非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测方法

试验旨在建立一种非洲猪瘟病毒(ASFV)的荧光定量PCR检测方法,根据ASFV P72基因核苷酸序列,通过基因克隆技术在质粒载体中克隆一段ASFV P72基因片段,设计一对特异性引物以及探针,通过带有基因序列的重组质粒绘制曲线,构建了一种ASFV荧光定量PCR检测手段。结果显示,该方法具有较高的敏感度,标准曲线线性关系较好,相关系数达到0.9998,重复性较佳,变异系数小;且以其他疾病核酸为模板均未出现扩增曲线,特异性较好。研究表明,该荧光定量PCR方法能够为ASFV的检测提供帮助。

如何规避非洲猪瘟荧光定量PCR检测实验中的操作问题

非洲猪瘟荧光定量PCR检测作为一种实验室快速检测技术,已被广泛应用于非洲猪瘟病原诊断中。荧光定量PCR法是一种准确、快速的检测方法,在根除、检测非洲猪瘟的过程中具有较高的应用价值。虽然,该实验室检测技术、试验试剂等非常成熟,但因检测人员操作不当,造成检测结果不清晰和假阳性复检等常有发生,实验结果无效会浪费大量实验时间和实验材料。本文仅以密云区动物疫病预防控制中心实验室的非洲猪瘟荧光定量PCR检测实验中出现的问题进行分析,提出改善措施,解决实际问题,为其他拥有相同问题的地区实验室提供参考。

刍议活动性肺结核早期检验中半巢式全自动实时荧光定量PCR检测与涂片抗酸染色法的应用研究

目的评估半巢式全自动实时荧光定量PCR检测与涂片抗酸染色法在活动性肺结核早期检验中的应用效能。方法选取2022年9月—2023年9月于平邑县结核病防治所就诊的90例疑似肺结核患者为研究对象,采用Xpert MTB/RIF技术、涂片抗酸染色法检验及简单法固体培养法同时检测90例疑似肺结核患者痰标本,对检测结果进行比较。结果以固体培养结果作为金标准,痰培养阳性率85.56%,阴性率14.44%。Xpert MTB/RIF阳性率84.44%、阴性率15.56%。涂片抗酸染色法检验阳性率48.88%、阴性率51.11%。Xpert MTB/RIF检验的灵敏度97.40%、准确度96.67%、阳性预测值98.68%以及阴性预测值85.71%均高于涂片抗酸染色法检验50.64%、52.22%、88.64%、17.39%,差异有统计学意义(χ^(2)=43.768、46.722、5.922、22.546,P均<0.05)。结论与涂片抗酸染色法相比,在活动性肺结核早期检验中采用半巢式全自动实时荧光定量PCR检测(Xpert MTB/RIF)的应用效能更高。

猪传染性胃肠炎荧光定量PCR检测与治疗

猪传染性胃肠炎(TGE)为一类兽医临床常见的传染病,TGE的主要临床表现为严重腹泻、呕吐、脱水。与猪流行性腹泻(PED)的临床特征相似,二者常出现混合感染,导致临床诊断困难。PCR技术是快速诊断TGE的重要方法,TGEV作为TGE的病原体,其核衣壳蛋白(N)基因是PCR检测的靶基因。建立敏感特异的荧光定量PCR方法用于检测TGEV。本病的临床表现为呕吐、腹泻和脱水等症状,具有高传染性和致死率。如果病猪没有得到及时治疗,有可能感染其他猪只,就此影响健康猪只的健康及养殖场的经济收益。因此,做好猪传染性胃肠炎疾病诊断和治疗工作意义重大。基于此,笔者分析猪传染性胃肠炎荧光定量PCR检测与治疗方法。

高危型HPV感染临床检验中实时荧光定量PCR检测法的作用

目的分析高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染临床检验中实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测法的作用。方法选取80例疑似高危型HPV感染患者,均接受第二代杂交式捕获法(HCⅡ)、实时荧光定量PCR检测,以病理检查结果为金标准,分析实时荧光定量PCR检测价值。结果实时荧光定量PCR检验准确率97.50%、敏感度98.51%、特异度92.31%,均显著高于HCⅡ的78.75%、88.06%、38.46%(P<0.05);实时荧光定量PCR诊断检出率CINⅠ100%、慢性宫颈炎92.31%,均显著高于HCⅡ的88.10%、46.15%(P<0.05)。结论应用实时荧光定量PCR检测法可明显提高高危型HPV感染患者的临床检验准确性,提高治疗方法的针对性。

4种致牛腹泻病毒多重荧光定量PCR检测方法的建立及应用

【目的】建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛轮状病毒(BRV)、牛恶性卡他热病毒(MCFV)4种致牛腹泻病毒多重荧光定量PCR检测方法,为BVDV、BCoV、BRV和MCFV的鉴别诊断提供技术支持。【方法】根据BVDV的5′UTR基因、BCoV的N基因、BRV的VP6基因和MCFV的ORF9基因的保守区域设计引物,克隆目的基因构建标准阳性重组质粒,建立可同时检测4种致牛腹泻病毒的多重荧光定量PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行评价。用建立的多重荧光定量PCR检测方法对76份临床样品进行检测,并与常规PCR检测方法的结果进行比较。【结果】建立了BVDV、BCoV、BRV和MCFV多重荧光定量PCR检测方法,该方法建立的标准曲线线性关系良好,仅可特异性扩增出4种目标基因片段;对BVDV、MCFV、BRV和BCoV的最低检出限分别为9.4×10^(1),1.4×10^(3),9.1×10^(1)和1.2×10^(2)拷贝/μL,与普通PCR相比,灵敏性高出10~1000倍;批内、批间差异均小于5%。76份临床样品检测结果显示,多重荧光定量PCR检测结果与普通PCR检测结果的符合率分别为98.7%(BCoV)、97.4%(BRV)、100.0%(BVDV)和100.0%(MCFV)。【结论】建立了BVDV、BCoV、BRV和MCFV多重荧光定量PCR检测方法,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于牛腹泻病毒病原的实验室检测。

肺结核细菌检测中的荧光定量PCR检测应用分析

目的分析荧光定量PCR检测在肺结核细菌检测中的应用效果。方法选取2022年1月至2022年12月我院收治的100例疑似肺结核患者,采集患者的痰液标本,进行荧光定量PCR检测、痰涂片检测、痰培养检查,将以痰培养检查结果作为“金标准”,对比分析另两种检测方法对肺结核细菌的检测效果。结果在100例疑似肺结核患者中经痰培养检查检出阳性81例,阴性19例;采用荧光定量PCR检测检出真阳性78例,真阴性17例;经痰涂片检测检出真阳性70例,真阴性13例;荧光定量PCR检测诊断灵敏度(96.30%)、阴性预测值(85.00%)以及诊断符合率(95.00%)均高于痰涂片检测(86.42%、54.17%、83.00%),差异有统计学意义(P<0.05),两种检测方法的诊断特异度、阳性预测值保健,差异无统计学意义(P>0.05)。结论荧光定量PCR检测对于肺结核细菌检测的效果要优于痰涂片检测,有着较高的灵敏度,能够有效增加结核杆菌测定结果,帮助疾病早诊断和早治疗。

猪传染性胃肠炎荧光定量PCR检测与治疗

近年来,随着居民生活品质不断提升,养猪业规模化进程不断推进,同时各类病害发病率随之加大。该文阐述了猪传染性胃肠炎的致病原与传播途径,就某养猪场发病情况描述了发生特征,并介绍了荧光定量PCR检测方法以及针对性中医治疗与西医治疗方法,给养殖户提供借鉴,确保养殖业持续良好发展。

乙肝病毒DNA荧光定量PCR检测及其意义

探究乙肝病毒DNA荧光定量PCR检测及其意义。方法 在我院选取96例大三阳患者作为实验A组研究对象,96例小三阳患者作为实验B组研究对象,96例乙肝病毒检查显示HBsAG(乙肝表面抗原)阳性者作为实验C组研究对象,96例乙肝病毒检查显示HBsAb(乙肝表面抗体)阳性者作为实验D组研究对象患者作为实验组研究对象,另外选取60例同期接受门诊健康体检的健康者作为对照组研究对象。样本纳入启动时间为2021年1月,完结时间为2022年1月。所有样本均接受乙肝病毒DNA荧光定量PCR检测,对比各组间检查数据的差异。结果 乙肝病毒DNA荧光定量PCR检测HBV-DNA阳性率高低顺序分别为实验A组(100.00%)、实验粗C组(60.41%)、实验B组(44.79%)、实验D组(21.88%)、对照组(3.13%),各组间均有明显差异(P<0.05);各组乙肝病毒DNA荧光定量PCR检测病毒拷贝数高低顺序分别分为实验A组>实验B组>实验C组>实验D组>对照组,组间数据差异显著(P<0.05)。结论 DNA荧光定量PCR检测可对乙肝病毒感染作出准确的分析,可根据患者病毒复制状态实施相关治疗。

基层非洲猪瘟荧光定量PCR检测技术研究

随着现代化养猪业的快速发展,非洲猪瘟已成为全球养猪业最大的威胁之一。我国将非洲猪瘟列为重点防范的一类动物疫病,实行严格的防控措施,包括加强检测和监测、加强动物隔离和消毒、实行扑杀等紧急措施。在基层工作中,为了更快速、准确地检测非洲猪瘟病毒,多采用荧光定量PCR的检测方法。本文将围绕这个主题进行论述。

荧光定量PCR检测人类乳头瘤病毒在尖锐湿疣中的应用

目的 对尖锐湿疣 (CA)患者进行乳头瘤病毒 (HPV )DNA定量测定。方法 用聚合酶链反应 (PCR )测定HPVDNA的载量及HPV分型。结果 2 0 0例尖锐湿疣患者中 198例疣体组织HPV测定阳性 ,2例阴性。在 84例疣体组织HPV6、11阳性者中有 12例合并HPV16、18阳性。 5例疣体组织及宫颈分泌物同时阳性。定量测定结果显示 :HPV6、11患者最高 2 .0× 10 8copy/ml ,最低 3 .0× 10 4copy/ml,HPV16、18患者最高 1.75× 10 7copy/ml,最低 3 .0× 10 5copy/ml。 结论 尖锐湿疣患者应用荧光定量PCR检测HPV阳性率高 ,并可快速区分致癌型及致疣型HPV感染 。

黄瓜花叶病毒荧光定量PCR检测方法的建立

【目的】建立检测香蕉中黄瓜花叶病毒Cucumber mosaic virus(CMV)的实时荧光定量方法.【方法】根据CMV外壳蛋白(CP)保守序列设计了TaqMan实时荧光定量PCR特异性探针及引物,优化反应体系检测TaqMan探针实时荧光定量方法的灵敏度、特异性和重复性.【结果和结论】该方法检测灵敏度为4.2×102μL-1,比普通PCR高100倍,且与香蕉束顶病毒Banana bunchy top virus(BBTV)、香蕉线条病毒Banana streak virus(BSV)无交叉反应,特异性和重复性都较好.用实时荧光定量PCR检测14份田间香蕉样品有5份样品为阳性,进一步证明建立的实时荧光定量方法可用于香蕉CMV的检测.

TaqMan探针用于转基因食品的荧光定量PCR检测

选择了内源基因大豆植物凝集素 (lectin)、玉米转化酶 (invertase)和外源基因抗草甘膦除草剂的 5 烯醇式丙酮酰莽草酸 3 磷酸合成酶 (cp4epsps)、抗欧洲玉米螟的苏云金芽孢杆菌杀虫毒蛋白 (cryIAb)的TaqMan探针 ,确定了探针浓度和镁离子浓度等反应条件 ,分别对转基因大豆和转基因玉米系列标准品进行内源基因和外源基因的荧光PCR扩增 ,在PCR反应过程中分别以TET和FAM两种荧光通道信号分别追踪同一样品DNA的内源基因和外源基因的扩增动力学变化 ,并依此绘制了ΔCt值与转基因食品百分比含量之间的标准曲线 ,建立了转基因大豆和转基因玉米的TaqMan -荧光定量PCR检测方法 ,该方法具有探针设计较简便、成本较低的特点 ,初步实现了对转基因食品的定量分析及品种鉴定。

荧光定量PCR检测解脲支原体感染与胎膜早破的关系

目的:探讨解脲支原体(UU)感染与胎膜早破的关系。方法:采用荧光定量PCR检测法分别对50例胎膜早破和50例正常妊娠非胎膜早破妇女的宫颈分泌物、胎盘母面、新生儿咽拭子进行解脲支原体检测。结果:胎膜早破组宫颈分泌物、胎盘母面、新生儿咽拭子中,UU检测率明显高于对照组,两组比较,差异均有显著性(P<0.05)。结论:解脲支原体感染与胎膜早破的发生关系密切。

猪传染性胃肠炎病毒SYBR Green Ⅱ荧光定量PCR检测方法的建立及在初乳检测上的应用

为了提高初乳中猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)的检出率,避免初生仔猪受到带毒初乳的危害,建立了一种SYBR GreenⅡ荧光定量PCR(qPCR)检测方法。根据Gen Bank已发表的TGEV的N基因序列,选择保守区域设计、合成了1对特异性引物,扩增TGEV的N基因片段(174 bp),构建含有N基因片段的重组质粒,以重组质粒作为模板建立了特异性检测TGEV的qPCR检测方法。该方法的灵敏性比普通PCR方法高,应用建立的qPCR检测方法,对2016年10月-2017年4月采集自四川省部分地区腹泻猪场的母猪初乳130份进行检测,并与普通PCR检测方法进行比较。结果显示:用qPCR方法检测,130份样本中有13份为TGEV阳性,而普通PCR方法只检测到5份TGEV阳性样本。说明qPCR检测方法的敏感性高于普通PCR方法,更适合用于猪初乳检测。

荧光定量PCR检测HBV-DNA与ELISA法乙肝免疫学检测的探讨

目的探讨HBV感染者乙肝免疫学检测与HBV-DNA的关系,为合理治疗乙肝患者提供较准确的依据。方法用ELISA方法检测HBV感染者乙肝免疫学检测,用PCR方法检测HBV-DNA,并对结果进行分析。结果HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)组(大三阳组)患者血清HBV-DNA检出率97.06%(66/68),平均拷贝数为(2.15E+07)mL;HBsAg(+)HBeAb(+)HBcAb(+)组(小三阳组)患者血清HBV-DNA检出率为62.64%(57/91),平均拷贝数为(2.47E+04)mL;HBsAg(+)HBcAb(+)组血清HBV-DNA检出率为52.94%(18/34),平均拷贝数为(6.39E+04)mL。结论HBsAg和HBeAg阳性与HBV-DNA复制密切相关。乙肝免疫学检测和HBV-DNA检测将成为指导乙型肝炎防治的重要手段。

嗜肺军团菌荧光定量PCR检测方法的建立

目的:建立嗜肺军团菌mip基因荧光定量PCR检测方法。方法:利用Primer Express软件设计特异性引物和探针,对质粒标准品、嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌及其他菌株进行检测,验证方法的特异性、敏感性和重复性,最后采集环境样本进行检测。结果:该方法特异性好,嗜肺军团菌呈现阳性结果,而非嗜肺军团菌及其他菌株均为阴性结果。检测灵敏度达293copies/μl;重复性较好,Ct值变异系数较小;检测的12份环境样本中5份阳性。结论:该方法快速且具有较好的特异性、敏感性、重复性,适于外环境嗜肺军团菌污染调查及应急事件的快速检测。

EDTA修复肉芽肿组织中荧光定量PCR检测结核杆菌的应用

目的观察EDTA热修复炎性肉芽肿组织石蜡切片,能否提高荧光定量PCR结核/非结核分枝杆菌的检出率。方法对125例炎性肉芽肿组织石蜡切片结核/非结核分枝杆菌同时进行常规荧光定量PCR检测和EDTA热修复后荧光定量PCR检测。结果常规荧光定量PCR检测检出分枝杆菌75例(60%)阳性,其中结核杆菌74例(59.2%),非结核分枝杆菌1例(0.8%),阳性病例平均阳性基因拷贝数6.35×105/ml/例;EDTA修复后荧光定量PCR检测检出分枝杆菌88例(70.4%),其中结核杆菌83例(66.4%),非结核分枝杆菌5例(4%),阳性病例平均阳性基因拷贝数7.36×106/ml/例。两组间差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 EDTA热修复后荧光定量PCR检测可以大幅度提高炎性肉芽肿组织石蜡切片的结核/非结核分枝杆菌的阳性检出率。

荧光定量PCR检测弓形虫基因方法的建立

目的 建立荧光定量PCR检测弓形虫基因的方法,并进行实验室方法学评价。方法 PCR扩增弓形虫 529bp重复序列,经TA克隆后转化入大肠杆菌DH5α中;提取重组质粒鉴定后,作为模板建立荧光定量PCR标准曲线,并做重复性试验和临床标本检测。结果 用重组质粒制作的标准曲线循环阈值与模板浓度有良好的线性关系,相关系数 0. 995,平均试验间变异系数 3. 28%,无非特异性扩增。临床标本检测阳性率为 43. 3%。结论 建立了检测弓形虫基因的荧光定量PCR方法,快速、灵敏、特异的特点适合临床实验室的应用。