龙葵茎叶中澳洲茄碱及澳洲茄边碱的超声辅助提取工艺优化

以龙葵茎叶提取物为原料,考察提取时间、料液比、乙醇浓度、水解酸种类及浓度等因素对澳洲茄碱、澳洲茄边碱提取率的影响。结果表明:以乙醇为提取溶剂,超声辅助提取,最佳提取工艺为,乙醇浓度80%、提取时间60 min、提取温度40℃、料液比1∶20,在此条件下,龙葵茎叶中澳洲茄碱、澳洲茄边碱的含量分别为0.229%、0.141%;以10%硫酸乙醇作为提取溶剂,在料液比1∶20、提取时间60 min、提取温度80℃条件下,澳洲茄碱与澳洲茄边碱提取率分别为0.275%、0.168%,与乙醇提取相比,提取率分别提高1.2、1.19倍。实验证明:酸水解可提高龙葵茎叶中澳洲茄碱、澳洲茄边碱的提取率。

UPLC-MS/MS法检测中毒血液中α-茄碱和α-卡茄碱

建立一种超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(UPLC-MS/MS)检验血液中α-茄碱和α-卡茄碱的方法。采用乙腈沉淀蛋白法提取目标物,电喷雾离子源正离子模式(ESI+)下,多反应监控(MRM)分析。结果表明,血液中α-茄碱和α-卡茄碱检出限分别为0.10 ng/mL和0.11 ng/mL;在0.5~50 ng/mL范围内线性关系良好,R2均大于0.998;在低、中、高(0.5 ng/mL、5 ng/mL、50 ng/mL)3种添加浓度中基质效应在92.64%~110.45%之间,提取回收率在89.23%~105.08%之间,日内、日间精密度RSD均不大于5.94%。本方法专属性好、灵敏度高、准确性好,可用于快速检验中毒血液α-茄碱和α-卡茄碱。

澳洲茄碱对肺癌A549细胞生物活性、瘤体抑制及MAPK/ERK1/2的影响

目的澳洲茄碱对肺癌A549细胞生物活性、瘤体抑制及MAPK/ERK1/2信号的影响。方法将人肺癌细胞株A549分为空白组、低剂量澳洲茄碱组、中剂量澳洲茄碱组、高剂量澳洲茄碱组及顺铂组,分别加入浓度为0、15、20、25μmol/L的澳洲茄碱及2μg/mL顺铂培养。MTT检测活性;流式细胞仪检测凋亡率;Transwell法检测侵袭;划痕试验检测划痕愈合率。25只裸鼠分为空白组、低剂量澳洲茄碱组、中剂量澳洲茄碱组、高剂量澳洲茄碱组及顺铂组,皮下注射0.3 mL的0、15、20、25μmol/L的澳洲茄碱及2μg/mL顺铂共培养A549细胞,观察瘤体质量及抑瘤率。结果澳洲茄碱组降低A549细胞活性,凋亡率升高,侵袭、划痕愈合率、MAPK、p-MAPK、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白水平降低(P<0.05)。结论澳洲茄碱可抑制肺癌细胞增殖、侵袭及转移,并加快凋亡,作用呈现剂量依赖性且高剂量效果最佳,研究机制可能与抑制MAPK/ERK1/2信号表达相关。

澳洲茄碱的抗肿瘤活性及其机制研究进展

澳洲茄碱(SS)是一种天然来源的生物活性小分子化合物,已经被证实具有抗菌、抗炎和抗肿瘤等功效。在抗肿瘤作用方面,SS可以通过多种机制在不同类型肿瘤中有效发挥抗肿瘤作用,其作用机制包括诱导肿瘤细胞凋亡、阻滞肿瘤细胞周期、诱导肿瘤细胞铁死亡、调控肿瘤相关非编码RNA、调节免疫和炎症反应、削弱肿瘤细胞的侵袭和转移能力、抑制糖酵解进程和肿瘤干细胞的产生等,涵盖了肺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌、胆管癌、膀胱癌、胰腺癌、白血病、骨肉瘤等多种癌症类型。阐明SS在不同类型肿瘤中的抗肿瘤活性及其作用机制,为促进SS抗肿瘤作用机制的进一步研究和开发更有效安全的抗肿瘤药物提供了重要的理论基础。

澳洲茄碱抗肿瘤作用及机制研究进展

综述澳洲茄碱(solasonine)抗肿瘤作用及其机制的研究进展。澳洲茄碱对于肝癌、胃癌、肺癌、白血病、胰腺癌和大肠癌等疾病具有抗肿瘤作用,可以抑制癌细胞增殖、诱导癌细胞凋亡、抑制癌细胞迁移侵袭、诱导铁死亡、抑制糖酵解和降低癌细胞耐药性,可以调控Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-Catenin)通路、Hh信号通路、核因子-κB(NF-κB)通路、丝裂原活化蛋白激酶(AMPK)通路、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路等的信号转导。

澳洲茄碱通过调控Bcl-2/Bax/caspase-3信号通路促进非小细胞肺癌发生凋亡

目的 探讨龙葵活性成分澳洲茄碱对非小细胞肺癌细胞PC9增殖、凋亡的影响。方法 体外培养PC9细胞,设对照组(0μmol/L)及澳洲茄碱不同剂量组(0、2、5、10、15、20、25μmol/L),CCK-8试剂盒检测澳洲茄碱对PC9细胞的增殖抑制作用;TMRE检测线粒膜电位;caspase3/7活性试剂盒联合GreenNuc?Caspase-3/Annexin V-mCherry染色检测caspase-3活性;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;给药处理或者使用PTEN抑制剂后,Western blot检测细胞中相关蛋白的表达量。结果 与对照组相比,经澳洲茄碱干预24、48、72 h后,PC9细胞的活力均明显降低(P<0.05);经澳洲茄碱干预24 h后,细胞线粒体膜电位明显降低,而细胞凋亡比例明显升高(P<0.05);caspase-3/7活力、活细胞Caspase-3活性及cleaved caspase-3蛋白表达均显著升高(P<0.01);PI3K和Akt磷酸化水平降低(P<0.05);而PTEN、Bax蛋白表达上调(P<0.05);抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白的表达下调(P<0.05)。结论 澳洲茄碱可通过调控Bcl-2/Bax/caspase-3通路及其上游蛋白活性而抑制PC9细胞增殖,促进其凋亡。

β-苦茄碱通过Fas介导的死亡受体途径诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的探讨β-苦茄碱(Beta-solamarine,BSM)诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其对Fas介导的死亡受体途径相关蛋白的影响。方法将不同浓度的BSM对体外培养的乳腺癌MCF-7细胞进行干预。采用MTT法测定细胞增殖抑制率,细胞侵袭试验观察细胞侵袭能力,TUNEL法检测细胞凋亡情况,采用Western Blot对Fas、FADD、Cleaved Caspase-8、Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP和PARP蛋白表达水平进行检测。结果BSM处理后的细胞组显示出了较高的抑制率、侵袭细胞数明显下降、细胞凋亡率显著增加,各BSM组的细胞抑制率、侵袭细胞数和凋亡率与正常对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.01)。Caspase-8抑制剂Z-IETD-FMK处理组的细胞凋亡率显著降低,相较于与BSM同剂量组,细胞凋亡率差异具有统计学意义(P<0.01)。在BSM的作用下,MCF-7细胞中Fas、FADD、Cleaved Caspase-8、Cleaved Caspase-3以及Cleaved PARP的表达水平显著提升,而PARP的表达水平下降明显,与正常对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论BSM在抑制MCF-7细胞的增殖、侵袭和促进细胞凋亡方面显示出显著效果,激活Fas介导的死亡受体途径可能是BSM诱导细胞凋亡的机制之一。

HPLC—ELSD法同时测定马铃薯中α-茄碱和α-卡茄碱含量

建立高效液相色谱—蒸发光散射检测（HPLC—ELSD）同时测定马铃薯中α-茄碱和α-卡茄碱的方法,并对不同样品含量进行测定。结果表明：当ELSD漂移管温度98℃,雾化管温度30℃,载气压力6.90kPa时,以0.1%三氟乙酸水—乙腈为流动相,经梯度洗脱程度,α-茄碱和α-卡茄碱可获得良好分离,色谱峰柱效高。样品用质量100倍的1%甲酸甲醇为提取溶剂在70℃下提取90min,提取液直接注入色谱仪进行检测。α-茄碱标准品在0.196-9.800μg线性关系良好（R2=0.999 5）,平均回收率为99.4%,并以该标准曲线同时计算样品中的α-茄碱和α-卡茄碱的含量。马铃薯植物的不同部位均含有生物碱,α-茄碱的含量为0.13-1.59mg/g,α-卡茄碱的含量为0.39-8.28 mg/g;两种生物碱总量为0.52-9.37mg/g,同一部位中α-卡茄碱的含量为α-茄碱的1.2-7.6倍。

α-茄碱、α-卡茄碱在动物生产中的抗营养作用及毒性研究进展

马铃薯中存在α-茄碱(α-solanine)、α-卡茄碱(α-chaconine)糖苷生物碱,本文对α-茄碱、α-卡茄碱对动物采食量、生长性能、消化系统、肠道机械屏障功能、组织器官、抗氧化机能、细胞膜的破坏作用及细胞增殖凋亡的影响研究进展进行了综述,为马铃薯副产物的开发利用和α-茄碱、α-卡茄碱的相关研究提供科学依据。

高效液相色谱串联质谱法检测马铃薯及马铃薯粉中α-茄碱和α-卡茄碱含量

建立了高效液相色谱-串联质谱同时测定马铃薯及马铃薯粉中α-茄碱与α-卡茄碱含量的方法。样品采用10%乙酸水溶液匀浆提取3 min,马铃薯粉提取液经Bond Elut C18 SPE柱净化后,采用C18色谱柱分离,液相色谱串联质谱仪检测。结果表明,α-茄碱和α-卡茄碱在0.01~1.00μg/mL范围内线性关系良好,相关系数分别为0.9998和0.9997。马铃薯和马铃薯粉在低、中、高三个添加浓度范围内,回收率在90.0%~110%之间,相对标准偏差在1.6%~5.0%之间。马铃薯中α-茄碱和α-卡茄碱的定量限分别为0.80和0.42μg/kg,马铃薯粉中α-茄碱和α-卡茄碱的定量限分别为25和14μg/kg(S/N=10)。本方法简单快速,灵敏度高,重复性好,适用于马铃薯及马铃薯粉中的α-茄碱和α-卡茄碱检测。

茄子果实中α-茄碱的高效液相色谱法检测

为建立一种快速、准确检测茄子果实中α-茄碱的方法,采用高效液相色谱法(HPLC),探索不同色谱条件下α-茄碱的分离效果和保留时间,确定较优色谱条件。结果表明:采用Waters Nova-pak C18色谱柱(150mm×3.9mm,4μm),以乙腈-0.05mol·L-1K2HPO4(70:30,V/V,H3PO4调pH值4.5)为流动相,流速0.7mL·min-1,柱温25℃,检测波长205nm的条件下,检测效果较好。α-茄碱在0.15～3.00g.L-1浓度范围内与峰高呈良好线性关系,r=0.9992;平均回收率为97.97%,RSD=1.17%(n=5)。本研究建立的茄子果实中α-茄碱的定量分析方法精密度高、准确性好,适用于茄子果实中α-茄碱的定性与定量分析。

液相色谱-质谱联用法检测马铃薯中α-茄碱含量

目的：建立基于液相色谱-质谱联用法的马铃薯中低含量的α-茄碱的高灵敏检测方法。方法：马铃薯用1％甲酸-甲醇（1：1，v／z）N声提取50min。采用C18色谱柱（2．1mm×150mm，5μm）分离，流动相为乙腈-0．1％甲酸（r／F），梯度洗脱，柱温35℃，流速0．2mL／min；采用液相色谱-电喷雾离子源单四极杆质谱检测。结果：α-茄碱在7～460μg／kg范围内与峰面积具有良好的线性关系，回归系数R^2=0．9991，平均加标回收率为93．6％，精密度为1．13％，重复性为2．59％。结论：该检测方法灵敏度高、重复性好，可用于马铃薯中低含量α-茄碱的含量测定。

不同产地龙葵药材中澳洲茄碱量的分析研究

目的 测定龙葵中澳洲茄碱的量以评价不同产地龙葵药材质量。方法 采用Agilent Zorbax SB C18色谱柱（150mm×4．6mm，5μm），以乙腈-1％磷酸溶液为流动相梯度洗脱，体积流量1．0mL／min，柱温30℃，检测波长205nm。结果6个不同地区龙葵茎叶中澳洲茄碱的平均量在0．5445～1．5049mg／g；果实中澳洲茄碱的平均量在O．8555～3．4408mg／g。连云港灌南地区龙葵茎叶和果实中澳洲茄碱的量最高，分别为1．5049、3．4408mg／g；南京栖霞地区茎叶中量最低，为0．5445mg／g，南京江宁地区果实中量最低，为0．8555mg／g。结论 同一时期、不同产地龙葵药材茎叶和果实中澳洲茄碱量差异较大。

中药龙葵提取物澳洲茄碱对肺癌细胞抑制作用

目的研究中药龙葵提取物澳洲茄碱对肺癌细胞的抑制效果及其可能的机制。方法采用MTT法检测了中药龙葵提取物澳洲茄碱对人类肺癌细胞株A549及小鼠Lewis肺癌细胞株LLC的抑制效果;以稍高半致死剂量的澳洲茄碱处理A549细胞,并进行细胞形态学观察和应用annexin V凋亡检测试剂盒进行流式细胞分析。结果澳洲茄碱对A549和LLC肺癌细胞均有明显的抑制作用,两者的24h IC50分别约为18μg/ml和20μg/ml。细胞形态学观察表明以终浓度为20μg/ml澳洲茄碱处理的A549细胞大多呈现细胞膜皱缩样的垂死形态,Annexin V/PI流式细胞分析结果表明细胞的总死亡率为42.43%[(Q2+Q3)/(Q2+Q3+Q4)],其中,早期凋亡细胞占总死亡细胞约22.08%[Q3/(Q2+Q3)],晚期凋亡或晚期凋亡和坏死细胞约占77.92%[Q2/(Q2+Q3)]。结论澳洲茄碱能明显抑制肺癌细胞的生长,其方式主要是诱发细胞凋亡或细胞凋亡和细胞坏死。

龙葵提取物澳洲茄碱对肺癌细胞侵袭及MMPs/TIMPs表达的影响

目的探讨龙葵提取物澳洲茄碱对肺癌细胞侵袭的影响及对基质金属蛋白酶(MMPs)、基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMPs)表达的影响。方法以人肺癌细胞H1299细胞为研究对象,使用0、3、6、9、12、15μmol·L^(-1)浓度的澳洲茄碱作用于肺癌细胞48 h,CCK-8法检测细胞增殖情况。用0、3、6、9μmol·L^(-1)浓度的澳洲茄碱作用于肺癌细胞24 h,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,实时定量PCR检测细胞MMP-2、MMP-9、EMMPIN、TIMP-1、TIMP-2、RECK mRNA表达,Western blot检测PI3K、pPI3K、Akt、pAkt蛋白表达。结果 15μmol·L^(-1)澳洲茄碱作用于肺癌H1299细胞后,细胞存活率明显下降(P<0.05),12μmol·L^(-1)以下浓度的澳洲茄碱则无明显细胞毒性。不同浓度(3、6、9μmol·L^(-1))澳洲茄碱作用于肺癌细胞后,细胞迁移和侵袭能力明显下降(P<0.05)。6、9μmol·L^(-1)澳洲茄碱处理后,MMP-2、MMP-9、EMMPIN mRNA表达明显下降(P<0.05);9μmol·L^(-1)澳洲茄碱处理后,TIMP-1、TIMP-2、RECK mRNA表达明显上升(P<0.05)。9μmol·L^(-1)澳洲茄碱处理后,pPI3K和pAkt蛋白表达明显下降(P<0.05)。结论澳洲茄碱可抑制肺癌细胞侵袭,其机制可能与调控MMPs和TIMPs表达有关。

茄子体内α-茄碱的含量检测及分布特点

以不同品种的茄子(Solanum melomgena L.)为试材,采用超声波提取技术和高效液相色谱法对茄子不同器官、不同颜色、不同采收时期和不同成熟度的果实及果实不同部位中α-茄碱进行提取和测定,旨在明确茄子体内α-茄碱的含量及分布特点。结果表明,茄子不同器官中,果实中α-茄碱含量最高;紫茄品种α-茄碱含量显著高于绿茄;不同时期采收的果实中以门茄中α-茄碱含量最高;未成熟茄子果实中α-茄碱含量显著高于成熟的茄子果实;各茄子品种果肉中α-茄碱含量显著高于果皮和果蒂。

龙葵果保鲜技术对澳洲茄碱、澳洲茄边碱含量的影响

目的:研究龙葵果保鲜技术对其抗肿瘤成分澳洲茄碱、澳洲茄边碱含量的影响。方法:采用独特的龙葵果保鲜技术保存龙葵鲜果,并采用高效液相色谱法对龙葵干果和保鲜处理的鲜果中澳洲茄碱、澳洲茄边碱进行含量测定,比较保鲜技术对其抗肿瘤有效成分含量的影响。结果:经保鲜技术处理的龙葵鲜果中澳洲茄碱和澳洲茄边碱的含量要比龙葵干果的含量高80%以上。结论:龙葵果保鲜技术可以明显提高龙葵药材中抗肿瘤有效成分的含量,值得推广使用。

24个产地龙葵中澳洲茄碱的含量测定

目的:对来自10个省市、24个产地的不同生境、生长周期的龙葵中澳洲茄碱进行分析。方法:采用HPLC,AgilentTC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm);以乙腈-0.5%磷酸水溶液作为流动相,梯度洗脱;检测波长为203 nm;体积流量:0.9mL/min;柱温为30℃。结果:龙葵药材中澳洲茄碱含量因产地、生境及生长周期不同差异很大。尤以生境及生长周期对澳洲茄碱的含量影响最为显著。结论:龙葵药材中澳洲茄碱含量因产地、生境及生长周期不同差异很大,因此控制龙葵药材的来源及最佳采收期,以保证龙葵药材的质量。

鲁米诺-铁氰化钾流动注射化学发光体系测定饮用水中ɑ-茄碱

建立一种快速测定ɑ-茄碱的新方法,利用鲁米诺-铁氰化钾化学发光体系,结合流动注射技术,对ɑ-茄碱进行测定。实验结果表明,ɑ-茄碱对鲁米诺-铁氰化钾体系发光反应有明显的抑制作用,在最佳实验条件下,该方法的线性范围为8.0×10-4～1.0×10-1mg/mL,检出限为6.09×10-5mg/mL,RSD为2.1%(n=11)。该方法具有操作简单、自动化程度高、成本低廉、容易实现在线检测以及即时预警等优点,可用于饮用水中ɑ-茄碱的快速检测。

龙葵药材中澳洲茄碱、澳洲茄边碱的含量测定

目的:寻找可以作为评价龙葵药材质量的指标成分,提高龙葵药材的质量标准。方法:采用柱层析方法分离化学成分,应用光谱法进行结构鉴定,用高效液相色谱法测定其在龙葵药材不同部位的含量。结果:从龙葵药材中分离并鉴定了2个含量较高的甾体类生物碱苷澳洲茄碱(solasonine)和澳洲茄边碱(solamar-gine);建立了龙葵药材中澳洲茄碱、澳洲茄边碱的HPLC含量测定方法。结论:这两种生物碱在龙葵药材中含量较高,可用于龙葵药材的质量控制。