基于菠萝蛋白酶的羊毛生物酶法防毡缩整理

针对微生物蛋白酶在羊毛酶法防毡缩整理过程中易造成羊毛纤维损伤的问题,本文采用植物蛋白酶(菠萝蛋白酶)与预处理结合的工艺对羊毛织物进行防毡缩整理。结果表明,菠萝蛋白酶在预处理的基础上能够有效改善羊毛织物的防毡缩性能,整理后的织物毡缩率为5.29%,强力损失率为4.10%。通过扫描电镜、亚甲基蓝着色等表征方法综合判断,菠萝蛋白酶作用于羊毛鳞片层,进而实现在降低羊毛织物毡缩率的同时将强力损失率控制在一个较小的水平。

菠萝蛋白酶的提取纯化工艺研究

为降低环境污染,提高菠萝蛋白酶的附加值以及延长菠萝的产业链,以菠萝废弃物为原料,采用盐析浓缩-透析提纯-乙醇有机溶剂沉淀相结合的方法提取菠萝蛋白酶。实验考察料液比、缓冲液温度、搅拌时间、缓冲液pH值、盐析浓度以及透析时间对菠萝蛋白酶酶活性和酶活回收率的影响。结果表明,菠萝蛋白酶的最佳工艺条件为料液比1.0∶1.5(m∶v)、缓冲液温度30℃、搅拌时间40 min、缓冲液pH值7、盐析浓度30%和透析时间28h,该条件下菠萝蛋白酶酶活回收率为68.45%。

菠萝蛋白酶水解醇法大豆浓缩蛋白的研究

用菠萝蛋白酶对醇法大豆浓缩蛋白进行酶法改性,提高醇法大豆浓缩蛋白的溶解性.在单因素分析的基础上采用响应面分析方法对酶解条件进行优化,酶解的最佳条件为pH6.5,反应温度48℃,底物浓度6%,加酶量607 U/g.此条件下水解4 h,水解度可达11.07%.

盐法提取菠萝蛋白酶的研究

采用正交实验,运用盐析法从菠萝皮中提取菠萝蛋白酶,对菠萝蛋白酶的提取工艺及其影响因素进行了研究,并对提取后得到的菠萝蛋白酶进行测定。

果菠萝蛋白酶在有机溶剂中的变性与失活动力学的研究

测得果菠萝蛋白酶是由单亚基组成,分子量约为30k,pl为4.6,每个酶分子含一个游离疏基和二个硫硫键,甲醇、乙醇、乙二醇对酶活力有明显的抑制作用,甲醇、乙醇表现为非竞争性,乙二醇为竞争性,其抑制常数分别为:20％、16.5％和11％。在有机溶剂作用下,监测荧光(332nm)强度随时间的变化过程,作为变性的指标,测定酶在不同浓度有机溶剂中的变性动力学,并按邹氏法测定酶的失活动力学,对酶构象及催化活力关系进行比较,酶的失活速度大于变性速度,说明酶活性中心处于对有机溶剂较敏感的区域,酶的变性与失活过程均可分为快、慢两相的一级反应,这意味着可能存在着部分活力的中间态。

海藻酸钠包埋法制备固定化菠萝蛋白酶

以海藻酸钠为载体,包埋法固定菠萝蛋白酶,对固定化条件进行优化,同时探讨固定化菠萝蛋白酶的部分酶学性能。结果表明:固定化菠萝蛋白酶的质量受海藻酸钠质量分数、固定化酶量、固定化时间以及CaC l2质量分数的影响,其最佳固定化条件为:海藻酸钠质量分数1.0%,CaC l2质量分数3%,固定化酶液量与海藻酸钠体积之比1∶2,固定化时间60 m in,在此条件下,制备的固定化菠萝蛋白酶的比活力为211.8 U/g(湿质量载体),由此制得的固定化酶的最适pH为7.6,与游离酶相比,升高了0.8个pH单位,同时显示固定化菠萝蛋白酶能耐受较高的碱性环境,固定化酶最适温度与游离酶相同,均为50℃,固定化酶在较高温度范围内,仍能保持较高的相对活力。

超高压处理对菠萝汁中菠萝蛋白酶活性的影响

以菠萝汁中菠萝蛋白酶为对象,利用福林酚法分别研究超高压压力、温度、保压时间和pH值对菠萝蛋白酶活性的影响。结果表明:随着压力的升高,菠萝汁(pH3.60～3.78)中菠萝蛋白酶活力先上升后下降,20℃、300MPa加压10min相对酶活力增加到120%;随加压时间延长,菠萝蛋白酶酶活性趋于稳定,15min(300MPa、20℃)后相对酶活力无显著变化;不同温度(10～40℃)协同超高压处理对该酶活性无显著影响,超高压能减弱温度对菠萝蛋白酶活性的影响程度;天然pH值条件下的超高压菠萝汁含菠萝蛋白酶的相对酶活力最高达113%(300MPa、25℃、10min、pH3.74)。

菠萝蛋白酶应用的性质研究

本文研究了pH、温度、金属离子、EDTA、还原剂对菠萝蛋白酶单宁复合物酶促反应速度的影响 ,结果表明 ,该酶的最适pH为 7.1,最稳定的pH范围为 3.9～ 4 .2 ,最适反应温度为 5 5℃ ,一般的金属盐NaCl、kCl对酶反应影响不大 ,MgCl2 、CaCl2 在高浓度下对酶有一定程度的抑制作用 ,在低浓度下影响不显著 ,半胱氨酸在一定浓度的范围内 ,对酶反应速度有促进作用。EDTA本身对菠萝蛋白酶没有激活作用 ,它能鳌合酶反应所需的金属离子 ,使酶活降低。

菠萝蛋白酶水解泥鳅蛋白制备ACE抑制肽的研究

为了探讨利用泥鳅蛋白制备功能性肽的可能性,采用高效液相色谱法测定泥鳅肉水解物对血管紧张素转换酶(ACE)的抑制作用,从胰蛋白酶、胃蛋白酶、菠萝蛋白酶、复合风味蛋白酶、复合蛋白酶5种酶中筛选出菠萝蛋白酶作为酶解泥鳅肉制备具有降血压活性水解物的适宜水解酶。在单因素试验的基础上,采用L9(34)正交试验设计对该酶的酶解条件进行优化。结果表明最佳水解条件为:温度55℃,固液比1:3,pH6.5,加酶量1000U/g pro,水解时间90min。在该条件下,水解物的ACE抑制率IC50值为0.0184mg/mL,ACE抑制肽的相对分子质量主要集中在924左右。

超滤浓缩提取菠萝蛋白酶的研究

用外压管式超滤组件浓缩菠萝蛋白酶,通量为50L/m^2·h,酶截留率达95％,回收率达79.8％。最终酶粉活性为5.62×10~6u/g。

菠萝蛋白酶酶解鱼鳞蛋白的工艺优化研究

鱼鳞中含有丰富的蛋白质资源,对其进行温和、环保的酶法水解受到更多的关注。本文采用菠萝蛋白酶水解鱼鳞蛋白,制备胶原多肽制品。通过考察温度、时间、酶量、料液比等单一因素对酶解的影响,设计了L9(34)正交实验,最终获得了菠萝蛋白酶水解鱼鳞蛋白的优化工艺条件,即温度60℃,时间3h,酶量4%(质量分数),底物浓度5%(质量分数),水解度为18.1%,该条件具有生产应用前景。

菠萝蛋白酶的研究与应用进展

综述了菠萝蛋白酶在抑制肿瘤和心血管疾病防治方面的研究及应用进展。

超高压处理菠萝蛋白酶引发构象变化与酶活力的关系

采用超高压处理菠萝蛋白酶,研究菠萝蛋白酶结构变化与酶活力的关系。采用傅里叶红外光谱(Fourier transform infrared spectrometer,FTIR)检测二级结构变化,荧光光谱检测三级结构变化,采用福林酚法测定酶活力。结果显示,与0.1 MPa相比,在37℃,不同压力(100~500 MPa)处理20 min,对菠萝蛋白酶活力均有显著影响(P<0.05)。200 MPa处理时,酶活力达到最大值(3 524 U/g),提高了8.29%。200 MPa处理后的菠萝蛋白酶,经傅里叶红外光谱分析结果显示,β-折叠含量比常压下增加了1.76倍。内源性荧光光谱结果显示,280 nm波长处激发,荧光强度达到最高4 934。因此,菠萝蛋白酶的活性与β-折叠的含量以及亲水性Typ残基的暴露程度有关。

Ca^(2+)和聚乙二醇对菠萝蛋白酶活性和热稳定性的影响

研究了Ca2+和聚乙二醇对菠萝蛋白酶活性及热稳定性的影响。在37℃下,Ca2+与酶作用1h后,5~10mmol/LCa2+对酶的活性均有促进作用,其中当Ca2+浓度为2mmol/L时,促进作用最明显。在60℃下,Ca2+浓度为3mmol/L时对菠萝蛋白酶的热稳定性效果最好,处理100min后仍然能保留68%的活性;菠萝蛋白酶在60℃下活性的半衰期为86min,除Ca2+浓度为1mmol/L外,其他浓度(2mmol/L、3mmol/L、4mmol/L和5mmol/L)Ca2+与菠萝蛋白酶作用后,酶的半衰期均有所延长,未经修饰的聚乙二醇6000加入酶反应体系中,其对酶活性起很大的抑制作用,且酶的热稳定性也未得到改善。

Ca^(2+)对菠萝蛋白酶热稳定性和二级结构的影响

研究了Ca2+对菠萝蛋白酶活性及远紫外圆二色谱的变化。在37℃下,Ca2+与酶作用1h后,5～10mmol/L Ca2+对酶的活性均有促进作用,其中当Ca2+浓度为2mmol/L时,促进作用最明显。在60℃下,Ca2+浓度为3mmol/L时,对菠萝蛋白酶的热稳定化效果最好,处理100min后仍然能保留68%的活性;菠萝蛋白酶在60℃下活性的半衰期为86min,除Ca2+浓度为1mmol/L外,其他浓度(2、3、4、5mmol/L)的Ca2+与菠萝蛋白酶作用后,酶的半衰期均有所延长。由圆二色谱曲线发现,菠萝蛋白酶在波长209nm与221nm处有明显的负峰。与Ca2+作用后菠萝蛋白酶的α-螺旋、β-转角和无规则卷曲均有所变化,其中,在37℃下加入Ca2+后,菠萝蛋白酶的α-螺旋均减少,而β-转角有所增加。在70℃下处理1h,Ca2+对菠萝蛋白酶二级结构也有所影响。无Ca2+处理的菠萝蛋白酶和加入4mmol/LCa2+的菠萝蛋白酶的α-螺旋分别减少为34.90%和35.60%,而β-转角则有所增加,分别为26.30%和25.10%。圆二色谱结果表明,α-螺旋结构对菠萝蛋白酶的稳定性起关键作用。

菠萝蛋白酶部分酶学性质的研究

通过菠萝蛋白酶的最佳吸收峰、酶的浓度及大小,红外光谱分析和酶活性的测定,研究菠萝蛋白酶的部分性质。结果表明,菠萝蛋白酶具有热稳定性,其大小约为28.8kD,且最适温度为60℃,最适pH为7.5。Fe2+对菠萝蛋白酶有激活作用,Zn2+、Cu2+低浓度有促进作用,高浓度有抑制作用,NaCl对菠萝蛋白酶能起到一定的保护作用、KCl对酶反应影响不大,MgSO4·7H2O和无水CaCl2对菠萝蛋白酶活性均有一定程度的抑制作用。菠萝蛋白酶经pH2.5胃蛋白酶和pH3.2胃蛋白酶作用后,随处理时间的延长,其酶活力都呈下降的趋势。其中,pH2.5条件下的胃蛋白酶对菠萝蛋白酶活力的影响较大。表明在模拟猪胃条件下pH2.5胃蛋白酶对菠萝蛋白酶影响较大。

超滤分离纯化菠萝蛋白酶的研究

采用超滤分离纯化菠萝蛋白酶,考察了超滤操作压力、温度、浓缩倍数等因素对膜通量和截留率这两个超滤的重要指标的影响,结果在理想状态(压力(0.184±0.007)MPa、温度(10±0.5)℃、浓缩倍数16倍)时,菠萝蛋白酶的纯化倍数达到89.4倍,酶活回收率相应达到79.3%,比TiO2多孔陶瓷柱层析纯化倍数多81.4倍,且回收率提高了31.3%。超滤法大大减少实验使用场地和设备使用量,酶活回收率好、所得比酶活率高,起到高度纯化的作用,而且此法操作简单、处理果汁量大,反映超滤法较适合生产高纯度菠萝蛋白酶。

高沸醇木质素及其衍生物对菠萝蛋白酶的吸附

通过曼尼希反应和室温相分离方法合成了高沸醇木质素胺和高沸醇木质素酚衍生物,并探讨了它们对菠萝蛋白酶的吸附特性.结果表明,引入了胺基和酚羟基的高沸醇木质素衍生物对菠萝蛋白酶的吸附性能有很大的提高,吸附能力为HBS木质素胺>HBS木质素酚>HBS木质素,而且吸附后的菠萝蛋白酶活性仍保持在较高的水平,高沸醇木质素衍生物有望成为菠萝蛋白酶的浓缩吸附剂或固定化的载体.

菠萝蛋白酶结合滚揉嫩化马肉工艺的优化

以系水力、蒸煮损失率、剪切力和感官评定为评价指标,通过注射菠萝蛋白酶液,结合滚揉处理,研究菠萝蛋白酶在不同的添加量、处理温度、处理时间和p H条件下对马肉(半腱肌)嫩度的影响,采用L9(34)正交试验对嫩化条件进行优化。试验结果表明:蛋白酶添加量、处理温度和处理时间对马肉的嫩度有显著影响。菠萝蛋白酶的最佳嫩化条件是:菠萝蛋白酶添加量12 U/g,处理温度60℃,处理时间1.5 h,p H7.0;或者菠萝蛋白酶添加量16 U/g,处理温度60℃,处理时间2 h,p H7.0。

菠萝蛋白酶在创面修复中的作用

对于创面处理的过程需要很多方法的协作,包括清创、控制感染、足够的血管形成、减轻负担、适量营养摄入、血糖控制等[1]。但是,对于急性创面和慢性创面的愈合,其变迁过程是不同的。急性创面的愈合表现为一系列有序的、可以预测的事件的串联过程,都是时限性的,预后较好;