R-藻红蛋白光动力杀伤的形态学机制研究

在荧光显微镜下观察新型光敏剂Ｒ藻红蛋白的荧光在肿瘤细胞中的分布，探讨以藻红蛋白为光敏药物的光动力损伤可能发生的细胞水平机制，以及培养液酸度和藻红蛋白浓度对其与细胞结合、进入及光动力杀伤的关系．结果表明在ｐＨ５ 时，藻红蛋白与瘤细胞有最好的结合．其结合部位随藻红蛋白浓度的增加，逐渐以分布在胞膜、胞浆和胞核为主，表现为一个动态进入细胞的过程．光动力杀伤作用与其进入细胞的数量成正相关，从形态学上证明了Ｒ藻红蛋白介导的光动力治疗作用与藻红蛋白进入瘤细胞状态紧密相关．

紫球藻两种藻红蛋白特性的比较研究——γ亚基在稳定藻红蛋白结构方面的作用

从紫球藻中分离纯化两种藻红蛋白 (B 藻红蛋白和b 藻红蛋白 ) ,对它们的吸收光谱和电泳图谱进行比较研究。结果表明 ,尽管电泳图谱与文献报道的相同 ,但b 藻红蛋白的吸收光谱与文献报道的有较大的差别 ,表现在本研究发现b 藻红蛋白在 5 4 5nm处有一吸收峰 ,在 5 6 5nm处仅有一个吸收肩峰 ,而不是文献中报道的在 5 4 5nm和 5 6 5nm均有独立的吸收峰。通过比较B 藻红蛋白和b 藻红蛋白在不完全变性条件下的电泳图谱 ,发现B 藻红蛋白比b 藻红蛋白要稳定的多 ,进一步分析认为这主要是因为B 藻红蛋白含有γ亚基 ,而b 藻红蛋白不含有γ亚基 。

R-藻红蛋白的多对同晶置换联合相位的分析与评估

在已报道的R-藻红蛋白金(AUC4)和汞(PCMS)重原子衍生物的基础上,又得到了含重金属铂(PTC4)和汞(PHMH)的与R-藻红蛋白母体同晶型的另外2种重原子衍生物。使用全部4种重原子衍生物联合相位(MIR)的品质因子(figure of merit)为0.70.经溶剂过滤法处理,相位得到了很大改善,总的品质因子增加到0.86,从已改善的MIR相位计算的电子密度图上可以清晰的观测到R-藻红蛋白亚基间的配置和分子的轮廓。

响应面法优化复合酶法提取紫菜藻红蛋白工艺

研究复合酶法提取紫菜藻红蛋白的最优工艺,筛选了复合酶的配比,并选取酶解温度、提取时间、加酶量和p H值为自变量,采用响应面法研究各因素及其交互作用对紫菜藻红蛋白得率和纯度的影响。结果表明,紫菜藻红蛋白复合酶法提取的最优酶配比为纤维素酶和果胶酶质量比7∶3,通过响应面优化,确定藻红蛋白最优提取工艺为:p H?6.8、酶解温度39℃、提取时间7.2?h、在5?g样品中加酶0.04?g。在此条件下藻红蛋白得率为2.257%,纯度达到1.656。经过验证,所得工艺参数准确,可用于复合酶法生产紫菜藻红蛋白。

藻红蛋白介导的光敏反应可诱导人肝癌7721细胞凋亡

目的 :探讨藻红蛋白介导的光动力效应对肝癌细胞的杀伤机制是否与诱导瘤细胞凋亡有关。方法 :对培养的人肝癌细胞进行光动力治疗处理 ,通过观察DNALadders的形成和形态学改变 ,判断凋亡的发生与否。结果 :可观察到在经过光动力治疗处理一定时间后 ,772 1细胞出现典型的凋亡形态学改变 ,同时伴有特征性的DNALadders出现。结论 :藻红蛋白介导的光敏反应杀伤肿瘤细胞与诱导人肝癌细胞凋亡相关 ,是一种很有前景的光动力药物。

红毛藻藻红蛋白的粗提方法比较及不同光照条件下藻胆蛋白变性机制的初步探讨

比较研究了多种细胞破碎方法和盐析方法对红毛藻中藻红蛋白的提取效果,确定组织捣碎法为效率较高的细胞破碎方法,用饱和度为60%的硫酸铵按"改进结晶法"进行盐析为较佳的盐析方法.探讨了冻融法的作用机制.同时对藻红蛋白盐析液在不同照射条件下的变性机制进行了初步的研究和探讨,研究显示光照有可能使藻胆蛋白的摩尔消光系数发生变化.

紫菜多糖和藻红蛋白生物活性的研究进展

紫菜含有多种生物功能成分,其中最主要的是紫菜多糖和藻红蛋白,在医药、食品、化妆品及动物营养等领域有着广泛的应用前景。综述紫菜多糖和藻红蛋白的提取纯化和生物活性研究进展,探讨其潜在的应用价值,并展望紫菜深加工的发展方向。

紫球藻藻红蛋白的分离纯化及光谱特性研究

紫球藻（Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ ｃｒｕｅｎｔｕｍ）的水溶性色素粗提物经过固体硫酸铵沉淀和羟基磷灰石（ＨＡ）柱层析后，可以分离出较纯的Ｂ－藻红蛋白（Ｂ－ＰＥ），纯度（ＯＤ５４５ｎｍ／ＯＤ２８０ｎｍ）为３．０。测定了Ｂ－ＰＥ的紫外可见光吸收光谱和荧光光谱以及紫球藻活体吸收光谱。Ｂ－ＰＥ在５４５ｎｍ和５６３ｎｍ各有一个峰，在４９８ｎｍ有一肩峰，与活体吸收光谱相比较只是最大吸收峰向短波方向移动了５ｎｍ。激发光谱在５５３～５６７ｎｍ有一峰，在５００ｎｍ和５３６ｎｍ各有一肩峰，室温荧光发射峰在５７８ｎｍ左右。

R-藻红蛋白标记抗体荧光探针的高效制备及其在禽流感病毒检测中的应用

用适宜摩尔浓度的异型双功能交联剂SPDP将R-藻红蛋白与纯化的禽流感病毒H9亚型多克隆抗体交联,并经高效液相色谱纯化制备R-藻红蛋白标记抗体荧光探针。以溴化氰活化的琼脂糖微球为固相载体,采用双抗体夹心法建立固相免疫荧光检测法,以制备的R-藻红蛋白标记抗体荧光探针检测禽流感病毒H9尿囊毒。结果表明,阳性微球在蓝、绿光激发下发射桔黄色荧光,荧光明亮,无背景光干扰,特异性好,灵敏度高,可检测蛋白浓度为1.85×10-5mg.mL-1的H9亚型尿囊毒。R-藻红蛋白标记探针的检测灵敏度高于FITC标记探针,R-藻红蛋白可替代FITC或与FITC等荧光染料一起用于多色荧光免疫检测。

藻红蛋白应用于肿瘤光动力治疗的研究

目的 :探讨藻红蛋白介导的光敏反应对肿瘤细胞S180生长抑制作用 ,研究新型光动力药物。方法 :将不同浓度的藻红蛋白加入到细胞培养基中 ,随之以激光辐照 ,MTT法测定细胞存活率。结果 :激光能量恒定于 2 5.6J/cm2 时 ,S180细胞生存率随着藻红蛋白的浓度的增加而降低。说明藻红蛋白的激光光敏反应对S180瘤细胞有很强的杀伤、破坏作用 ,这种效应在一定的激光能量范围内 ,与藻红蛋白本身的浓度相关。而单用藻红蛋白或激光处理 ,均不对细胞造成显著杀伤。结论 :藻红蛋白是一种毒性较小 ,很有前景的光敏剂 ,可望应用于肿瘤光动力治疗。

葛仙米藻红蛋白体外抗活性氧自由基作用的研究

葛仙米以其资源稀少、营养价值丰富,独特的生物活性和药理作用而引起人们广泛地关注。为探讨葛仙米中的生物活性成分,本文以野生葛仙米藻红蛋白为研究对象,在系统研究葛仙米藻红蛋白的提取、分离和纯化的基础上,采用微弱化学发光法,研究了葛仙米藻红蛋白清除氧自由基的能力。结果表明:清除氧自由基的能力为:粗提物>藻红蛋白>藻蓝蛋白;葛仙米藻红蛋白清除氧自由基的能力为:H2O2自由基的清除率>·OH自由基的清除率>O2·自由基的清除率。

R-藻红蛋白色基多肽对肿瘤细胞光动力杀伤作用的实验研究

首次用胃酶降解及CMSephedexC 5 0柱层析法获得了 6种藻红蛋白的色基多肽 ,并用藻红蛋白及其色基多肽对两种肿瘤细胞作体外激光疗法增敏作用实验 .S1 80小鼠腹水癌细胞株培养后分别用浓度为 1 0、2 5、5 0、1 0 0 μg/mL的藻红蛋白及其色基多肽处理 ,经波长为 488nm的氩离子激光辐照 (照射剂量为 2 8.8J/cm2 ) ,用MTT法检测 ,其细胞的生存率最佳效果分别可达 45 %及 1 6 % ,显示出良好的剂量效应 .在激光处理藻红蛋白及其色基多肽对HL6 0人白血病细胞所做的细胞生长曲线图的比较中可看出 ,色基多肽的激光增敏作用要优于藻红蛋白多聚体 .

龙须菜藻红蛋白抗肿瘤活性的研究

目的探讨龙须菜藻红蛋白抗肿瘤活性。方法体内实验以S180荷瘤小鼠为肿瘤模型，检测藻红蛋白粗提物（CPE）对肿瘤生长的抑制作用以及对免疫器官的影响；体外实验采用MTT法检测不同浓度的藻红蛋白（PE）对人宫颈癌HeLa、人食道癌EC109和人血管内皮细胞等细胞的作用，流式细胞仪、Annexin V-FITC／PI双荧光染色法观察藻红蛋白对HeLa细胞周期及细胞凋亡的影响。结果CPE能显著的抑制小鼠S180肉瘤生长，当灌胃剂量在100～300mg·kg^-1范围内时，呈量效关系，其中剂量为300mg·kg^-1时，其抑瘤率达49％，且能极显著地提高荷瘤小鼠的胸腺指数；体外实验表明PE对人宫颈癌细胞HeLa有明显的抑制作用，其抑制率达70％以上，并存在剂量依赖性。PE可阻滞HeLa细胞从G2／M期进入S期，促使细胞凋亡。但PE对人食道癌EC109细胞无作用，对正常的人血管内皮细胞有一定的促生长作用。结论龙须菜藻红蛋白具有体内抑制S180肉瘤生长的活性，体外对培养的不同细胞作用不同，对人宫颈癌HeLa细胞有较强的抑制作用。

条斑紫菜中R-藻红蛋白的纯化及其α和β亚基的分离与发色团含量的测定

本文从条斑紫菜(Porphyra yezoensis)中提取了藻胆蛋白,找到了一种新的简便有效的提纯R-藻红蛋白的方法。用Bio-GelP300柱进一步纯化后,得到了高纯度的R-藻红蛋白。用Bio-Rex 70柱分离R-藻红蛋白,得到了它的α和β亚基溶液。对亚基溶液进行的一些光谱分析表明亚基溶液具有R-藻红蛋白的一些性质。本文对α和β亚基的发色团含量进行了测定:α亚基含2个藻红胆素,β亚基含3个藻红胆素和1个藻尿胆素。

多管藻R-藻红蛋白和R-藻蓝蛋白的制备及其相对分子质量的测定

以海生大型红藻多管藻(Polysiphonia urceolata)为材料,通过凝胶过滤层析、离子交换柱层析、凝胶电泳,得到纯度较高的R-藻红蛋白和R-藻蓝蛋白.在SDS-PAGE中,藻红蛋白表现出4个带有发色团的亚基α、β、β'、γ和γ',其相对分子质量分别为1.73×1041,.95×104,3.33×104和3.10×104;藻蓝蛋白则表现出3个带有发色团的亚基,分别是:α、β和β',其相对分子质量为1.75×1042,.13×104和2.62×104.不同相对分子质量的γ亚基和β亚基的发现都有别于先前的报道,这对藻红蛋白和藻蓝蛋白结构的研究提供了有价值的研究结果.选用Superdex-200凝胶柱层析对纯化的藻红蛋白和藻蓝蛋白进行了相对分子质量测定,藻红蛋白相对分子质量为2.4×105,藻蓝蛋白相对分子质量为1.36×105这表明纯化制备的藻红蛋白和藻蓝蛋白分别以六聚体((αβ)3γ(αβ)3)和三聚体((αβ)3)形式存在.

多管藻R-藻红蛋白的激光光敏作用对体外培养的肿瘤细胞生存率的影响

用１００μｇ／ｍｌ藻红蛋白联合激光处理８１１３人口腔上皮癌细胞，ＭＴＴ比色法测定癌细胞存活率。实验表明，先用藻红蛋白处理再经波长为４８８ｎｍ，２５．６Ｊ／ｃｍ２氩离子激光辐照，细胞存活率为２５％；而单用藻红蛋白，单用激光组分别为４３％和１０７％。结果证明，藻红蛋白的光敏作用对体外培养的肿瘤细胞具有较强的杀伤作用。

R-藻红蛋白介导的光敏反应对DNA分子的生物学效应

藻红蛋白 (phycoerythrin ,PE)是海藻中的重要捕光色素蛋白 ,具有强荧光性 ,易溶于水 .在藻体内能将捕获的光能传递给光合反应中心 ;在体外则能将光能传递给周围环境中的氧分子 ,产生如单线态氧等活性氧组分 ,可用来介导光动力效应治疗癌症 .将纯化的藻红蛋白加入到瘤细胞培养基中 ,数小时后 ,采用 488nm波长的氩离子激光辐照 ,MTT法检测细胞存活数 ,计算细胞存活率 .3H TdR掺入实验观察细胞DNA的合成 .结果表明 ,藻红蛋白介导的光动力反应能够有效地抑制肿瘤细胞DNA合成并杀伤癌细胞 .随着藻红蛋白浓度增加 ,DNA合成下降 ,瘤细胞存活率降低 .将藻红蛋白加入到 pUC18质粒溶液中 ,随之进行激光辐照 ,琼脂糖电泳结果可见 pUC18构象由超螺旋 (supercoiled)向带切口的环形构象 (relax)转换 .结果提示 :通过改变或影响DNA构象 ,抑制细胞DNA合成可能是藻红蛋白介导肿瘤光动力治疗的途径之一 .

钝顶螺旋藻C-藻蓝蛋白和多管藻R-藻红蛋白的分离纯化及摩尔消光系数的测定

１９９３年１１月～１９９４年１月用简单的羟基磷灰石柱层析法从多管藻中分 离纯化了Ｒ－藻红蛋白和从钝顶螺旋藻中纯化了Ｃ－藻蓝蛋白，它们的纯度（指可见 光部分的最大吸收与 ２８０ｎｍ处吸收值之比）可分别达到 ６（Ｒ－藻红蛋白）和 ５． ５（Ｃ－ 藻蓝蛋白）。由于不同藻种的同种藻胆蛋白的摩尔消光系数不同，所以应用凯氏定 氮法并结合可见光的吸收值测定了上述两种藻胆蛋白的摩尔消光系数，钝顶螺旋 藻Ｃ－藻蓝蛋白为１．８５３ × １０６ｍｏｌ－１ｃｍ－１（６２０ｎｍ），多管藻Ｒ－藻红蛋白为１．７９６ × １０６ｍｏｌ－１ｃｍ－１（４９８ｎｍ），为藻胆蛋白的浓度测定提供了方便。

营养盐可得性对坛紫菜氮磷吸收、生长及藻红蛋白含量的影响

实验室条件下,研究了N、P浓度、不同化合态N及N∶P比值对坛紫菜(Porphyra haitanensis)N、P吸收速率,以及P浓度对坛紫菜生长速率和藻红蛋白含量的影响。结果表明,随着营养盐浓度的升高,坛紫菜对N、P的吸收速率也随之增高,当无机氮浓度达到100μmol/L时,坛紫菜对N、P的吸收速率趋向接近最大值;当NO3--N∶NH4+-N比值为1∶5时,坛紫菜对N的吸收达到最大值;坛紫菜对P的吸收速率随NO3--N∶NH4+-N比值的减小而略有增大;坛紫菜对N的吸收速率随着N∶P比值的增大而增大,而对P的吸收速率随着N∶P比值的增大而减小;在磷浓度低于12μmol/L的情况下,坛紫菜的生长速率和藻红蛋白含量随着P浓度的升高而增加,高于12μmol/L时,则不再增加。

红毛藻藻红蛋白的分离纯化及性质研究

从红毛藻(Bangiafusco-purpurea)中分离纯化得到纯度较高(A565/A280为5.0)的藻红蛋白(phycoerythrin,PE)。纯化过程包括:硫酸铵分级沉淀,阴离子交换柱层析,凝胶过滤柱层析。通过扫描藻红蛋白的紫外可见光谱,确定其为R-藻红蛋白。用SDS-PAGE及银染色法测定了组成R-藻红蛋白各亚基的相对分子量。并研究了pH值、温度、光照等理化因子对R-藻红蛋白稳定性的影响。