磷脂酶Cβ1过表达对葡萄糖刺激胰岛素分泌的影响

目的观察过表达磷脂酶Cβ1(phospholipase Cβ1,PLCβ1)对葡萄糖刺激胰岛素分泌(glucose-stimulated insulin secretion,GSIS)的影响。方法设定葡萄糖浓度梯度:10、20、40、80、100mmol/L,分别刺激INS-1细胞40min,检测细胞培养上清液中胰岛素含量,确定最适的葡萄糖刺激浓度;设定时间梯度:20、40、60、80、120min,以最适葡萄糖浓度刺激,检测胰岛素含量,确定最适的刺激时间。②以最适葡萄糖浓度刺激INS-1细胞适当时间后,RT-PCR检测PLCβ1表达变化。③构建PLCβ1真核表达载体(PCMV-HA-PLCβ1),转染INS-1细胞,Western blot检测INS-1细胞中PLCβ1蛋白的表达。④收集转染后INS-1细胞培养上清液,检测胰岛素含量。结果用40mmol/L葡萄糖刺激60min,INS-1细胞的胰岛素分泌量最大;RT-PCR观察刺激后PLCβ1表达显著升高;过表达PLCβ1的INS-1细胞培养上清液中胰岛素含量为(1.906±0.080)ng/ml,较转染PCMV-HA载体的对照组(0.740±0.091)ng/ml显著升高(P<0.01)。结论过表达PLCβ1显著增加INS-1细胞的胰岛素分泌,提示PLCβ1可能参与GSIS信息传递。

11β-羟类固醇脱氢酶1型基因沉默对胰岛β细胞系NIT-1葡萄糖刺激胰岛素分泌的影响

目的观察RNA干扰阻断胰岛β细胞系NIT-1中11β-羟类固醇脱氢酶1型(11β-HSD1)表达对细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)的影响。方法pSuper质粒为载体,构建针对11β-HSD1基因的质粒oligo886、oligo866和乱序对照质粒oligoScr886,转染NIT-1细胞,RT-PCR和蛋白印迹法检测11β-HSD1mRNA和蛋白表达。oligo886重组质粒转染25 mmol/L葡萄糖培养基中的NIT-1细胞,测GSIS。结果转染oligo886和oligo866质粒的NIT-1细胞11β-HSD1mRNA分别下降78.1%±2.9%和51.7%±2.7%,11β-HSD1蛋白的水平分别下降82.2%±2.1%和56.5%±2.0%。oligo866转染25 mmol/L葡萄糖培养基中的NIT-1细胞后,GSIS较对照组明显升高(P<0.01)。结论11β-HSD1基因沉默能改善NIT-1细胞的葡萄糖刺激胰岛素分泌能力,提示胰岛β细胞NIT-1通过11β-HSD1调节糖皮质代谢,参与葡萄糖刺激胰岛素分泌。

DTBNP、DTDP促进INS-1细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌

目的：探讨巯基氧化还原试剂对葡萄糖刺激胰岛素分泌（glucose-stimulated insulin secretion,GSIS）影响,进而揭示其调节胰岛素分泌的可能机制。方法 ：INS-l细胞经传代培养3~4 d后在KRBH液中,37℃培养箱孵育30 min,再用含有不同浓度葡萄糖和巯基氧化还原试剂的KRBH液中培养60 min。然后留取上清液进行胰岛素测定。结果：（1）INS-1细胞在2.5、5、10、15、20 mmol/L葡萄糖浓度范围内胰岛素分泌量逐渐增加,G5、G10、G15组间两两相比均有统计学意义（P〈0.05）;（2）与G10组相比,G10＋DTBNP、G10＋DTDP组胰岛素分泌量显著增加（P〈0.05）,且该效应可以被DTT所消除。（3）DTBNP、DTDP均能增加NIF处理组胰岛素分泌,但其增加幅度低于非NIF处理组（P〈0.05）;（4）与非DIA组相比,G10＋DIA＋DTBNP、G10＋DIA＋DTDP组胰岛素分泌增加幅度显著减低（P〈0.05）;（5）同G10组比较,G10＋DIA＋NIF＋DTBNP、G10＋DIA＋NIF＋DTDP组胰岛素分泌值增加（P〈0.05）。结论 ：本研究显示巯基氧化还原试剂对GSIS产生调节作用。DTDP、DTBNP可能通过对K_ATP、L型Ca_V通道及IP_3受体活性的调节,促进胰岛素分泌。

原代分离的大鼠胰岛细胞对葡萄糖刺激胰岛素分泌的反应性研究

目的:研究原代分离的大鼠胰岛对葡萄糖刺激的胰岛素分泌反应性。方法:胶原酶原位灌注法分离大鼠胰岛,在含0.5%BSA、5.5或11.1mmol/L葡萄糖的培养基中培养不同时间后,用含0.2%BSA、3.3mmol/L葡萄糖的KRB缓冲液预培养胰岛30min,分别换入含不同浓度葡萄糖KRB缓冲液,培养1h,收集上清,RIA法测定胰岛素浓度。结果:大鼠胰岛过夜培养后,在基础(3.3mmol/L)和高浓度(16.7mmol/L)葡萄糖条件下胰岛素分泌量分别为(12.4±3.2)和(45.2±4.2)μU/ml/10islets/h;5.5mmol/L和11.1mmol/L葡萄糖浓度下培养12h和20h后,胰岛对葡萄糖的反应性均明显高于16.7mmol/L和22.5mmol/L葡萄糖组(P<0.05);体外培养5d后,对高糖的反应性为(4.28±0.67)倍。结论:原代分离的大鼠胰岛可在(1～5)d内保持对葡萄糖的反应性。

芬太尼抑制体外培养大鼠胰岛动态条件下葡萄糖刺激胰岛素分泌

目的研究芬太尼对体外培养大鼠胰岛动态条件下葡萄糖刺激胰岛素分泌的抑制作用。方法根据芬太尼浓度将SD大鼠胰岛随机均分为四组:Ⅰ组(0.3 ng/ml)、Ⅱ组(3.0 ng/ml)、Ⅲ组(30 ng/ml)和Ⅳ组(0 ng/ml)。每组胰岛分别按以下3种方式与药物共同培养24 h:单独与芬太尼,芬太尼+0.1μg/ml纳洛酮和芬太尼+1μg/ml纳洛酮。每组设6个培养孔,每孔加入胰岛30IEQ,重复3次。检测胰岛细胞活力。动态培养条件下葡萄糖刺激胰岛素释放试验按以下方法进行:先加入2.8mmol/L葡萄糖(低糖)培养液培养,分别于10 min(第一分泌时相)和60 min(第二分泌时相)吸取上清液,然后加入16.7mmol/L(高糖)的培养液继续培养,分别于10 min和60 min吸取上清液,测定胰岛素含量。结果四组胰岛细胞活力差异无统计学意义。第一和第二分泌时相单独芬太尼培养下,Ⅱ组和Ⅲ组低糖和高糖刺激胰岛素释放量明显低于Ⅳ组(P<0.01),且Ⅲ组高糖刺激胰岛素释放量最低(P<0.05)。第一和第二分泌时相芬太尼+0.1μg/ml纳洛酮培养下,Ⅱ组和Ⅲ组低糖和高糖刺激胰岛素释放量仍明显低于Ⅳ组(P<0.01),且Ⅲ组高糖刺激胰岛素释放量仍最低(P<0.05)。第一和第二分泌时相芬太尼+1μg/ml纳洛酮培养下,各组胰岛素释放量差异无统计学意义。结论高浓度芬太尼抑制体外培养大鼠胰岛素的分泌,并且对鼠胰岛细胞具有一定的损伤作用。

硫酸脱氢表雄酮对MIN6细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌的影响

目的探讨硫酸脱氢表雄酮(DHEAS)对胰岛β细胞株MIN6葡萄糖刺激的胰岛素分泌的影响。方法以葡萄糖刺激浓度为2.8mmol/L和16.7mmol/L的对数生长期MIN6细胞作为实验对象,分别以1、5、10μmol/LDHEAS干预10min和24h(不同浓度DHEAS组),以5μmol/LDHEAS或与10μmol/L糖皮质激素受体阻断剂RU486联合干预24h(DHEAS和DHEAS+RU486组),设立空白对照组。ELISA法测定细胞培养上清液中胰岛素分泌量,Real-TimePCR检测细胞胰岛素mRNA表达。结果干预后10min和24h时点,5μmol/L和10μmol/LDHEAS组MIN6细胞培养上清液中的胰岛素分泌量均显著高于空白对照组(P<0.05);干预后24h时点,DHEAS+RU486组与DHEAS组MIN6细胞培养上清液中胰岛素分泌量比较差异无统计学意义(P>0.05),但均显著高于空白对照组(P<0.05)。干预后24h时点,5μmol/L和10μmol/LDHEAS组MIN6细胞胰岛素mRNA表达均显著高于空白对照组(P<0.05)。结论 DHEAS对MIN6细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌具有促进作用,且其核内信号通路可能不经糖皮质激素受体介导。

丙酮酸循环回补反应与葡萄糖刺激的胰岛素分泌的关系

葡萄糖刺激的胰岛素分泌对维持机体葡萄糖代谢的稳态起着至关重要的作用。在此过程中,β细胞的线粒体一方面利用葡萄糖酵解产生的ATP引起ATP依赖的KATP通道关闭,Ca2+通道开放,Ca2+内流,促进胰岛素囊泡向胞外分泌;另一方面通过KATP通道非依赖途径,利用丙酮酸回补反应使葡萄糖充分酵解,既补充了由于糖酵解循环代谢造成的中间物的流失,又生成了促进胰岛素分泌的中间产物及促使ATP/ADP比率的增加,进一步促进胰岛素的释放。该文对丙酮酸回补反应的3个途径,即丙酮酸-苹果酸循环途径,丙酮酸-柠檬酸循环途径和丙酮酸-异柠檬酸循环途径,及其在胰岛素分泌中的作用等方面的研究进展进行了综述。

脂联素对小鼠葡萄糖刺激下胰岛素分泌的影响

目的观察脂联素干预后小鼠葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)的变化。方法分离获得原代小鼠胰岛,使用胶原酶Ⅴ消化小鼠胰腺,反复过滤离心后体式显微镜下手工挑取胰岛;胰岛的纯度采用双硫棕(DTZ)染色法鉴定;采用RTPCR的方法检验小鼠胰岛细胞表面脂联素受体(AdipoR)的表达;分为溶剂对照组(Con组)和脂联素组(Ad组),观察脂联素干预后小鼠胰岛在低糖(LG)和高糖(HG)刺激下胰岛素分泌的变化。结果该方法获得的胰岛外形饱满,状态良好;胰岛细胞表面AdipoR1及AdipoR2的表达分别为0.56±0.08、0.32±0.03,P<0.05;使用脂联素干预后,体外刺激胰岛素分泌实验,测得胰岛素含量使用胰岛素总量标化后分析得到:低糖时Ad组胰岛素总量(0.01410±0.00088)低于低糖时Con组(0.01470±0.00110),差异无统计学意义;高糖时Ad组胰岛素总量(0.04420±0.00408)显著高于高糖时Con组(0.03150±0.00274)及低糖时Ad组,P<0.05;高糖时Con组胰岛素总量显著高于低糖时Con组,P<0.01。结论使用胶原酶Ⅴ消化获得的小鼠原代胰岛纯度高、活性好;小鼠胰岛细胞表面有AdipoR的表达;低糖情况下,脂联素对胰岛素分泌无明显影响,高糖刺激下,脂联素对胰岛素分泌有促进作用。

磷脂酶C与葡萄糖刺激的胰岛素分泌

磷脂酶C（phospholipase C，PLC）是磷脂酰肌醇信号通路的关键酶，在体内分布极为广泛。许多细胞外信息分子，如激素、神经递质、免疫球蛋白、细胞因子、生长因子等都可以激活磷脂酰肌醇特异性PLCs。至今已鉴定出15种PLCs亚型。而每种PLCs亚型的特异分布和独特生理作用使得近年来对PLCs亚型的结构、功能、活化机制的研究成为热点。

CNC-bZIP蛋白Nrf1调节胰岛β细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌功能的研究

2型糖尿病是由遗传因素、环境因素和不良生活方式等共同作用而引发的代谢性疾病。目前，2型糖尿病已经成为全球性的公共卫生问题，其发病通常是胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能障碍共同作用的结果，而胰岛β细胞胰岛素分泌功能障碍则是糖尿病发生的直接原因之一。

20-HETE对小鼠葡萄糖刺激胰岛素分泌反应的影响

为了考察20-羟基二十碳四烯酸(20-hydroxyeicosatetraenoic acids, 20-HETE)对葡萄糖刺激胰岛素分泌反应的影响,本研究选择CYP4F2转基因小鼠和小鼠胰岛素瘤INS-1E细胞作为研究材料,通过LCMS/MS检测WT和TG小鼠的胰腺20-HETE水平。通过IPGTT测定小鼠葡萄糖耐量,通过ELISA测定小鼠血浆C肽水平来检测胰岛素分泌。通过Western blotting、Real time PCR、免疫组化和免疫荧光来检测小鼠胰腺或INS-1E细胞中Glut2、GSK-3β(Ser9点)和AKT (Ser473点)的磷酸化水平。TG小鼠的20-HETE水平((7.26±2.03) ng/mg蛋白)显著高于WT小鼠((2.14±0.76) ng/mg蛋白)。在用20-HETE合成的选择性抑制剂HET0016处理后,TG小鼠((0.33±0.07) ng/mg蛋白)和WT小鼠((0.27±0.06) ng/mg蛋白)胰腺组织中的20-HETE水平均急剧降低。给予葡萄糖处理30 min后,TG小鼠的血糖水平均显著高于WT小鼠,而血浆C肽水平显著低于WT小鼠(p<0.05)。与WT小鼠相比,TG小鼠的胰腺组织中Glut2 m RNA和蛋白水平显著降低。与WT小鼠相比,CYP4F2转基因小鼠的GSK-3β和AKT磷酸化均显著降低。20-HETE处理可导致INS-1E细胞中AKT/GSK-3β磷酸化水平和Glut2表达水平显著降低(p<0.05)。此外,用17 mmol/L葡萄糖处理INS-1E细胞1 h,20-HETE处理组的胰岛素分泌显著降低。应用GSK-3β选择性抑制剂TWS119预处理INS-1E细胞3 h后,TWS119 (一种GSK-3β选择性抑制剂)预处理显著逆转了Glut2表达水平的降低以及胰岛素分泌的减少。20-HETE主要通过AKT/GSK-3β信号通路来下调Glut2的表达,进而减弱胰岛素分泌,导致胰岛素分泌功能障碍。

胰岛素抵抗者的葡萄糖刺激胰岛素分泌的增强作用受损

T2DM根据IR和胰岛p细胞功能障碍进行分类，后者可能是胰岛B细胞胰岛素信号缺陷引起的。为评估IR人群较之胰岛素敏感人群在胰岛素调节葡萄糖刺激的胰岛素分泌（GSIS）方面的作用，美国研究者对10例IGT患者.

Ghrelin促进大鼠胰岛素合成及高葡萄糖诱导的胰岛素分泌

Ghrelin是由胃黏膜分泌的小分子脑肠肽。本研究探讨了Ghrelin对于大鼠胰岛细胞合成与分泌胰岛素的影响。将分离培养的大鼠胰岛分为Ghrelin处理组和对照组 :(1)在高浓度葡萄糖 (16 7mmol L)刺激时加入不同浓度Ghrelin 10 - 1 2 ～ 10 - 8mol L孵育 6 0min ,测定胰岛素分泌量。 (2 )在培养液中加入不同浓度Ghrelin 10 - 1 2 ～ 10 - 8mol L预处理 2 4h后 ,用RT PCR方法检测胰岛内前胰岛素原mRNA表达 ,并测定不同浓度葡萄糖 (5 6mmol L ,16 7mmol L)刺激时胰岛素分泌量。离体大鼠胰岛 ,在高糖刺激时加入Ghrelin 10 - 1 1 ～ 10 - 1 0 mol L共同培养 6 0min ,胰岛素分泌量增加高于对照组 (P <0 0 5 )。Ghrelin 10 - 1 2 ～ 10 - 1 0 mol L预处理 2 4h后 ,高糖刺激时胰岛素分泌量增加高于对照组 (P <0 0 5 ) ,同时Ghrelin 10 - 1 0 mol L促进胰岛内前胰岛素原mRNA表达高于对照组 (P <0 0 5 )。一定浓度的Ghrelin促进胰岛在高葡萄糖诱导下的胰岛素分泌 ,经Ghrelin预处理 2 4h后该作用更为显著。Ghrelin增加大鼠胰岛内前胰岛素原mRNA的表达 ,促进胰岛素合成。

小檗碱对胰岛素分泌缺陷型糖尿病大鼠葡萄糖激酶相关糖代谢的影响

目的探讨小檗碱对胰岛素分泌缺陷型糖尿病大鼠肝脏葡萄糖激酶(GK)相关糖代谢的影响。方法观察小檗碱对实验性胰岛素分泌缺陷型糖尿病大鼠空腹血糖、血清胰岛素(INS)、糖原、肝脏乳酸(LA)、GK活性及其蛋白表达的影响。结果与模型组比较,小檗碱组大鼠血清空腹血糖水平明显降低,而INS、肝脏LA无明显变化,肝糖原合成增多、GK活性及其蛋白表达明显增高。结论小檗碱能调节胰岛素分泌缺陷型糖尿病大鼠糖代谢,这可能与其促进GK活性及其蛋白表达有关。

葡萄糖诱导胰岛素合成分泌机制与特点

胰岛素合成和分泌受多种因素的调节,葡萄糖是最重要的调节物质,它诱导胰岛B细胞合成和分泌胰岛素有多条信号途径,但主要是通过ATP敏感钾通道途径和第2信使途径使胰岛B细胞内的钙离子、环磷酸腺苷、三磷酸肌醇、蛋白激酶A、蛋白激酶C、一氧化氮等物质含量增加,从而诱导胰岛素的分泌。葡萄糖在3个水平调节胰岛素基因表达：增加转录、稳定mRNA和增加翻译。机体内胰岛素合成、贮存和分泌是相互联系的统一过程。

不同饮食负荷对葡萄糖依赖性促胰岛素分泌多肽的影响

目的探讨不同饮食负荷对正常糖耐量人群的葡萄糖依赖性促胰岛素分泌多肽(glucose-dependent insulinotropicploypeptide,GIP)分泌模式的影响,及其与胰岛素分泌、血浆葡萄糖水平的关系。方法 14例正常糖耐量受试者先后接受75 g葡萄糖耐量及混合餐耐量试验,检测空腹及葡萄糖或混合餐后15,30,60,90和120 min的血糖、胰岛素及GIP。结果(1)葡萄糖负荷后GIP的第一个峰值在糖负荷后15 min(45.09±4.67)pmol/L,短暂下降之后持续上升至120 min(59.66±11.73)pmol/L;(2)混合餐负荷后GIP分泌呈双时相曲线,第一峰值在15 min(71.69±14.19)pmol/L,显著高于同时点的葡萄糖负荷(P<0.05);第二个峰在90 min(55.35±13.19)pmol/L。两种饮食负荷后GIP曲线下面积无统计学差异(P>0.05);(3)随着混合餐负荷时GIP早期分泌(15 min)第一峰值升高幅度较葡萄糖负荷大,胰岛素达峰时间提前(30 min vs 60min),同时混合餐负荷后15 min血糖升高幅度明显低于葡萄糖负荷(P<0.05)。结论正常糖耐量人群两种饮食负荷后GIP分泌曲线明显不同,混合餐后GIP分泌呈典型的双相分泌,其第一峰值显著高于葡萄糖负荷,提示混合餐(含脂肪)刺激GIP释放较强,使胰岛素达峰时间提前,可能是混合餐血糖峰值较低的重要原因之一。

2型糖尿病患者口服葡萄糖耐量试验中血糖与胰岛β细胞分泌功能、胰岛素抵抗的相关性研究

目的探讨使用外源性胰岛素的2型糖尿病（T2DM）患者口服葡萄糖耐量试验（OGTr）各时间点血糖与胰岛8细胞分泌功能、胰岛素抵抗（IR）的相关性。方法对279例皮下注射胰岛素治疗的T2DM患者血糖达标后行OGTT试验。依据糖化血红蛋白（HbAlc）水平分为≥9％和〈9％两组，将空腹血糖（FPG）、空腹C肽（FCP）代入稳态模型2（HOMA2）计算胰岛β细胞分泌功能（HOMA2-β）、胰岛素抵抗（HOMA2-IR），并进行比较分析。结果多因素线性回归分析结果显示，各时间点血糖与HOMA2．B均呈负相关（P〈0．01）。HbA1c≥9％组FPG与HOMA2-IR呈正相关（t=3．620，P=0．001），而其他各时间点血糖与HOMA2-IR均不相关（P〉0．05）。HbAlc〈9％组FPG、0．5hPG与HOMA2-IR呈正相关（t=2．861，P=0．006，t=2．215，P=0．031），1hPG、2hPG、3hPG与HOMA2-IR均不相关（P〉0．05）。结论应用外源性胰岛素的T2DM患者OGTT中FPG可评价胰岛β细胞分泌功能及IR情况。血糖控制越差者餐后血糖对IR的判定意义越小。

线性最小模型在分析胰岛素敏感性和分泌功能中的应用——660例天津地区中国人口服葡萄糖耐量试验资料的分析研究

目的探讨利用口服葡萄糖耐量试验(OGTT)中5个时点的血糖值和胰岛素值,借助线性最小模型(LMM)计算胰岛素敏感指数(ISI)和分泌功能指数(BCI)的可行性。方法对660例天津地区的中国人正常糖耐量组150例、糖调节受损组220例、糖尿病组290例的OGTT资料进行研究,分析比较4种ISI:李氏IAI、DeFronzoISI、HOMAIR、LMMISI,和5种BCI:李氏MBCI、HOMAβ、ΔI30/ΔG30、ΔI60/ΔG60、LMMBCI。结果(1)用HOMAβ调整后,在4种ISI中,LMMISI与G梯形的相关性相对最好(r=-0.6083,P<0.001)。(2)用DeFronzoISI调整后,在5种BCI中,LMMBCI与G梯形的相关性相对最好(r=-0.9092,P<0.001)。(3)LMMISI与LMMBCI相配合可以较好的解释G梯形的变化(决定系数R2=0.836,P<0.001)。结论利用OGTT资料所计算的LMMISI和LMMBCI是一对相对较好的反映胰岛素敏感性和胰岛素分泌功能的指数。

胰岛素抵抗者的葡萄糖刺激胰岛素分泌的增强作用受损

T2DM根据胰岛素抵抗和胰岛p细胞功能障碍进行分类，后者可能是p细胞胰岛素信号缺陷引起的。为了评估胰岛素抵抗人群较之胰岛素敏感人群在胰岛素在调节葡萄糖刺激的胰岛素分泌（GSIS）方面的作用，美国研究者对10例IGT患者，ll例T2DM患者以及8名健康对照者进行了研究。输注生理盐水或采用B28-Asp-胰岛素进行正常血糖一高血胰岛素钳夹试验4h后给予右旋糖80min评估胰岛素分泌反应。

胰岛素抵抗者的葡萄糖刺激胰岛素分泌的增强作用受损

T2DM根据m和胰岛β细胞功能障碍进行分类，后者可能是β细胞胰岛素信号缺陷引起的。为了评估珉人群较之胰岛素敏感人群在胰岛素在调节葡萄糖刺激的胰岛素分泌（GSIS）方面的作用，美国研究者对10例IGT患者，11例T2DM患者以及8名健康对照者进行了研究。输注生理盐水或采用1328-Asp-胰岛素进行正常血糖-高血胰岛素钳夹试验4h后给予右旋糖80min评估胰岛素分泌反应。