失水对苹果新根ABA含量和蛋白激酶活性的影响

以 2年生苹果砧木———平邑甜茶 (MulushenpenensisRehd .)根系为试材 ,通过自然失水和PEG (聚乙二醇 ) 6 0 0 0处理 ,研究了失水过程中吸收根和延长根内源ABA和蛋白激酶活性的变化。结果表明 ,吸收根内源ABA浓度及水分胁迫下ABA积累量均高于延长根 ;失水过程中 ,延长根根系活力先升后降 ;蛋白激酶活性高峰在吸收根和延长根中均出现于ABA浓度快速增加之前 ,两种蛋白激酶抑制剂均抑制了水分胁迫下两类根中ABA的积累。

镉、硒对神经细胞钙稳态及蛋白激酶活性交互影响的体外实验研究

目的 观察镉、硒对神经细胞内〔Ca2 +〕i及蛋白激酶(PKA、PKC)活性的交互影响。方法 以分离神经细胞为研究对象 ,测定不同状态下神经细胞内〔Ca2 +〕i及蛋白激酶 (PKA、PKC)活性。结果 5～ 5 0 μmol/L镉可使神经细胞内〔Ca2 +〕i及PKA活性降低 ,而使PKC活性升高 ;5 0 0 μmol/L镉可使神经细胞内〔Ca2 +〕i及PKA、PKC活性明显升高。 5 μmol/L的硒不引起细胞内〔Ca2 +〕i发生变化 ,对镉所致神经细胞内〔Ca2 +〕i的变化也没有影响。结论 体外实验不适合于硒拮抗镉毒性作用的研究。

酪氨酸蛋白激酶活性的检查

酪氨酸蛋白激酶(Tyrosine Protein Kinase, TPK)是催化多种底物蛋白质酪氨酸残基磷酸化的激酶,在细胞生长、增殖、转化中具有重要作用。现已发现许多生长因子受体都具有TPK活性,如表皮生长因子(EGF)受体、血小板衍生生长因子(PDGF)受体、类胰岛素-1(IGF-1)受体、胰岛素(INS)受体、白介素-2(IL-2)受体、成纤维细胞生长因子(FGF)受体、克隆刺激因子-1(CSF-1)受体等。

雪莲SikCDPK1基因的表达特征和蛋白激酶活性分析

极端生境草本植物天山雪莲中的Sik CDPK1基因可明显提高转基因烟草的低温、干旱耐受性。为探究Sik CDPK1基因的表达特征和蛋白激酶活性,本研究利用实时荧光定量PCR技术检测了Sik CDPK1基因在雪莲不同组织器官的表达水平以及对信号分子CaCl_(2)、脱落酸(ABA)、赤霉素(GA_(3))、水杨酸(SA)、H_(2)O_(2)的诱导响应模式,采用Kinase-GloTM技术检测了SIKCDPK1蛋白激酶活性,利用绿色荧光蛋白(GFP)基因融合蛋白表达法进行了SIKCDPK1蛋白的亚细胞定位。结果显示:Sik CDPK1基因在雪莲根、茎、叶、种子、幼茎、幼叶中均表达,Sik CDPK1基因受CaCl_(2)、ABA、GA_(3)、SA、H_(2)O_(2)的诱导表达但响应模式有差异;激酶活性分析发现Ca^(2+)存在时,SIKCDPK1具有激酶催化活性,加入Ca^(2+)螯合剂EGTA后,SIKCDPK1几乎没有激酶活性。SIKCDPK1激酶活性随Ca^(2+)浓度增加而增加,Ca^(2+)浓度(K0.5)为48.7 nmol·L^(-1)时,SIKCDPK1激酶活性可达到最大活性的1/2;以HisⅢ为底物时,SIKCDPK1的Km值可达到43.8μg·m L^(-1),SIKCDPK1蛋白定位于细胞核。上述结果表明Sik CDPK1基因表达无明显组织特异性,可响应信号分子Ca^(2+)、ABA、GA_(3)、SA、H_(2)O_(2)的诱导;SIKCDPK1发挥蛋白激酶活性需要Ca^(2+),SIKCDPK1主要在细胞核里发挥作用。

颅脑损伤后钙调节蛋白激酶活性的研究进展

颅脑损伤（TBI）是威胁人类生命的主要损伤之一。在临床病例及法医学活体伤害案件中,是最常见的外伤类型,已成为全球关注的严重的公共卫生问题[1]。1颅脑损伤的生理机制1.1原发性颅脑损伤的发生机制原发性颅脑损伤[2]是由创伤暴力所致,包括直接暴力和间接暴力,直接暴力是指直接作用于头部所造成损伤的致伤力。而间接暴力主要是指作用于其他身体部位后传递到头部而引起颅脑损伤的暴力作用。

磷酸腺苷活化蛋白激酶活性影响鸡胚发育

美国马里兰大学的研究人员推测磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK）在鸡胚发育过程中，对鸡胚养分的协调利用起关键作用。为验证这一假设，研究人员测定了大、小鸡蛋鸡胚发育过程中肝脏中AMPK活性。小鸡蛋来自26周龄母鸡，蛋重53g72右，大鸡蛋来自42周龄母鸡，蛋重69g左右。分别于11、14、17、20日胚龄及1日龄进行测定。结果显示，大蛋干蛋黄蛋白初始重比小鸡蛋的大，

HCV E_2蛋白抑制干扰素诱导的蛋白激酶活性

干扰素（IFN）是治疗HCV的常用药物,但仅对少数型别和患者有效,其耐药机理尚不清楚。蛋白激酶（PKR）是IFN诱导产生的主要抗病毒蛋白之一,可以自身磷酸化,也可磷酸化真核蛋白合成的起始因系。单位（eIF2α）从而抑制蛋白的合成和细胞生长,达到抗病毒作用。 最近研究表明:HCV E2蛋白含有一个12氨基酸序列与PKR以及eIF2α磷酸化同源结构域（PePHD）,通过这结构域E2可以干扰和抑制PKR活性,致使干扰素疗效不能发挥。PePHD多见于HCV 1a,

长链非编码RNA PVT1调控表皮生长因子受体/有丝分裂原活性蛋白激酶通路对卵巢癌细胞的影响实验研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)人浆细胞瘤转化迁移基因1(PVT1)调控表皮生长因子受体(EGFR)/有丝分裂原活性蛋白激酶(MAPK)通路对卵巢癌细胞的影响。方法:将人卵巢癌细胞SKOV-3分为对照组(空白未处理)、si-NC组(转染携带空载体慢病毒)、si-lncRNA PVT1组(转染lncRNA PVT1 siRNA)。另选取人正常卵巢上皮细胞系HOSE为正常组。采用RT-qPCR检测细胞中lncRNA PVT1表达。采用Transwell实验、平板克隆实验分别检测SKOV-3细胞侵袭以及克隆形成能力。采用流式细胞术检测SKOV-3细胞凋亡情况。采用Western blot检测细胞中EGFR、细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、p-ERK1/2蛋白表达。根据细胞分组,将BALB/c裸鼠也相应随机分为对照组、si-NC组、si-lncRNA PVT1组,每组8只。建立裸鼠皮下移植瘤模型。比较各组裸鼠不同时间皮下移植瘤体积及平均瘤体重量。结果:对照组SKOV-3细胞lncRNA PVT1表达水平高于si-lncRNA PVT1组,si-lncRNA PVT1组SKOV-3细胞lncRNA PVT1表达水平高于正常组人卵巢正常上皮细胞系HOSE(均P<0.05)。与对照组及si-NC组比较,si-lncRNA PVT1组SKOV-3细胞克隆形成率、侵袭细胞数、EGFR、p-ERK1/2蛋白表达水平降低,细胞凋亡率升高(均P<0.05)。与对照组及si-NC组比较,si-lncRNA PVT1组裸鼠28 d时皮下移植瘤体积以及平均瘤体重量降低(均P<0.05)。结论:lncRNA PVT1在卵巢癌细胞中高表达,干扰其表达可抑制卵巢癌细胞侵袭、克隆、凋亡以及裸鼠皮下成瘤速度,作用机制可能与调控EGFR/MAPK信号通路有关。

毛木耳多糖对小鼠腹腔巨噬细胞蛋白激酶C活性的影响

目的 观察毛木耳多糖 (APSP)体外对小鼠腹腔巨噬细胞 (Mφ)蛋白激酶C(PKC)活性的影响。 方法 采用反相离子对高效液相色谱法测定PKC活力。结果 APSP (80mg·L-1)能引起小鼠腹腔Mφ中PKC活性明显升高 ,2 0min达峰值 ,1.5h恢复到基础水平 ,并可引起Mφ中PKC发生质膜转位。

二尖瓣病变患者左房心肌总蛋白激酶C活性及亚类含量的变化

目的 探讨二尖瓣病变患者左房心肌总蛋白激酶 C(PKC)活性及 PKCα、β亚类含量与心房颤动(AF)之间可能存在的关系。方法 35例患者分为四组 ,A组 :二尖瓣狭窄 (MS)伴 AF;B组 :为窦性心率 (SR)的二尖瓣狭窄 ;C组 :二尖瓣关闭不全 (MR)伴 AF;D组 :为 SR的二尖瓣关闭不全。分别检测各组总 PKC活性及 PKCα、PKCβ亚类含量。结果 各组间总 PKC活性无明显差异 (P>0 .0 5 )。伴有 AF的二尖瓣病变患者 (MS或 MR)其左房心肌 PKCα含量低于 SR的二尖瓣病变患者 (MS或 MR) ;而 PKCβ含量却高于 SR的二尖瓣病变患者 ,但上述差异尚未达到统计处理的显著性水平 (P>0 .0 5 )。结论 左房心肌总 PKC活性与二尖瓣病变患者 AF发生的关系不明显 ,但左房心肌 PKC亚类含量水平的变化与

阿魏酸钠对糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C活性的影响

目的探讨阿魏酸钠(SF)对糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C(PKC)活性的影响。方法链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠灌胃给予SF110mg·kg-1·d-1,治疗8周,测定各组大鼠肾皮质超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、PKC活性及丙二醛含量,观察肾脏病理改变。结果与正常对照组相比,糖尿病对照组大鼠肾重/体重、肌酐清除率、24h尿蛋白、肾皮质胞膜PKC活性、胞膜PKC活性占总活性的百分比、肾皮质丙二醛显著升高,肾皮质超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性显著降低,肾脏病理学改变明显,SF治疗组上述指标显著改善。结论SF可通过抑制肾脏PKC的激活对糖尿病大鼠肾脏产生保护作用。

人参茎叶皂甙对创伤小鼠活化T细胞内cAMP代谢、蛋白激酶A活性的影响

皮下注射人参茎叶皂甙（ＧＳ）５０ｍｇ／ｋｇ，连续４天，可明显拮抗撞击创伤小鼠活化Ｔ细胞内ｃＡＭＰ含量、腺苷酸环化酶（ＡＣ）、蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）活性的升高及ｃＡＭＰ－磷酸二酯酶（ｃＡＭＰ－ＰＤＥ）活性的降低。０．１～１００ ｇ／ｍｌ的ＧＳ在体外也可降低创伤小鼠活化Ｔ细胞内ｃＡＭＰ含量及ＡＣ和ＰＫＡ的活性，并升高ｃＡＭＰ－ＰＤＥ活性。表明ＧＳ对创伤后Ｔ细胞功能受抑状态的纠正作用与此有关。

葡萄糖对内皮细胞蛋白激酶C活性、通透性及粘附性的影响

目的 研究不同浓度葡萄糖对血管内皮细胞的蛋白激酶C(PKC)活性、通透性及粘附性的影响。方法 用[γ32 P]ATP参入外源性底物的方法测定人脐静脉内皮细胞(HUVECs )PKC活性;用51 Cr标记的静止血小板与HUVECs保温,测定内皮细胞的粘附性;用HUVECs对白蛋白的体外通透性实验测定内皮细胞的通透性。结果 2 0mmol L的高浓度葡萄糖可最大程度活化HUVECs的PKC ,膜PKC活性为( 2 874±0 0 4 6 )mmol·mg- 1 ·min- 1 ,明显高于浆PKC活性[( 1 2 15±0 0 19)mmol·mg- 1 ·min- 1 ,P <0 0 1];HUVECs在2 0mmol L高浓度葡萄糖作用下的最大粘附率为( 6 2 84±3 2 4 ) % ,对白蛋白的最大通透率为( 0 32±0 0 0 2 )ng ml,明显高于对照组(P <0 0 1) ;HUVECs的PKC总活性与HUVECs的通透性及粘附率的相关系数r分别为0 84 6、0 734(P均<0 0 5 )。PKC抑制剂CalphostinC能抑制高浓度( 2 0mmol L)葡萄糖对HUVECs的PKC活化,并使HUVECs的通透性及粘附率明显下降。结论 高浓度葡萄糖( 2 0mmol L)可活化血管内皮细胞的PKC ,进而增加其通透性及粘附性;

GnRH类似物对培养的大鼠胃平滑肌细胞蛋白激酶C活性的影响

研究GnRH类似物阿拉瑞林 (Alarelin)对大鼠胃平滑肌细胞蛋白酶C (PKC)活性的影响 ,采用放射性同位素法测定PKC的活性 ,发现 :(1)阿拉瑞林可使培养的大鼠胃平滑肌细胞中PKC活性明显升高 ,3min时达高峰 ,10min后作用明显降低 ,且成剂量依赖性。当阿拉瑞林为 10 -5mol/L时 ,PKC活性最高 ,10 -9mol/L时其对PCK的作用基本消失 ;(2 )当用佛波醇酯 (phorbol 12myristate 13 acetate ,PMA)短期作用激活PKC后 ,再加入阿拉瑞林 ,仍可使PKC活性略有升高 ,但无显著性差异 ;当用PMA长期持续作用耗竭PKC后 ,再加入阿拉瑞林作用 3min ,它不能激活PKC ,与单纯的阿拉瑞林作用 3min组相比差异显著 ;(3)在无外Ca2 +时 ,阿拉瑞林也可使PKC活性升高 ,但不如单独用阿拉瑞林作用 3min组的高。因此PKC活性的增高 ,并不完全依赖细胞外Ca2 + ,它可以动员胞内Ca2 + 的释放激活PKC ,说明GnRH类似物可使胃平滑肌细胞中PKC活性增加 ,PKC参与阿拉瑞林对胃平滑肌细胞调控的信号转导过程。

脾气虚与脾阴虚大鼠肝、脾组织蛋白激酶C活性变化的比较研究

目的:探讨脾气虚证与脾阴虚证肝、脾组织蛋白激酶C(PKC)活性变化的异同,揭示脾气虚和脾阴虚的现代生物学基础.方法:采用复合因素塑造大白鼠脾气虚证与脾阴虚证模型;采用底物磷酸化法检测模型大鼠肝、脾组织PKC活性.结果:健脾益气和滋补脾阴中药对脾组织细胞膜无明显作用,对脾组织细胞浆、肝组织细胞膜和细胞浆PKC活性均有明显的降低作用(P＜0.01).其中,滋补脾阴中药对肝组织细胞浆作用尤为明显,可使其恢复到正常水平.结论:脾气虚证与脾阴虚证肝、脾组织细胞PKC活性变化存在一定的差异,同肝组织细胞膜和脾组织细胞浆PKC活性变化密切相关;脾气虚与脾阴虚的病理变化与现代医学肝、脾组织的功能相关;健脾益气和滋补脾阴中药能够调节脾气虚与脾阴虚大鼠肝、脾组织PKC活性,其中滋补脾阴中药的作用靶点可能在肝组织细胞浆.

大肠癌的蛋白激酶C活性的研究

大肠癌的蛋白激酶Ｃ活性的研究王红梅，宋今丹中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室（沈阳１１０００１）本文试图通过对大肠癌、癌周及相邻正常粘膜组织这一连续过程蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性检测，寻找新的、更加特异性大肠癌标记物，以期用于大肠癌的早期诊断。材料...

胰岛素敏感及胰岛素抵抗肥胖人群腺苷单磷酸活化蛋白激酶活性、氧化应激及不同脂肪组织中基因表达的特异性变化

本研究以稳态模型胰岛素抵抗指数为标准，将16例病态肥胖患者分为胰岛素敏感组及胰岛素抵抗组，比较2组患者腹部皮下脂肪、肠系膜脂肪及网膜脂肪含量。

碘化N-正丁基氟哌啶醇对培养大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤及蛋白激酶C活性的影响

目的：前期研究表明，碘化N-正丁基氟哌啶醇（F2）心肌保护作用的机制可能与其拮抗钙超载及抑制早期生长反应基因-1（Egr—1）mRNA及蛋白表达相关，作为Egr-1的上游信号分子蛋白激酶C（PKC），

钙调蛋白激酶抑制剂对肥厚心肌心律失常的影响

目的研究钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)抑制剂KN-93对肥厚心肌细胞心律失常发生率和钙调蛋白激酶活性的影响,探讨肥厚心肌易于发生心律失常的机制。方法雌性大耳白兔随机分成假手术组、心肌肥厚组(LVH组)、KN-93组和KN-92组。应用彩色多普勒超声观察左室肥厚程度;同步记录楔形心肌块心电图和内、外膜心肌细胞跨膜动作电位,低钾、低镁、慢频率刺激下,观察各组尖端扭转型室性心动过速(Tdp)的诱发率;同时测定CaMK活性的变化。结果LVH组Tdp发生率高于假手术组(P<0.05),KN-93能降低肥厚心肌室性心律失常的发生率;LVH组CaMK的活性高于假手术组(P<0.05),KN-93能有效降低肥厚心肌细胞内CaMK活性,而KN-92没有该作用。结论肥厚心肌恶性心律失常的发生与钙调蛋白激酶活性增高密切相关。CaMKⅡ可能成为抗心律失常新的靶点。