荧光定量PCR法鉴别蛤蚧定喘丸中醋鳖甲

目的建立蛤蚧定喘丸中醋鳖甲的DNA分子鉴定方法。方法根据鳖、佛罗里达鳖线粒体基因序列的差异设计特异性引物TS和AF,进行荧光定量PCR和方法学考察,然后对市售蛤蚧定喘丸中醋鳖甲进行鉴定。结果含有鳖、佛罗里达鳖的DNA样品仅与相应引物扩增后可检测到荧光信号,有特定温度单一峰,T_(m)分别为77.45、79.72℃。该方法的检测限为10 copies/μL,重复性较高(CV<1%)。10批蛤蚧定喘丸中有9批仅检出鳖DNA,被鉴定为正品;1批同时检出鳖DNA和佛罗里达鳖DNA,被鉴定为掺伪品。结论本研究所建立的方法可快速、可靠地鉴定蛤蚧定喘丸中醋鳖甲炮制品成分,有助于监管含醋鳖甲成方制剂的质量,并为成方制剂中动物药成分的专属性鉴定研究提供新途径。

超高效液相色谱-质谱法鉴别蛤蚧定喘丸中的龟鳖甲类成分

目的建立蛤蚧定喘丸中龟鳖类成分的检测方法。方法借鉴动物类药材特征肽鉴别方法,采用胰蛋白酶对不同批次的蛤蚧定喘丸样品进行酶解,利用超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS/MS)法,选择龟鳖类特征分子离子峰作为检测离子对,ESI+模式,进行多反应监测模式检测。结果8家生产企业共51批蛤蚧定喘丸样品中均检出鳖甲成分,未检出其他龟鳖源成分。结论该方法专属性较好,可用于蛤蚧定喘丸中龟鳖类成分掺伪检测。

蛤蚧定喘胶囊与吸入用乙酰半胱氨酸溶液治疗COPD患者的效果

目的:探讨蛤蚧定喘胶囊与吸入用乙酰半胱氨酸溶液治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者的临床效果。方法:选取2022年2月—2024年2月黔东南苗族侗族自治州人民医院收治的94例COPD患者作为研究对象,采用随机数表法将其分为两组,各47例。所有患者均予以常规支持性治疗,对照组采用吸入用乙酰半胱氨酸溶液治疗,观察组在对照组基础上增用蛤蚧定喘胶囊治疗。比较两组临床疗效、用力肺活量(FVC)、第1秒用力呼气容积(FEV1)、慢阻肺评估测试(CAT)评分、白细胞(WBC)计数、C反应蛋白(CRP)、不良反应情况。结果:观察组总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组FVC、FEV1水平高于对照组,CAT评分、WBC计数、CRP低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在COPD患者应用乙酰半胱氨酸治疗过程中,给予蛤蚧定喘胶囊可提升整体疗效,改善患者的肺部功能,降低炎症因子指标,且用药过程的安全性较好。

显微技术在蛤蚧定喘丸质量控制中的应用

探讨显微技术在蛤蚧定喘丸质量控制中的应用。采用显微鉴别方法对蛤蚧定喘丸执行标准规定的显微特征进行研究,并新建未规定检验项目的其他8味药材的显微鉴别方法,同时建立处方中麦冬混淆品山麦冬的显微检查方法。最终筛选出了处方中瓜蒌子、紫菀、醋鳖甲、甘草、麦冬、炒紫苏子、炒苦杏仁、石膏等8味药材中镜检率较高的粉末显微特征,作为蛤蚧定喘丸的显微鉴别依据;研究并建立了中成药中麦冬和山麦冬的显微鉴别方法;12批样品中均能检出相应药材的显微特征,均未发现山麦冬的显微特征,表明样品质量在显微鉴别结果上无明显差异。本研究建立的方法简便、快速、直观、经济,可更加全面地控制蛤蚧定喘丸的质量,提示传统的显微技术能够在指标成分缺乏或含量过低的中药的鉴别方面发挥重要作用。

温氏奔豚汤加味联合参龙蛤蚧胶囊在脾肾阳虚型水肿患者治疗中的应用效果观察

目的探究温氏奔豚汤加味联合参龙蛤蚧胶囊用于脾肾阳虚型水肿患者的治疗效果。方法选取2020年7月~2021年6月在梧州市中医医院治疗的脾肾阳虚型水肿患者60例,按照随机数字表法分为对照组和观察组,各30例。对照组采用呋塞米等西药常规治疗,观察组在对照组的基础上采用温氏奔豚汤加味联合参龙蛤蚧胶囊治疗。比较两组患者相关临床指标、血清指标情况及疗效。结果治疗后,观察组水肿改善程度、水肿消退时间等临床指标、血清相关指标的结果均优于对照组(P<0.05)。观察组总有效率高于对照组(P<0.05)。结论采用温氏奔豚汤加味联合参龙蛤蚧胶囊治疗脾肾阳虚型水肿患者,能改善患者的水肿症状,调节血清指标水平,进而提高治疗效果。

金龙蛤蚧平喘加味方对COPD稳定期合并骨质疏松患者骨密度和骨代谢生化标志物的影响

目的:观察金龙蛤蚧平喘加味方对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)稳定期肺肾气虚证合并骨质疏松患者骨密度(bone mineral density,BMD)及骨代谢生化标志物的影响。方法:选取2022年9月至2023年8月安徽中医药大学附属滁州中西医结合医院呼吸科门诊及病房收治的COPD稳定期肺肾气虚证合并OP患者58例,根据随机数字表法分为对照组和联合组,每组29例。对照组给予常规西药对症治疗,联合组在对照组治疗的基础上联合金龙蛤蚧平喘加味方治疗。观察两组患者治疗前后肺功能[1秒用力呼气容积(forced expiratory volume in one second,FEV1)用力肺活量(forced vital capacity,FVC)、FEV1/FVC]、COPD评估测试问卷(COPD assessment test,CAT)评分、症状积分、BMD及骨代谢生化标志物[总碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨钙素(osteocalcin,OC)及Ⅰ型胶原C端肽(C-terminal peptide of type 1 collagen,CTX-1)]等指标变化情况。结果:联合组治疗后腰椎BMD高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),股骨颈BMD高于对照组,差异无统计学意义(P>0.05);联合组治疗后ALP、OC、CTX-1水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);联合组治疗后腰背疼痛、腰膝酸软、下肢抽筋症状积分均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);联合组治疗后FEV1高于对照组,CAT评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:金龙蛤蚧平喘加味方能改善COPD稳定期肺肾气虚证合并骨质疏松患者的骨密度、肺功能,降低骨代谢生化标志物ALP、OC、CTX-1水平,减轻患者腰背疼痛、腰膝酸软、下肢抽筋症状。

蛤蚧净制与火制探析

蛤蚧的净制,古人有去眼、去口、去头、去足、去鳞的经验,亦有头足全用或仅用蛤尾者。由于古人对于蛤蚧的用药部位并没有形成统一的观点,仅宜保留“去眼”的经验。火炙法的目的一是易于粉碎,二是去除腥气,包括酒炙法、酥炙法、醋炙法、皂角水炙法等,以酥炙法为最优。

广西蛤蚧、泰国蛤蚧及其混伪品海蛤蚧(红瘰疣螈)的生药鉴定

对中药商品蛤蚧（广西蛤蚧，泰国蛤蚧ＣｅｋｋｏｇｅｃｋｏＬ）及其混伪品海蛤蚧（红瘰疣螈ＴｙｌｏｔｒｉｒｏｎｖｅｒｕｃｏｓｕｓＡｎｄｅｒｓｏｎ）进行了药材性状、药材鳞片显微特征、化学定性反应、紫外光谱、ＨＰＬＣ高效液相色谱的鉴别研究。实验结果，海蛤蚧与广西蛤蚧、泰国蛤蚧比较有明显区别，不应混用；广西蛤蚧与泰国蛤蚧的比较差异较小；为蛤蚧的准确鉴定和质量评价提供了鉴别依据。

UPLC-TOF结合多元数学统计方法建立五加参蛤蚧精中蛤蚧的鉴别方法

目的建立五加参蛤蚧精中蛤蚧的定性鉴别方法,为判定五加参蛤蚧精中是否投料正品蛤蚧提供参考。方法取样品至1.5 mL离心管中,离心(12000 r·min^(-1),5 min),取上清液,即得;色谱分析采用Waters BEH C_(18)色谱柱(2.1×50 mm,1.7μm),柱温35℃,流速为0.5 mL·min^(-1),流动相为0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱。质谱测定采用电喷雾离子源(ESI)的飞行时间质谱(TOF/MS);正负离子模式下采集MSE数据;质量扫描范围m/z100~1200。结果分别对8个不同厂家的五加参蛤蚧精中的蛤蚧定性离子用多元数学统计方法进行比较、拟合,最终决定对样品采取未酶解的前处理方式,采集了ESI(正和负)的MSE数据,将162.1136、482.3709、508.3879这3个正离子特征离子和514.2794、353.2299、407.2765这3个负离子特征离子做为蛤蚧鉴别的6个特征离子。8个厂家中有一个厂家未检出这6个特征离子,怀疑为蛤蚧伪品投料。结论所建立的蛤蚧鉴别方法可作为规范五加参蛤蚧精中蛤蚧真伪判定的质量控制手段。

蛤蚧地理变异的初步研究

历代本草和国家《药典》都没有蛤蚧品种分化的记载。动物分类上一直把蛤蚧的体色变异看成是居住环境所致。我们在药用动物资源调查中发现蛤蚧有明显的地理变异。产自我国广东、广西和云南南部及越南、缅甸北部的蛤蚧体型较细，体色较深，色斑较杂，称之为黑蛤蚧；而东南亚及南亚大部分地区出产的蛤蚧则体型粗壮，体重较大，体色较浅，具有醒目的红色斑点，故称之为红蛤蚧或泰国蛤蚧。二者的地理分布不重叠，市场售价差异甚大。

酥制蛤蚧炮制工艺及质量标准研究

目的:以酥制蛤蚧的厂家炮制工艺为基础,结合《中国药典》2020年版四部炮制通则的要求明确具体的相关工艺参数,优化炮制工艺;遵循药材和饮片检定通则,制订质量标准。方法:收集样品,确定考察因素,将酥制蛤蚧的工艺进行优化。以《中国药典》2020年版一部蛤蚧的质量标准为基础,通过方法学考察,制订性状、鉴别和浸出物的质量标准和限度;增加聚合酶链式反应法、重金属及有害元素、黄曲霉毒素三项检验项目。结果与结论:经过生产企业验证,酥制蛤蚧的炮制工艺可行,更加规范化;新制订的质量标准能够有效控制酥制蛤蚧饮片的质量。

蛤蚧定喘胶囊联合孟鲁司特对支气管哮喘患者外周血IL-25、EOS和IL-35水平的影响

目的研究蛤蚧定喘胶囊联合孟鲁司特对支气管哮喘患者外周血白介素-25(IL-25)、嗜酸性粒细胞(EOS)和白细胞介素-35(IL-35)水平的影响。方法选择2019年1月~2021年12月某院收治的126例支气管哮喘患者,随机分为两组。对照组单用孟鲁司特治疗,观察组采用蛤蚧定喘胶囊联合孟鲁司特治疗。检测两组的第一秒用力呼气量占所有呼气量的比值(FEV_(1)/FVC)、外周血IL-25水平、最大呼气中期流速(MMF)、EOS、呼气峰值流速(PEF)和IL-35水平。结果观察组的咳嗽消失天数、喘息消失天数、肺内哮鸣音消失天数和气短消失天数更短(P<0.05);治疗前,两组的FEV_(1)/FVC、MMF以及PEF差异无统计学意义(P>0.05),治疗后,两组的PEF、FEV_(1)/FVC以及MMF均明显升高(P<0.05),且观察组更加明显(P<0.05);治疗前,两组的外周血IL-25、EOS和IL-35水平差异无统计学意义(P>0.05),治疗后,两组的外周血IL-25、EOS水平均明显降低(P<0.05),外周血IL-35水平均明显升高(P<0.05),且观察组的外周血IL-25、EOS水平均明显低于对照组(P<0.05),外周血IL-35水平明显高于对照组(P<0.05)。结论蛤蚧定喘胶囊联合孟鲁司特可通过调节支气管哮喘患者的外周血IL-25、EOS和IL-35水平,发挥显著的治疗效果。

广西蛤蚧、泰国蛤蚧及其伪品海蛤蚧(红瘰疣螈)的鉴别

蛤蚧为壁虎科动物蛤蚧(Gekko geekoLinnaens)的干燥体。蛤蚧主要分布区域是北回归线附近的亚热带石灰岩地区,如广西的西南部,广东、云南、贵州、江西有少量分布。在国外,越南、泰国、老挝均有分布。市售品中有广西蛤蚧,泰国蛤蚧及海蛤蚧(红瘰疣螈),前二者外形相似,易混淆,且价格相差甚远;后者为蝾螈科动物红瘰疣螈(Tylototriton Verrucous Anderson)除去内脏或未除去内脏的干燥全体。蛤蚧为我国名贵中药。

蛤蚧疗肺片质量控制标准提升研究

目的对蛤蚧疗肺片的原有质量控制标准进行提升研究,以保证临床用药的安全性与稳定性。方法在原有蛤蚧药材显微鉴别的基础上,增加白及、百部、川贝母3味药材的显微鉴别方法;在原有薄层色谱法(TLC)定性鉴别的基础上,增加枇杷叶、桔梗2味药材的TLC鉴别方法;增加蛤蚧疗肺片的醇浸出物含量标准,采用热浸法测定,95%乙醇作溶剂;增加高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)同时测定方中黄芪药材有效成分黄芪甲苷和刺五加浸膏有效成分紫丁香苷的含量。结果显微鉴别中,白及药材可在镜下观察到草酸钙针晶束存在于类圆形黏液细胞中或随处散在的显微特征;百部药材可观察到木薄壁细胞类长方形、壁厚等的显微特征;川贝母药材可观察到淀粉粒广卵形或贝壳形等的显微特征。TLC定性鉴别中,枇杷叶和桔梗分别在各自对照药材色谱相应的位置上显示相同颜色的清晰斑点,斑点分离效果好,且阴性无干扰。以蛤蚧疗肺片干燥品计算,含醇溶性浸出物不得少于16.5%。HPLC-ELSD色谱图可见,黄芪甲苷和紫丁香苷对照品峰均可达基线分离,且峰形良好,阴性对照色谱在对照品相同位置上未见干扰峰。黄芪甲苷和紫丁香苷分别在10.6~53.0、9.3~46.5μg/mL范围内,与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为98.49%(RSD=0.78%)和97.92%(RSD=1.05%)。以蛤蚧疗肺片干燥品计算,每克中含紫丁香苷不得少于84.8μg,含黄芪甲苷不得少于74.4μg。结论该研究所建立的蛤蚧疗肺片质量控制提升标准方法简便,重复性好,准确度高,专属性强,可用于蛤蚧疗肺片的质量控制。

黑点蛤蚧与红点蛤蚧微量元素及氨基酸含量的比较

目的：寻求来自广西的黑点蛤蚧与来自越南南部的红点蛤蚧在药效差别上的药化基础。方法：利用原子吸收光谱仪和氨基酸自动分析仪，检测这两类蛤蚧的4种微量元素和17种氨基酸含量。结果：红点蛤蚧的Cu、Fe及人体必需氨基酸的含量比黑点蛤蚧的高许多。结论：红点蛤蚧的营养滋补作用比黑点蛤蚧强。

黑点蛤蚧与红点蛤蚧的本草考证

黑点蛤蚧自古以来为我国蛤蚧正品,并被国家药典收载。红点蛤蚧自清代中后期零星进入我国,20世纪80年代后,由于黑点蛤蚧日趋濒危,红点蛤蚧迅速成为蛤蚧市场主角,但业内对其贬褒各半,也一直没有被药典收载。红点蛤蚧是否能真正替代黑点蛤蚧在临床上的应用,亟需从化学成分和药理予以对比分析。

基于亲缘关系的红蛤蚧与黑蛤蚧药效再评估

目的基于药用亲缘学原理,对红、黑蛤蚧药效情况进行再评估。方法通过Mega软件,采用MP法构建系统发育树,基于系统发育树判断红、黑蛤蚧之间的亲缘关系,并依此探讨红、黑蛤蚧及药效之间的关系。结果红、黑蛤蚧在系统树上相互嵌合在一起,不能各自形成独立分支(单系),来自不同产地的红、黑蛤蚧分别构成了4个独立支系,这与红、黑蛤蚧截然可分的概念相悖。结论红蛤蚧可能具有和黑蛤蚧相似的药效,不同地区的红、黑蛤蚧药效可能存在差异。该研究旨在为红、黑蛤蚧的药效及化学成分研究提供前瞻性的建议,即开展相关研究应基于亲缘关系,分别对不同产地红、黑蛤蚧样品进行分析。

无冬眠饲养对灰斑蛤蚧和红斑蛤蚧生长发育的影响

为了研究无冬眠饲养对灰斑蛤蚧和红斑蛤蚧生长发育的影响,在蛤蚧冬眠期内,人工保持其环境温度为28～30℃,相对湿度为65%～85%,并提供其所需的食物,测量3个月冬眠期内灰斑蛤蚧和红斑蛤蚧的体重和形态学指标变化。结果表明:改变蛤蚧冬眠习性可以维持蛤蚧正常生长发育,不仅能缩短饲养时间,而且还能提高其成活率,从而达到高效养殖蛤蚧的目的,并且红斑蛤蚧比灰斑蛤蚧生长快。

蛤蚧补肾丸(胶囊)补肾壮阳作用的实验研究

目的 :研究蛤蚧补肾丸(胶囊)的补肾壮阳作用。方法 :采用去势大鼠制作肾虚模型 ,观察蛤蚧补肾丸(胶囊)补肾壮阳作用 ;观察蛤蚧补肾丸(胶囊)对氢化可的松诱发阳虚小鼠的保护作用及对大鼠交配能力的影响。结果 :蛤蚧补肾丸(胶囊)可提高肾虚(去势大鼠)包皮腺的脏器指数 ,并可延长肾虚大鼠阴茎勃起的持续时间 ;蛤蚧补肾丸(胶囊)对正常大鼠的交配能力有一定的提高作用 ,对正常大鼠提肛肌的脏器指数有明显的提高作用,同时使血清睾丸酮的水平也比正常对照组提高17.99 % -45.92% ,并对于氢化可的松造成小鼠阳虚症状表现体温、自主活动和耐寒能力的下降以及生殖器官精囊腺 +前列腺、提肛肌、包皮腺的脏器指数的下降 ,均有一定的保护作用。结论 :蛤蚧补肾丸(胶囊)具有补肾壮阳作用。

人参、蛤蚧及其复方对果蝇性活力的定量实验研究

本文以雄性黑腹果蝇的交配潜伏期、交配时间作为果蝇性活力定量测定参数,对人参、蛤蚧及其复方均能缩短果蝇交配潜伏期,延长交配时间,经统计学处理均有显著差异p<0.01或P<0.05。提示人参、蛤蚧及其复方在纠正男性性功能低下方面具有实用价值。