降解苯丙氨酸的工程益生菌构建及其喂养苯丙酮尿症小鼠的效果分析

苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)是一种常染色体隐性遗传病,低蛋白饮食是目前临床治疗的主要方法,而采用工程益生菌治疗尚处于研发阶段。为了探究工程益生菌对PKU的治疗效果,该研究基于大肠埃希菌Nissle 1917(EcN)菌株,构建了一株表达苯丙氨酸裂解酶的工程益生菌EcN-PAL。通过λ-Red同源重组系统在EcN中导入经优化设计的苯丙氨酸裂解酶基因,并通过体外降解实验和小鼠喂养实验验证其功能性。实验结果表明,工程益生菌EcN-PAL成功表达苯丙氨酸裂解酶,并且可降解苯丙氨酸和有效降低PKU小鼠的血液苯丙氨酸浓度。该研究成功构建的工程益生菌EcN-PAL对苯丙氨酸有良好的降解效果,动物实验证实可有效治疗PKU小鼠,为用于PKU患者的益生菌治疗奠定了基础。

4例苯丙酮尿症儿童接种疫苗实践

目的为消除特殊健康状态儿童疫苗犹豫,对患苯丙酮尿症的儿童以实际病例为导向,经临床、流行病、药学等多学科专家组评估后进行疫苗接种,形成该类儿童一般性接种建议,从而为基层预防接种医护人员提供借鉴。方法通过实际案例经多学科专家论证,形成苯丙酮尿症儿童预防接种建议,对4例满足预防接种建议中的相关恢复指标的患儿接种疫苗,观察接种后不良反应情况。结果形成苯丙酮尿症儿童一般性接种建议。4例苯丙酮尿症儿童均食用特制奶粉治疗,病例1和病例2无合并症,血清苯丙氨酸浓度控制在20~60 mg/L后完成疫苗接种;病例3和病例4在分别控制轻度营养不良和抽搐症状,且血清苯丙氨酸浓度控制在20~60 mg/L后完成疫苗接种。本研究中4例患儿在诊断苯丙酮尿症前接种6剂次疫苗,诊断苯丙酮尿症后按照接种建议接种44剂次疫苗,共50剂次疫苗,均无不良反应报告。结论建议无合并症或者已控制合并症(纠正营养不良、控制抽搐等)的苯丙酮尿症儿童接种前复查血清苯丙氨酸浓度,血清苯丙氨酸浓度控制在20~60 mg/L后可接种疫苗。

浙江省726 998名新生儿苯丙酮尿症筛查分析

目的通过对苯丙酮尿症(PKU)疾病的筛查,了解浙江省遗传性代谢病苯丙酮尿症疾病的发病情况及临床类型。方法取出生72h后并喂足高蛋白奶6次以上的726998例新生儿足跟末梢血,应用荧光定量法测定血苯丙氨酸(phe)水平。结果在726998例新生儿中检出phe增高(phe>121.0μmol/L)的可疑者152例,经血清氨基酸分析(其中宁波可疑10例,确诊7例),确诊PKU患儿32例,其中经典型PKU26例,高苯丙氨酸血症5例,四氢生物喋呤(BH4)缺乏症1例。确诊治疗最早时间为16d,最晚为105d,中位数为32d。结论浙江省苯丙酮尿症检出率为1/22718。

基于毛细管电泳-安培检测的新生儿苯丙酮尿症早期无创诊断

首次采用毛细管电泳-安培检测法(CE-AD)同时测定了苯丙酮尿症(Phenylketonuria,PKU)患者尿液中的两种标志物:具有电活性的苯丙酮酸及非电活性的苯乙酸。考察了运行液添加剂、SDS浓度、工作电极电位等因素对分离和检测的影响。在优化实验条件下,两种标志物在15 m in内可实现基线分离。苯丙酮酸和苯乙酸的检出限(S/N=3)分别为0.50、0.92 mg/L。苯丙酮酸、苯乙酸浓度与峰高分别在3.0～1.0×103mg/L、2.0～5.0×103mg/L范围内呈良好线性,峰高与迁移时间的相对标准偏差分别为4.4%、3.2%(苯丙酮酸)和2.2%、4.3%(苯乙酸)。该方法已成功用于PKU患儿尿液中两种标志物的测定,且完全避免了尿液中尿酸对标志物测定的干扰,有望用于PKU患儿的早期无创诊断。

研究串联质谱法检测苯丙氨酸(Phe)和酪氨酸(Tyr)在新生儿苯丙酮尿症诊断中的应用

探讨串联质谱法检测苯丙氨酸(Phe)和酪氨酸(Tyr)在新生儿苯丙酮尿症诊断中的应用效果。方法 选取2023年1月~2023年12月本院27765例实施苯丙酮尿症筛查新生儿,其中82例初筛阳性新生儿,并选取同期200例健康新生儿,通过干滤纸血片对200例健康新生儿Phe及Tyr浓度进行检测,确定检测指标的线性范围,并对82例疑似苯丙酮尿症患儿phe及Tyr浓度进行测定,检测平均回收率、变异系数,计算苯丙酮尿症阳性新生儿的phe及Tyr水平和Phe/Tyr比值,检测方法应用串联质谱法。结果Phe和Tyr的线性范围、回收率及CV如下:线性范围:Phe为(26.28~890.64)umol/L,Tyr为(38.94~263.58)umol/L。浓度平均回收率:Phe为98.2%,Tyr为97.1%。批内CV:phe为3.8%,Tyr为4.0%。批间CV:Phe为4.3%,Tyr为5.5%。经串联质谱法检测后,总计5例苯丙酮尿症阳性新生儿,其Phe水平为465.93~612.37umol/L,Tyr水平为78.65~152.38umol/L,Phe/Tyr为4.0~5.9(均>3.5)。结论 串联质谱法在新生儿苯丙酮尿症诊断中,通过该方法对Phe及Tyr浓度检测,线性范围较宽,且具有较高的浓度回收率,值得采纳。

苯丙酮酸及其盐的理化性质比较

对苯丙酮酸及其钠盐和铵盐的理化性质，和酶促转氨产生Ｌ－苯丙氨酸的效果进行了比较研究，结果表明：钠盐的热稳定性和耐氧化性明显优于其它二者，而水溶性则以铵盐为最佳。三者分别为底物配制成酶转氨底物溶液。

四氢生物蝶呤反应性的苯丙酮尿症研究进展

本文综述对四氢生物蝶呤(BH4)反应性的苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因缺陷的苯丙酮尿症(PKU)的研究进展。分析BH4反应性的PAH基因突变,探讨这一现象潜在的发生机制,介绍一种新的临床分类法,并对PKU的BH4替代治疗前景进行展望。

α-苯丙酮酸和β-苄基-α-苯丙酮酸光谱学性质研究

研究了α 苯丙酮酸 (PPA)和 β 苄基 α 苯丙酮酸 (BPPA)的UV ,IR ,MS和1 HNMR等光谱学性质。UV光谱中 ,PPA在 2 4 0和 365nm处出现吸收峰 ,BPPA只在 2 1 0nm处有吸收 ,这证明PPA存在烯醇式结构而BPPA则没有。IR光谱中 ,PPA由于采取烯醇式二聚体结构 ,在 1 62 4 38和 1 697 2 5cm- 1 处分别出现两个羧基CO峰 ,BPPA则在 1 70 6 6cm- 1 和 1 72 8 6cm- 1 处分别出现酮基CO和羧基CO吸收峰。同时还对MS及1 HNMR图谱进行了详尽的解析 ,并就两者化学结构上的差异进行了比较说明。

1300例苯丙酮尿症筛查结果分析

１３００例苯丙酮尿症筛查结果分析河南省焦作市人民医院遗传室（４５４１５１）段爱军，郑红，邹磊，陆彬如，吴璧君苯丙酮尿症（ＰＫＵ）是一种遗传性代谢性酶缺陷病。１９６１年Ｇａｔｈｒｉｅ将细菌抑制法应用于ＰＫＵ筛查。目前，国内微生物法测定ＰＫＵ已列为新生儿...

苯丙酮酸及其钠盐制备的研究概况

目的比较苯丙酮酸及其钠盐几种制备方法的优缺点,为制备苯丙酮酸及其钠盐选择一条比较有前景的路线。方法分别对α-乙酰氨基肉桂酸水解法、海因法、双羰基化法、乙内酰脲和苯甲醛合成法4种制备方法进行分析研究。结果在4种方法中,乙内酰脲和苯甲醛合成法是理想的制备方法。结论采用乙内酰脲和苯甲醛合成法制得的苯丙酮酸以钠盐的形式存在,稳定性好,易于储存和运输,且原料易得,成本较低,安全系数高,可实现产业化。

苯丙酮尿症4例报告

苯丙酮尿症是先天性代谢性疾病,属常染色体隐性遗传,是由于体内缺乏苯丙氨酸羟化酶,使苯丙氨酸不能氧化成酪氨酸而变成苯丙酮酸。由于大量的苯丙氨酸及其代谢产物酮酸堆积在血液及脑脊液中抑制了脑组织内谷氨酸脱羧酶的活性。

尿中苯丙酮酸的GC/MS定量测定方法

采用患儿自身尿，人为地加入一定量的苯丙酮酸做为辅助标样，和标样及患儿尿一起在完全相同的条件下进行化学衍生化处理后，作GC／MS定量分析，通过计算可求得患儿尿中的苯丙酮酸含量，此法克服了苯丙酮酸在尿中和在标准有机酸混合物中由于衍生化结果不同而给定量带来的困难，成功地解决了尿中苯丙胡酸的定量测定方法问题。

对苯丙酮尿症筛查的临床价值

苯丙酮尿症(Pku)是一种以智力发育不全为主要特征的遗传性代谢缺陷病,主要由于肝脏内缺乏苯丙氨酸羟化酶所致。本文共筛查720例,未发现阳性者,门诊就诊患者10例中查得3例阳性,确诊为苯丙酮尿症。建立新生儿苯丙酮尿症筛查可早期诊断。早期治疗,患儿智力发育可完全正常。该项工作对优生优育,提高人口素质具有重要的社会意义和临床价值。

苯丙酮尿症研究十八年

将自1984年以来在中日友好医院开展的有关苯丙酮尿症(PKU)的主要研究工作总结如下: (1) 1984年10月～2002年9月,共诊治苯丙酮尿症(PKU)患者603例。经新生儿筛查发现并在出生后3个月内开始 治疗者136例,195例在3～12个月时就诊,272例1岁以上就诊。晚发现的467例PKU患者均有PKU的症状和体 征,119例合并癫痫。经低苯丙氨酸饮食治疗,早治患者的智能和体格发育正常,晚治者的异常行为明显改善、智 能也有不同程度提高。22个PKU家庭作了产前基因诊断,防止了第二胎患病胎儿的出生。(2)采用高效液相色谱仪 (HPLC)对369例高苯丙氨酸血症(HPA)患者进行尿液喋呤测定,22例诊断为四氢生物喋呤(BH4)缺乏症。对 18例BH4缺乏症患者及其家系进行基因分析,发现6种基因突变,其中259C→T和286G→A为中国北方人的常见 突变。18例患者接受了BH4、L-多巴及5-羟色胺联合治疗,疗效满意。 (3)未经治疗的PKU患者的脑电图(EEG) 及颅脑磁共振成像(MRI)异常均具有高发生率。脑电图异常所见主要为痫样放电,少数为背景活动异常。颅脑 MRI异常以T2WI上脑白质内散在斑片高信号灶最为常见,其次为脑髓鞘化发育延迟及脑发育不良。经低苯丙氨酸饮 食治疗后,绝大多数患者脑电图及脑MRI随之改善。 (4) 将29例晚治的经典型PKU患者的基因型与治疗前?

甘肃省56万例新生儿苯丙酮尿症筛查结果分析

目的回顾性分析甘肃省567 691例新生儿苯丙酮尿症筛查结果,了解甘肃省新生儿苯丙酮尿症（PKU）的发病情况,为甘肃省PKU的防治提供基础数据。方法标本为甘肃省新生儿筛查中心于2009~2014年收集的567 691例新生儿足跟血滤纸干血斑样品,用荧光定量法检测苯丙氨酸水平,并采用尿碟呤谱分析及苯丙氨酸羟化酶（PAH）基因突变检测进行鉴别诊断。结果在567 691例新生儿中,确诊PKU患儿166例;总体检出率为1/3 420,其中经典PKU 119例（71.7%）,中等型PKU33例（19.9%）,轻型PKU 14例（8.4%）。结论甘肃省PKU发病率远高于全国平均发病水平,以经典型PKU发病为主,应成为PKU重点防治地区。

GC-MS方法诊断新生儿苯丙酮尿症

用甲醇提取血样中的苯丙氨酸 (Phe)、酪氨酸 (Tyr) ,提取液离心去蛋白质 ,用正丁醇将其中的苯丙氨酸和酪氨酸丁酯化 ,再用三氟醋酸酐酰化后进行GC -MS分析 ,测定Phe ,Tyr特征离子峰面积 ,用外标法计算出Phe和Tyr的摩尔浓度 ,根据Phe和Tyr摩尔浓度比值来诊断新生儿苯丙酮尿症 (PKU)

2000—2008年河北省新生儿苯丙酮尿症筛查结果分析

目的分析河北省新生儿苯丙酮尿症(PKU)筛查状况、PKU发病率及治疗情况,总结经验,促进新生儿筛查工作。方法以2000年1月—2008年9月在河北省11所市新生儿疾病筛查中心(新筛中心)进行PKU筛查的218万例新生儿作为分析对象,在出生后72h采足跟血,分别采用细菌抑制法(BIA)、荧光法、定量酶法测定血苯丙氨酸(phe)水平。结果218万例新生儿中,确诊PKU249例,发病率为1∶8757,其中男婴145例,女婴104例,男女之比约为1.39∶1,各年度的发病率比较差异无统计学意义(P>0.05),各市的发病率比较差异有统计学意义(P<0.05)。确诊的138例PKU患儿接受正规治疗,治疗率为55.4%。结论河北省是PKU高发区,新生儿疾病筛查是早发现、早诊断、早治疗PKU的重要措施,在今后的工作中要大力提高治疗率,使PKU患儿的智力和体格发育达到正常标准,减少残疾的发生,提高人口素质。

新生儿苯丙酮尿症两种实验室筛查方法的质量评价

目的比较筛查新生儿苯丙酮尿症(PKU)的2种检测苯丙氨酸(Phe)的方法——细菌抑制法(B IA)和荧光法。方法参加美国疾病控制中心(CDC)质量评价,分析B IA和荧光法的批内、批间误差及相对偏差,比较2种方法的结果。结果用CDC质控品测得BIA批内变异系数(CV)为14.29%,荧光法为5.85%;用不同浓度质控品测得B IA批间CV分别为25.34%、20.86%、34.78%和25.72%,荧光法为16.46%、13.22%、19.53%和15.41%;B IA的PKU阳性检出率为5.04/10万,荧光法为7.79/10万。结论荧光法较B IA具有更灵敏、准确、可定量、费时少的优点,国内今后应顺应其发展趋势,普及推广运用荧光法筛查新生儿PKU。

苯丙酮尿症杂合子高危人群基因型与生化表型相关性

目的:用分子生物学方法对可疑PKU/HPA杂合子进行PAH突变基因分析,以验证生化筛查PKU/HPA杂合子方法的可行性。方法:利用PCR、SSCP和DNA测序等方法对152例已知PKU/HPA杂合子(阳性组)和29例可疑PKU/HPA杂合子(可疑组)的PAH基因部分外显子进行分析。并与健康体检者对照(对照组)结果:152例已知PKU/HPA杂合子中发现26种基因突变,突变检出率为80.9%(123/152)。29例可疑“PKU/HPA杂合子”发现5例突变,检出率为17.2%(5/29)。对照组与可疑PKU/HPA杂合子组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:生化方法与分子生物学方法有一定相关性,提示生化筛查法用作PKU杂合子的初筛是可行的。

苯丙氨酸及苯丙酮酸对Lactobacillus sp.SK007合成苯乳酸的影响

从自然发酵泡菜中分离筛选到一株乳杆菌(Lactobacillus sp.)SK007,研究了Lactobacillus sp.SK007利用苯丙氨酸合成苯乳酸的过程,结果发现,在MRS培养基中最高可产生0.55mmol/L苯乳酸,苯丙氨酸剩余94%,但检测不到中间产物苯丙酮酸,这表明苯丙氨酸的转氨反应是苯乳酸合成的限速步骤.用苯丙酮酸代替苯丙氨酸作为底物可有效突破这一瓶颈,进一步优化了Lactobacillus sp.SK007利用苯丙酮酸合成苯乳酸的发酵条件.当苯丙酮酸为18.3mmol/L,30℃静置培养24h,苯乳酸产量可达10.25mmol/L.