基于UBA2/PTEN/PI3K/Akt通路探讨蔓荆子黄素对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 基于泛素样修饰激活酶2(UBA2)/磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路探究蔓荆子黄素对结直肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 取对数生长期的SW480细胞,对照组细胞常规培养,蔓荆子黄素组细胞加入10μmol/L蔓荆子黄素培养,UBA2抑制剂组细胞加入0.5μmol/L UBA2抑制剂培养,蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组细胞加入10μmol/L蔓荆子黄素和0.5μmol/L UBA2抑制剂共培养。CCK-8实验检测细胞增殖情况,克隆形成实验观察细胞的单克隆形成能力,划痕实验观察细胞的迁移能力,Transwell实验观察细胞的侵袭能力,Western blot法检测细胞中UBA2/PTEN/PI3K/Akt通路相关蛋白表达情况。结果 CCK-8实验和克隆形成实验显示,UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组培养72 h后的细胞增殖吸光度OD值明显低于蔓荆子黄素组(P均<0.05),细胞克隆形成数量均明显少于蔓荆子黄素组(P均<0.05),UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组培养不同时间的细胞增殖吸光度OD值和细胞克隆形成数量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。划痕实验和Transwell实验显示,UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组划痕间距均明显宽于蔓荆子黄素组(P均<0.05),穿膜细胞数量均明显少于蔓荆子黄素组(P均<0.05),UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。蔓荆子黄素组、UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组细胞中PTEN蛋白相对表达量均明显高于对照组(P均<0.05),UBA2、p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量均明显低于对照组(P均<0.05);UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组细胞中PTEN蛋白相对表达量均明显高于蔓荆子黄素组(P均<0.05),UBA2、p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量均明显低于蔓荆子黄素组(P均<0.05),UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组UBA2、PTEN、p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 蔓荆子黄素可能通过抑制UBA2/PTEN/PI3K/Akt信号通路发挥抗结直肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭的能力。

中药蔓荆子的化学成分及药理作用研究进展

蔓荆子是我国用药历史悠久的传统中药。主要含有萜类、黄酮类、木脂素类、酚酸类、甾类、蒽醌类等化学成分;具有广泛的生物活性,包括解热镇痛、抗菌、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、降血糖等,常用于治疗风热、感冒头痛、偏头痛等症状。本文将从化学成分和药理作用方面,对蔓荆子近年来研究进展进行综合归纳整理,为蔓荆子进一步开发应用提供参考。

基于标准汤剂的蔓荆子配方颗粒质量标准研究

目的建立基于标准汤剂的蔓荆子配方颗粒质量标准。方法建立15批标准汤剂、3批配方颗粒HPLC特征图谱。一测多评法测定原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷、蔓荆子黄素的含量,计算从饮片到标准汤剂、配方颗粒的转移率,再进行聚类分析、主成分分析。结果各批样品特征图谱中有7个共有峰,相似度均大于0.90,指认出5个。标准汤剂、配方颗粒中5种成分含量、转移率接近。结论蔓荆子配方颗粒、标准汤剂一致性良好。该方法合理可靠,可为蔓荆子配方颗粒质量控制、工艺优化提供参考。

基于主成分分析的不同产地蔓荆子的质量评价研究

目的:考察江西省、云南省、安徽省、山东省、福建省等10个不同产地蔓荆子药材质量,探讨各产地蔓荆子的质量差异。方法:参照《中国药典》2020版所收载的蔓荆子项下的内容为依据,对不同产地蔓荆子样品进行性状、显微鉴别、薄层鉴别,同时进行水分、总灰分、浸出物、蔓荆子黄素含量测定。结果:不同产地蔓荆子药材性状、显微鉴别和薄层鉴别特征明显,水分、总灰分、浸出物及含量均符合药典规定;水分范围6.92%~11.92%,总灰分范围3.59%~4.19%,醇溶性浸出物范围10.27%~12.20%,蔓荆子黄素的含量范围0.061%~0.079%。结论:10批不同产地蔓荆子在质量品质方面存在一定差异,其中产自云南省普洱市景谷傣族彝族自治县的蔓荆子药材品质综合表现较好,本研究可为蔓荆子药材的质量标准提升提供参考。

HPLC法研究不同产地蔓荆子果实及花萼中蔓荆子黄素含量的差异

目的收集不同产地的蔓荆子果实及花萼并测定其蔓荆子黄素的含量,探讨不同产地蔓荆子的品质及去除花萼的影响。方法用高效液相色谱法分别对蔓荆子果实及花萼中蔓荆子黄素含量进行测定。色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇4 mL·L^(-1)磷酸溶液(60∶40);检测波长为258 nm;柱温为30℃;流速为1.0 mL·min^(-1)。结果蔓荆子中蔓荆子黄素的回归方程为y=13001 x-3.59(r=0.9996),线性范围为14.5~72.5μg·mL^(-1)。结论不同产地的蔓荆子药材品质差异较大,其蔓荆子黄素含量不同。同时花萼中同样含有蔓荆子黄素,且部分地区所产的蔓荆子花萼中蔓荆子黄素的含量较高,去除花萼将影响药材品质。

基于网络药理学和分子对接技术探讨蔓荆子防治急性心肌梗死的作用机制

目的:基于网络药理学和分子对接技术探讨蔓荆子防治急性心肌梗死(AMI)的作用机制。方法:应用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)对蔓荆子的有效成分及作用靶点进行筛选,通过SwissTargetPrediction平台进行补充;利用UniPort数据库注释靶点基因;通过GeneCards、DisGeNET、TTD、OMIM数据库获取AMI的疾病靶点;将药物靶点与疾病靶点取交集,采用Cytoscape 3.9.1软件构建“药物-药物化合物-靶点”可视化网络图;应用Rstudio 4.1.3通过Bioconductor数据库对交集靶点进行基因本体(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;通过STRING数据库对交集靶点进行蛋白相互作用(PPI)分析,利用Cytoscape 3.9.1软件CytoHubba插件对PPI网络进行分析,获得关键靶点。通过AutoDock Tools 1.5.7软件和Pymol 2.4.0对部分关键靶点蛋白受体和化合物配体进行分子对接验证和可视化分析。结果:筛选得到蔓荆子中的活性成分共计27个,药物与疾病交集靶点185个;通过蔓荆子-药物化合物-靶点网络模型发现其防治AMI的主要活性成分为槲皮素、木犀草素、山柰酚、豆甾醇、牡荆素C;GO分析显示主要与调节脂多糖应答的生物过程相关,KEGG通路富集分析显示主要作用机制可能与脂质和动脉粥样硬化、糖尿病并发症受体信号通路、血流剪切应力与动脉粥样硬化、白细胞介素-17(IL-17)信号通路、肿瘤坏死因子(TNF)信号转导通路有关。结论:蔓荆子对AMI的干预作用具有多成分、多靶点、多通路、多环节的调控特点,可能通过调节脂代谢、抗炎、免疫调节、促进血管生成以及调节细胞自噬等过程发挥治疗作用。

蔓荆子黄素通过调控糖代谢重编程抑制肝癌细胞增殖

目的探讨蔓荆子黄素对肝癌细胞增殖的影响及其分子机制。方法用不同浓度(0.5、1.0、2.0μmol/L)的蔓荆子黄素处理肝癌细胞SNU⁃368、SNU⁃739及人肝永生化细胞THLE⁃2,采用MTS实验和克隆形成实验检测蔓荆子黄素对肝癌细胞生长的影响,同时选出蔓荆子黄素处理肝癌细胞的适宜浓度。用过表达HIF⁃1α慢病毒及其阴性对照慢病毒感染肝癌细胞SNU⁃368和SNU⁃739,同时用适宜浓度的蔓荆子黄素处理过表达HIF⁃1α的肝癌细胞,采用qRT⁃PCR和Western blot检测肝癌细胞中HIF⁃1α、C⁃MYC和P53的表达情况,通过葡萄糖摄取水平、乳酸生成水平、细胞外培养液pH值和细胞氧耗检测实验分析肝癌细胞糖酵解、氧化磷酸化的情况,采用MTS实验和克隆形成实验检测细胞的增殖情况。结果蔓荆子黄素可降低肝癌细胞SNU⁃368和SNU⁃739的增殖能力,且呈一定的剂量和时间依赖效应。1.0μmol/L蔓荆子黄素处理肝癌细胞SNU⁃739和SNU⁃368后,可降低肝癌细胞中的葡萄糖摄取水平和乳酸生成水平(均P<0.01),提高细胞外培养液pH值和细胞氧耗率(均P<0.01),抑制肝癌细胞中HIF⁃1α的表达(均P<0.05)。过表达HIF⁃1α可促进肝癌细胞的糖酵解,抑制氧化磷酸化,增强肝癌细胞的增殖能力(均P<0.05),而蔓荆子黄素可以逆转过表达HIF⁃1α对肝癌细胞增殖的促进作用(均P<0.05)。结论蔓荆子黄素可通过抑制HIF⁃1α的表达抑制细胞糖酵解和促进氧化磷酸化,进而抑制肝癌细胞增殖。

黄荆子与蔓荆子特征图谱及酚类、黄酮类含量测定研究

通过特征图谱及多指标含量测定对黄荆子和蔓荆子进行对比研究,在采用UPLC建立黄荆子药材特征图谱方法的基础上通过高分辨质谱对其化学成分进行指认,指认了其中9个成分,分别为原儿茶酸A、原儿茶醛、4-羟基苯甲酸、香草酸、异荭草苷、荭草苷、穗花牡荆苷、牡荆苷、异牡荆苷,并进行含量测定,15批黄荆子与12批蔓荆子的9个成分均有一定的差异,从多批次的均值来看,黄荆子的原儿茶酸、原儿茶醛、4-羟基苯甲酸、香草酸、穗花牡荆苷的含量高于蔓荆子,异荭草苷、荭草苷的含量低于蔓荆子;另外牡荆苷、异牡荆苷在蔓荆子中未有检出。本研究采用UPLC特征图谱结合多指标含量测定对黄荆子及蔓荆子进行对比研究,为黄荆子及蔓荆子的药材质量控制和临床用药提供参考。

蔓荆子药材与炒蔓荆子指纹图谱对比研究

目的:采用高效液相色谱法建立蔓荆子原药材和炒蔓荆子的指纹图谱,从而考察蔓荆子炒制前后的质量传递信息,为炒蔓荆子质量控制及质量标准的建立提供依据。方法:月旭色谱柱,流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液线性梯度洗脱,流速:1.0mL·min^(-1),检测波长:258nm,进样量:10μL;柱温:30℃,理论板数按蔓荆子黄素峰计算应不低于2000。测定28批蔓荆子原药材和炒蔓荆子的指纹图谱,并用中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012版对两者相似度进行配对t检验比较分析。结果:在选定的色谱条件下,确定4个色谱峰构成28批蔓荆子的指纹图谱的特征峰,蔓荆子炒制前后指纹图谱基本一致(配对样本相关系数γ=0.9684,均值差异检验t=0.1206,df=27,P=0.9049),蔓荆子炮制后指纹图谱相似度及蔓荆子黄素含量的量值传递率皆达96%以上,平均值达100.0%以上。结论:炒蔓荆子未改变蔓荆子原药材的化学成分,保留蔓荆子原药材的质量属性,质量传递率高。

一测多评法同时测定蔓荆子配方颗粒中5种化学成分的含量

目的建立一测多评(QAMS)法同时测定蔓荆子配方颗粒中5种成分的含量。方法采用UPLC法,流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液,梯度洗脱;流速为0.3 mL·min^(-1);柱温为30℃;检测波长为258 nm;进样量为1μL。以蔓荆子黄素为内参物,建立其与原儿茶酸、对羟基苯甲酸、香草酸和异荭草素的相对校正因子,并在不同色谱仪和色谱柱上考察各成分相对校正因子的稳定性和耐用性。结果原儿茶酸、对羟基苯甲酸、香草酸、异荭草素、蔓荆子黄素浓度分别在0.4221~42.2064μg·mL^(-1),0.7958~79.5760μg·mL^(-1),0.5038~50.3840μg·mL^(-1),0.5464~54.6370μg·mL^(-1),0.5918~59.1766μg·mL^(-1)范围内线性关系良好;平均加样回收率分别为101.41%,96.65%,101.12%,97.90%,99.64%,RSD均小于3.0%(n=9);相对校正因子分别为1.42,1.75,1.15,0.64。QAMS计算10批蔓荆子配方颗粒5种成分的含量与外标法(ESM)测定值间均无明显差异。结论建立的QAMS法简单可行、结果准确,可为提升蔓荆子配方颗粒质量控制方法提供参考。

蔓荆子黄素调控miR-378/PRRX1轴对胃癌生物学行为的影响

目的探究蔓荆子黄素(Cas)对胃癌(GC)SGC-7901细胞增殖、侵袭、迁移及微小RNA-378(miR-378)/配对相关同源框1(PRRX1)轴的影响。方法不同浓度Cas(0、5、10、20、40、80μmol/L)处理SGC-7901细胞48 h。将对数生长期的SGC-7901细胞分为:对照组、Cas低浓度组(10μmol/L)、Cas中浓度组(20μmol/L)、Cas高浓度组(40μmol/L)、Cas高浓度+miR-378小干扰RNA(siRNA)组(40μmol/L Cas+miR-378 siRNA)、Cas高浓度+PRRX1组(40μmol/L Cas+PRRX1过表达质粒)、Cas高浓度+miR-378 siRNA+PRRX1组(40μmol/L Cas+miR-378 siRNA+PRRX1过表达质粒)。MTT法、集落形成实验、流式细胞术、Transwell小室、划痕实验分别测定各组SGC-7901细胞活力、集落形成数量、凋亡率、侵袭及迁移能力;qPCR、蛋白印迹实验分别检测SGC-7901细胞miR-378、PRRX1蛋白表达水平;双萤光素酶实验验证miR-378和PRRX1靶向关系;体内异种移植SGC-7901细胞建立裸鼠移植瘤模型,验证Cas的抗癌活性及对miR-378表达的影响。结果Cas 10、20、40、80μmol/L组SGC-7901细胞活力呈浓度依赖性降低(P<0.05),选取10、20、40μmol/L的Cas作为后续研究浓度。与对照组相比,Cas低、中、高浓度组SGC-7901细胞活力、集落形成数量、侵袭细胞数量、划痕愈合率、PRRX1蛋白表达水平依次降低(P<0.05),细胞凋亡率和miR-378表达水平依次升高(P<0.05);与Cas高浓度组相比,Cas高浓度+miR-378 siRNA组和Cas高浓度+PRRX1组SGC-7901细胞活力、集落形成数量、侵袭细胞数量、划痕愈合率、PRRX1蛋白表达水平升高,细胞凋亡率降低(P<0.05),Cas高浓度+miR-378 siRNA组SGC-7901细胞miR-378表达水平降低(P<0.05);与Cas高浓度+miR-378 siRNA组相比,Cas高浓度+PRRX1组SGC-7901细胞miR-378表达水平升高(P<0.05);与Cas高浓度+miR-378 siRNA组、Cas高浓度+PRRX1组相比,Cas高浓度+miR-378 siRNA+PRRX1组SGC-7901细胞活力、集落形成数量、侵袭细胞数量、划痕愈合率、PRRX1蛋白表达水平升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05)。在SGC-7901细胞中,miR-378可靶向调控PRRX1表达;Cas可抑制体内裸鼠移植瘤生长并促进miR-378表达(P<0.05)。结论Cas可能通过调控miR-378/PRRX1轴抑制SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移。

高速逆流色谱分离纯化蔓荆子中的活性成分

应用高速逆流色谱法(HSCCC)分离纯化蔓荆子中的活性成分。以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(体积比为3:6:3.6:3)为两相溶剂体系,在转速为800r/min、流速为1.5mL/min、检测波长为254nm的条件下进行分离,所得馏分经高效液相色谱法(HPLC)检测,并经电喷雾电离(ESI)质谱和核磁共振谱(NMR)鉴定化合物的结构。从250mg蔓荆子粗提物中一次性分离得到4个化合物,分别为23mg对羟基苯甲酸、15mg3,6,7-三甲基槲皮万寿菊素、24mg蔓荆子黄素和5mg蒿黄素,其纯度约为93.1%、97.3%、98.7%和98.5%。该法具有简便、快速、重复性好的优点,为分离蔓荆子中的活性成分提供了新的方法。

不同产地蔓荆子中黄酮类成分含量分析

目的:分析不同产地蔓荆子中总黄酮和蔓荆子黄素的含量,探讨蔓荆子药材的品质变异情况。方法:采用芦丁比色法对蔓荆子中总黄酮含量进行分析,建立HPLC法对蔓荆子黄素进行含量分析。色谱柱:Zorbax 80A Extend-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);保护柱:Dikma Easyguard C18柱(10 mm×4.6 mm,5μm);乙腈-0.5%磷酸作为流动相进行梯度洗脱;流速:1.0 ml/min;柱温:25℃,检测波长258 nm。结果:总黄酮的线性回归方程为A=12.49c+0.003 7(r=0.999 9),线性范围:10.3～51.6μg/ml。蔓荆子黄素回归方程为A=67 712c+170.7(r=0.999 7),线性范围2.49～243.2μg/ml。结论:不同产地的单叶蔓荆和蔓荆中黄酮类成分和蔓荆子黄素含量差异较大,可能受到环境、纬度等多种因素影响。

市售蔓荆子、炒蔓荆子质量考察及药典相关标准的商榷

目的对市售蔓荆子、炒蔓荆子的质量进行考察。方法采用药典法对不同产地、批次蔓荆子、炒蔓荆子的TLC、水分、总灰分、醇浸出物、蔓荆子黄素含有量进行检测。结果不同产地、批次蔓荆子、炒蔓荆子的质量存在明显差异。结论建议药典中对以上饮片的TLC鉴别由碱板改为硅胶G板。

HPLC法测定蔓荆子黄素的含量

以蔓荆子黄素为指标，用反相 ＨＰＬＣ法测定了蔓荆子中的含量，实验采用 Ｃ_(１８)柱，以甲醇－０．４％磷酸溶液（６０： ４０）为流动相，检测波长 ２５８ｎｍ，用外标法测定，回收率为 ９８．１８％，ＲＳＤ１．４６％，线性范围 ０．１５～０．７５μｇ。本法快速简便，重现性好，为蔓荆子质量控制提供了可靠的依据。

炮制对蔓荆子中主要黄酮成分水溶出率的影响

目的研究炮制对蔓荆子中黄酮类成分含量的影响,探索炮制对蔓荆子中黄酮类成分水溶出率的影响。方法建立高效液相色谱法,采用Agilent TC-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇(A)-1%冰醋酸水(B)梯度洗脱(0~10 min:25%~35%A;10~18 min:35%A;18~45 min:35%~75%A),流速1 m L·min-1,检测波长254 nm,柱温30℃。同时测定蔓荆子生品和炮制品中异荭草素、蔓荆子黄素的含量及水溶出率,分析炮制前后变化。结果上述2个成分的含量,炮制前分别为0.035%、0.066%,炮制后分别为0.033%、0.056%;异荭草素、蔓荆子黄素炮制前的水溶出率分别为:40.00%、12.12%,炮制后分别为60.61%、14.29%。结论炮制会增加蔓荆子中异荭草素、蔓荆子黄素的水溶出率。

江西单叶蔓荆子栽培技术及产地加工

单叶蔓荆子是江西的特色中药材品种,具有较高的药用价值,在医疗保健中应用较为广泛。单叶蔓荆子家化栽培时间较短,其技术成熟度有待提高。基于此,阐述蔓荆子优质高产栽培技术,包括育苗、栽培田间管理、防治病害及采收与初加工。

单叶蔓荆不同器官中蔓荆子黄素含量测定

目的研究单叶蔓荆不同器官中蔓荆子黄素的含量,为选择单叶蔓荆的药用部位及栽培利用提供科学依据。方法采用高效液相色谱法测定单叶蔓荆不同器官中蔓荆子黄素的含量。结果自然晾干后,果实中蔓荆子黄素的含量最高(0.030 8%),叶片次之(0.012 0%),未能检测出枝条和根系中蔓荆子黄素含量。结论单叶蔓荆以果实入药合理,叶片可进一步开发。

福建野生单叶蔓荆子总黄酮与蔓荆子黄素含量分析

对福建省不同地区野生单叶蔓荆子总黄酮和蔓荆子黄素含量进行测定,不同地区含量差异进行比较分析,确定福建野生单叶蔓荆子的质量水平,为进一步开发福建野生单叶蔓荆子提供基础研究数据。回流提取总黄酮,紫外分光光度法(UV法)测定总黄酮含量,高效液相色谱法(HPLC法)测定蔓荆子黄素含量。结果表明不同产地野生单叶蔓荆子总黄酮含量范围为7.081%～10.792%,平均含量9.040%;蔓荆子黄素含量范围为0.06170%～0.12578%,平均含量0.08878%。福建省不同地区野生单叶蔓荆子质量(以蔓荆子黄素含量为指标)均符合药典规定,可进一步开发利用。

异地驯化对蔓荆子中蔓荆子黄素含量的影响

目的研究异地驯化对蔓荆子中蔓荆子黄素含量的影响。方法采用高效液相色谱法测定各产地蔓荆集中驯化一年后干燥成熟果实中蔓荆子黄素的含量。结果各野生蔓荆从海边或者湖边沙地移至水肥条件较好的壤土中驯化一年后,果实中蔓荆子黄素的平均含量反而下降了56.1%。结论生长环境对蔓荆子黄素的含量有显著影响。