溶血素 E基因原核表达载体的构建与蛋白诱导表达

目的构建大肠杆菌(Escherichia Coli,E.coli)溶血素E(Hemolysin E)基因的重组质粒pCZN1-hlyE,诱导表达目的蛋白。方法通过NCBI数据库检索获取E.coli Hemolysin E基因序列(NC_000913.3),采用基于PAS(PCR-based Accurate Synthesis)的全基因合成法,设计全长拼接引物,合成目的基因,并成功构建重组质粒pCZN1-hlyE。将构建好的pCZN1-hlyE重组质粒转入大肠杆菌TOP10菌株中,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导Hemolysin E基因的表达,生成Hemolysin E毒力蛋白。结果经SDS-PAGE凝胶电泳,Western blot分析鉴定目的蛋白Hemolysin E分子量为28.72 kDa,与Hemolysin E基因核酸序列经DNAMAN软件分析所得蛋白分子量一致。结论被诱导表达的Hemolysin E蛋白存在于菌体裂解液上清中,并纯化制备重组蛋白。

食物蛋白诱导的直肠结肠炎患儿不同乳制品喂养前后肠道微生态变化的研究

目的探讨3种不同喂养方式对食物蛋白诱导的直肠结肠炎(Food protein-induced proctocolitis,FPIP)患儿喂养前后肠道微生物特点及体格发育的影响。方法以2023年1月至12月山西省儿童医院新生儿内科的60例FPIP患儿作为试验组(失访15例,最终纳入45例),根据家长意愿分为3个亚组:母乳喂养组(母亲回避牛奶、鸡蛋、坚果)(Breastfeeding group,BAM组)、深度水解配方乳喂养组(Extensively hydrolyzed formula group,eHF组)和游离氨基酸配方乳喂养组(Amino acid formula group,AAF组);以本院产科同期分娩、并于后期在儿童保健科定期随访中均未出现FPIP症状的20例健康新生儿作为对照组,采用母乳喂养和/或普通配方乳喂养。比较各组研究对象不同喂养方式前后的临床症状、肠道微生态特点及体格发育情况。结果①实验组3种喂养方式中,AAF组中FPIP患儿腹泻、便血及肉眼血便消失的时间更短,差异有统计学意义(P<0.05)。②治疗前粪便物种丰度AlPha多样性中,试验组的丰富度(Chao1 richness,Chao1)指数和利用稀有物种估算物种多样性(Abundance-based coverage estimator,ACE)指数显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。③治疗后试验组中3组的粪便物种丰度的菌群操作分类单元(Operational taxonmic unit,OTU)及AlPha多样性差异均无统计学意义(P>0.05)。④本研究对肠道菌群的物种差异进行分类学分析,以门水平为例,治疗前试验组较对照组菌群多样性降低,以放线菌门和拟杆菌门降低为主;治疗后试验组3组中,BAM组菌群多样性更接近于对照组,差异无统计学意义(P>0.05);eHF组和AAF组与对照组相比,厚壁菌门和变形菌门占优势,差异有统计学意义(P<0.05)。⑤试验组3组患儿治疗5个月后的体重、身长差异均无统计学意义(P>0.05)。结论游离氨基酸配方乳在治疗FPIP时,临床效果更好;FPIP患儿菌群多样性较健康婴儿降低;母乳喂养(母亲回避牛奶、鸡蛋、坚果)更有利于FPIP婴儿后期健康肠道菌群的建立;母亲回避饮食的母乳喂养、深度水解配方乳喂养和游离氨基酸配方乳喂养对后期体格发育影响差异不大。

医护一体化护理在牛奶蛋白诱导的过敏性直肠结肠炎患儿中的应用

目的探讨医护一体化护理在牛奶蛋白诱导的过敏性直肠结肠炎(AP)患儿中的应用效果。方法将90例牛奶蛋白诱导的AP患儿随机分为参照组(n=45)和研究组(n=45)。参照组采用常规护理,研究组在参照组基础上采用医护一体化护理。比较两组家长疾病照护能力、患儿症状缓解时间以及家长满意度。结果研究组护理后的家长中文版家庭照护测量量表(FaMM)各项评分均高于参照组,血便消失时间、大便次数恢复正常时间、腹泻消失时间短于参照组(P<0.05)。研究组家长满意度为95.56%,高于参照组的82.22%(P<0.05)。结论医护一体化护理可明显提升牛奶蛋白诱导的AP患儿家长疾病照护能力,促进患儿不适症状尽快缓解,家长满意度更高。

新生儿食物蛋白诱导性小肠结肠炎综合征2例并文献复习

目的:探讨新生儿食物蛋白诱导性小肠结肠炎(NFPIES)的临床特点及治疗。方法:回顾性分析2021年8月与2021年12月于青岛大学附属医院诊断的2例NFPIES患儿的临床资料,以“新生儿”“食物蛋白诱导小肠结肠炎”和“neonate”“food protein induced enterocolitis syndrome”为关键词分别在中国期刊全文数据库(CNKI)、万方数据知识服务平台、PubMed进行检索(建库至2022年12月),总结NFPIES患儿的临床特点。结果:例1,患儿女,7天,因“便血1天半”入院。患儿系G5P2,胎龄39周 1天,出生体重3600 g。患儿父亲有湿疹、鼻炎病史,患儿哥哥有鼻炎病史。入院时体重下降11.3%,小便量少,皮肤颜色苍白,皮肤弹性差。例2,患儿男,6天,因“便血3天”入院。患儿系G2P2,胎龄38周,出生体重3450 g。患儿父亲有鼻炎病史。入院时体重下降6%。查体:血压71/43 mmHg,反应欠佳,面色欠红润,皮肤弹性差。2例患儿生后均有配方奶喂养史,均有低白蛋白、脱水临床表现,更换为氨基酸奶粉喂养后,便血等临床症状得到缓解,诊断为慢性重度FPIES。文献复习结果:根据本研究设定的文献检索策略,共计检索到6篇关于NFPIES的文献,共14例患儿。临床表现主要为呕吐、腹胀、便血、发热等,其中7例嗜酸性粒细胞升高。结论:NFPIES没有特异性的临床表现及实验室检查,要求医师详细询问疾病发作时临床表现及父母过敏史等信息,需注意与新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)、感染性胃肠炎及炎症性肠病等疾病鉴别,避免过度检查及治疗。

食物蛋白诱导性小肠结肠炎综合征的早期诊断及治疗进展

食物蛋白诱导性小肠结肠炎综合征(food proteininduced enterocolitis syndrome,FPIES)是一种由食物蛋白引起的非IgE介导的胃肠道炎症性疾病,是一种严重的过敏反应。临床医生对该病认识不足,容易误诊漏诊。其病理为小肠和结肠的非特异性炎症病变,通常在单一或多种食物蛋白质暴露后数小时内发作,常见于婴幼儿,表现为频繁呕吐、腹泻、脱水、电解质紊乱等消化系统症状。发病机制尚不完全明确,可能与肠道免疫系统对特定食物蛋白的异常反应有关[1]。近年来对其诊断和治疗取得了一定进展。诊断方法包括病史、食物激发试验、实验室检查等。治疗策略是避免诱发食物及对症支持治疗。未来的研究方向为进一步深入探索FPIES的发病机制,发现更准确、快速的诊断方法及更有效的治疗手段。同时,还需加强对FPIES的预防和管理策略的研究,以期为临床提供更多有针对性的诊疗方案。

婴儿食物蛋白诱导的直肠结肠炎早期诊断指标研究进展

1食物蛋白诱导的直肠结肠炎(FPIAP)定义及发病情况食物过敏(food allergy,FA)是由于特异性免疫介导的、可重复出现的、危害健康的过敏反应。近年来,FA发生率逐年上升。澳大利亚墨尔本一项基于人群的队列研究显示,≤1岁婴儿口服食物激发试验(oral food challenge,OFC)中FA患病率高达10%[1]。美国儿童中,8.0%出现FA,2.4%存在多种FA,3.1%发生过严重FA[2]。

程氏蠲痹汤通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路激活减轻胶原蛋白诱导关节炎(CIA)大鼠炎症

目的探索程氏蠲痹汤(JBT)对胶原蛋白诱导关节炎(CIA)大鼠治疗的可能机制。方法将雌性SD大鼠分为正常组、CIA模型组、甲氨蝶呤(MTX)组、不同剂量JBT组、LY294002(PI3K阻断剂)组。评估JBT对实验大鼠治疗前后足趾肿胀度、关节炎指数测定的影响,HE染色检测滑膜组织病变情况,ELISA检测大鼠滑膜组织匀浆中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。实时定量PCR检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、beclin-1、P62的mRNA表达水平,Western blot法检测AKT、磷酸化的AKT(p-AKT)、mTOR、磷酸化的mTOR(p-mTOR)、PI3K、磷酸化的PI3K(p-PI3K)、P62、beclin-1、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)蛋白表达。结果与正常组相比,给药前1 h,其余各组大鼠足趾明显肿胀。与给药前1 h相比,高剂量JBT组、MTX组、LY294002组给药30 d后,采血前2 h足趾肿胀明显缓解。JBT能显著减轻大鼠足趾肿胀度、关节炎指数评分、滑膜组织的破坏。高剂量JBT组大鼠滑膜样本IL-1β、TNF-α水平以及PI3K、AKT、mTOR、P62的mRNA表达水平降低,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、P62蛋白水平明显降低,beclin-1 mRNA和蛋白表达、LC3B蛋白水平明显升高。结论JBT可能通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活减轻关节炎症,高剂量JBT的治疗效果与MTX、LY294002的治疗效果相当。

北沙参补骨脂素合成酶基因 GlPS1 原核表达载体的构建和蛋白诱导表达

北沙参(Glehniae Radix)为伞形科植物珊瑚菜(Glehnia littoralis)的干燥根,具有良好的药用价值和较高的经济价值。补骨脂素(psoralen)是北沙参香豆素类化合物主要的活性成分之一,对白血病细胞有较强的杀伤作用,对支气管平滑肌有舒张作用。补骨脂素合成酶(GlPS)是北沙参补骨脂素生物合成途径的最后一步关键酶。本试验通过PCR扩增获得对北沙参补骨脂素合成酶基因GlPS1,通过酶切、连接、转化、平板培养和提取质粒构建原核表达载体;将构建好的表达载体转入大肠杆菌BL21(DE3)中,实现GlPS1基因的IPTG诱导原核表达。该研究表明被诱导表达的GlPS1蛋白存在于菌体沉淀中,不溶于上清液。研究结果为验证GlPS1基因的功能及使用基因工程方法调控GlPS1蛋白表达奠了基础。

儿童食物蛋白诱导性小肠结肠炎综合征诊疗研究进展

食物蛋白诱导的小肠结肠炎综合征(Food protein-induced enterocolitis syndrome, FPIES)是一种并不罕见的非IgE介导的食物过敏反应,常在婴儿期发病,急性起病多见,但病理生理尚不完全清楚,而临床表现缺乏特异性。目前诊断主要依赖于病史、典型的临床表现以及回避可疑致敏食物后症状缓解,必要时需进行口服食物激发试验确诊。基于症状的严重程度的FPIES管理主要包括回避致敏食物及对症支持治疗,预后良好。回顾总结儿童FPIES的流行病学、临床表型、发病机制、疾病诊疗的最新进展,全面认识并掌握其临床特点,对儿童FPIES尤其是新生儿FPIES早期诊治、合理实施营养方案有积极意义。

同源性磷酸酶张力蛋白诱导激酶1-Parkin通路在过敏性鼻炎中的作用机制

[目的]探讨同源性磷酸酶张力蛋白诱导激酶1(PINK1)-Parkin通路在卵清蛋白(OVA)所致过敏性鼻炎(AR)中的作用机制.[方法]选择雌性BALB/c小鼠随机分为对照组和模型组,采用OVA致敏(25μg OVA)和激发(100μg OVA)的方法建立AR小鼠模型,在激发期间观察并记录两组小鼠的打喷嚏和挠鼻次数.采用HE染色方法观察鼻黏膜上皮细胞的形态和嗜酸性粒细胞的浸润情况;采用Western blot法检测两组小鼠鼻黏膜组织中PINK1、Parkin和线粒体凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及Caspase-3的表达水平.[结果]与对照组比较,模型组小鼠打喷嚏和挠鼻次数明显增多(P<0.05),鼻黏膜下炎性细胞浸润明显,鼻黏膜组织中PINK1、Parkin和促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达均显著升高,Bcl-2表达显著降低.[结论]P INK1-Parkin信号通路可能改善AR小鼠鼻黏膜组织的炎症反应,抑制炎症细胞因子的表达,对AR具有保护作用.

Th1型细胞因子在胶原蛋白诱导性关节炎小鼠血清中的动态变化

目的研究鸡Ⅱ型胶原蛋白诱导性关节炎(CIA)小鼠血清Th1型细胞因子IFN-γ、IL-2、TNF-α的动态变化。方法 72只DBA1/J小鼠随机分为正常对照组(每组6只)和模型组(每组12只),分别在加强免疫后第7、14、21、35天,无菌摘眼球取血清,应用流式细胞术检测各组小鼠血清中细胞因子IFN-γ、IL-2、TNF-α在关节炎不同时期的动态变化情况。结果模型组IFN-γ在加强免疫后第7天和第14天显著升高(P<0.05),加强免疫后第21天、第35天开始下降,与正常组比较无区别(P>0.05);模型组IL-2和TNF-α在加强免疫后第7天上升明显,与正常组比较有统计学意义(P<0.05),加强免疫后第14、21、35天IL-2和TNF-α逐渐下降,与正常组比较无统计学意义(P>0.05)。结论 CD4+Th1型细胞因子参与CIA发病全过程,而且在不同的发病阶段其相关细胞因子的变化与关节炎的炎症进展有一定关系。

骨形成蛋白诱导活性材料联合自体骨移植治疗牙周骨下袋缺损的临床疗效研究

目的探讨骨形成蛋白诱导活性材料(OAM)联合自体骨移植治疗牙周骨下袋的缺损临床疗效。方法选取2014年3月-2016年4月海军总医院口腔科收治的牙周骨下袋缺损患者50例为研究对象,患牙56颗。56颗患牙随机分为治疗组与对照组,每组28颗。治疗组患者应用OAM联合自体骨移植结合引导组织再生术(GTR)进行修复,对照组患者单纯应用OAM结合GTR进行修复,对比观察两组牙周在手术前及手术后12、24w的牙周临床附着丧失(CAL)、牙周探诊深度(PPD)、龈沟出血指数(SBI)。结果与手术前比较,治疗组与对照组患者在手术后12、24wCAL均明显减少,且治疗组手术后12w的CAL低于对照组(P<0.05),手术后24w两组CAL比较差异无统计学意义(P>0.05);与手术前比较,治疗组与对照组患牙在术后12、24w的PPD与SBI均明显改善,且治疗组手术后12、24w牙周PPD与SBI明显低于对照组(P<0.05)。结论在GTR手术中应用OAM联合自体骨移植修复牙周骨下袋缺损的临床疗效明显。

氧化型极低密度脂蛋白诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡

探讨氧化型极低密度脂蛋白诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的作用。应用低温超速离心法分离健康人血浆极低密度脂蛋白 ,用CuCl2氧化得到氧化型极低密度脂蛋白。琼脂糖凝胶电泳观察巨噬细胞凋亡DNA断裂“梯状”图谱 ;流式细胞仪和二苯胺法分别测定凋亡巨噬细胞百分率和DNA片断百分率 ;光镜观察凋亡巨噬细胞形态变化。结果发现 :①氧化型极低密度脂蛋白能诱导巨噬细胞发生凋亡及DNA断裂 ;②抗氧化剂二甲基硫脲能部分抑制氧化型极低密度脂蛋白诱导的DNA断裂 ;③核转录因子核因子κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐可完全抑制氧化型极低密度脂蛋白诱导的DNA断裂。提示氧化型极低密度脂蛋白诱导巨噬细胞凋亡可能是动脉粥样硬化形成机制之一 ;氧化型极低密度脂蛋白诱导巨噬细胞凋亡的作用可能与自由基和激活核因子κB有关。

丙丁酚抑制氧化型低密度脂蛋白诱导系膜细胞转化生长因子-β_1表达

目的 观察丙丁酚对ox- LDL诱导系膜细胞AP -1活性和TGF -β1 表达的作用 ,探讨抗氧化剂治疗脂质肾损伤的分子机制。方法 大鼠系膜细胞随机分为正常细胞组、ox- LDL处理组和ox- LDL +丙丁酚处理组。运用凝胶迁移率实验检测AP-1活性变化 ,Western杂交检测c- Jun、JNK/SAPK磷酸化及TGF- β1 蛋白表达水平的改变。运用Northern杂交检测TGF- β1- mRNA表达。结果 丙丁酚 5 0 μmol/L预处理系膜细胞 2 0h ,显著降低ox LDL诱导系膜细胞AP 1活性。丙丁酚浓度为 5 0、1 0 0、2 0 0 μmol/L时 ,均显著抑制ox- LDL诱导JNK ,/SAPK磷酸化 ;且ox LDL +丙丁酚处理组的c Jun蛋白表达分别为ox- LDL处理组的 6 0 %、5 1 %和 4 6 %。Northern杂交显示 :ox LDL为 1 0 μg/mL时并不激活TGF- β1 mRNA表达 (P >0 .0 5 ) ;而当ox-LDL浓度增至 5 0、1 0 0 μg/mL时 ,TGF -β1 mRNA表达分别增加 1 .8和 1 .9倍。Western杂交显示ox -LDL呈剂量依赖方式增加TGF β1 蛋白质表达。加入丙丁酚后显著降低ox LDL诱导系膜细胞的TGF -β1- mRNA和蛋白质表达 (P <0 .0 5 )。结论 丙丁酚可能通过抑制JNK1 /SAPK磷酸化和AP 活性下调ox- LDL诱导系膜细胞TGF- β1 表达。

复方丹参对Ⅱ型胶原蛋白诱导性关节炎大鼠滑膜细胞白介素-6mRNA表达的影响

目的研究复方丹参对Ⅱ型胶原蛋白诱导性大鼠关节炎模型(CIA)滑膜细胞白介素-6mRNA(IL-6mRNA)表达的影响。方法用Ⅱ型胶原蛋白诱导大鼠关节炎模型,以逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)半定量法测定模型大鼠滑膜细胞IL-6mRNA的表达,以及复方丹参对其的影响。结果复方丹参可以明显下调CIA大鼠滑膜细胞IL-6mRNA表达的水平。结论复方丹参治疗类风湿性关节炎的机制可能与下调滑膜细胞IL-6mRNA的表达水平有关。

骨形态发生蛋白诱导基因克隆和表达的实验研究

目的:用基因工程技术在大肠杆菌中表达骨形态发生蛋白诱导基因(BMP-2-inducedgene3kbgene,BIG-3)所编码的蛋白。方法:依据Genbank中BIG-3的基因序列设计并合成引物,从新生小鼠颅骨组织中提取总RNA,通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)得到BIG-3全长编码序列。将所得到的基因片段克隆至原核表达载体pGEX-4T-2的多克隆位点获得pGEX-4T-2-BIG-3重组表达载体,经测序证实后转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,挑选阳性克隆,经诱导表达后SDS-PAGE鉴定。结果:克隆得到BIG-3全长编码序列并在大肠杆菌中表达了GST-BIG-3融合蛋白,融合蛋白约占菌体总蛋白的45.3%。结论:通过RT-PCR从新生小鼠颅骨中克隆到BIG-3基因并在大肠杆菌中获得GST-BIG-3融合蛋白的高水平诱导表达。

激光针灸对2型胶原蛋白诱导关节炎(CIA)模型大鼠滑膜组织病理改变的影响机制

目的:探讨激光针灸对2型胶原蛋白诱导的关节炎(CIA)模型大鼠滑膜组织病理改变的作用机制。方法:将40只大鼠进行编号分为空白对照组、模型组、药物治疗组和激光针灸治疗组。激光治疗组采用足三里和肾俞穴位进行针灸15次,观察各组大鼠足肿胀程度并对各组大鼠的关节进行评分。提取大鼠的踝关节滑膜组织行HE染色,光镜下观察滑膜组织增生、炎性细胞浸润、巨噬细胞增生及纤维组织增生的情况。结果:模型组的4种病理学组织评分和总评分均高于空白对照组和药物、激光针灸治疗组,差异有统计学意义;模型组足肿胀程度及关节评分高于空白对照组,差异有统计学意义。药物治疗组和激光治疗组各指标之间比较差异无统计学意义。结论:激光针灸治疗CIA大鼠能有效地抑制CIA大鼠踝关节滑膜组织的增生,其疗效与药物治疗相当。

氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞炎症因子表达

目的:探讨氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)对培养的人巨噬细胞表达巨噬细胞移动抑制因子(macrophagemigrationinhibitory factor,MIF)、肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor,TNF-α)和单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)mRNA水平的影响.

2型糖尿病病人外周血同源性磷酸酶-张力蛋白诱导的激酶1、Parkin蛋白、视神经蛋白表达与肾损伤程度的关系研究

目的探究2型糖尿病(T2DM)病人外周血同源性磷酸酶-张力蛋白诱导的激酶1(PINK1)、Parkin蛋白、视神经蛋白(OPTN)表达及与肾损伤程度关系。方法选取2019年5月至2021年5月河南科技大学第一附属医院156例T2DM病人,根据糖尿病肾病(DN)诊断分期标准,分为非DN组92例、早期DN组(EDN组)38例、临床期DN组(CDN组)26例,另以同期60例健康体检者为健康组。比较四组病人外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量(荧光定量PCR法);采用Pearson相关分析法探究PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量与糖脂代谢空腹血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及肾功能指标血尿素氮、血肌酐、预估肾小球滤过率(eGFR)、尿微量白蛋白/尿肌酐(UACR)、24 h尿蛋白排泄率(UAER)相关性,采用多因素logistic回归分析探究DN发生影响因素,绘制ROC曲线分析PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量对DN诊断价值。结果CDN组、EDN组、非DN组、健康组外周血PINK1 mRNA表达量分别为0.31±0.17、0.44±0.20、0.69±0.35、0.73±0.34,Parkin蛋白mRNA分别为0.51±0.12、0.62±0.18、0.79±0.28、0.98±0.35,OPTNmRNA分别为0.05±0.01、0.10±0.03、0.14±0.05、0.18±0.07,四组病人外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量差异有统计学意义(P<0.05),均表现为CDN组<EDN组<非DN组<健康组。T2DM病人外周血PINK1、Parkin蛋白表达量均与空腹血糖、HbA1c、血尿素氮、血肌酐、UACR、UAER呈负相关(P<0.05),与eGFR呈正相关(P<0.05);OPTN与血尿素氮、血肌酐、UACR、UAER呈负相关(P<0.05),与eGFR呈正相关(P<0.05)。糖尿病病程、HbA1c、UACR、UAER是DN的独立危险因素(P<0.05),PINK1、Parkin蛋白、OPTN为其保护因素(P<0.05)。外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量诊断DN的ROC曲线下面积分别为0.709、0.754、0.839。结论T2DM病人外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量均下调,且随着病人肾损伤程度增加而降低,检测外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量对DN有一定诊断价值。