莲子心中具有心肌细胞保护活性的化学成分研究

为了寻找莲子心(Nelumbinis Plumula)具有心肌细胞保护活性的化学成分,本研究采用多种柱色谱技术分离和纯化莲子心的80%乙醇提取物,运用^(1)H NMR、^(13)C NMR等波谱技术和文献数据比对鉴定化合物结构,并对化合物进行心肌细胞保护活性筛选。从莲子心80%乙醇提取物分离纯化得到14个化合物,分别鉴定为柚皮苷(1)、山柰酚-3-O-β-D-芸香糖苷(2)、芹菜素-6-C-β-L-阿拉伯糖-8-C-β-D-葡萄糖苷(3)、木犀草素-7-O-β-D-新橙皮苷(4)、木犀草素-3′-O-β-D-葡萄糖苷(5)、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(6)、橙皮苷(7)、异夏佛塔苷(8)、松脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷(9)、对香豆酸-4-O-β-D-葡萄糖苷(10)、对香豆酸(11)、苯乙基6-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基-β-D-葡萄糖苷(12)、淫羊藿次苷D1(13)、淫羊藿次苷F2(14)。化合物1~6、9、11~14均为首次从莲子心中分离得到。黄酮类化合物1~8对缺氧/复氧损伤下的小鼠HL-1心肌细胞具有明显的保护作用,对小鼠HL-1-STAT3-Luc细胞中STAT3的表达也具有促进作用,且均具有剂量依赖性。

莲子心总生物碱及总生物碱高氯酸盐对MG63细胞迁移和迁移体生成的影响

目的 研究莲子心总生物碱(TAL)和总生物碱高氯酸盐(TALP)对MG63细胞迁移及迁移体生成的影响,探讨其治疗骨肉瘤的作用机制。方法 将对数生长期的MG63细胞,分为空白组、TAL组和TALP组,空白组不加药物,TAL组和TALP组以10、20、40、60、80、100μg/mL TAL和TALP培养液分别干预24、48 h后采用CCK8法检测各组细胞增殖率;根据CCK8实验结果,取24 h IC_(50)的一半剂量约为50.0μg/mL稀释成不同浓度的含药培养基来干预细胞,即2组实验组分别加入50.0、25.0、12.5、6.25μg/mL TAL和TALP干预24 h后采用划痕实验检测各组细胞迁移率,并计算迁移抑制率为50%的药物浓度;MG63细胞传代培养15~20 h后采用激光共聚焦显微镜、透射电镜观察细胞迁移体的生成和形态结构;将细胞分成空白组、TAL组和TALP组,后2组根据划痕实验结果,取细胞迁移抑制率约为50%时的药物浓度进行干预15~20 h,计算并比较各组迁移体生成的数量变化。结果 与空白组比较,20、40、60、80、100μg/mL TAL和40、60、80、100μg/mL TALP干预后细胞增殖率均显著下降(P<0.05);TAL和TALP的12.5、25.0、50.0μg/mL组细胞迁移率显著下降(P<0.05),迁移抑制率为50%的药物浓度分别为TAL 15.05μg/mL,TALP 20.16μg/mL;激光共聚焦显微镜观察显示MG63细胞迁移过程中尾部可见膨大的囊泡,透射电镜下观察到囊泡为迁移体石榴样结构;与空白组比较,TAL 15μg/mL组和TALP20μg/mL组迁移体生成的数量显著减少(P<0.05)。结论 TAL和TALP对骨肉瘤细胞迁移有抑制作用,其机制可能与影响细胞迁移体的生成有关。

莲子心米曲霉发酵物对特应性皮炎缓解效果的研究

该研究旨在探究莲子心经米曲霉发酵后其产物在细胞层面对特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)的潜在治疗作用。通过HPLC监测莲子心米曲霉发酵过程,并采用液相色谱-飞行时间-质谱联用技术鉴定了其特征转化产物结构。在肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)/干扰素-γ(interferon-gamma,IFN-γ)双炎症因子诱导的AD细胞模型中,对米曲霉莲子心发酵前后的不同组分,进行了白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、巨噬细胞来源趋化因子(macrophage-derived chemokine,MDC)、胸腺激活调节趋化因子(thymus and activation-regulated chemokine,TARC)和氧化应激(谷胱甘肽、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和丙二醛)水平的考察。结果表明,通过米曲霉发酵能有效分解莲子心中的异莲心碱及甲基莲心碱,生成小分子苄基异喹啉类生物碱衍生物。在细胞层面的评价结果表明,相比于发酵前,莲子心发酵产物不仅可以更好的缓解模型中HaCaT细胞的氧化应激反应,而且对MDC、TARC和IL-6的分泌具有更强的负调控作用。综上,米曲霉可对莲子心中的特征性生物碱进行转化,且产物在TNF-α/IFN-γ双炎症因子诱导的AD细胞模型中表现出更强的抗炎效果。该研究为后续开发发酵来源的功能性食品、化妆品以及药品提供理论依据和新思路。

超声波辅助乙醇提取莲子心总黄酮及其抗氧化活性的研究

通过超声波辅助乙醇提取莲子心总黄酮,用单因素及正交实验选择最佳提取工艺条件,研究了黄酮提取物对羟基自由基的清除效果及抗油脂氧化作用。结果表明,当用80%乙醇按料液比1:25(g:mL)在超声功率250W及超声温度50℃的水浴中提取30min后,莲子心黄酮的提取率为2.23%。该提取物具有清除羟基自由基及抗油脂氧化作用,对植物油的抗氧化能力强于对动物油的抗氧化能力,表明莲子心黄酮提取物可作为天然抗氧化剂使用。

莲子心中黄酮类物质的提取和测定

采用碱溶酸析法和微波间歇加热提取法,成功地提取了莲子心中黄酮类物质。经HCl-锌粉反应和红外光谱鉴定,提取物为黄酮类物质。另外,利用分光光度法,以芦丁标准品为标准对莲子心中的总黄酮进行了测定,其质量分数分别为4.135mg/g和6.266mg/g。同时讨论了时间对测定方法的影响,结果表明,显色时间在4min内稳定。

加速溶剂萃取-高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱联用分析莲子心中生物碱

建立了加速溶剂萃取-高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱(ASE-HPLC-DAD-ESI-TOF/MS)联用技术分析莲子心中生物碱类化合物的方法。采用ASE法对药材进行提取,萃取温度为100℃,压力为9646kPa,时间为10min。采用HPLC-DAD-ESI-TOF/MS联用技术对其中的化学成分进行了分离鉴定,HPLC采用AgilentEclipseXDB-C18色谱柱;流动相为0.1%三乙胺溶液,用氨水调pH=8.0(A),色谱纯乙腈(B),梯度洗脱;进样量为20μL,流速:1.0mL/min;检测波长:282nm。ESI-TOF/MS采用正离子电离模式,毛细管电压:4500V;喷雾气压:310.05kPa;干燥气(N2)流速:10.0L/min;干燥气温度:350℃,破碎电压:150V。鉴定了其中的6种生物碱分别为:前荷叶碱、莲心季铵碱、莲心碱、异莲心碱、荷叶碱和甲基莲心碱。

莲子心及Nef对实验性糖尿病及肥胖大鼠模型的影响

目的 观察莲子心及甲基莲心碱 (neferine ,Nef)对链脲佐菌素 (streptozotocin ,STZ)和高糖高脂制作的大鼠糖尿病及肥胖模型的影响 ,并与二甲双胍 (metformin ,Met)作对照。方法 STZ(30mg/kg)一次性ip后给予高糖高脂饮食 8周造模 ,莲子心乙醇提取物 5 0 0mg(生药 ) /kg、Nef 10mg/kg灌胃给药 1个月。结果 Nef用药后空腹血糖 (FBG)显著低于给药前及模型组 (P <0 .0 1) ,与Met组相当 ,莲子心空腹血糖 (FBG)低于模型组 (P <0 .0 5 ) ;莲子心的总胆固醇 (TCHO)、甘油三脂(TG)和低密度脂蛋白 (LDL -C)显著低于模型组 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1) ,而Nef的TCHO、TG显著低于模型组 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。结论 提示莲子心及Nef对实验性糖尿病及肥胖大鼠有一定的降低血糖及调节血脂作用。

LC/MS/MS鉴定莲子心生物碱在Caco-2细胞中的代谢产物

目的：应用LC/MS/MS鉴定去甲乌药碱、莲心碱、异莲心碱、荷花碱4种莲子心生物碱在Caco-2细胞中的代谢产物,推测其代谢途径。方法：100μmol/L生物碱作用Caco-2细胞3～12 h后收集并纯化样品,采用LC/MS/MS分析鉴定代谢产物。结果：去甲乌药碱的代谢产物有甲基化去甲乌药碱和去甲乌药碱葡萄糖醛酸苷;莲心碱和异莲心碱的代谢产物分别是去甲基莲心碱和去甲基异莲心碱;荷花碱的主要代谢物为莲心碱、异莲心碱和它们的进一步去甲基产物。结论：LC/MS/MS操作简便,可快速鉴定Caco-2细胞中的莲子心生物碱的代谢产物。莲子心生物碱主要代谢途径有甲基化、去甲基化和葡萄糖醛酸化。

紫外分光光度法测定莲子心总黄酮的含量

目的对莲子心中总黄酮的含量方法进行研究。方法提取后的样品溶液,经聚酰胺纯化后,稀释,以芦丁为对照品,用亚硝酸钠及硝酸铝在碱性溶液中显色后,用紫外分光光度法测定,测定波长为500 nm。结果测得37个莲子心药材中总黄酮的含量,含量最高为1.66%,最低为0.46%;加样回收率为99.53%,RSD(%)为2.03%。结论样品经提取、纯化后即可直接进行分析测定,方法简便、快速,可用于莲子心中黄酮类化合物的含量测定。

莲子心中酚性生物碱3种主要成分定量分析及其特征图谱研究

目的 :建立同时测定莲子心中酚性生物碱 :莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱含量的RP -HPLC法以及酚性生物碱的特征图谱。方法 :采用RP -HPLC法 ,流动相为乙腈 水 三乙胺 (2 5∶75∶0 .1 ,用磷酸调 pH3.3) ,紫外检测波长 2 82nm ,流速0 .8mL·min-1 ,进样量 2 0 μL。结果 :莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱线性方程显示线性关系良好。特征图谱研究确定了酚性生物碱 1 6个共有峰。结论 :本方法简便、准确 ,重现性好 ,专属性强 ,可为莲子心中生物碱类物质标准提取物质量控制提供参考。

离子对反相HPLC法测定10个产地莲子心中莲心碱的含量

目的 建立用离子对反相 HPL C法测定莲子心药材中莲心碱含量的方法。方法 选用 ODS色谱柱 ,流动相为甲醇 -水 -冰醋酸 -辛烷磺酸钠 -乙酸钠 (5 5∶ 45∶ 0 .6∶ 10 m mol/ L∶ 5 m mol/ L ) ,检测波长 2 82 nm ,流速为1.0 m L/ min,柱温为 40℃。结果 莲心碱在 0 .0 0 5～ 0 .146 m g/ m L范围内 ,线性关系良好 (r=0 .9999) ;平均回收率为 10 0 .6 % ,RSD为 1.2 1% (n=6 )。结论 该法准确 ,快速 ,灵敏 ,重现性好 。

莲子心总生物碱滴丸的制备工艺及含量测定

目的:研究影响莲子心总生物碱滴丸制备工艺的各种因素,确立最佳制备工艺和含量测定方法。方法:以滴丸的溶散时限、圆整度及丸重为指标,采用正交设计试验法对影响因素进行考察。同时采用HPLC测定滴丸中莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱的含量。结果:最佳工艺为总生物碱提取物与含75%PEG4000复合基质比例为1∶5,药液温度85℃,冷却液为二甲基硅油,冷却温度10℃,冷却柱长为100 cm,滴距4 cm,滴速30滴/m in;滴丸中生物碱平均质量分数:莲心碱为24.6 mg.g-1、异莲心碱为24.7 mg.g-1、甲基莲心碱为79.4 mg.g-1,总生物碱为128.7 mg.g-1。结论:制得的滴丸溶散时限、圆整度及丸重均符合质量要求,测定方法简便易行。

莲子心多糖的提取、分离和抗氧化活性研究

干燥的莲子心经机械粉碎、乙醇脱脂、沸水提取、乙醇沉淀及中性酶和Sevag法除蛋白得其粗多糖,经DE-AE-Cellulose-32阴离子交换和SephacrylTMS-200凝胶过滤层析得组份ELPS-Ⅰ和混合物Ⅱ,Ⅱ再经过DEAE-Cel-lulose-32柱层析得组份ELPS-Ⅱ.GC-MS法测定粗多糖、ELPS-Ⅰ和ELPS-Ⅱ的中性糖组成.凝胶过滤色谱(GPC)法测得ELPS-Ⅰ和ELPS-Ⅱ的重均分子量分别为4.97×104Da和2.96×106Da.β-胡萝卜素漂白实验结果显示:莲子心粗多糖具有显著的抗氧化活性(维生素C作为阳性对照).

莲子心非酚性生物碱和非生物碱类成分的研究

目的研究睡莲科植物莲成熟种子中的幼叶及胚根(莲子心)中非酚性生物碱和非生物碱类成分。方法利用溶剂提取、聚酰胺柱和硅胶柱色谱分离纯化莲子心中非酚性生物碱和非生物碱类成分,根据理化性质和光谱数据进行化合物结构的鉴定。结果从莲子心中得到8个化合物,分别鉴定为:棕榈酸(palmitic acid,Ⅰ),棕榈酸乙酯(ethylpalmitate,Ⅱ),三棕榈酸甘油酯(glycerol tripalmtate,Ⅲ),棕榈酸酰胺(palmitamide,Ⅳ),β-谷甾醇(-βsitosterol,Ⅴ),胡萝卜苷(daucos-terol,Ⅵ),N-methylcorydaldine(Ⅶ),荷叶碱(nuciferine,Ⅷ)。结论化合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅶ为该植物中首次发现。

莲子心降血糖活性部位的筛选研究

目的对中药莲子心降血糖的活性部位进行筛选研究。方法对药材莲子心进行提取分离,得到70%乙醇提取物、总生物碱类成分及总黄酮类成分3个部位。以这3个部位分别给四氧嘧啶造模的糖尿病小鼠灌胃,观察它们对升高的小鼠血糖值的影响。结果乙醇提取物组与总生物碱组对四氧嘧啶造成的小鼠血糖值升高有明显的拮抗作用,其血糖值与空白组及给药前自身血糖值相比,有显著性差异(P<0.05,P<0.01);总黄酮组作用则不明显,其血糖值与空白组及给药前自身血糖值相比,无显著性差异(P>0.05)。结论提示莲子心中降血糖的活性部位为生物碱类成分而非黄酮成分。

莲子心甾醇提取工艺优化及其组成分析

为优化提取莲子心甾醇工艺,考察提取时间、提取温度、料液比、提取次数对总甾醇得率的影响。通过响应面试验优化丙酮提取甾醇条件,并结合气相色谱-质谱法对甾醇组成进行分析。结果表明:提取莲子心甾醇的最佳工艺条件为提取时间12 min、提取温度44℃、料液比1∶12(g/m L)、提取3次(即以料液比1∶12(g/m L)提取12 min,重复操作3次)。此条件下,莲子心总甾醇得率为(1.67±0.11)%。甾醇主要以酯态形式存在,占总甾醇含量的84.97%,游离态仅占11.95%。气相色谱-质谱法共检测到7种甾醇。其中,谷甾醇(58.27%)相对含量最高,其次是Δ5-燕麦甾烯醇(22.99%)和菜油甾醇(12.64%)。甘油酯及甾醇酯的脂肪酸组成中,亚油酸等不饱和脂肪酸相对含量较为丰富,占脂肪酸总量77%左右;甾醇酯中山嵛酸、木焦油酸等长碳链饱和脂肪酸相对含量显著高于甘油酯。

薄层扫描法测定莲子心中莲心碱的含量

用冷浸法相回流法提取,测得莲心碱的含量分别为0.853%和0.939%,其回收率分别为97.9%和100.9%。

不同产地莲子心脂溶性成分的GC-MS分析

目的对7种不同产地莲子心中脂溶性成分进行GC-MS定性鉴别和指纹图谱分析。方法用氯仿提取莲子心的脂溶性成分,经甲酯化后,以气相-质谱联用技术(GC-MS)结合相对保留时间鉴定脂溶性的物质组成,采用面积归一化法测定它们在样品中的相对含量,并通过Excel相似度评价和SPSS聚类分析等统计手段,比较这7种莲子心脂溶性成分存在的差异。结果莲子心的40多种脂溶性成分被GC分离;16种被MS鉴定,其中有14种为脂肪酸类化合物,24种为酮类物质。采用2种色谱指纹图谱相似度计算法所得结果表明,不同产地的莲子心成分的相似度均在0.97以上;经对其脂溶性成分的逐步聚类分析,人为将这7种莲子心分为3类,但并未发现它们之间具有显著的因产地不同造成的区域性差异。结论初步认定7种不同产地莲子心的脂溶性成分具有高度一致性,在基本物质组成上并不存在地域的区别。

莲子心总黄酮的大孔吸附树脂纯化及其抑菌活性

为优选莲子心总黄酮的纯化方法,测试其抑菌活性,采用X-5型大孔吸附树脂对莲子心总黄酮进行纯化工艺研究,并利用杯碟法,以芦丁为对照,研究了莲子心总黄酮的抑菌活性.结果表明,X-5型大孔吸附树脂纯化莲子心总黄酮的最佳工艺为:上样液含量为5.1 mg·mL-1,上样液pH为6,上样量为2 BV,洗脱剂为4 BV 50%乙醇,洗脱剂流速为2 BV·h-1.纯化后莲子心总黄酮的纯度达50%.莲子心总黄酮对霉菌(青霉、根霉)无明显的抑菌作用,但对细菌(金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、假单胞杆菌和枯草芽孢杆菌)的抑菌作用明显,并获得最低抑菌浓度.