环磷酸腺苷／蛋白激酶A通路与谷氨酰胺刺激胰岛素分泌机制的相关性

目的研究环磷酸腺苷（cAMP）／蛋白激酶A通路与谷氨酰胺刺激胰岛素分泌机制的相关性。方法按照细胞培养标准操作规程培养15HC9细胞（一种来源于转基因鼠的B细胞株），在有葡萄糖（0．25mmoL／L）存在的前提下，以不同浓度的谷氨酰胺（0．0、0．5、1．0、2．0、5．0mmol／L）刺激13HC9细胞胰岛素的分泌，取出培养液，离心后留取上清液，分别测定细胞培养液中的胰岛素水平和13HC9细胞内的cAMP水平，分析谷氨酰胺刺激对15HC9细胞内cAMP水平和培养液中胰岛素水平的影响。结果在有葡萄糖（0．25mmol／L）存在的前提下，随着谷氨酰胺浓度的增加（0．0、0．5、1．0、2．0、5．0mmolfL），13HC9细胞培养液中的胰岛素[0．0ng／（mL·million）、19．1ng／（mL·million）、29．1ng／（mL·million）、30．1rig／（mL·million）、33．9us／（mL·million）]及cAMP水平（0．0pmol／million、40．0pmol／million、51．5pmol／million、52．5pmol／million、61．3pmol／million）均相应增加。结论谷氨酰胺对葡萄糖刺激的胰岛素分泌起着进一步放大作用，并且这种放大作用是以cAMP的存在为前提的。

薯蓣皂苷对缺血性脑损伤模型大鼠cAMP/PKA通路、NHE1和GLUTs蛋白的调控作用

目的探究薯蓣皂苷对缺血性脑损伤模型大鼠环腺苷酸(cAMP)/蛋白激酶(PK)A通路、葡萄糖转运蛋白(GLUTs)、1型Na^(+)/H^(+)交换蛋白(NHE1)的调控作用。方法60只SPF级雄性SD大鼠,随机分为假手术(J)组、模型(MCAO)组、尼莫地平(N)组(15 ml/kg)、薯蓣皂苷高、中、低剂量(H、M、L)组(200、100、50 mg/kg),每组10只,线栓法构建大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)再灌注模型,造模成功后灌胃给药7 d(1次/d)。测定各组大鼠神经功能评分,Western印迹检测脑组织中GLUTs和NHE1蛋白水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脑脊液cAMP、PKA水平。结果与J组比较,MCAD组神经功能评分显著增高,脑脊液中cAMP、PKA含量显著降低,GLUTs表达水平显著减少,NHE1表达水平显著升高(均P<0.01)。与MCAO显著组相比,H、M、L组能显著改善神经病学症状(P<0.01,P<0.05),显著升高cAMP、PKA含量及GLUTs表达水平,并显著降低NHE1表达水平(P<0.01,P<0.05),其中H组效果最佳,与N组接近。结论薯蓣皂苷可通过上调cAMP/PKA通路,升高GLUTs、降低NHE1水平,来缓解MCAO模型大鼠脑组织缺血缺氧,保护脑组织。

薯蓣皂苷元通过激活VIP/cAMP/PKA通路改善慢性阻塞性肺疾病大鼠气道炎症和肺损伤

目的探讨薯蓣皂苷元对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠及血管活性肠肽(VIP)/环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)通路的影响。方法将60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、薯蓣皂苷元组(100 mg/kg)、阳性组(地塞米松0.81 mg/kg)、薯蓣皂苷元+H89组(100 mg/kg薯蓣皂苷元+1 mg/kg VIP/cAMP/PKA通路抑制剂H89),每组12只。4周后,采用全身体积描记系统检测大鼠肺功能,采用酶联免疫吸附试验检测大鼠血清中炎症因子水平及肺组织cAMP水平,采用HE染色检测肺组织病理变化,采用流式细胞术测定肺Th17、Treg细胞比例,采用蛋白质印迹法检测肺组织VIP、PKA蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠肺组织有炎症细胞浸润、部分血管破裂等损伤,炎症评分、白细胞介素(IL)-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-17、Th17细胞水平及Th17/Treg均升高(P<0.05),肺功能、Treg细胞、VIP、cAMP水平及p-PKA/PKA降低(P<0.05);与模型组比较,薯蓣皂苷元组、阳性组大鼠肺功能损伤缓解,炎症评分、IL-6、IL-8、TNF-α、IL-17、Th17细胞水平及Th17/Treg均降低(P<0.05),肺功能、Treg细胞、VIP、cAMP水平及p-PKA/PKA升高(P<0.05);与薯蓣皂苷元组比较,薯蓣皂苷元+H89组大鼠肺功能损伤加重,炎症评分、IL-6、IL-8、TNF-α、IL-17、Th17细胞水平及Th17/Treg升高(P<0.05),肺功能、Treg细胞、VIP、cAMP水平及p-PKA/PKA降低(P<0.05)。结论薯蓣皂苷元可能通过激活VIP/cAMP/PKA通路,改善COPD大鼠气道炎症和肺损伤。

半夏提取物通过AMPK/FOXO3a信号通路对哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨半夏提取物(EP)对哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖、凋亡的影响及作用机制。方法:采用卵清蛋白致敏和激发方式构建哮喘大鼠模型,分离并培养大鼠ASMCs,免疫荧光染色鉴定ASMCs中的α-肌动蛋白(α-actin),符合ASMCs特征后将ASMCs分为对照组、模型组、EP组、Compound C组、EP+Compound C组,MTT检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA检测细胞上清中炎症因子IL-6、TNF-α水平;Western blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Caspase-3、Cleaved-Caspase-3、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、p-AMPK、叉头框蛋白O3a(FOXO3a)、p-FOXO3a蛋白表达。结果:免疫荧光染色显示98%细胞的细胞质中呈现绿色荧光的肌丝,α-actin呈阳性表达,证明培养的细胞为ASMCs。与对照组比较,模型组细胞OD490、CyclinD1、PCNA蛋白表达及上清中IL-6、TNF-α水平显著升高,细胞凋亡率、Bax、Caspase-3、Cleaved-Caspase-3蛋白表达及p-AMPK/AMPK、p-FOXO3a/FOXO3a水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,EP组细胞OD490、CyclinD1、PCNA蛋白表达及上清中IL-6、TNF-α水平显著降低,细胞凋亡率、Bax、Caspase-3、Cleaved-Caspase-3蛋白表达及p-AMPK/AMPK、p-FOXO3a/FOXO3a水平显著升高(P<0.05),而Compound C组上述对应指标呈相反趋势(P<0.05);与EP组比较,EP+Compound C组细胞OD490、CyclinD1、PCNA蛋白表达及上清中IL-6、TNF-α水平显著升高,细胞凋亡率、Bax、Caspase-3、Cleaved-Caspase-3蛋白表达及p-AMPK/AMPK、p-FOXO3a/FOXO3a水平显著降低(P<0.05)。结论:EP可能通过激活AMPK/FOXO3a通路抑制哮喘大鼠ASMCs增殖,促进细胞凋亡。

消积通便方对便秘小鼠VIP-cAMP-PKA信号通路的影响

目的探讨消积通便方治疗便秘的作用机制。方法将64只SPF级雄性ICR小鼠随机分为空白组、模型组、消积通便方低剂量组、消积通便方中剂量组、消积通便方高剂量组、莫沙必利组。空白组给予生理盐水灌胃,其余各组给予洛哌丁胺10 mg/kg灌胃,均每日2次,共14 d。消积通便方低、中、高剂量组以及莫沙必利组小鼠均于第8天开始灌胃相应药物,正常组和模型组灌胃等量的生理盐水,均连续7 d。观察各组小鼠一般情况,记录实验第15天胃排空率及肠道推进率,采用ELISA法测定血清中血管活性肠肽(VIP)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平,HE染色观察结肠组织黏膜情况,实时荧光定量PCR法检测结肠组织中环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)mRNA表达情况。结果空白组小鼠一般状态良好,体重逐步增加;模型组小鼠有不同程度易激惹或倦怠,精神不振,反应迟钝,进食量及饮水量减少;消积通便方各组及莫沙必利组小鼠精神状态及活动改善,进食、饮水量渐增。与空白组比较,模型组小鼠胃排空率及血清VIP、iNOS水平均明显增高(P均<0.05),肠道推进率及结肠组织中PKA mRNA、cAMP mRNA表达量均明显降低(P均<0.05);HE染色显示结肠黏膜固有层及黏膜下层可见炎性细胞浸润,肌层明显变薄。与模型组比较,消积通便方中、高剂量组及莫沙必利组小鼠胃排空率及血清VIP、iNOS水平均明显降低(P均<0.05),消积通便方高剂量组和莫沙必利组小鼠肠道推进率及结肠组织中PKA mRNA、cAMP mRNA表达量均明显升高(P均<0.05);HE染色显示消积通便方中、高剂量组及莫沙必利组小鼠结肠组织损伤明显减轻。结论消积通便方可能通过下调VIP、iNOS水平,激活cAMP-PKA通路,从而调节肠道平滑肌的活动,促进肠蠕动,缓解便秘症状。

补肾调经方含药血清对体外培养的人卵巢颗粒细胞FSH/cAMP-PKA通路的影响

目的通过补肾调经方含药血清对体外培养的人卵巢颗粒细胞卵泡刺激素/环磷酸腺苷-蛋白激酶A(follicle stimulating hormone/cyclic adenosine monophosphate-protein kinase A,FSH/cAMP-PKA)通路的影响,探讨补肾调经方改善卵巢内分泌功能可能的分子机制。方法收集行体外受精-胚胎移植(In vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)患者卵泡液,提取颗粒细胞进行原代细胞培养24 h,以低、中、高剂量补肾调经方人、大鼠含药血清以及正常人、大鼠血清分别与体外培养的人卵巢颗粒细胞共同孵育48 h,分为补肾调经方低、中、高剂量组以及对照组。采用放射免疫方法测定培养液中雌二醇(estrogen,E2)、孕酮(progesterone,P)、环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)的水平,采用蛋白印迹法和Real-time PCR分别检测卵泡刺激素受体(follicle stimulating hormone receptor,FSHR)蛋白和FSHR、P450芳香化酶(P450 aromatase,P450arom)mRNA在颗粒细胞的表达。结果人含药血清组:与对照组比较,补肾调经方中、高剂量组培养液中E2、cAMP水平均明显升高(P<0.05),补肾强经方中剂量组P明显降低(P<0.01);补肾调经方中、高剂量组卵巢颗粒细胞FSHR蛋白及其mRNA表达均明显增高(P<0.01),P450芳香化酶mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。大鼠含药血清组:与对照组比较,补肾调经方中、高剂量组E2均升高(P<0.01),cAMP明显升高(P<0.05,P<0.01),补肾调经方中剂量组P明显降低(P<0.01);补肾调经方中、高剂量组人卵巢颗粒细胞FSHR蛋白及其mRNA表达均增高(P<0.01),P450芳香化酶mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论补肾调经方可能通过调节卵巢颗粒细胞FSH/cAMP-PKA通路的主要效应分子FSHR、cAMP、P450arom、E2,促进卵巢颗粒细胞的内分泌功能。

磷酸二酯酶4抑制剂治疗银屑病的研究进展

银屑病是一种遗传和环境共同作用诱发的、免疫介导的慢性炎症性皮肤病。环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)通路与银屑病的发病机制密切相关,而磷酸二酯酶4是可以专一水解cAMP的酶,因此磷酸二酯酶4成为银屑病治疗的期望小分子靶点。磷酸二酯酶4抑制剂类药物通过竞争性阻断磷酸二酯酶4对cAMP的降解作用,使T辅助细胞1(Th1)、Th2和Th17的免疫反应减弱来发挥治疗作用。磷酸二酯酶4抑制剂如阿普司特、罗氟司特、克立硼罗、Hemay005、奥利司特、MK-0873、tanimilast、DRM02在治疗银屑病及其共病方面有巨大的潜力。就磷酸二酯酶4抑制剂治疗银屑病的作用机制、疗效、安全性进行了总结。