基于HPLC指纹图谱结合一测多评法的葛花质量控制研究

建立葛花药材的指纹图谱,并同时建立其中10个主要黄酮类成分含量的一测多评分析方法(QAMS),用于不同产地葛花药材整体质量评价。采用高效液相色谱法(HPLC)对不同产地葛花中主要化学成分进行分析,确定最佳色谱条件,建立指纹图谱;在此基础上,以葛花苷为参照峰,建立QAMS测定葛花10个黄酮类成分含量;并与外标法(ESM)测定结果比较,验证QAMS的准确性。建立了葛花药材指纹图谱,20批葛花和10批粉葛花药材的相似度均大于0.85,标定共有峰分别为18和27个。以葛花苷为参照峰,各个成分校正因子的重复性、耐用性均良好;应用一测多评法测定10个成分的含量,与外标法测定结果比较,含量无明显差异(P>0.05),相对偏差<3.0%。不同产地来源的葛花药材中10个成分含量均存在较大差异,说明应提高葛花药材的质量控制标准。所建立的指纹图谱结合一测多评分析方法简便、可行,可客观、有效的用于不同产地葛花药材质量评价,可以为葛花质量标准修订、优质葛花种质资源的选育和育种提供参考。

RP-HPLC测定野葛花中3种异黄酮

采用反相高效液相色谱法测定野葛花中3种异黄酮化合物葛花苷、次葛花苷及尼泊尔鸢尾异黄酮.色谱柱为ODS柱,以甲醇-1.0g/L柠檬酸水溶液为流动相,紫外检测波长为265 nm.3种异黄酮化合物线性范围均在0.02～0.2mg/mL,它们的平均回收率分别为99.90%,100.57%和99.80%（n=5）,RSD分别为0.79%,0.60%和0.70%（n=5）.

葛花提取物通过激活PPARγ上调ABCA1的表达而抑制THP-1源性泡沫细胞形成

[目的]探寻葛花提取物(PFE)对巨噬细胞源性泡沫细胞脂质蓄积的影响。[方法]通过MTT法筛选PFE对THP-1源性泡沫细胞的作用浓度,采用油红O染色和胆固醇检测试剂盒检测细胞内脂质蓄积情况,采用胆固醇流出试剂盒检测细胞的胆固醇流出水平,使用RT-qPCR和Western blot检测mRNA和蛋白表达。[结果]PFE显著降低THP-1源性泡沫细胞内的脂质蓄积。PFE不影响CD36、清道夫受体AⅠ(SR-AⅠ)、固醇调节元件结合蛋白2(SREBP2)及3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)的mRNA表达,但能上调ATP结合盒转运体A1(ABCA1)的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),促进巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出(P<0.01)。PFE可以激活过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的活性(P<0.01)及上调其mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。与PFE对照组相比,加入GW9662处理后PPARγ和ABCA1的蛋白表达水平均下降(P<0.01),胆固醇流出水平降低(P<0.01)。[结论]PFE可显著改善THP-1源性泡沫细胞内的脂质蓄积,通过PPARγ上调ABCA1表达及其介导的胆固醇流出抑制泡沫细胞形成。

基于标准汤剂的葛花(甘葛藤)配方颗粒质量标准

目的基于标准汤剂的研究建立葛花(甘葛藤)配方颗粒的质量标准。方法采用HPLC法测定葛花饮片、标准汤剂和配方颗粒中射干苷的质量分数,并计算转移率。建立标准汤剂和配方颗粒HPLC特征图谱分析方法及TLC鉴别方法。结果19批葛花(甘葛藤)饮片中射干苷质量分数为0.46%~2.19%,标准汤剂中射干苷的质量分数为7.4~26.3 mg/g,转移率为31.2%~55.7%,3批配方颗粒中射干苷的质量分数分别为14.3、12.6、10.5 mg/g,转移率分别为36.3%、37.6%、32.2%;19批标准汤剂HPLC特征图谱中有5个共有峰,指认了6″-O-木糖黄豆黄苷、黄豆黄苷、鸢尾黄素-7-O-木糖葡萄糖苷、染料木苷、射干苷5种成分,特征图谱相似度大于0.90,聚为4类,2种主成分统计的累积方差贡献率为81.963%,3批配方颗粒HPLC特征图谱中同样有5个共有特征峰,相似度分别为0.979、0.981、0.985;TLC法测定信息丰富、斑点清晰、分离度良好。结论所建立的方法稳定、合理,可全面评判葛花(甘葛藤)配方颗粒的质量,为其质量控制提供依据。

基于网络药理学探讨葛花治疗心肌缺血的潜在机制

目的探讨葛花治疗心肌缺血(MI)的潜在机制。方法在TCMSP数据库检索葛花的活性成分和靶点,使用Cytoscape构建葛花-活性成分-靶点网络图。通过DisGeNET、GeneCards、OMIM数据库筛选MI的靶点。通过制作葛花靶点和MI靶点的韦恩图得到共同靶点,在STRING数据库中对其进行网络构建,然后将其可视化。使用DAVID数据库进行GO和KEGG富集分析,将其可视化取KEGG富集分析的前20条信号通路,构建信号通路与靶点之间的网络图。选择前5个活性成分及其对应的前10个靶点进行分子对接。结果葛花的活性成分16个,成分靶点142个,MI的靶点2327个,取交集后共得到葛花治疗MI的靶点51个,其中核心靶点是INS、EDN1和IL10等,GO富集分析确定了171个与之发生发展密切相关的生物过程,KEGG富集分析确定了38条信号通路,GO和KEGG富集分析提示葛花主要通过补体和凝血级联反应通路、流体剪切应力与动脉粥样硬化途径、MAPK等信号通路发挥作用。分子对接表明葛花的活性成分与其相应靶点具有良好的结合力。结论本研究通过网络药理学初步揭示葛花多成分、多靶点、多通路治疗MI的作用机制,可能与细胞的增殖与凋亡、基因表达调控、氧化应激、炎症反应等途径相关,可为临床研究提供参考。

基于网络药理学和分子对接探讨葛花干预酒精性肝炎的作用机制

目的探讨葛花治疗酒精性肝炎(AH)的作用机制。方法收集葛花活性成分、作用靶点及AH相关靶点,对交集靶点进行蛋白质相互作用分析并获取关键核心靶点,进行功能富集分析,构建葛花成分-交集靶点-疾病-通路网络,并进行分子对接。结果获得17种葛花主要成分及其靶点166个,AH相关靶点699个,葛花与AH的交集靶点70个;葛花的主要活性成分是槲皮素、山柰酚、葛花苷元、芒柄花黄素及β-谷甾醇,关键核心靶点为丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT1)、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素(IL)-6、肿瘤蛋白p53、IL1B;主要信号通路为TNF、IL-17和丝裂原活化蛋白激酶。结论葛花可能通过槲皮素等活性成分激活AKT1、TNF蛋白,调控TNF等信号通路治疗AH。

高效液相色谱法测定不同产地葛花中葛花苷的含量

目的建立高效液相色谱法测定葛花中葛花苷含量方法。方法采用依利特Hypersil ODS(4.6 mm×150mm,5μm)色谱柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸(17∶83),流速为1mL.min-1,柱温为35℃,检测波长:265nm,进样量:10μL。结果葛花苷在0.102 4～1.229mg.mL-1内与峰面积线性关系良好,平均回收率为100.9%,RSD为1.7%。结论所建立之方法准确可靠、灵敏度高、专属性强,可用于测定葛花中葛花苷的含量。

武当山产葛花中葛花苷的含量测定

目的：采用反相高效液相色谱法分析武当山产葛花中葛花苷的含量。方法：采用LUNA—C18（250mm×4．6mm，5um）色谱柱，流动相为乙腈-0．1％磷酸溶液（18：82），流速为1．0mL/min，柱温30℃，检测波长265nm。结果：葛花苷在0．062～1．240mg／mL范围内与峰面积有良好的线性关系，平均加样回收率为99．1％，RSD为0．86％。结论：本文建立了葛花中葛花苷的反相高效液相色谱测定方法，为更全面评价武当山地区葛花药材质量提供依据，同时也为其他含有葛花苷成分的药材及成药分析提供了借鉴。

葛花质量标准的研究

目的建立葛花Pueraria lobata(Willd.)Ohwi的质量标准。方法对葛花性状、显微特征进行鉴别后,TLC法作定性鉴别,HPLC、紫外分光光度法分别测定葛花苷、总黄酮含有量,《中国药典》方法测定水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物含有量。结果 TLC斑点清晰,重复性好,阴性无干扰。葛花苷、总黄酮分别在2.34~234μg/m L(r=0.999 8)、0.336 8~1.347 2 mg/m L(r=0.999 7)范围内线性关系良好,平均加样回收率(RSD)分别为100.66%(1.73%)、99.77%(2.2%)。10批样品中,水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物含有量范围分别为12.40%~14.70%、8.16%~10.13%、0.40%~0.70%、20.25%~29.5%。结论该方法稳定可靠,可用于葛花的质量评价。

野葛花中葛花苷紫外分光光度法检测

采用紫外-分光光度法测定野葛花中异黄酮化合物葛花苷的含量,紫外检测波长为265mm。葛花苷在 0．010-0．040mg／mL范围内呈良好线性关系,平均加样回收率为101．1％(n=4),平均RSD为0．69％(n=4)。

葛根和葛花对急性酒精中毒小鼠的解酒作用

比较葛根和葛花的解酒效果及葛根素剂量与解酒效果的相关性。先给小鼠灌胃葛根和葛花提取物,30 min后灌胃白酒(5.75g/kg·bw),观察醉酒小鼠的醒酒时间及ADH法测定小鼠血液乙醇含量变化,以探讨葛根和葛花对醉酒小鼠的影响。结果低、中剂量(2.5,7.5 g/kg·bw)的葛根水提物(PRW)和葛根醇提物(PRE)能显著缩短醉酒小鼠的醒酒时间(PRW:43.3%、48.7%;PRE:51.1%、53.6%),中剂量(7.5g/kg·bw)的葛花醇提物(PFE)能有效缩短小鼠睡眠时间(24.3%);中、高剂量(7.5,10 g/kg·bw)的PRW和PRE能有效抑制酒精的吸收,降低小鼠血液乙醇浓度,而高剂量的PFW和PFE对血乙醇浓度影响较小,与对照组相比仅在240min处有显著差异。结论葛根的解酒预防效果比葛花好,PRE优于PRW,且PR中的葛根素剂量与解酒效果呈现良好的正相关性。

葛花枳椇子配伍对酒精性肝损伤大鼠肝脏功能及病理形态的影响

目的探讨葛花枳椇子2∶1比例配伍后解酒保肝的作用,明确使用的最佳条件。方法采用56°红星二锅头白酒灌胃建立酒精性肝损伤动物模型,并给予实验动物含生药量3、6、12 g/kg葛花枳椇子2∶1配伍药物,4、8、12周服药疗程,通过检测肝脏指数,谷氨酸转氨酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、碱性磷酸酶（ALP）等血清肝功能相关指标及肝脏病理形态,观察葛花、枳椇子2∶1比例配伍防治慢性酒精性肝损伤的作用。结果葛花枳椇子配伍各剂量组给药4周对慢性酒精性肝损伤没有治疗作用。给药8周后配伍各剂量组的ALT均明显降低,与模型组相比有显著性差异（P〈0.05-0.01）。给药12周后,配伍各剂量组AST明显下降,配伍低、高剂量组ALT下降,配伍低剂量组TP升高,配伍不同剂量组ALB升高,与模型组相比有显著性差异（P〈0.05-0.01）;肝脏病理形态的变化也与肝功能指标相一致。结论葛花枳椇子配伍各剂量组在给药8周和12周显示出一定解酒保肝作用,并随着治疗时间的延长,可以不同程度地改善相关指标,其中低剂量组较中、高剂量组效果好。

葛花对缓解小鼠急性酒精中毒的影响

为了探讨葛花对急性酒精中毒的缓解作用及机理,根据中医烟熏疗法的作用方式向烟丝中添加一定量的葛花,分别采用酒精+主流烟气暴露(处理1)和主流烟气暴露+酒精(处理2)的方式处理小鼠,考察了实验小鼠的醒酒效果和血液中乙醇浓度及肝脏中乙醇脱氢酶活性的变化。结果表明:(1)与空白组相比,处理1在高剂量葛花添加组能显著缩短醉酒时间,处理2随着葛花添加量的增加能显著延长酒精耐受时间及缩短醉酒时间;(2)葛花添加量的增加可使处理2小鼠肝脏中乙醇脱氢酶活性升高,血液中乙醇浓度随时间呈现明显下降趋势。烟丝中添加葛花预处理对小鼠急性酒精中毒具有较为明显的缓解作用。

葛根与葛花解酒的功效研究

[目的]对葛根与葛花解酒的效果进行了研究,为合理开发利用葛根与葛花提供参考。[方法]利用酒精比重计测定葛根与葛花在不同用量、不同时间及不同酶用量的条件下与酒精作用的密度。[结果]葛根液与酒精作用的密度曲线随着溶液及酶用量的增加及作用时间的延长而上升,密度接近于1.000 0。葛花液与酒精作用的密度曲线在同等条件下下降。[结论]葛根与葛花均有解酒的效果,但葛根解酒效果明显好于葛花。在酶的作用下,它们能促进酒精分解,起到保肝、护肝的效果。

葛花枳椇子不同比例配伍对酒精性肝损伤大鼠肝组织病理形态影响的实验研究

为了观察葛花、枳椇子不同比例配伍对酒精性肝损伤大鼠肝组织病理形态的影响。采用白酒灌胃的方法复制酒精性肝损伤的模型,将Wistar大鼠160只,按体重随机分为空白组,模型组,东宝肝泰对照组,葛花组,枳椇子组,葛花枳椇子配伍1∶1,1∶2和2∶1八组。连续灌胃8周,于8周末取材,摘取肝脏,制成病理切片,在光镜下观察大鼠肝脏的病理形态变化。结果显示:光镜下模型组可见肝小叶结构遭到破坏,肝细胞索排列紊乱,肝血窦间隙增大,肝细胞肿大出现水样变,炎性细胞侵润及纤维组织增多,葛花与枳椇子配伍组肝细胞索排列紊乱、肝细胞水样变较模型组减轻,纤维结缔组织无明显增生。由此得出结论:大量饮酒可以导致肝损伤,葛花与枳椇子不同比例配伍对酒精性肝损伤大鼠肝细胞具有保护作用。

不同葛花提取物对乙醇致小鼠肝损伤保护作用的比较研究

目的比较不同提取纯化工艺对葛花提取物中黄酮含量及其保肝作用的影响。方法制备葛花的水提物、乙醇提取物及其大孔树脂纯化物,采用高效液相色谱法分析其中主要黄酮类成分的含量;复制乙醇致小鼠肝损伤模型,同时连续多日灌胃不同葛花提取物,以小鼠体质量变化、肝脏指数、血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和丙二醛(MDA)等指标比较对乙醇所致小鼠肝损伤保护作用的差异。结果葛花不同提取物中黄酮类成分的比例和含量差异明显,其中乙醇提取物黄酮类含量高,其保肝活性更强。结论建议针对不同活性采用不同提取方法制备样品。

超高效液相色谱串联质谱法检测葛花中异黄酮

目的建立超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)方法,检测葛花中异黄酮成分。方法葛花经乙醇提取和乙酸乙酯纯化,HPLC分析采用Diamonsil C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-乙腈-水(2∶1∶2)为流动相,体积流量为0.5 m L/min,检测波长为264 nm,柱温为25℃,进样量10μL,质谱检测设定为负离子模式。结果得到7种异黄酮成分,MS鉴定为大豆苷、大豆苷元、鸢尾苷、鸢尾苷元、染料木黄酮、印度黄檀苷和鸡豆黄素。结论 HPLC-MS/MS法检测葛花异黄酮,具有高灵敏度和选择性,方法准确可靠。