多维液相色谱 bottom-up top-down 阵列式 完整蛋白质 蛋白质分离

蛋白质组学出现之后,多维高效液相色谱（multidimensional HPLC,MD-HPLC）系统以其快速、高效、自动化程度高以及容易与质谱等其他技术联用等优势而成为蛋白质组学相关分析技术中研究应用的热点。本文主要以本实验室在蛋白质组学研究中的技术进展为主线,介绍了多维高效液相色谱技术的发展,包括经典的“bottom-up”技术和“top-down”式的多维高效液相色谱技术路线,以及为了提高系统的分离通量而自行设计搭建的阵列式多维高效液相色谱平台,这些技术路线在蛋白质组学研究中有着极大的潜在应用价值。

蛋白质分离器中的不同臭氧浓度对工厂化养殖净水效果的试验

The water treatment effect of a protein skimmer with different ozone concentrations for recirculation system of industrial fish farming was studied in this paper.Foam separation principle and ammonia nitrogen removing theory of the protein skimmer was described.A protein skimmer with a discharge of 50 m3·h-1 was designed.The skimmer was used in a recirculation system,and relative water quality parameters: protein,ammonia nitrogen,nitrite,nitrate,organic nitrogen,suspended solid,dissolved oxygen,were tested.The results showed that the egesta of the fish reared and the feedstuff residual could be removed efficiently.The removal efficiency of ammonia nitrogen and protein in the recirculation system was very high by entering ozone into the protein skimmer.The removal rate of protein,ammonia nitrogen,nitrite,nitrate,organic nitrogen,suspended solid were various along with the different ozone concentrations.And the dissolved oxygen was greatly increased.

蛋白质分离玻璃微流控芯片的制作方法

对湿法刻蚀和键合两个芯片制作关键步骤进行了研究和优化.首先比较了两种刻蚀配方的效果,并对刻蚀时间和刻蚀过程中的振荡方向等条件进行了考察,对键合预处理方法做了进一步改进.通过对常温键合和高温键合方法比较,证明高温键合才能保证芯片的使用寿命.最后将所制得的芯片成功地应用于非变性蛋白质的二维芯片电泳分离.实验结果表明,通过对芯片制作方法的改进,不仅获得了良好的蛋白分离效果,而且芯片制作方法更为简便、成本低、制作成功率提高.

大孔硅胶反相色谱填料的高温溶剂法合成及其在蛋白质分离上的应用

报道利用高温溶剂法在Ｓｉｎｏｐａｋ－Ｓ大孔硅胶上键合十八烷基，得到可用于蛋白质分离的高效反相色谱填料，合成时间缩短为３～５ｈ。用苯、萘、菲及苯胺评价了该反相柱，其理论塔板数达每米３到５万，能有效地用于蛋白质和多肽混合物的分离。

微流控芯片毛细管电泳在蛋白质分离分析中的应用研究进展

重点介绍了近年来国内外在微流控芯片毛细管电泳法用于蛋白质分离分析方面的研究进展。按照分离模式的不同,综述了各种应用于蛋白质分离的微流控芯片毛细管电泳系统,讨论了抑制芯片中的蛋白吸附的各种方法,并展望了芯片毛细管电泳系统在蛋白质分离领域的发展前景。引用文献47篇。

径向电场调制毛细管电泳法用于蛋白质分离

利用自制的双向电场控制毛细管电泳新系统， 考察了蛋白质的分离情况． 结果发现， 在低ｐＨ 值下， 通过施加径向电场， 不仅可改变电渗流的大小和方向， 而且能抑制蛋白质的吸附， 进而实现对蛋白质分离效率和分离速度的调控． 研究结果表明， 可通过物理化学方法实现毛细管电泳的动态或随机调控，

再生纤维素纳米纤维膜的制备及其蛋白质分离性能

为将纳米纤维膜应用于蛋白质分离处理,用静电纺丝和化学改性方法制备聚丙烯腈/再生纤维素(PAN/RC)复合纳米纤维膜,通过扫描电镜、红外光谱、比表面积及孔径分析等对制备的复合纳米纤维膜进行了表征,并将制备的再生纤维素复合纳米纤维膜作为分离层,构建膜分离系统并分离纯化血清白蛋白,通过调节操作压力和过滤时间等影响因素,确定其分离纯化过程的最佳条件。研究结果表明:在操作压力为0.10 MPa、过滤时间为1.5 h条件下,再生纤维素复合纳米纤维膜对蛋白质的截留率达到80.04%,膜通量达到1.85 L/(m2·min),与商用聚醚砜超滤膜相比,在截留率差异不大的情况下,膜通量有了数倍的提升;同时再生纤维素复合纳米纤维膜具有优异的重复使用能力,并在使用的过程中保持良好的纳米纤维形态结构。

纳米材料在蛋白质分离中的应用

蛋白质的分离技术不仅在药物检测和制药工程中具有重要意义,而且还是生化工程和蛋白质分析的一个研究热点.纳米材料具有许多与众不同的特性,广泛应用于化工、生物、医药、航天等多个领域,被认为是21世纪最有前途的材料.本文作者从非金属氧化物纳米材料、非金属单质纳米材料、金属氧化物纳米材料、金属单质纳米材料、纳米聚合物、纳米复合材料等方面综述了纳米材料在蛋白质分离方面的应用现状,总结了其在蛋白质分离中的优缺点,并就其在蛋白质固定和分离领域的应用前景进行了展望.

强阳离子交换树脂在蛋白质分离纯化中的应用

为了进一步考察流动相中盐种类、体积流量及有机溶剂等对蛋白质保留的影响,采用新的化学方法将3.0μm无孔单分散亲水性交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂改性为一种新型的强阳离子交换色谱填料;实验分析了该填料对标准蛋白的分离性能,有机溶剂、流动相盐种类和体积流量等对蛋白质保留的影响.实验结果表明:当体积流量为3mL/min时,在1.5min线性梯度时间内可快速分离四种标准蛋白质,且蛋白质的保留符合阳离子交换色谱规律.该填料的动力学吸附容量为7.13mg/mL,将其应用于快速纯化鸡蛋清中的溶菌酶和猪心中细胞色素-C,可取得较好的效果.

RPLC-SDS-PAGE整体蛋白质分离与纳升毛细管液相色谱-串联质谱联用技术的研究及应用

采用RPLC-SDS-PAGE与纳升毛细管液相色谱-串联质谱联用技术对国际人类蛋白质组织(HUPO)提供的法国人肝脏蛋白质组表达谱的构建及其理化性质的统计分析,鉴定了2552条肽段,归结于402种蛋白质和240个蛋白质簇。蛋白质的pI分布范围为:4.29～11.57,分子量范围为:8,593～3,816,218Da,其中大于100kDa的蛋白质占到所鉴定蛋白质的10%,二者皆高于两维凝胶电泳的等电点和分子量范围(一般等电点3～10;分子量10～100kDa)。另外,蛋白质组中不同蛋白质的疏水性分布显示大部分蛋白质为可溶性蛋白质,其中疏水性蛋白质占15%(GRAVY>0的蛋白质)。实验结果表明该技术路线兼顾了反相色谱分离度高和SAS-PAGE兼容性好的优点,可用于复杂组织或细胞中蛋白质组表达谱的构建或比较蛋白质组的研究,为蛋白质组学的方法学研究奠定了基础。

无胶筛分毛细管电泳在蛋白质分离中的应用

目的 :运用高效毛细管电泳 (HPCE)分离 6种蛋白质。方法 :以线性高分子聚合物聚乙二醇 (PEG2 0 0 0 0 )作为筛分介质 ,15 0mmol/LTris 10 0mmol/LCHES(pH8.7)作为运行缓冲液 ,运行电压 2 0kV。结果 :磷酸化酶B、牛血清白蛋白、肌动蛋白、碳酸酐酶、烟草花叶病毒外壳蛋白和胰蛋白酶抑制剂达到基线分离。结论 :高效毛细管电泳分离生物大分子具有快速。

一种新型的蛋白质分离技术——反胶团萃取

本文综述了反胶团特点、萃取蛋白质的原理、方法及应用。

新型磁性分子印迹纳米颗粒用于蛋白质分离

由于具有构效预定性、特异识别性、广泛实用性三大特性，分子印迹技术在分析化学中发挥着越来越大的作用。磁性纳米颗粒在外加磁场下能迅速地定位、分离，在生物医学、磁分离等诸多领域受到广泛关注。将分子印迹技术与磁性纳米颗粒结合，制备具有生物分子识别能力的磁性分子印迹复合纳米颗粒，在生化、医学领域具有非常广阔的应用前景。

超滤技术在蛋白质分离纯化中的应用研究

超滤技术是一种相对比较实用的膜分离的相关技术,并且在生物工业的制药领域中对于去除发酵液汇总的内毒素十分有效,能够高效的进行有关蛋白质溶液的浓缩、脱醇以及脱盐工序。本文在分别介绍超滤技术以及蛋白质分离纯化研究过程的前提下,深入的分析探究了超滤技术在蛋白质分离纯化中的具体应用。

聚砜中空纤维膜接口的改进及其在二维毛细管电泳蛋白质分离平台构建中的应用

介绍了一种在自制的聚砜中空纤维膜基础上改进接口的连接方法,并将其用于构建二维毛细管电泳蛋白质分离技术平台。经改进的中空纤维膜接口具有死体积小、传质效率高、分析速度快等优点,是目前多维毛细管电泳较为理想的接口。本文以细胞色素C为标样对二维毛细管等电聚焦和毛细管区带电泳的分离性能进行了考察,同时对肺癌细胞的分泌蛋白进行了分离分析。实验结果表明:与一维系统分离结果比较二维毛细管电泳在分辨率和峰容量方面都有较大的提高。

高效液相色谱在多肽、蛋白质分离纯化中的应用

高效液相色谱(HPLC)具有分析速度快、分离效能高,检测灵敏度高,样品适用范围广等优点,因此在药学研究和生物医学测定中,都得到了广泛的应用。HPLC法分离、纯化和鉴定多肽和蛋白质类物质是一门新技术。

用于蛋白质分离的大孔硅胶烷基键合固定相的制备

采用大孔硅胶和一氯硅烷制备了几种用于蛋白质分离的大孔硅胶短链烷基键合固定相。

模板法制备大孔硅胶微球及其在高效液相色谱蛋白质分离中的应用

以弱阳离子交换聚合物微球(WCX)为模板、N-三甲氧基硅基丙基-N,N,N-三甲基氯化铵(TMSPTMA)为结构导向剂、四乙氧基硅烷(TEOS)为硅胶前驱体,在三乙醇胺弱碱催化作用下,水解缩合形成有机聚合物与二氧化硅复合微球,将此复合微球煅烧后得到大孔二氧化硅微球。探索了不同反应条件对二氧化硅微球的形貌、表面结构和分散性的影响;当TMSPTMA、TEOS与三乙醇胺的体积比为1∶2∶2时可以得到孔径在50~150 nm之间、粒径在2μm左右的硅胶微球。对所制备的大孔硅胶微球表面进行C18(十八烷基二甲基氯硅烷)键合修饰,然后将键合的填料装填到50 mm×4.6 mm的色谱柱中,考察了其对常见的几种标准蛋白质和市售大豆分离蛋白质的分离效果,结果显示这种填料在高效液相色谱蛋白质分离中具有一定的潜力。

APBA阳离子交换整体柱的制备及在蛋白质分离复性中的应用

整体柱是近年来发展迅速的一种具有传质速率快、稳定性好、制备简单等多项优点的色谱固定相，离子交换柱是生物大分子色谱分离中很重要的一类固定相。本文首先以热引发原位聚合法在不锈钢柱中合成了以甲基丙烯酸（MAA）、乙二醇二甲基丙烯酸酯（EGDMA）为基质的有机聚合物整体柱，