天麻素与薯蓣皂苷元配伍对大鼠缺氧损伤脑微血管内皮细胞的保护作用

目的探讨天麻素(Gas)、薯蓣皂苷元(Dio)及其组合物(GDC)对大鼠缺氧损伤脑微血管内皮细胞(BMECs)的保护作用和对脑微血管新生的影响及其作用机制。方法将BMECs分为5组:正常对照组,模型对照组,Gas组(1、2、4、8、16、32μmol·L^(-1)),Dio组(0.25、0.5、1、2、4、8μmol·L^(-1)),GDC组(Gas和Dio浓度分别为1和0.25、2和0.5、4和1、8和2、16和4、32和8μmol·L^(-1))。分组给药12 h后,对模型对照组、Gas组、Dio组和GDC组通过氧糖剥夺法建立BMECs缺氧模型。检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、白细胞介素1β(IL-1β)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)浓度;观察Hoechst 33258、FITC-Annexin V/PI染色,采用Transwell小室实验、细胞划痕实验和小管形成实验,考察Gas、Dio及GDC对缺氧损伤BMECs的保护作用及促进血管新生作用。进一步利用网络药理学和分子对接方法研究GDC抗脑缺血的作用机制。结果Gas、Dio以2、0.5μmol·L^(-1)组合时,可显著提高缺氧损伤BMECs细胞活力(P<0.05),促进细胞增殖;与模型对照组比较,Gas组LDH漏出率降低(P<0.05);Gas组、Dio组与GDC组IL-1β含量均显著下降(均P<0.05),Gas组、GDC组SOD活力升高(P<0.05),Gas组、Dio组以及GDC组凋亡小体减少。GDC可促进BMECs缺氧模型的增殖、侵袭、迁移以及小管形成,表明其在细胞水平上一定程度促进血管新生。网络药理学研究发现,Gas与半胱天冬酶3(CASP3)、过氧化物酶体增生激活受体γ(PPARG)、凝血因子Ⅱ(F2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)1蛋白具有良好的结合活性,Dio与内皮一氧化氮合成酶(NOS3)、KDR蛋白具有良好的结合活性,Gas、Dio可能主要通过血管内皮生长因子(VEGF)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)-Akt信号通路以及缺氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路调控脑缺血后血管新生。结论Gas、Dio及GDC具有抗缺氧损伤作用并可促进缺氧损伤后血管新生,作用机制可能与其作用于Akt1、NOS3、VEGFR2等蛋白,调控VEGF/Akt/MAPK等信号通路促进血管新生有关。

薯蓣皂苷元滴丸制备工艺优化及其体内药动学研究

目的 优化薯蓣皂苷元滴丸制备工艺,并考察其体内药动学。方法 以成型率为评价指标,单因素试验考察基质种类、基质与药物比例、冷凝温度、滴距对成型率的影响,测定体外溶出速率和累积溶出度。HPLC法测定薯蓣皂苷元血药浓度,计算主要药动学参数。结果 最佳条件为基质PEG 4000,基质与药物比例6∶1,冷凝温度10℃,滴距8 cm,成型率为95.68%,30 min内累积溶出度达95.68%。与原料药、物理混合物比较,滴丸tmax缩短(P<0.01),Cmax、AUC升高(P<0.01),相对生物利用度增加至4.53倍。结论 滴丸可提高薯蓣皂苷元溶出度和口服生物利用度。

磺酸功能化离子液体催化制备薯蓣皂苷元研究

目的:探索磺酸功能化离子液体1-磺丁基-3-甲基咪唑三氟甲烷磺酸盐([BHSO_(3)MIm]CF3SO_(3))作为催化剂在薯蓣皂苷元制备中的应用。方法:以盾叶薯蓣提取粗皂苷为原料、[BHSO_(3)MIm]CF3SO_(3)为催化剂,水解制备薯蓣皂苷元。通过单因素试验对反应温度、反应时间、离子液体用量、溶剂体积进行考察,采用响应面分析方法进一步优化反应条件,确定最佳反应条件。进行12次循环实验,考察该离子液体循环使用性能。结果:最佳反应条件为反应温度100℃、反应时间5.17 h、离子液体用量2.56 g、水溶剂体积6 mL,在该条件下薯蓣皂苷元产率为12.99%。该离子液体循环6次时,循环效率为82.70%,循环10次时循环效率降至58.12%。结论:在薯蓣皂苷元制备过程中,[BHSO_(3)MIm]CF3SO_(3)作为酸催化剂,表现出了水解效率高、性能稳定、易于回收、循环使用性能良好等优势,具备较强的应用前景。

薯蓣皂苷元衍生物ML5激活NRF2信号通路改善AD的机制研究

通过体外和体内实验研究了薯蓣皂苷元衍生物ML5的神经保护作用,并对其机制进行了探讨。结果表明,ML5可改善β淀粉样蛋白(Aβ)所致的小鼠学习和认知障碍,保护海马区神经元;ML5具有减轻过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤的功效,且提高三磷酸腺苷(ATP)和线粒体膜电位的水平;免疫印迹和免疫荧光结果显示,ML5可激活核因子红细胞系2相关因子2(NRF2)信号通路,增加NRF2、血红素加氧酶-1(HO-1)及NAD(P)H醌脱氢酶(NQO-1)的表达水平。ML5可能是一种治疗阿尔茨海默症(AD)的有效药物,通过靶向NRF2通路,进而发挥抗氧化和神经保护作用。

薯蓣皂苷元对人骨肉瘤细胞自噬的影响

目的探讨薯蓣皂苷元对人骨肉瘤细胞自噬的影响。方法MTT法检测薯蓣皂苷元对人骨肉瘤MG63和U2OS细胞增殖的影响,透射电镜技术观察细胞超微结构,免疫荧光法观察细胞自噬蛋白Beclin1表达,Western blot法检测细胞自噬分子标记物LC3、Beclin1和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达。薯蓣皂苷元联合PI3K通路抑制剂LY294002处理MG63和U2OS细胞,RT-qPCR法检测细胞Beclin1 mRNA表达;联合自噬抑制剂3-methyladenine(3-MA)处理MG63和U2OS细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,Western blot法检测细胞cleaved-caspase3蛋白表达,RT-qPCR法检测细胞caspase3 mRNA表达。结果薯蓣皂苷元能抑制骨肉瘤MG63和U2OS细胞增殖,促使自噬体生成,增加LC3Ⅱ、Beclin1蛋白表达(P<0.05,P<0.01),降低LC3 I蛋白表达(P<0.01),可抑制PI3K/Akt/mTOR通路蛋白磷酸化水平(P<0.05,P<0.01);联合自噬抑制剂干预后,薯蓣皂苷元对骨肉瘤细胞的增殖抑制作用降低,并下调了细胞caspase3 mRNA、cleaved-caspase3蛋白表达(P<0.01)。结论薯蓣皂苷元能抑制骨肉瘤细胞增殖,诱导细胞产生自噬,可能与激活PI3K/Akt/mTOR信号通路以及上调LC3Ⅱ和Beclin1蛋白表达有关,同时其诱导的自噬可促使骨肉瘤细胞死亡,诱导自噬性凋亡。

基于响应面法优化白背牛尾菜中薯蓣皂苷元的提取工艺研究

目的:对白背牛尾菜中薯蓣皂苷元提取工艺进行优选。方法:选取乙醇浓度、提取时间、料液比、酸浓度、水解时间、水解温度为主要因素,应用响应曲面法以及Box-Behnken试验设计方法研究各因素的交互作用及其对白背牛尾菜中薯蓣皂苷元得率的影响,建立响应曲面模型并得到最佳工艺参数。结果:模拟后的最佳工艺为在提取溶剂为81%乙醇,提取时间为80 min,料液比为1∶23,酸浓度为1.27 mol/L,水解温度为95℃,水解时间为4.5 h,在此条件下薯蓣皂苷元实测得率为1.70mg/g,与响应曲面拟合所得方程的预测值1.71 mg/g符合良好。结论:响应面法优化后所得的制备工艺稳定可行,可用于白背牛尾菜中薯蓣皂苷元的制备。

不同制备工艺对薯蓣皂苷元固体分散体体外溶出、物相特征、体内药动学的影响

目的 考察不同制备工艺对薯蓣皂苷元固体分散体体外溶出、物相特征、体内药动学的影响。方法 以Soluplus为载体,分别采用共沉淀法、微波淬冷法、冷冻干燥法制备固体分散体,测定溶解度、溶出度,采用差示扫描量热分析、粉末X射线衍射、扫描电镜、傅里叶红外光谱研究物相特征,拟合水接触角曲线。30只大鼠随机分为5组,分别灌胃给予原料药、物理混合物、3种制备工艺所得固体分散体的0.5%CMC-Na混悬液(100 mg/kg),于0、0.083、0.25、0.5、0.75、1、2、3、4、6、8、12、24、36、48、72 h采血,UPLC-MS/MS法测定薯蓣皂苷元血药浓度,计算主要药动学参数。结果 固体分散体溶解度、120 min内累积溶出度高于原料药,以共沉淀法所得更明显。薯蓣皂苷元以无定形态存在于共沉淀法、微波淬冷法所得固体分散体中,以晶体存在于冷冻干燥法所得固体分散体中。薯蓣皂苷元与Soluplus之间存在相互作用。固体分散体水接触角小于原料药、物理混合物,共沉淀法所得固体分散体的水接触角最小,润湿性最强。共沉淀法、微波淬冷法所得固体分散体的溶解机制为载体控制,冷冻干燥法所得固体分散体的溶解机制为药物控制。与原料药比较,共沉淀法、微波淬冷法所得固体分散体AUC_(0~t)、AUC_(0~∞)、C_(max)升高(P<0.05,P<0.01),CL_(z/F)降低(P<0.01),相对生物利用度分别为576.69%、447.80%。结论 共沉淀法更适合制备薯蓣皂苷元固体分散体。

薯蓣皂苷元通过NLRP3通路对RAW264.7来源泡沫细胞炎症反应的影响

目的:探讨薯蓣皂苷元通过调节NLRP3通路对RAW264.7来源泡沫细胞炎症反应的影响。方法:采用80μg/ml氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导RAW264.7细胞24 h建立RAW264.7来源泡沫细胞模型,CCK-8检测不同浓度(1、2、4、8、16μmol/L)薯蓣皂苷元处理的RAW264.7来源泡沫细胞增殖率。将RAW264.7细胞分为对照组(不经药物干预)、模型组(加入80μg/ml ox-LDL)、低剂量薯蓣皂苷元组(加入1μmol/L薯蓣皂苷元)及高剂量薯蓣皂苷元组(加入4μmol/L薯蓣皂苷元),药物处理细胞24 h,油红O染色检测各组细胞泡沫化变化;ELISA试剂盒检测各组细胞IL-1β、IL-18表达;Western blot检测各组细胞NLRP3、Caspase-1、Cleaved GSDMD蛋白表达。结果:CCK-8结果表明:2、4、8μmol/L薯蓣皂苷元对ox-LDL诱导的RAW264.7来源泡沫细胞具有保护作用。与对照组比较,模型组细胞泡沫化程度加重,细胞IL-1β、IL-18、NLRP3、Caspase-1、Cleaved GSDMD表达显著升高(P<0.05);与模型组相比,不同剂量薯蓣皂苷元组细胞泡沫化程度降低,细胞IL-1β、IL-18、NLRP3、Caspase-1和Cleaved GSDMD表达降低,且呈剂量依赖性。结论:薯蓣皂苷元可抑制ox-LDL诱导的RAW264.7细胞泡沫化,通过调节NLRP3通路抑制RAW264.7来源泡沫细胞炎症反应。

薯蓣皂苷元白蛋白纳米粒制备及其体内药动学研究

目的制备薯蓣皂苷元白蛋白纳米粒,并考察其体内药动学。方法高压均质法制备白蛋白纳米粒,单因素试验优化处方,测定其包封率、载药量、粒径、Zeta电位、溶解度、体外释药,分析其晶型、稳定性。18只大鼠随机分为3组,分别灌胃给予薯蓣皂苷元、物理混合物、薯蓣皂苷元白蛋白纳米粒的0.5%CMC-Na混悬液(30 mg/kg),于0.5、1、2、3、4、6、9、12、18 h采血,HPLC法测定薯蓣皂苷元血药浓度,计算主要药动学参数。结果最佳处方为薯蓣皂苷元用量60 mg,水相pH值8.5,白蛋白用量0.9 g,均质压力135 MPa,均质次数10次,包封率为93.59%,载药量为5.70%,粒径为163.72 nm,Zeta电位为-21.67 mV。白蛋白纳米粒溶解度高于原料药、物理混合物,模拟胃液、模拟肠液中其24 h内累积溶出率高于原料药。薯蓣皂苷元在白蛋白纳米粒中以无定形态存在,6个月内稳定性良好。与原料药、物理混合物比较,白蛋白纳米粒t max缩短(P<0.05),t 1/2延长(P<0.05),C max、AUC 0~t、AUC 0~∞升高(P<0.01);与原料药比较,其相对生物利用度增加至3.77倍。结论白蛋白纳米粒可增加薯蓣皂苷元溶解度,促进其体外释药、体内口服吸收。

薯蓣皂苷元的药理活性及其机制研究进展

薯蓣皂苷元作为一种特别重要的天然甾体皂苷元,是目前合成各种甾体激素类药物的重要基础原料,具有抗肿瘤、抗炎、降低血糖、抗焦虑、抗抑郁、改善心血管功能、调节免疫、抗血小板聚集、降血脂等多种药理作用。其来源较为广泛,主要来源于薯蓣科、豆科、姜科、蒟蒻薯科等植物中,具有很高的药用以及临床使用价值,因此日益引起国内外学者的关注。本文重点综述国内外近年来有关薯蓣皂苷元药理活性及其作用机制的研究进展,着重介绍抗肿瘤、抗炎、降血脂等药理作用,以供参考。

穿龙薯蓣中薯蓣皂苷元提取工艺优化

目的:优化穿龙薯蓣中薯蓣皂苷元的提取工艺,开发一种在酸水解前的酶解预处理工艺。方法:利用酶的生物降解作用,断开薯蓣皂苷与纤维素的葡萄糖苷键,从而改变植物细胞壁的通透性。通过单因素试验考察酶添加量、酶解温度、酶解时间、酶解pH、料液比对薯蓣皂苷得率的影响,并在此基础上通过Box-Behnken响应面分析法优化薯蓣皂苷的提取工艺条件。结果:纤维素酶提取薯蓣皂苷的最佳工艺条件为纤维素酶用量400 U、酶解温度55℃、酶解时间8 h、酶解pH 5.5、料液比1∶30,在此条件下薯蓣皂苷得率为9.78%。酸解得到薯蓣皂苷元得率为32.07%,薯蓣皂苷元纯度为70.89%。结论:通过一步纤维素酶预处理可以使薯蓣皂苷元得率提高140.59%,薯蓣皂苷元纯度提高41.21%。该方法方便、高效,可为薯蓣皂苷元的进一步研究和工业化生产提供参考。

薯蓣皂苷元通过激活VIP/cAMP/PKA通路改善慢性阻塞性肺疾病大鼠气道炎症和肺损伤

目的探讨薯蓣皂苷元对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠及血管活性肠肽(VIP)/环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)通路的影响。方法将60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、薯蓣皂苷元组(100 mg/kg)、阳性组(地塞米松0.81 mg/kg)、薯蓣皂苷元+H89组(100 mg/kg薯蓣皂苷元+1 mg/kg VIP/cAMP/PKA通路抑制剂H89),每组12只。4周后,采用全身体积描记系统检测大鼠肺功能,采用酶联免疫吸附试验检测大鼠血清中炎症因子水平及肺组织cAMP水平,采用HE染色检测肺组织病理变化,采用流式细胞术测定肺Th17、Treg细胞比例,采用蛋白质印迹法检测肺组织VIP、PKA蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠肺组织有炎症细胞浸润、部分血管破裂等损伤,炎症评分、白细胞介素(IL)-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-17、Th17细胞水平及Th17/Treg均升高(P<0.05),肺功能、Treg细胞、VIP、cAMP水平及p-PKA/PKA降低(P<0.05);与模型组比较,薯蓣皂苷元组、阳性组大鼠肺功能损伤缓解,炎症评分、IL-6、IL-8、TNF-α、IL-17、Th17细胞水平及Th17/Treg均降低(P<0.05),肺功能、Treg细胞、VIP、cAMP水平及p-PKA/PKA升高(P<0.05);与薯蓣皂苷元组比较,薯蓣皂苷元+H89组大鼠肺功能损伤加重,炎症评分、IL-6、IL-8、TNF-α、IL-17、Th17细胞水平及Th17/Treg升高(P<0.05),肺功能、Treg细胞、VIP、cAMP水平及p-PKA/PKA降低(P<0.05)。结论薯蓣皂苷元可能通过激活VIP/cAMP/PKA通路,改善COPD大鼠气道炎症和肺损伤。

高效液相色谱-蒸发光散射法测定肤痒颗粒中薯蓣皂苷元的含量

目的:建立一种准确测定肤痒颗粒中薯蓣皂苷元含量的方法。方法:以白英中薯蓣皂苷元为检测指标,采用高效液相色谱-蒸发光散射法测定肤痒颗粒中薯蓣皂苷元的含量。色谱柱为Eclipse XDB-C 18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(95∶5),流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为30℃,进样量为20μL;采用Alltech 3300 ELSD蒸发光散射检测器。肤痒颗粒供试品溶液的制备采用酸水解提取,水浴回流3 h,用石油醚(60~90℃)萃取4次,回收石油醚至干,用甲醇溶解得到供试品溶液进行测定。结果:薯蓣皂苷元在20.82~104.10μg·mL^(-1)浓度范围内线性关系良好。平均回收率为92.97%(n=6),RSD=4.8%。测定14个厂家肤痒颗粒中薯蓣皂苷元含量,发现含量相差较大。结论:本方法准确,专属性强,能客观地反映肤痒颗粒中薯蓣皂苷元的含量。不同厂家肤痒颗粒中薯蓣皂苷元含量参差不齐,应加强质量控制。

薯蓣皂苷元和黄山药总皂苷抗高脂血症作用比较

目的 :比较黄山药总皂苷 (TSDP)和薯蓣皂苷元 (Dio)抗高脂血症及对胆固醇吸收的抑制作用。方法 :在形成高胆固醇动物模型同时或之后ig或ip给予TSDP和Dio ,以血清总胆固醇含量评价TSDP和Dio对高脂血症的预防和治疗作用。将TSDP或Dio与胆固醇及离体猪胆汁温孵形成微胶粒 ,以未形成微胶粒的游离胆固醇含量评价TSDP与Dio抑制胆固醇吸收作用。结果 :给小鼠igTSDP和Dio ,Dio对高脂血症有明显预防和治疗作用 ,而TSDP只有大剂量才有一定预防作用。小鼠ip给予Dio仍然有效 ,TSDP无效。大鼠igDio的预防效果明显优于TSDP。Dio体外抑制胆固醇微胶粒形成作用明显强于TSDP。结论 :Dio抗高脂血症作用优于TSDP ,可能与其抑制胆固醇微胶粒形成和吸收抑制有关系。

水解原位萃取薯蓣皂苷元的工艺条件研究

目的 :正交试验法研究利用穿山龙提取薯蓣皂苷元的生产工艺。方法 :采用水解原位萃取法 ,以薯蓣皂苷元得率为指标 ,确定了最佳工艺 ,并将该工艺与传统工艺相比较。结果 :穿山龙用含约 1.5mol·L-1硫酸的75 %异丙醇水溶液在沸水浴中加热回流提取 4 .5h ,其提取效果最佳 ,优于传统工艺。结论 :该工艺薯蓣皂苷元得率高 ,成本低 ,操作简单 ,实用性好。

高效液相色谱法和薄层色谱法测定重楼中薯蓣皂苷元的含量

目的 采用高效液相色谱和薄层色谱技术 ,分别测定重楼中薯蓣皂苷元的含量。方法 采用 HPL C法 ,选用 ODS柱 ,流动相 :乙腈 -水 ( 90∶ 10 ) ,检测波长 :2 0 3 nm,柱温 :3 5℃ ;TL C法选用硅胶 G板 ,展开剂 :环已烷 -乙酸乙酯 ( 4∶ 1) ,测定波长 :610 nm,参比波长 :42 0 nm。结果 线性范围分别为 1.2～ 7.2 μg( r=0 .9998) ,0 .2～ 1.0μg( r=0 .9957)。平均回收率分别为 10 2 .2 % ,RSD=3 .3 9% ( n=6) ;10 0 .9% ,RSD=2 .68% ( n=6)。结论 两种方法均可用于重楼中薯蓣皂苷元的质量控制。

用盾叶薯蓣生产薯蓣皂苷元预发酵与水解条件优化

采用RP HPLC法检测薯蓣皂苷元,对薯蓣皂苷元提取过程中影响产率的多种因素,分预发酵、水解2部分分别用单因素和正交设计的方法进行优化。结果表明:40℃预发酵16h,加6%浓H2SO4,料液比为1∶6,温度为121～126℃,水解5h,产率高达3.62%,说明预发酵与水解条件优化可以提高盾叶薯蓣(DioscoreazingiberensisC.H.Wright)生产薯蓣皂苷元的产率。

反相高效液相色谱法测定山药及其同属植物参薯中薯蓣皂苷元的含量

目的:建立反相高效液相色谱法测定山药中薯蓣皂苷元含量,考察不同产地山药及其同属植物中薯蓣皂苷元的含量。方法:采用Agilent ODS色谱柱(5μm,4.6mm×250 mm),以甲醇-水(95:5)为流动相,流速1.0 mL·min～1,柱温30℃,检测波长为215 nm。结果:在此色谱条件下,各样品中待测组分均得到良好分离。此法测定的线性范围为5.0—15.0μg,r=0.9999,平均回收率为98.3%。结论:本方法灵敏、准确、回收率高,适用于生药样品检测和质量控制。

氮磷钾对盾叶薯蓣产量及薯蓣皂苷元含量的影响

目的 :研究大田条件下N、P、K肥料不同配比对盾叶薯蓣根茎产量及薯蓣皂苷元含量的影响。方法 :采用肥料单因素正交试验 ,SPSS11 5统计软件包统计分析。结果 :N、P、K可不同程度提高盾叶薯蓣根茎产量及薯蓣皂苷元含量 ,其中N、K对产量影响达到极显著水平 (P <0 0 1) ,P肥达到显著水平 (P <0 0 5 ) ,N、P、K单施对含量影响未达到显著水平 (P >0 0 5 ) ;3种肥料配施以N肥对薯蓣皂苷元含量影响达到显著水平 (P <0 0 5 )。表明肥料对薯蓣皂苷元含量影响的顺序为N >K >P ,对根茎产量影响的顺序为K >N >P ,综合最优组合为N2 K1P2 。结论 :适当配比的N、P。

穿龙薯蓣总皂苷中薯蓣皂苷元含量的毛细管气相色谱法研究

目的 :建立毛细管气相色谱法测定穿龙薯蓣总皂苷中薯蓣皂苷元的含量。方法 :采用HP - 1(Methylsiloxane)不锈钢毛细管柱 ,柱箱温度 2 70℃ ,柱头压 12 3 7kPa ,汽化室温度 330℃ ,检测器温度 310℃ ,载气 (N2 )流速 2 0mL·min- 1 ,分流比 40∶1,对穿龙薯蓣总皂苷中薯蓣皂苷元含量进行测定。结果 :能将薯蓣皂苷元及其主要杂质进行分离 ,薯蓣皂苷元在 35 2～ 175 8ng范围内峰面积与其浓度线性关系良好 (r=0 9996 ) ,样品平均回收率为 95 6 5 % ,精密度RSD为 1 0 % (n=5 )。结论 :该法测定样品无需衍生化 ,分离效果好 ,分析快速准确。