猫棒束孢联合环磷酰胺对H22荷瘤小鼠的治疗作用

目的 研究冬虫夏草来源的猫棒束孢(Isaria felina,IF)联合环磷酰胺(cyclophosphamide, CTX)对肝癌H22荷瘤小鼠的治疗作用。方法 建立H22荷瘤小鼠模型,随机分组,设正常对照组(NC group,蒸馏水)、模型对照组(MC group,蒸馏水)、CTX组(CTX group, 25 mg/kg)、IF组(IF group, 400 mg/kg)和IF+CTX组(IF+CTX group, IF 400 mg/kg+CTX 25 mg/kg),每组5只小鼠;蒸馏水、IF灌胃给药,CTX腹腔注射给药,连续给药10 d。实验结束后,计算各组小鼠平均肿瘤体积和瘤重、抑瘤率、q值、免疫器官脏器指数;检测血常规和血清细胞因子含量;观察肿瘤组织苏木精-伊红(HE)染色病理形态变化。结果 各给药组小鼠的肿瘤体积和重量均显著低于MC组(P<0.05)。CTX组、IF组、IF+CTX组小鼠的抑瘤率分别为49.3%、34.2%、72.8%,q值为1.09。IF+CTX组白细胞(WBC)、淋巴细胞(Lymph)、血小板(PLT)数量显著高于CTX组(P<0.05)。MC组小鼠的脾指数显著高于NC组,IF+CTX组小鼠脾指数显著低于MC组(P<0.05)。MC组小鼠的血清IFN-γ水平显著低于NC组,IF组和IF+CTX组的IFN-γ水平显著高于MC组和CTX组(P<0.05)。MC组肿瘤细胞生长状态良好,数量多,排列紧密;CTX组、IF组和IF+CTX组肿瘤组织可见肿瘤细胞排列松散,多处肿瘤细胞灶性坏死,坏死细胞核固缩碎裂。结论 IF和CTX联用对H22荷瘤小鼠有相加的抑瘤作用,可减轻小鼠的免疫功能抑制,具有免疫调节功能。

DEPDC1B结合p65在肝癌细胞和荷瘤小鼠肿瘤生长中的作用及机制研究

目的 研究DEP结构域蛋白1B(DEPDC1B)在肝癌细胞和荷瘤小鼠肿瘤生长中的作用及相关机制。方法 分别将过表达DEPDC1B的质粒(oe-flagDEPDC1B)与对照质粒(oe-NC)转染至H22肝癌细胞系中,采用蛋白质印迹法检测flag和DEPDC1B蛋白表达水平,采用CCK-8法检测细胞增殖能力。通过flag抗体富集flag-DEPDC1B结合蛋白,通过质谱进行鉴定,并对免疫共沉淀物进行关键蛋白验证。在oe-flag-DEPDC1B转染细胞中加入p65抑制剂Helenalin,采用实时荧光定量PCR法检测IL-1β、IL-6、TNF-α的m RNA表达水平,采用CCK-8法检测细胞增殖能力。分别将oe-flag-DEPDC1B和oe-NC转染细胞注射至C57/B6小鼠皮下,注射后2周开始监测小鼠肿瘤体积,注射后5周处死小鼠。分别采用实时荧光定量PCR法、蛋白质印迹法和ELISA法检测肿瘤组织中DEPDC1B、p65、IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平。结果 与oe-NC组细胞比较,oe-flag-DEPDC1B组细胞中DEPDC1B蛋白表达水平显著升高,细胞增殖能力显著增强(P均<0.05)。flagDEPDC1B可结合关键蛋白p65,免疫沉淀物中可以检测到p65蛋白。与oe-NC组细胞比较,oe-flag-DEPDC1B组细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达水平均显著升高(P均<0.05)。与oe-flag-DEPDC1B组细胞比较,oe-flag-DEPDC1B+Helenalin组细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α的m RNA表达水平均显著降低,细胞增殖能力均显著减弱(P均<0.05)。在荷瘤小鼠中,与oe-NC组小鼠比较,oe-flag-DEPDC1B组小鼠的肿瘤体积增长更快,肿瘤组织中DEPDC1B、p65、IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平均显著升高(P均<0.05)。结论 DEPDC1B可通过结合NF-κB信号通路中关键蛋白p65激活NF-κB信号通路,促进肝癌生长。

复方中药制剂对H22荷瘤小鼠免疫功能的影响

【目的】探究蛹虫草、灵芝、黄芪、五味子、党参、当归、茯苓复方中药制剂对H22荷瘤小鼠免疫功能的影响。【方法】建立H22荷瘤小鼠模型,随机将小鼠分为模型组、复方中药制剂高(250 mg/(kg·d))、中(50 mg/(kg·d))和低(10 mg/(kg·d))剂量组,各剂量组灌胃给药,1次/d,模型组灌胃同等体积生理盐水,试验期3周,另设置正常组进行常规饲喂。末次给药后采集抗凝全血,检测小鼠血细胞数量、血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)、细胞因子水平。用流式细胞术检测外周血CD4~+/CD8~+ T细胞亚群;通过小鼠脾淋巴细胞转化试验、碳粒廓清试验考察荷瘤小鼠免疫活性。【结果】与正常组相比,模型组小鼠血液中白细胞(WBC)、血小板(PLT)、淋巴细胞(W-SCR)数量极显著或显著减少(P<0.01;P<0.05),白细胞介素-2(IL-2)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量、SOD、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)活性以及细胞色素C(Cyt C)浓度均极显著或显著降低(P<0.01;P<0.05)。与模型组相比,高、中和低剂量组小鼠血清IL-2、IL-6、TNF-α含量和SOD、Caspase-3活性均极显著或显著升高(P<0.01;P<0.05),MDA含量均极显著或显著降低(P<0.01;P<0.05);中剂量组小鼠血液中WBC、PLT数量极显著或显著增加(P<0.01;P<0.05);高剂量组小鼠血液中PLT数量极显著增加(P<0.01),Cyt C浓度显著升高(P<0.05)。流式细胞检测结果显示,模型组小鼠血液T淋巴细胞CD4~+、CD8~+亚群细胞数量较正常组显著减少(P<0.05)。与模型组相比,复方中药制剂高、中剂量组小鼠血液T淋巴细胞CD4~+、CD8~+亚群细胞数量显著增加(P<0.05),高、中剂量组小鼠刺激指数、半数溶血值和吞噬指数均极显著或显著升高(P<0.01;P<0.05)。【结论】复方中药制剂能提高H22荷瘤小鼠免疫活性,进而促进肝癌细胞凋亡。

灵芝孢子糖肽对荷瘤小鼠的特异性免疫调节作用研究

为考察灵芝孢子糖肽对荷瘤小鼠的特异性免疫调节作用,建立S180荷瘤小鼠模型,随机设4个处理组(空白组,模型组,阳性药云芝胞内糖肽胶囊组,阳性药环磷酰胺组),灵芝孢子糖肽设低、中、高(130 mg∕kg、260 mg∕kg、520 mg∕kg)三个剂量组。通过对小鼠体重、瘤重、主要脏器的质量、白细胞计数及血清溶血素试验来研究灵芝孢子糖肽对小鼠体内特异性免疫的影响。结果表明:灵芝孢子糖肽对小鼠无明显毒副反应,可以升高小鼠的血清半数溶血值,提高小鼠体内特异性免疫作用,升高白细胞值。灵芝孢子糖肽可以显著降低瘤重。上述结果表明,灵芝孢子糖肽具有一定的抗肿瘤活性,能增强荷瘤小鼠的特异性免疫作用,而无明显毒副作用。

椒目油对喉癌荷瘤小鼠的抑制作用研究

本实验在课题组前期细胞实验的基础上,构建Hep?2荷瘤小鼠模型来探究椒目油(Zanthoxylumbungeanum seed oil,ZBSO)在动物体内抑制喉癌组织生长的作用.将100只小鼠随机分为五组,包括正常组(normal),对照组(control),阳性药顺铂组(Cisplatin,Cis,3 mg/kg),椒目油低、高剂量组(ZBSO,1.2、2.4 mL/kg).阳性药组采用腹腔注射,对照组和ZBSO高、低剂量组采用灌胃的方式.给药20天后,处死小鼠并解剖,取小鼠心、肝、脾、肺、肾、胸腺组织以及肿瘤组织,并称量脾及胸腺的重量.小鼠各组织处理完成后用石蜡包埋、切片、染色并拍照.ZBSO高、低剂量组对荷瘤小鼠的肿瘤具有明显的抑制作用并有明显的浓度?时间依赖性.肿瘤体积及瘤重分别为:对照组(1929.07±339.68 mm^(3);1.17±0.28 g)、ZBSO低剂量组(1215.63±224.94 mm^(3);0.79±0.11 g)、Cis组(955.24±69.34 mm^(3);0.54±0.07 g)、ZBSO高剂量组(562.85±110.33 mm^(3);0.34±0.13 g).病理切片结果显示ZBSO能够显著抑制荷瘤小鼠肿瘤组织的生长且对小鼠肝肾组织无损伤.此外,与化疗药顺铂相比,经过ZBSO治疗后小鼠的胸腺指数和脾脏指数较高.ZBSO对荷瘤小鼠体内的肿瘤细胞具有明显的抑制作用,跟化疗药相比对免疫器官的损伤性较小.

石墨烯远红外对Lewis肺癌荷瘤小鼠顺铂化疗免疫损伤的修复作用

目的探究石墨烯远红外对顺铂化疗后的Lewis肺癌荷瘤小鼠相关免疫指标的影响。方法建立Lewis肺癌荷瘤小鼠免疫损伤模型,将小鼠分为模型对照组(CTL)、单独化疗组(DDP)、石墨烯低功率组(G-Low,30℃)、石墨烯高功率组(G-High,35℃)。检测小鼠的肿瘤体积增殖率、胸腺指数和脾脏指数、脾脏淋巴细胞增殖活性及NK细胞杀伤活性、外周血中白细胞数量及CD4^(+)T/CD8^(+)T的比值。结果与CTL组相比,DDP组小鼠胸腺指数、脾脏指数明显降低(P<0.01);与DDP组相比,G-Low组小鼠肿瘤抑制率显著提升(P<0.05),G-High组小鼠肿瘤抑制率极显著提高(P<0.01)。G-High组小鼠胸腺指数、白细胞数量、外周血CD4^(+)T/CD8^(+)T比值、脾脏NK细胞的杀伤活性均显著高于DDP组(P<0.05)。结论石墨烯远红外对顺铂化疗造成的Lewis肺癌荷瘤小鼠的免疫损伤具有良好的修复作用,且能显著抑制瘤体的生长。

粪菌移植改善了PD-1单抗治疗卵巢癌荷瘤小鼠的免疫作用

目的:探讨粪菌移植(fecal microbiota transplantation,FMT)能否提高抗程序性细胞死亡蛋白1(anti-programmed cell death protein 1,PD-1)疗法治疗卵巢癌荷瘤小鼠的效果及可能的作用机制。方法:随机将20只5周龄的C57bl/6 SPF雌鼠分为4组,每组5只,分别为对照组(NC组)、FMT组、PD-1组、联合治疗(FMT联合PD-1)组。每组小鼠予广谱抗生素统一处理2周,构建假无菌小鼠模型。第0天,腹腔注射ID8-luc细胞,构建卵巢癌荷瘤小鼠模型。在药物治疗前后,分别给小鼠进行1次动物活体成像(in-vivo imaging system,IVIS),评价治疗效果。第30天即实验结束后,小鼠脱颈处死,取腹膜肿瘤组织进行HE和免疫组化染色,观察肿瘤组织病理变化。结果:联合治疗组比PD-1组治疗卵巢癌荷瘤小鼠效果更好,并且降低了肿瘤细胞PD-L1表达(P<0.05)和增加了肿瘤微环境(the tumor microenvironment,TME)中CD8+T细胞浸润(P<0.05)。结论:FMT通过增加肿瘤微环境中CD8+T细胞的浸润来提高PD-1单抗治疗卵巢癌荷瘤小鼠的效果。

参苓白术散联合5-氟尿嘧啶对CT26结直肠癌荷瘤小鼠瘤体生长及免疫功能的影响

目的探讨参苓白术散联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对CT26结直肠癌(CRC)荷瘤小鼠瘤体生长及免疫功能的影响。方法建立CT26 CRC荷瘤小鼠模型,随机分为对照组、模型组、5-FU组(5-FU 25 mg/kg)、联合组(参苓白术散10 g/kg+5-FU 25 mg/kg),于末次给药后比较4组小鼠肿瘤质量、抑瘤率和CD4^(+)、CD8^(+)、白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果5-FU组、联合组CT26 CRC荷瘤小鼠肿瘤质量均低于模型组,联合组CT26 CRC荷瘤小鼠肿瘤质量低于5-FU组,抑瘤率高于5-FU组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。模型组、5-FU组CT26 CRC荷瘤小鼠CD4^(+)、IL-2、TNF-α水平均低于对照组,CD8^(+)水平均高于对照组,联合组CT26 CRC荷瘤小鼠CD4^(+)、IL-2、TNF-α水平均高于5-FU组,CD8^(+)水平低于5-FU组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论参苓白术散可协同提高5-FU化疗效果并改善机体免疫状态。

龙葵碱对H_(22)荷瘤小鼠细胞膜流动性和膜蛋白水平的影响

目的观察龙葵碱对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜流动性和膜蛋白水平的影响。方法采用荧光探针DPH标记法测定肿瘤细胞膜流动性,考马斯亮蓝法测定肿瘤细胞膜蛋白水平。结果龙葵碱可显著降低H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜流动性,降低H22小鼠肿瘤细胞膜蛋白水平。结论龙葵碱是通过影响肿瘤细胞膜的流动性和肿瘤细胞膜上的蛋白水平恢复细胞的正常生理活性而达到抗肿瘤作用。

龙葵碱对H_(22)荷瘤小鼠肿瘤细胞膜唾液酸和封闭度的影响

目的研究龙葵碱对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜唾液酸(SA)水平和封闭度的影响。方法建立H22荷瘤小鼠模型,荷瘤小鼠分别sc生理盐水、环磷酰胺、龙葵碱(9.375、18.75、37.5mg/kg)。采用比色法测定H22小鼠肿瘤细胞膜SA水平和封闭度。结果龙葵碱可剂量依赖性地降低荷瘤小鼠肿瘤细胞膜SA水平和肿瘤细胞膜封闭度。结论龙葵碱通过降低H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜SA水平和肿瘤细胞膜封闭度起抗肿瘤作用。

女贞子多糖对荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的研究女贞子多糖对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法用LPS及ConA分别刺激B淋巴细胞及T淋巴细胞,研究女贞子多糖对荷瘤小鼠B淋巴细胞及T淋巴细胞的影响;用Yac-1细胞作为靶细胞,研究其对荷瘤小鼠NK细胞的影响,同时也研究女贞子多糖对单核巨噬细胞吞噬功能的作用。结果女贞子多糖促进了荷瘤小鼠脾脏B淋巴细胞和T淋巴细胞的增殖,提高其NK细胞活性,同时,增强了荷瘤小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能。结论女贞子多糖提高了荷瘤小鼠的免疫功能。

豆类丝核菌次级代谢产物的抑瘤作用及其对荷瘤小鼠巨噬细胞活性的影响

建立种植性肝癌(H22)实体瘤动物模型,并给荷瘤小鼠灌服含有苦马豆素(swainsonine,SW)且剂量分别为2.7和16.2mg/(kg·d)的豆类丝核菌次级代谢产物稀释液,分别于灌药前(0d)及灌药后4d和8d时测定其肿瘤抑制率和腹腔巨噬细胞吞噬百分率。结果表明,8d时 组(高剂量灌药组)的腹腔巨噬细胞吞噬率达到(33.99±1.56)%,显著高于 组(生理盐水对照组)的(27.95±4.03)%; (低剂量灌药组)、 2组肿瘤抑制率分别在4d时达到26.44%和33.91%,8d时达到46.98%和47.22%。说明该次级代谢产物能够使荷瘤动物巨噬细胞吞噬力增强,并能抑制种植性实体瘤(H22)的生长。表明该次级代谢产物具有抗肿瘤药用价值。

桑黄多糖对肝癌H_(22)荷瘤小鼠的治疗作用

目的:研究桑黄多糖对肝癌H_(22)荷瘤小鼠的治疗效果,并探讨其作用机制。方法:将60只昆明种小鼠随机分为6组:正常对照组、模型组、环磷酰胺阳性对照组及桑黄多糖低、中、高剂量组。除正常对照组外,其余各组小鼠均在左前肢皮下注射H_(22)肝癌细胞,建立肝癌模型,成模后给药15 d,比较各组相关指标。结果:与模型组比较,桑黄多糖低、中、高剂量组的抑瘤率分别为26.71%、34.48%、56.65%;除桑黄多糖低剂量组中的TNF-α无显著差异外,其他各给药组血清细胞因子IL-6、IL-2、TNF-α均显著升高(P<0.05);与阳性对照组比较,桑黄多糖各剂量组T、B淋巴细胞的增殖能力显著升高(P<0.05)。组织病理学观察显示桑黄多糖能促使肿瘤细胞坏死。结论:桑黄多糖对H_(22)荷瘤小鼠具有一定的抑瘤作用,其机制可能与免疫调节有关。

石见穿多糖对H22荷瘤小鼠的抗肿瘤免疫调节作用

前期研究发现石见穿多糖(polysaccharides from Salvia chinensis Benth.,PSSC)能有效抑制H22肝癌细胞在昆明小鼠体内的生长。在此基础上,本研究进一步探讨了PSSC对H22荷瘤小鼠免疫器官和免疫细胞的影响。通过在昆明小鼠右腋皮下注射H22肝癌细胞构建荷瘤小鼠模型。采用流式细胞术、免疫组织化学染色、酶联免疫法等实验方法评价PSSC对CD4+T细胞、CD8+T细胞、自然杀伤细胞(NK细胞)抗肿瘤免疫能力的影响。结果表明PSSC可以有效增加小鼠的脾脏/胸腺指数并促进Con A/LPS刺激的脾细胞增殖。同时,PSSC剂量依赖性地增加了荷瘤小鼠外周血单核细胞、脾脏及淋巴结中CD8+T细胞比例并提高CD8+T细胞与NK细胞在肿瘤组织中的组分含量。注射PSSC后,CD4+T细胞分泌免疫促进因子IFN-γ和IL-2的量增加,而分泌免疫抑制因子IL-4和IL-10的量减少。这一系列实验研究结果表明PSSC具有显著的抗肿瘤免疫增强活性。

黑木耳多糖对荷瘤小鼠细胞免疫功能的影响研究

目的:研究黑木耳多糖对荷瘤小鼠细胞免疫功能的影响。方法:通过细胞培养观察黑木耳多糖对荷瘤小鼠淋巴细胞增殖和IL2产生的影响,并利用激光共聚焦显微镜检测其对荷瘤小鼠淋巴细胞内游离钙离子浓度的影响。结果:黑木耳多糖能提高荷瘤小鼠的生存时间;黑木耳多糖可以全面提高荷瘤小鼠的细胞免疫功能:包括提高淋巴细胞的增殖;提高IL2的产生;提高淋巴细胞内钙离子浓度。结论:黑木耳多糖具有一定的抗肿瘤作用,此作用与调节机体的细胞免疫功能有关。

四君子汤总多糖对化疗荷瘤小鼠脾脏和派氏结及肠系膜淋巴细胞的影响

目的研究四君子汤总多糖(SJZPS)对化疗荷瘤小鼠脾脏、派氏结(PPs)、肠系膜淋巴结(MLNs)淋巴细胞的影响。方法将BALB/c小鼠随机分为对照组、肿瘤模型组,环磷酰胺(CY)化疗组和四君子汤总多糖治疗(CY+SJZPS)组。CY组和CY+SJZPS组每天腹腔注射CY20 mg.kg-1,CY+SJZPS组同时灌胃SJZPS 1g.kg-1,连续给药9 d。应用流式细胞术检测脾脏、小肠PPs和MLNs中T、B淋巴细胞比例、活化水平以及T细胞亚群的变化。结果 SJZPS能提高肠道PPs中B淋巴细胞的比例和活化水平,降低MLNs中CD4+/CD8+的比值,改善化疗所致的肠道黏膜免疫损伤;SJZPS能提高化疗荷瘤小鼠脾脏淋巴细胞中B淋巴细胞的比例,及T、B淋巴细胞的活化水平,同时降低CD4+/CD8+的比值以改善化疗荷瘤小鼠系统免疫功能,其中SJZPS对B细胞的作用更加明显。结论 SJZPS能有效拮抗化疗药物所致的小鼠肠黏膜免疫功能损伤,同时对整体免疫功能具有改善作用。

玉屏风散对S180荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响

目的:探讨玉屏风散对荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响。方法:采用体外培养S180肉瘤细胞,接种健康小鼠,建立荷瘤小鼠模型,并给予玉屏风散治疗,观察计算抑瘤率,检测巨噬细胞吞噬活性,巨噬细胞NO分泌量,自然杀伤细胞(NK)活性,T淋巴细胞增殖能力及白介素-2(IL-2)的产生及活性。结果:玉屏风散可提高荷瘤小鼠吞噬细胞的功能,增加巨噬细胞NO分泌量,促进荷瘤小鼠白介素-2(IL-2)的产生,淋巴细胞的转化、及NK细胞活性。结论:玉屏风散可增强荷瘤小鼠的免疫功能,抑制模型鼠肿瘤的生长。

当归贝母苦参丸对顺铂化疗H22荷瘤小鼠肿瘤及肝脏、肾脏和胸腺组织病理形态的影响

目的观察当归贝母苦参丸对顺铂化疗H22荷瘤小鼠肿瘤及肝脏、肾脏和胸腺组织病理形态的影响,探讨其对顺铂化疗的增效减毒作用。方法建立小鼠H22肝癌皮下移植瘤模型,随机分为模型组、顺铂组、当归贝母苦参丸组、当归贝母苦参丸联合顺铂组,另设空白组作对照。造模后第8日开始给药,连续14 d,动态监测荷瘤小鼠肿瘤体积;第15日处死小鼠,镜下观察各组小鼠肿瘤、肝脏、肾脏和胸腺组织的病理形态变化。结果给药第10日,与模型组比较,各给药组肿瘤体积明显减小(P<0.01),当归贝母苦参丸联合顺铂组最为明显;各给药组肿瘤细胞密度、异型性和病理性核分裂像均明显降低(P<0.01),其中当归贝母苦参丸联合顺铂组效果优于顺铂组,还伴有明显的淋巴细胞浸润和纤维组织增生(P<0.01)。顺铂组肝脏、肾脏和胸腺病理变化较空白组、模型组加重(P<0.01),而当归贝母苦参丸联合顺铂组病变较顺铂组减轻(P<0.05)。结论当归贝母苦参丸可以增强顺铂对H22荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用,减轻顺铂化疗H22荷瘤小鼠的肝脏、肾脏和胸腺毒性。