蛹虫草-浙贝母-黑豆菌质固体双向发酵工艺及其抗肿瘤活性研究

为实现浙贝母、黑豆高值化利用,开发一种具有抗肿瘤功效的蛹虫草菌质,将浙贝母-黑豆(浙贝母黑豆=21,质量比)作为蛹虫草(Cordyceps militaris)菌株发酵基质,以多酚含量为评价指标,采用单因素及响应面试验方法优化蛹虫草-浙贝母-黑豆菌质固体双向发酵工艺,采用MTT法测定发酵菌质体外抗肿瘤活性。结果表明,最佳发酵条件为料液比11.2(g/mL),接种量20 mL/100 g,培养温度21℃,培养时间29 d。优化条件下,菌质中多酚含量(6.24 mg/g)与模型预测值(6.35 mg/g)偏差为1.78%,且显著高于基质中多酚含量(1.19 mg/g);发酵菌质具有一定的体外抗肿瘤活性,其水提物对S180肿瘤细胞体外增殖抑制率表现出良好的量效及时效关系,以质量浓度相当于生药量200 mg/mL的水提液作用48 h条件下的细胞增殖抑制率最强,达到了73.08%,且在相同质量浓度及作用条件下,发酵菌质对S180肿瘤细胞的体外增殖抑制率是基质的1.10~1.88倍。

蝉花菌质对菜豆苗期生长的影响

为了探究蝉花菌质对菜豆苗期生长的影响,研究采用盆栽试验,通过设置试验组(无菌土+蝉花菌质)与对照组(无菌土),测定菜豆苗期生长的农艺性状指标、根系指标、叶绿素含量。结果表明,与对照组相比,添加蝉花菌质提高了菜豆幼苗总根长、根体积及叶绿素含量,降低了其总根尖数、分枝数和交叉数;在15 d时,施加蝉花菌质显著提高了菜豆的最大叶长和叶宽;在30 d时施加蝉花菌质显著提高了株高。在15 d时,与对照组相比,试验组的株高、叶片数、茎粗分别提高了36.36%、25.00%、30.97%;在30 d时,试验组的株高较对照组显著提高40.83%,茎粗、叶片数、最大叶长及最大叶宽与对照组相比均有所提高。此外,与对照组相比,试验组的地上部分鲜质量、地下部分鲜质量、地上部分干质量、地下部分干质量、根冠比均有所提高。因此,在育苗土中加入蝉花菌质,能够有效促进菜豆的苗期生长。

猴头菌-黄芪渣菌质总皂苷的优化提取及抗氧化活性研究

试验研究经双向固体发酵的猴头菌-黄芪渣菌质总皂苷(HAMTS)的优化提取方案,并测定其抗氧化活性。采用香草醛法测定发酵前后黄芪渣与HAMTS中总皂苷的含量,采用响应面法结合超声法优化提取HAMTS,并分析HAMTS的还原力及对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS+)自由基的清除能力。结果显示:发酵后HAMTS含量为10.34 mg/g,提升了63.35%。在最佳提取工艺条件下,即液料比19 mL/g、超声时间16 min、乙醇体积分数74%、超声功率62 W,HAMTS提取量为11.48 mg/g。在HAMTS浓度为10 g/L时,HAMTS的还原力以及DPPH和ABTS+自由基的清除率分别为0.80、96.48%和56.12%。研究表明,试验建立的回归模型可用于预测HAMTS提取量,且HAMTS具有较好的抗氧化活性,具有开发为饲料添加剂的潜力。

药用真菌新型固体发酵工程与槐芪菌质^((F))的研制

目的 研制抗乙肝病毒等新药槐芪菌质 。方法 采用双向性发酵工程。结果 槐耳菌和黄芪构成发酵组合所产槐芪菌质 所提成分有促进机体免疫功能、抗病毒与保肝功效。结论 药性菌质的优良作用显示双向性发酵工程可能成为中药新药研制的新途径 ,各种菌质将成为中药的新领域。

芝芪菌质多糖对AA肉鸡生长、免疫和肉品质的影响

以AA肉鸡为研究对象,将其随机分为对照组和试验1-3组,试验1-3组基础日粮中分别添加芝芪菌质多糖0.56、1.12和2.24 g.kg-1,研究芝芪菌质多糖对肉鸡生长性能、肉品质及血清抗体水平和α-干扰素含量的影响。结果表明：试验2、3组全期平均增重和料肉比显著高于对照组（P〈0.05）。各试验组在结合疫苗使用的情况下,35日龄新城疫抗体滴度试验1-3组比对照组分别提高23.0%、25.6%和15.4%;42日龄抗体滴度试验3组比对照组提高28.6%。血清α-干扰素含量试验组均显著高于对照组（P〈0.05）。芝芪菌质多糖能改善肉色和降低失水率。由此可见,芝芪菌质多糖能促进肉鸡生长,改善肉品质,有效提高肉鸡体免疫力。

蝉花菌质主要营养成分和活性成分分析

蝉花是寄生在蝉幼虫上的一种虫草菌,蝉花菌质是指由蝉花的营养菌丝和经发酵的培养基质组成的营养物质。通过对蝉花菌质营养成分和活性成分的研究和分析,结果表明:蝉花菌质蛋白含量为16.17%、总糖含量为38.87%、脂肪酸含量为1.43%,其中不饱和脂肪酸含量达1.18%。通过对蝉花菌质氨基酸的分析,在FAO/WHO的评分模式中,其第一限制氨基酸是赖氨酸。蝉花菌质VE和VC的含量分别达1 833mg/kg和239mg/kg。此外,蝉花菌质中还有腺苷、甘露醇等虫草类真菌的活性成分。该研究结果为蝉花菌质的进一步开放利用奠定了理论基础。

发酵法生产灵芝-蕨渣菌质可溶性膳食纤维的工艺优化

为了获得发酵法制备灵芝-蕨渣菌质可溶性膳食纤维的最适工艺参数,以基质蕨渣比例、基质含水量和培养温度为因子,以可溶性膳食纤维得率为响应值,采用响应面试验设计进行试验。结果表明:可溶性膳食纤维最适制备条件为基质蕨渣质量分数84%、基质含水量为63%、培养温度27℃。在此条件下,可溶性膳食纤维得率的预测值为13.034%,验证实验所得可溶性膳食纤维得率为12.885%。回归方程的预测值和实验值差异不显著,所得回归模型拟合情况良好,达到设计要求。在本实验优化的条件下,以发酵法制备灵芝-蕨渣菌质的可溶性膳食纤维得率(12.885%)显著高于蕨渣原料的可溶性膳食纤维得率(1.733%)。

Box-Behnken响应面设计法优化黑木耳菌质多糖提取工艺

为了优化黑木耳菌质多糖的提取工艺,采用Box-Behnken设计方法,研究水提温度、水提时间、液料比及其交互作用对黑木耳菌质多糖得率的影响。应用Design Expert软件和响应面分析相结合的方法,模拟得到回归方程的预测模型和可信度,分析得到最佳的提取条件为:水提温度81.59℃,水提时间81.40 min,液料比36.42∶1。黑木耳菌质多糖得率的预测值为7.92 mg/g,采用上述最佳提取条件进行验证试验,测得菌质多糖得率为7.79 mg/g。采用响应法优化得到的黑木耳菌质多糖提取条件参数准确可靠,该研究为黑木耳菌质多糖的工业化生产提供了必要的技术支持。

芝芪菌质水提物活性成分与抗氧化活性研究

对药性菌质（中试产品）中粗多糖的含量进行了测定,并对其稳定性进行了考察,初步得出粗多糖的平均含量约为0.9%,药性菌质在不同温度和湿度条件下分别处理5 d和10 d,粗多糖含量在处理前后没有显著性差异。同时还测定了芝芪菌质水提物还原力和超氧阴离子自由基清除率,结果表明,发酵40-50 d的芝芪菌质样品的抗氧化性较强。

植物源大蒜菌质活素粉对扬州鹅生产性能和激素分泌的影响

本研究旨在日粮中添加4种不同剂量植物源大蒜菌质活素粉(Botanical activity flour of garlic bacterium substance,GBS)研究其对扬州鹅生产性能和激素分泌的影响,为其开发利用提供理论依据和应用参考。选择1日龄扬州鹅240只,公母各半。随机分成5组:对照组使用基础日粮,试验1、2、3、4组分别在基础日粮中添加GBS0.25、0.50、1.00、2.00 g.kg-1配合料。结果表明:与对照组相比,总体1～60日龄,试验各组体增质量(BWG)分别提高5.91%(P<0.05)、8.18%(P<0.01)、13.64%(P<0.01)、13.64%(P<0.01);试验4组采食量(FI)提高8.79%(P<0.01);试验2、3组饲料转化率(FCR)分别降低7.55%(P<0.05)、9.37%(P<0.01)。试验2、4组胸肌粗蛋白质含量分别提高22.88%(P<0.05)、17.81%(P<0.05);试验各组胸肌粗脂肪含量分别降低22.82%(P<0.05)、31.21%(P<0.05)、44.63%(P<0.05)、33.22%(P<0.05)。试验3、4组T3水平分别提高11.76%(P<0.01)、14.38%(P<0.01);试验各组T4水平分别提高7.75%(P<0.01)、14.06%(P<0.01)、14.30%(P<0.01)、66.52%(P<0.01)。试验1、3、4组胰高血糖素(Glu)水平分别降低14.78%(P<0.01)、14.45%(P<0.01)、16.05%(P<0.01)。试验2、3、4组采食后3 h血清胰岛素(Ins)平均水平分别提高14.85%(P<0.01)、12.54%(P<0.01)、23.27%(P<0.01);试验1、3、4组血糖平均水平分别降低7.96%(P<0.01)、6.80%(P<0.01)、11.30%(P<0.01)。结果提示,扬州鹅日粮中添加一定剂量的GBS对其生产性能和激素分泌有促进作用,且在本试验的4个剂量中,以添加GBS 2.00 g.kg-1配合料组效果最佳。

多指标权重分析与正交设计法优选黄芪女贞方菌质醇沉工艺

目的采用多指标正交试验优选黄芪女贞方菌质的最佳醇沉工艺。方法以黄芪甲苷、特女贞苷转移率及干膏得率为评价指标,选择药液浓缩比(A)、乙醇浓度(B)、含醇量(C)、醇沉时间(D)为考察因素,进行L9(34)正交试验,结合层次分析法及多指标试验全概率评分法优选最佳醇沉工艺。结果建立了黄芪女贞方菌质中黄芪甲苷、特女贞苷含量的HPLC测定方法。以黄芪甲苷转移率为评价指标,影响因素为C3>B3>A2>D2;以特女贞苷转移率为评价指标,影响因素为A3>D2>C2>B3;以干膏得率为评价指标,影响因素为A3>C1>B3>D2。加权评分优化后确定的最佳醇沉工艺为:菌质∶提取液=1∶1.5,采用85%乙醇,含醇量75%,醇沉18h。结论黄芪女贞方菌质中黄芪甲苷和特女贞苷在优选的醇沉工艺条件下转移率较高,达到较好的纯化效果,工艺稳定可行,可为进一步研究提供依据。

灵丹菌质发酵工艺的初探

目的筛选灵芝与丹参双向固体发酵菌株,优化发酵工艺参数,获得灵丹菌质最适的发酵组合及工艺参数。方法由不同灵芝菌株与丹参药性基质组成不同的发酵组合,在一定条件下进行双向固体发酵,以菌丝长势,菌质药效、毒性、化学成分为指标进行发酵菌株筛选及发酵工艺参数优化。结果灵芝菌株ZL30与丹参双向固体发酵时菌丝长势尤佳、菌质活血化瘀药效显著,为最优发酵菌株,其组合为最适发酵组合,最佳发酵工艺参数为:基质含水量70%、灭菌温度100℃、灭菌时间60 min、发酵终点40 d。结论以药用真菌双向性固体发酵工程为原理和方法进行灵丹双向固体发酵及灵丹菌质的研发、利用,切实可行。

人参药性菌质对小鼠Lewis肺癌的作用

目的观察人参药性菌质对小鼠Lewis肺癌的抑制作用并初步评价其一般毒性及对免疫功能的影响。方法将Lewis肺癌小鼠随机分为模型对照组、顺铂组、参一胶囊组、人参药性菌质低、中、高(2、4、8 g/kg)剂量组,每组12只,另取12只健康小鼠做为空白对照组,给药后26 d取小鼠肿瘤、胸腺、脾脏、肝脏等脏器称重,检测脾脏CD4/CD8比值,检测脾脏杀伤性T细胞(CTL)的产生情况。结果与模型对照组比较,人参药性菌质各剂量组均可抑制肿瘤LLC成瘤(P<0.05或P<0.01);与空白对照组比较,人参药性菌质各组脾脏指数及胸腺指数无明显差异;与模型对照组比较,人参药性菌质各剂量组的CD4和CD8细胞百分比明显升高(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,人参药性菌质各组CD4/CD8比值降低(P<0.05);与模型对照组比较,人参药性菌质各剂量组CTL数量及IFN-gamma细胞数增多(P<0.05或P<0.01)。结论人参药性菌质在体内有抗小鼠LLC成瘤的作用,无肝脏、胸腺、脾脏毒性;并且能够调节CD4/CD8比值,增加CTL细胞产生及IFN-γ细胞数,具有增强机体免疫功能的作用。

灵芪菌质对凡纳滨对虾生长及非特异性免疫的影响

在基础饲料中添加灵芝与黄芪共发酵产物——灵芪菌质,探讨灵芪菌质对凡纳滨对虾生长性能及非特异性免疫指标的影响。试验选用平均体质量(0.51±0.03)g的凡纳滨对虾幼虾,随机分为5组,每组3个重复,每个重复30尾虾。采用单因子试验设计,在基础饲料中分别添加0%、0.5%、1.0%、1.5%、2.0%的灵芪菌质。试验虾在水温为22～30℃的循环玻璃纤维水槽中饲喂60d。试验结果表明,添加1%灵芪菌质组与对照组相比,对虾相对质量增加率提高了31.88%(P<0.05),饵料系数降低了14.37%(P<0.05),成活率提高了15.16%(P<0.05);对虾血清酚氧化酶活力和超氧化物歧化酶分别提高了99.94%(P<0.05)和26.79%(P<0.05)。添加1.5%灵芪菌质处理组与对照组相比,对虾酸性磷酸酶活力和碱性磷酸酶活力分别提高了128.44%(P<0.05)和111.55%(P<0.05),对凡纳滨对虾的副溶血弧菌攻毒免疫保护率高达73.34%(P<0.05)。本次试验,凡纳滨对虾溶菌活性与灵芪菌质添加量呈一定的正相关(y=1.802x+11.104,r2=0.9378,P<0.05)。添加灵芪菌质可显著提高凡纳滨对虾的生长性能,改善其非特异性免疫力。

玉米源异麦芽寡糖菌质粉对黄羽肉鸡生长性能和激素分泌的影响

本研究在饲粮中分别添加3个不同剂量的玉米源异麦芽寡糖菌质粉(IBS),旨在研究其对黄羽肉鸡生长性能和内源性激素分泌的影响。选择1日龄黄羽肉鸡270只,公母各占1/2,随机分成5组。对照1组饲喂基础饲粮,对照2组在基础饲粮中添加4.27 g/kg市售食品级低聚异麦芽寡糖粉,试验1、2、3组分别在基础饲粮中添加6、12、24 g/kg IBS。结果表明:1)与对照1组相比,试验1、2、3组死亡率分别降低33.30%、49.95%、49.95%;1～52日龄,试验1、2、3组平均日增重分别提高8.80%(P<0.01)、11.02%(P<0.01)、7.80%(P<0.01);试验1、2、3组料重比分别降低8.73%(P<0.05)、9.09%(P<0.01)、6.91%(P<0.05);试验2组血清中甲状腺素含量提高8.68%(P<0.05);试验3组血清中胰高血糖素含量降低24.75%(P<0.05);在血清胰岛素动态变化过程中,采食后1 h,试验1组提高40.31%(P<0.05),采食后2 h,试验2组提高40.09%(P<0.05);在血清生长激素动态变化过程中,采食后1 h,试验3组提高35.18%(P<0.05),采食后2 h,试验2、3组分别提高48.26%(P<0.05)、42.72%(P<0.05);试验2、3组血清中生长激素含量总体平均值分别提高23.65%(P<0.05)、26.29%(P<0.05)。2)与对照2组相比,试验2、3组死亡率均降低24.97%;1～52日龄,试验1、2、3组平均日增重分别提高6.57%(P<0.05)、8.75%(P<0.01)、5.59%(P<0.05);在血清胰岛素动态变化过程中,采食后2 h,试验2组提高44.55%(P<0.05);在血清生长激素动态变化过程中,采食后2 h,试验2、3组分别提高50.24%(P<0.05)、44.63%(P<0.05);试验3组血清中生长激素含量总体平均值提高23.80%(P<0.05)。结果提示,黄羽肉鸡饲粮中添加一定剂量的IBS,对其生长性能、激素分泌有促进作用,且在本试验的3个剂量中,以添加12 g/kg IBS综合效果最佳。

槐耳菌质成分对小鼠免疫功能的影响

中国古代著名药用菌槐耳（Trametes robinpphila Murr.）在营养基质上进行固体发酵,产生槐耳菌质,从中提取的清膏及进一步提取的蛋白多糖,都有显著的抑制动物体内瘤和延长生命等作用,抑癌率可达50％左右.清膏治疗中晚期原发性肝癌总有效率达75.71％,它们具有促进多种免疫功能的作用,是良好的生物反应调节剂（BRM）,并有可能进一步扩大其适应症.

芝芪菌质中化学成分的动态变化

[目的]探讨不同发酵工艺下芝芪菌质中化学成分的动态变化,验证芝芪菌质的最佳发酵工艺。[方法]对不同发酵天数下芝芪菌质的有效成分多糖、蛋白质及总皂苷进行动态变化研究,绘制动态变化曲线。[结果]第20～25天是发生次生代谢最旺盛的时候。[结论]结合动物免疫学试验结果,确定第20～25天为发酵终点。

灵芝-黄芪药渣固体双向发酵工艺优化及菌质多糖对肠癌HCT116的抑制作用研究

为了高值化利用黄芪药渣,通过单因素和响应面优化灵芝-黄芪药渣固体双向发酵生产多糖的工艺,最佳发酵工艺为料液比0.66 g/mL、装瓶量0.22 g/mL、接种量4.5%、发酵温度28℃、发酵时间16 d,菌质多糖平均产率达到(29.21±0.23)mg/g。HPLC分析菌质多糖的单糖组成,菌质多糖由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成。采用MTT法测定菌质多糖对人体肠癌HCT116细胞的体外抗肿瘤活性,当菌质多糖浓度超过40 mg/mL时,对人体肠癌HCT116细胞的体外抑制率超过85%。菌质多糖溶液经口灌胃,测定对移植于裸鼠的人体肠癌HCT116的抑制作用,剂量为25 mL/kg时,对移植于裸鼠的人体肠癌HCT116的抑瘤率为55.99%。

不同发酵天数对“栓钱菌质”急性毒性及抗炎、镇痛作用的影响

通过急性毒性试验、小鼠扭体试验和耳廓肿胀试验,比较7个不同发酵天数(0、7、20、41、48、62、69 d)的"栓钱菌质"的急性毒性及抗炎、镇痛作用,研究了不同发酵天数对其毒性效应和抗炎、镇痛作用的影响。实验结果表明,不同发酵天数"栓钱菌质"毒性下降率(%)大小如下:0 d≈7 d<20 d≈41 d<48 d<62 d<69 d。扭体反应次数大小如下:69 d≈62 d>48 d>41 d≈20 d>0 d>7 d;与空白对照相比,0、7、20、41、48 d者与马钱子生品一样,均明显减少醋酸致小鼠扭体反应次数(P<0.05),表明发酵48 d内基本保留了生品原有的镇痛作用;而62 d和69 d者则此活性消失,且与阳性对照(吲哚美辛)相比有极显著性差异(P<0.01)。耳廓肿胀下降率(%)大小如下:7 d≈20 d>41 d>48 d>0 d>>62 d>69 d;与空白对照相比,0、7 d、20、41、48 d者与生品相同,皆可显著抑制致炎后小鼠的耳廓肿胀率(P<0.05或0.01),表明发酵48 d内抗炎作用没有明显变化。综合分析不同发酵天数"栓钱菌质"毒性和药效的结果,确定其发酵终点应选择在第41～48 d较适宜。

响应面法研制蛹虫草山药菌质饮料及抗氧化活性分析

以蛹虫草山药菌质为主要原料,以蔗糖、蜂蜜、柠檬酸、CMC-Na为辅料,研制出一款蛹虫草山药菌质饮料。在单因素试验基础上,采用Box-Behnken响应面法对蛹虫草山药菌质饮料的配方进行优化,检测了饮料中的关键性功能成分,并分析了饮料的抗氧化活性。结果表明,该饮料的最佳配方是蛹虫草山药菌质添加量2.00%、蔗糖添加量8.16%、蜂蜜添加量3.26%、柠檬酸添加量0.79%、CMC-Na添加量0.34%。在该条件下,饮料呈亮黄色、酸甜可口、具有蛹虫草山药菌质特有的香味、清澈透明、感官风味较佳,感官评分达到88.2分,微生物检测指标符合相关标准,饮料中总黄酮的含量为30.93±0.28 mg/L、总皂苷的含量为54.99±1.15 mg/L、总酚的含量为25.56±0.48 mg/L,该饮料对DPPH自由基和羟自由基的最大清除率分别达到91.33%和81.26%,表明该饮料具有一定的抗氧化功效。