检测迁移和侵袭能力,使用流式细胞术分析细胞周期变化情况,应用实时荧光定量聚合酶链反应实验测定GSPT1、CDK4、Cyclin D1和Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2的mRNA表达水平,应用蛋白印迹实验评估GSPT1和Caspase-3、Caspase-9、Bax及Bcl-2的蛋白表达水平。结果细胞毒性、细胞增殖以及平板克隆实验结果显示,ALO抑制胃癌HGC-27细胞、AGS细胞增殖并呈现浓度依赖性:与对照组相比,用0.1 mM和0.25 mM ALO处理的HGC-27细胞、AGS细胞的增殖能力下降。划痕实验结果显示,ALO抑制了HGC-27细胞、AGS细胞的迁移修复能力。细胞侵袭检测结果显示,经ALO处理后的HGC-27细胞、AGS细胞的迁移、侵袭能力受到抑制。流式细胞术结果显示,经ALO作用后的HGC-27细胞、AGS细胞的周期发生变化。实时荧光定量聚合酶链反应实验和蛋白印迹实验结果显示,与对照组相比,经药物处理后的HGC-27细胞、AGS细胞中的GSPT1、Bcl-2、CDK4、Cyclin D1表达水平降低,Caspase-3、Caspase-9、Bax表达水平升高。结论ALO可以通过调节GSPT1和Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2的表达水平来抑制胃癌HGC-27细胞、AGS细胞的增殖。

苦豆碱调节IL-6/JAK1/STAT3信号通路对结直肠癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响

目的:探讨苦豆碱(ALO)调节IL-6/酪氨酸激酶1(JAK1)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路对结直肠癌(CRC)细胞行为的影响。方法:SW480分为CK组(正常培养的SW480细胞)、ALO低剂量组(ALO-L组,0.2 mmol/L)、ALO中剂量组(ALO-M组,0.4 mmol/L)、ALO高剂量组(ALO-H组,0.8 mmol/L)、ALO-H+激活剂(IL-6激活剂重组人IL-6蛋白)组(0.8 mmol/L+100 ng/ml)。CCK-8、平板克隆实验检测SW480细胞增殖;流式细胞术检测SW480细胞凋亡;Western blot检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、IL-6、p-JAK1、p-STAT3蛋白表达。将自然杀伤细胞NK-92MI分别与上述5组细胞共培养,并依次命名为CK共培养组、ALO-L共培养组、ALO-M共培养组、ALO-H共培养组、ALO-H+激活剂共培养组,检测共培养细胞上清液中TNF-α、IFN-γ水平及共培养体系中NK-92MI的免疫杀伤率。结果:与CK组相比,ALO-L组、ALO-M组、ALO-H组OD_(450)值、克隆形成率、PCNA、IL-6、p-JAK1、p-STAT3蛋白表达降低,细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,且呈剂量依赖性(P<0.05);与ALO-H组相比,ALO-H+激活剂组SW480细胞OD_(450)值、克隆形成率、PCNA、IL-6、p-JAK1、p-STAT3蛋白表达升高,细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低(P<0.05);ALO-L共培养组、ALO-M共培养组、ALO-H共培养组上清中TNF-α、IFN-γ水平、NK-92MI细胞免疫杀伤率高于CK共培养组,且呈剂量依赖性(P<0.05);与ALO-H共培养组相比,ALO-H+激活剂共培养组上清中TNF-α、IFN-γ水平、细胞免疫杀伤率降低(P<0.05)。结论:ALO可能通过抑制IL-6/JAK1/STAT3信号通路抑制SW480细胞增殖、免疫逃逸,促进细胞凋亡。

苦豆碱通过调控miR-210对脂多糖致心肌细胞凋亡及炎性因子表达的影响

目的:探讨苦豆碱对脂多糖(LPS)致心肌细胞凋亡和炎症反应的影响。方法:将大鼠心肌H9c2细胞分为NC组(不作任何处理)、LPS组、LPS+苦豆碱低剂量组、LPS+苦豆碱中剂量组、LPS+苦豆碱高剂量组、LPS+miR-NC组、LPS+miR-210组、LPS+苦豆碱中剂量组+anti-miR-NC组、LPS+苦豆碱中剂量组+anti-miR-210组。通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、流式细胞术、蛋白免疫印迹法检测细胞增殖、凋亡及其相关蛋白表达情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测miR-210表达水平。结果:不同浓度苦豆碱处理后,LPS处理的心肌细胞活性及Ki-67、Bcl-2、miR-210蛋白表达水平增加,细胞凋亡率及p21、Bax蛋白表达水平降低,IL-1β、TNF-α水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。过表达miR-210后LPS处理的心肌细胞活性、Ki-67、Bcl-2表达水平增加,细胞凋亡率及p21、Bax表达水平降低,IL-1β、TNF-α水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。干扰miR-210表达能逆转苦豆碱对LPS诱导的H9c2细胞增殖、凋亡及炎性因子的影响。结论:苦豆碱可通过上调miR-210抑制LPS致心肌细胞凋亡和炎症反应。

苦豆碱、脱氢苦豆碱与松材线虫毒性及结构的关系

用GC -MS鉴定、HPLC分离制备了苦豆碱和脱氢苦豆碱 ,并用浸渍法对这两种生物碱进行杀松材线虫活性的测定。结果表明 ,含有仲胺型氮原子的苦豆碱比含叔胺型氮原子的脱氢苦豆碱具更强的杀线活性 。

苦豆碱对杨小舟蛾体内保护酶系统活力的影响

杨小舟蛾体内存在着过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)等保护酶系统.用1%苦豆碱处理杨小舟蛾幼虫,发现1%苦豆碱扰乱了杨小舟蛾幼虫体内保护酶系统,表现为POD和CAT在前期活力低于对照组指标;而在处理10～46 h内,处理组POD活力明显高于对照组;在处理27～45 h内,处理组CAT活力明显高于对照组;处理组SOD活力在前27 h内明显高于对照组.即用1%苦豆碱处理杨小舟蛾幼虫后,随着时间的延长,幼虫体内保护酶的活力发生明显变化,说明苦豆碱处理对杨小舟蛾有毒杀作用.

苦豆碱防治松材线虫病的林间试验

在国家自然科学基金的资助下，我们在筛选到天然化合物—苦豆碱具有对松材线虫极强的杀线活性［１］的基础上，进一步进行了用苦豆碱防治松材线虫病的多次林间试验，发现苦豆碱制剂具内吸性，能成功地控制松树中松材线虫的繁殖，使病松树得以康复。在林间试验证实苦豆碱剂...

苦豆碱对缺血再灌注引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症应答的作用

目的:明确苦豆碱对缺血再灌注(I/R)引起的大鼠心肌H9c2细胞损伤和炎症应答的作用及其机制。方法:采用缺氧/复氧的方法体外模拟缺血再灌注(SI/R)心肌损伤,用不同浓度苦豆碱处理,MTT实验分析苦豆碱对H9c2细胞存活率的影响;流式细胞术检测细胞凋亡;试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)的水平及caspase-3的活性;ELISA分析多种炎性因子水平;同时用Western blot法分析苦豆碱对PI3K/AKT信号通路的影响。结果:苦豆碱可对抗SI/R抑制的H9c2细胞存活率,同时明显降低SI/R引起的LDH及MDA浓度的增加(P<0.05)。此外,苦豆碱能够显著抑制SI/R触发的细胞凋亡(P<0.05),同时降低SI/R处理后引起的caspase-3活性的增加,并上调Bcl-2/Bax比值(P<0.05)。与SI/R组相比,苦豆碱处理可显著性降低H9c2心肌细胞炎性因子白细胞介素6、肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β的浓度(P<0.05)。此外,与SI/R组相比,苦豆碱处理后可显著增加p-PI3K和p-AKT的蛋白水平(P<0.05);当用LY294002抑制PI3K/AKT通路后,苦豆碱促心肌细胞存活、抗凋亡及抗炎症的作用明显减弱(P<0.05)。结论:苦豆碱可通过激活PI3K/AKT信号通路对抗心肌细胞缺血再灌注引起的损伤及炎症应答,提示其对心肌缺血再灌注损伤的防治具有潜在应用价值。

苦豆碱及顺式氯氰菊酯对菜田蚜虫群落的毒力研究

研究了植物源杀虫剂苦豆碱及顺式氯氰菊酯对菜田蚜虫群落结构的影响 ,并测定了其对第一优势种菜缢管蚜的杀伤毒力。苦豆碱在 1 %浓度下 ,以药膜法和喷雾法 ,测定其击倒作用 ,KT50 分别为2 9 74和 2 5 38min ;顺式氯氰菊酯在 0 1 %浓度下 ,KT50 分别为 1 73和 0 78min。以点滴法测定此两种杀虫剂对菜缢管蚜的触杀作用 ,LD50 分别为 7 7× 1 0 -4 及 9 2 0 1 μg 头 ,田间以 0 1 %喷雾 ,苦豆碱 1 0d校正防效均可达到 80 % ,而顺式氯氰菊酯仅能达到 30 %。结果显示 ,苦豆碱对菜缢管蚜有极强的毒杀作用 ,同时喷药前后菜田蚜虫群落结构也发生着明显的变化。

苦豆碱对兔血小板聚集的影响

苦豆碱抑制低浓度花生四烯酸(AA)和胶原诱导的兔血小板聚集,IC_(50)分别为184μg·L^(-1)和38.3mg·L^(-1)提高AA浓度使其抑制作用明显减弱。苦豆碱还抑制兔血小板形成血栓素B_2(TXB_2),此作用可能和其对血小板聚集的抑制有关。

苦豆碱对小菜蛾体内保护酶系统活力的影响

苦豆碱是植物苦豆子中的一种喹诺里西啶类生物碱 ,具有多种生物活性。本研究结果表明 ,苦豆碱对小菜蛾体内过氧化物酶 (POD)、过氧化氢酶 (CAT)、超氧化物歧化酶 (SOD)保护酶系统有一定的影响。

苦豆碱的气相色谱测定及其药代动力学

建立了气相色谱仪测定组织中苦豆碱含量的方法,并研究其在动物体内的时间过程。兔ⅳ苦豆碱的血浓-时间曲线符合二房室模型。分布半衰期t_(1/2)为5.5 min,消除半衰期为2 h,组织分布广,心、肝、肺、脂肪中含量均较血浆中高;剂量25 mg/kg时的分布容积V_((?))高达2.21L/kg;大鼠36 h内尿排泄药量为13.4%±5.0%,胆道几乎不排泄。牛血清白蛋白结合率为76.8%±5.1%。小鼠灌胃后以一级过程吸收,半量吸收时间为80.8 min。

苦豆碱质量标准的研究

目的建立苦豆碱的质量标准。方法采用化学法和HPLC法对苦豆碱进行了鉴别;进行了熔点和比旋度的检查;用HPLC法测定苦豆碱的含量。采用C18色谱柱(250 mm×4.0mm,5μm);以水-乙腈-三乙胺(95∶5∶0.1)为流动相,流速1.0mL.min-1,检测波长205 nm。结果在建立的色谱条件下,苦豆碱的线性范围为40.0～200 mg.L-1(r=0.999 9)。平均回收率为99.5%,RSD为0.75%。结论所建立的方法可准确地进行苦豆碱定性、定量分析,可用于苦豆碱的质量控制。

苦豆碱对膀胱癌EJ细胞增殖与凋亡的影响

目的观察苦豆碱对膀胱癌EJ细胞增殖与凋亡的影响并探讨其作用机制。方法实验分组如下,A组:膀胱癌EJ细胞不作处理;B组:加入苦豆碱浓度25μmol/L;C组:加入苦豆碱浓度50μmol/L;D组:加入苦豆碱浓度100μmol/L。通过CCK8检测各组细胞的存活率,通过流式细胞术检测各组细胞凋亡率,通过Western blot法检测各组细胞Bcl-2、Bax、p-Erk1/2蛋白的表达水平。结果 CCK8结果显示,B、C、D组较A组细胞存活率降低(P<0.05);流式细胞术结果显示:B、C、D组较A组细胞凋亡率增加(P<0.05);Western blot结果显示:B、C、D组较A组Bcl-2、p-Erk1/2表达水平降低(P<0.05),Bax表达水平增高(P<0.05)。结论苦豆碱可降低膀胱癌EJ的存活率,诱导其凋亡,其作用机制可能是通过抑制Erk1/2的磷酸化而实现的。

苦豆碱对胃癌细胞生长抑制作用的研究

目的探究苦豆碱对胃癌细胞生长的抑制作用。方法分别用0 mmon·L^(-1)、1 mmon·L^(-1)、2 mmon·L^(-1)和4 mmon·L^(-1)的苦豆碱处理SGC7901和BGC823细胞0、12、24、36和48 h,通过MTT实验检测苦豆碱对细胞增殖能力的影响;通过流式细胞术及Annexin V-PI染色检测苦豆碱对SGC7901细胞周期和凋亡能力的影响;通过western blot检测苦豆碱对SGC7901细胞中CDK4、CDK6和bcl-2表达水平的影响。结果1 mmmon·L^(-1)、2 mmon·L^(-1)和4 mmon·L^(-1)的苦豆碱作用于SGC7901细胞24 h时对细胞增殖的抑制率分别为(26.41±2.96)%、(41.51±4.45)%和(62.88±4.59)%,1 mmol·L^(-1)、2 mmol·L^(-1)和4mmol·L^(-1)苦豆碱作用于BGC823细胞24 h时对细胞增殖的抑制率分别为(28.35±1.86)%、(40.11±2.65)%和(61.77±3.84)%,与0 mmon·L^(-1)相比差异均具有统计学意义;苦豆碱还可抑制细胞周期G1/S期的进程,促进细胞凋亡;Western blot结果显示,苦豆碱可抑制CDK4、CDK6和bcl-2的表达。结论苦豆碱可抑制胃癌细胞的增殖促进其凋亡。

苦豆碱对松材线虫的杀线活性

研究了苦豆草中苦豆碱对松材线虫的杀线活性，讨论了苦豆草生物碱在研究防治松材线虫病中的意义。使用含苦豆碱的培养基培养灰葡萄抱菌菌丝的生物测定方法，测定了苦豆碱对松材线虫的杀线活性，５天后培养基中苦豆碱的ＬＣ５０＝２．６３×１０－５ｇ／ｍｌ，当浓度为１×１０－４ｇ／ｍｌ和２．６３×１０－５ｇ／ｍｌ时，１５天后苦豆碱的杀线率分别为９９．９％和９４．３％。

苦豆碱对菜缢管蚜的毒力作用

研究了植物源杀虫剂苦豆碱对菜田溴氰菊酯敏感及抗性蚜虫遗传品系群落结构的影响 ,并测定了其对第一优势种菜缢管蚜的杀伤毒力。以药膜法和喷雾法测定了其击倒作用 ,以点滴法测定了其触杀作用。田间1%喷雾 ,10d后苦豆碱对敏感及抗性蚜虫品系的校正防效均可达到 70 %,溴氰菊酯对敏感蚜虫品系的校正防效可达 70 %,而对抗性品系的校正防效仅为 5 0 6 %。结果显示 ,苦豆碱对菜缢管蚜有极强的毒杀作用 ,同时喷药前后菜田蚜虫群落结构也发生了明显的变化。

HPLC法测定苦豆碱的有关物质

目的建立高效液相色谱法测定苦豆碱有关物质的量。方法建立了以杂质对照品测定苦豆碱有关物质的方法 ,采用C18色谱柱(250mm×4.0mm,5μm);以0.05mol·L-1磷酸二氢钾溶液(0.1%三乙胺)-乙腈(94∶6)为流动相,检测波长205nm。结果在建立的色谱条件下,苦豆碱与杂质能完全分离。脱氢苦豆碱线性范围为0.1～1mg·L-1(r=0.9998)。结论方法简便,能准确测定苦豆碱的有关物质。