eNOS/PKG-1通路在L-精氨酸抗野百合碱所致大鼠右心室重构中的作用

目的借助工具药L-NAME,探讨eNOS/PKG-1通路在L-精氨酸(L-Arginine,L-arg)干预野百合碱(monocrotaline,MCT)所致大鼠右心室重构的作用。方法20只SD大鼠随机分为4组,正常对照组、MCT组、L-arg组和L-arg+L-NAME组。观察大鼠一般状况;采用右心导管术检测大鼠右心室压;称大鼠体质量和右心室重量,计算右心室质量指数;HE染色观察大鼠右心室形态学变化;蛋白免疫印迹法检测右心室cTnI、eNOS和PKG-1蛋白的表达。结果与Control组相比,MCT组大鼠右心室最大压和右心室质量指数均明显升高(P<0.05),体质量明显减轻(P<0.05);右心室心肌细胞肥大,且排列紊乱;cTnI蛋白的表达明显上调(P<0.05),eNOS和PKG-1蛋白表达均明显下调(P<0.05)。L-arg能明显改善上述变化(P<0.05)。而eNOS抑制剂L-NAME能明显阻断L-arg的作用(P<0.05)。结论L-arg可改善MCT所致大鼠右心室重构,其机制可能与上调eNOS和PKG-1蛋白的表达有关。

蛇床子素通过上调eNOS/PKG-1通路抗野百合碱所致大鼠肺动脉高压

目的借助工具药N^(G)-硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME),探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)/蛋白激酶G1(PKG-1)通路在蛇床子素(Ost)干预野百合碱(MCT)所致大鼠肺动脉高压(PAH)中的作用。方法在60只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠中随机抽取10只为正常对照组(Control组)。除Control组外,其余大鼠均采用颈背部一次性皮下注射MCT(55 mg/kg),建立PAH模型,并随机分为模型组(MCT组)、蛇床子素组(Ost组)、Ost+L-NAME组、L-精氨酸组(L-arg组)、L-arg+L-NAME组,后四组在建模第14天至第28天分别给予相应药物干预(qd)。在造模第28天,采用右心导管术检测大鼠肺动脉平均压(mPAP);称大鼠体重和肺组织重量,计算肺重指数(LI);H&E染色观察肺小动脉的形态学变化;蛋白免疫印迹法检测肺组织eNOS和PKG-1蛋白的表达。结果与Control组相比,MCT组大鼠肺动脉平均压和肺重指数均明显升高(P<0.05);肺小动脉血管壁增厚、管腔明显狭窄;肺组织eNOS与PKG-1蛋白表达均显著下调(P<0.05)。与MCT组相比,Ost组和L-arg组大鼠肺动脉平均压和肺重指数均明显下降(P<0.05);肺小动脉血管壁增厚、管腔狭窄的变化有所改善;肺组织eNOS与PKG-1蛋白表达均明显上调(P<0.05)。而给予L-NAME能明显拮抗Ost和L-arg的上述作用(P<0.05)。结论Ost改善野百合碱所致大鼠PAH的机制至少与上调eNOS/PKG-1通路有关。

eNOS与PKG-1在野百合碱所致大鼠右心室重构中的作用

目的探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)与蛋白激酶G1(PKG-1)在野百合碱(MCT)所致大鼠右心室重构中的作用。方法将18只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为两组,正常对照组(Control组,n=8)和模型组(MCT组,n=10)。MCT组大鼠采用颈背部一次性皮下注射MCT(55 mg/kg),建立右心室重构模型,Control组大鼠同MCT组方法注射等体积生理盐水。观察大鼠一般状况及存活率;造模28 d后采用右心导管术检测大鼠右心室压;称大鼠体重和右心室重量,计算右心室质量指数;H&E染色观察大鼠右心室组织形态学变化;蛋白免疫印迹法检测右心室组织eNOS和PKG-1蛋白的表达。结果与Control组相比,MCT组大鼠右心室最大压和右心室质量指数均明显升高(P<0.05),体重明显减轻(P<0.05);右心室心肌细胞出现排列紊乱,炎性细胞浸润,部分心肌细胞胞核宽大、形态不规则;eNOS与PKG-1蛋白表达均明显下调(P<0.05)。结论eNOS和PKG-1表达的下调可能参与了MCT所致大鼠右心室重构。

基于网络药理学及实验验证探究芪苈强心胶囊治疗射血分数保留型心衰的作用机制

目的基于网络药理学及实验验证探讨芪苈强心胶囊治疗射血分数保留型心衰(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)的作用机制。方法将44个明确鉴定的芪苈强心胶囊体内代谢物检识有效成分,利用Swisstargetprediction、pharmmapper平台预测化合物靶点,OMIM、DisGenet、GenCard数据库中检索HFpEF疾病靶点;取交集靶点,利用String数据库和Cytoscape 3.7.2软件进行蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)和拓扑分析;Metescape平台对共同靶点进行基因本体(gene ontology,GO)功能富集分析及京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析。构建醋酸脱氧皮质酮(deoxycorticosterone acetate,DOCA)盐敏感型HFpEF大鼠模型,给予沙库巴曲缬沙坦或芪苈强心胶囊进行干预,给药8周后,利用小动物超声成像系统、ELISA、免疫荧光、Western blotting、qRT-PCR方法进行药效学评估和环磷酸鸟苷(cyclic guanosinc monophosphate,cGMP)-蛋白激酶G1(protein kinase G1,PKG1)信号通路相关靶点验证。结果芪苈强心胶囊有效成分和HFpEF分别筛选出38个相同作用靶点;GO功能及KEGG通路富集分析得出其在血液循环、循环系统、心脏收缩等生物过程,膜筏、轴突、细胞质区等细胞成分,α-葡萄糖苷酶活性、内肽酶活性、水解酶活性等分子功能上起作用,涉及cGMP-PKG信号通路、肾素分泌、钙信号通路等。体内实验证实芪苈强心能够提高HFpEF大鼠射血分数,降低室壁肥厚程度,缩短等容舒张时间(isovolumic relaxation time,IVRT),提升左室舒张期充盈速度比值(P<0.05);提高血清一氧化氮(nitric oxide,NO)、cGMP水平(P<0.05);增强心肌组织内皮型一氧化氮合成酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)荧光表达(P<0.05、0.01);增加eNOS、PKG1、心肌肌浆网Ca^(2+)-ATP酶(sarco/endoplasmic reticulum Ca^(2+)-ATPase,SERCA)、可溶性鸟苷酸环化酶α(soluble guanylate cyclaseα,sGCα)蛋白表达水平(P<0.05、0.01),降低cGMP特异性磷酸二酯酶5A(cGMP-specific phosphodiesterase 5A,PDE5A)蛋白表达水平(P<0.05);减少心肌组织B型脑钠肽(B-type brain natriuretic peptide,BNP)、β-肌球蛋白重链(myosin heavy chainβ,β-MHC)的mRNA表达(P<0.05)。结论芪苈强心胶囊可通过成分-多靶点-多环节发挥HFpEF的治疗作用,其机制与调节cGMP-PKG信号通路有关。

翻白草含药血清对高糖培养肾小管上皮细胞增殖作用及其对RhoA/ROCK信号通路的影响

目的:探讨翻白草含药血清对高糖培养小鼠肾小管上皮细胞增殖及其对转分化机制的影响。方法:制备各组大鼠含药血清;10%胎牛血清(FBS)-RPMI 1640培养基培养小鼠肾小管上皮细胞,传代培养后按3 000个/孔接种于96孔培养板,分为正常组、高糖组、厄贝沙坦组及翻白草组;加入相对应6%含药血清的高糖RPMI 1640培养基;培养12,24,48,60 h时分别观察各组细胞形态,并应用噻唑蓝(MTT)比色法检测各组吸光度A;高糖培养24 h后应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组肾小管上皮细胞小G蛋白(RhoA),Rho蛋白激酶1(ROCK1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和钙黏附蛋白-E(Ecadherin)蛋白表达情况。结果:高糖培养后肾小管上皮细胞由扁平不规则的多角形变为长梭形;加入相应含药血清干预后细胞呈扁平不规则的多角形;与正常组比较,12 h时高糖组肾小管上皮细胞呈明显增殖状态(P<0.05),24,48,60 h时增殖显著(P<0.01);与高糖组比较,12 h时翻白草组能抑制肾小管上皮细胞增殖(P<0.05),24,48,60 h时翻白草组抑制肾小管上皮细胞增殖作用显著增强(P<0.01);与厄贝沙坦组比较,48,60 h翻白草组能抑制肾小管上皮细胞增殖(P<0.05);与模型组比较,翻白草组E-cadherin蛋白表达显著增加,RhoA,ROCK1和α-SMA蛋白表达显著减少(P<0.01)。结论:翻白草含药血清可以抑制高糖培养的肾小管上皮细胞增殖、抑制肾小管上皮细胞转分化,可能与RhoA/ROCK信号通路有关。