4种葡萄类病毒检测及序列分析

采用苹果锈果类病毒属(Apscaviroid)保守区域设计的通用引物和4种葡萄类病毒特异引物,对采自辽宁、山东、新疆、甘肃和宁夏的48个葡萄样品进行RT-PCR检测及序列分析。结果表明,葡萄黄斑类病毒1(Grapevine yellow speckle viroid 1,GYSVd1)、葡萄黄斑类病毒2(Grapevine yellow speckle viroid 2,GYSVd2)、澳大利亚葡萄类病毒(Australian grapevine viroid,AGVd)和啤酒花矮化类病毒(Hop stunt viroid,HSVd)检出率分别为41.7%、22.9%、75%和83.3%。通用引物能够检测出大部分样品中的GYSVd1、GYSVd2、AGVd。序列分析结果显示,中国辽宁兴城GYSVd1分离物(GU170805)属于TypeⅠ,与澳大利亚TypeⅠ分离物同源性为99%,与澳大利亚及日本TypeⅡ分离物同源性为97%,与中国GYSVd3分离物及美国、日本TypeⅢ分离物同源性仅为89%,而与GYSVd2分离物同源性均在80%以下。GYSVd2扩增产物(HM211853)与其余分离物的相似性在97%以上,与两个北京分离物DQ377131和DQ377129最为相似,相似性为99%。辽宁AGVd分离物(HM211854)与其他分离物同源性都在97%以上。山东HSVd分离物(HM357802)与北京、日本葡萄分离物的同源性均在98%以上,与德国葡萄分离物同源性为97%,与马铃薯、啤酒花、柑橘等其他作物上的分离物同源性为97%以下。

从吐鲁番古葡萄树上检测到4种类病毒(AGVd、GYSVd-1、GYSVd-2、HSVd)

从约有150年树龄的新疆吐鲁番葡萄(品种无核白)叶子中抽提小分子RNA,经过RT-PCR、生物学检测及克隆测序分析,证明其中含有4种类病毒:AGVd、GYSVd-1、GYSVd-2和HSVd。通过二维电泳,正反向电泳及Northern印迹杂交,RT-PCR等分子生物学方法对接种的指示植物Suyo黄瓜中的子代类病毒进行了检测,结果仅仅检测到HSVd一种类病毒。对Suyo黄瓜中的HSVd子代类病毒进行克隆及序列分析,结果表明葡萄中亲代类病毒与黄瓜中的子代类病毒序列之间存在明显差异。