蜜环菌人工菌棒基质碳氮比对乌天麻产量及营养品质的影响

目的分析蜜环菌人工菌棒基质碳氮比对乌天麻产量及基本营养成分含量的影响,并对乌天麻氨基酸品质进行评价。方法通过大棚内随机区组实验,测定不同种植模式下乌天麻的基本营养成分含量,对其进行单因素方差分析和多重比较,通过氨基酸评分法对乌天麻中氨基酸营养价值进行评价。结果蜜环菌人工菌棒基质碳氮比对乌天麻的产量、基本营养成分含量及氨基酸的营养品质均有显著影响;蜜环菌人工菌棒基质碳氮比为75.94时种植的乌天麻,其各项营养指标接近对照种植的乌天麻的各项营养指标,显著大于蜜环菌人工菌棒基质碳氮比为60.69、126.39时种植的乌天麻的各项营养指标。蜜环菌人工菌棒基质碳氮比为75.94时种植的乌天麻,其必需氨基酸含量与总氨基酸含量的比值为37.03%,接近40%;必需氨基酸含量与非必需氨基酸含量的比值为58.79%,接近60%;必需氨基酸的氨基酸比值、必需氨基酸的比值系数分、必需氨基酸比值系数与联合国粮食及农业组织/世界卫生组织提出的氨基酸理想模式较接近。结论利用蜜环菌人工菌棒种植乌天麻可以获得基本营养成分含量高、氨基酸丰富、必需氨基酸的组成比例相对合理、符合人体吸收利用需求、具有较高营养价值的乌天麻。

蜜环菌菌种选育及多糖药理活性的研究进展

蜜环菌是我国珍稀食药用菌,也是天麻生长发育必不可少的伴生菌,蜜环菌优良菌种的培育关系到天麻产业的健康可持续发展。综述蜜环菌育种研究进展,指出其优良菌种“易退化、难复壮”问题一直困扰着生产,解决这一问题须结合生产实践进行大量研究,创制优异种质资源,加强种源管理和维护;综述蜜环菌重要生物活性物质蜜环菌多糖在降血糖、抗氧化、抗衰老、免疫增强、机体保护和其他药理活性方面的研究进展,展望应用前景。

蜜环菌发酵玉米醇溶蛋白中蛋白酶学性质研究

为探究大型食药用真菌胞外蛋白酶的相关特性,从蜜环菌发酵的玉米醇溶蛋白产物中分离、纯化蛋白酶,通过饱和硫酸铵沉淀粗酶液、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子层析柱及Sephadex G-50层析柱纯化,得到电泳纯的蛋白酶。结果表明,该蛋白酶的分子质量为18.4 ku;最适温度为60℃,在40~60℃具有良好稳定性;pH值为8时酶活力最高,pH值稳定性范围为6~8;Mn2+对该酶具有明显的促进作用,乙二胺四乙酸(EDTA)对中性蛋白酶有明显的抑制作用;米氏常数Km为3.786 mg/mL。研究结果为大型食药用真菌来源蛋白酶的研究与应用提供理论依据,为大型真菌源酶制剂的研发提出新思路。

静磁场对蜜环菌发酵产物结构和理化特性的影响

采用蜜环菌普通发酵及静磁场辅助发酵玉米醇溶蛋白,探究发酵期间静磁场对玉米醇溶蛋白发酵产物结构和理化特性的影响。傅里叶变换红外光谱分析发现静磁场处理改变了发酵产物蛋白的二级结构;紫外吸收光谱和内源荧光光谱分析表明,经静磁场处理后产物蛋白分子结构舒展、基团暴露;扫描电子显微镜结果显示静磁场处理后产物蛋白表面更加粗糙,出现孔洞,比表面积增大;热力学性质分析结果显示静磁场处理后产物蛋白的变性温度明显升高,且静磁场处理使粒径减小,Zeta电位绝对值增大,游离巯基含量呈现上升趋势,二硫键含量呈现下降趋势;此外,静磁场辅助发酵明显改变了产物蛋白的理化特性,持水性、持油性、乳化性、起泡性和泡沫稳定性均明显升高,在第7天时达到最大,分别为3.86 g/g、4.22 g/g、26.83 m^(2)/g、37.67%和58.12%,乳化稳定性明显降低,在第7天时最小为34.10%。综上,静磁场辅助蜜环菌发酵玉米醇溶蛋白能够改变产物蛋白的结构,并有效改善其理化特性,进一步提高玉米醇溶蛋白的附加值和利用率。

蜜环菌Am-07-22发酵对玉米赤霉烯酮降解效果影响及机理初探

本研究以蜜环菌Am-07-22为试验菌株,采用真菌生物发酵的方式降解玉米赤霉烯酮(ZEN),对蜜环菌降解ZEN的降解效果进行研究,包括菌株对不同浓度ZEN的降解效果以及不同培养时间、培养温度、初始pH和接种量对菌株降解ZEN的影响。然后对降解机理进行初探,分析了菌丝体、发酵上清液、细胞内容物对ZEN的降解作用,并研究了不同发酵时间、pH、金属离子对发酵上清液降解ZEN的影响,以及降解效果与菌株产漆酶活力的相关性分析。结果表明:蜜环菌Am-07-22对ZEN的降解效果良好,当ZEN浓度为5μg/mL时,最适降解条件为培养时间8 d,培养温度27℃,初始pH7.0,接种量10%,此时对ZEN的降解率为78.72%。菌丝体、发酵上清液和细胞内容物对ZEN的降解率分别为47.42%、37.05%和13.08%,蜜环菌Am-07-22分泌的胞外酶是降解ZEN的主要方式,而且菌体细胞对ZEN也有一定的吸附作用。另外,发酵上清液对ZEN的降解率与漆酶酶活的相关性较高为0.973,且Cu^(2+)对发酵上清液降解ZEN具有最佳的促进作用。

蜜环菌菌株DJ1的分子鉴定、生物学特性及人工培养

为优化蜜环菌的人工培养条件,以蜜环菌菌株DJ1为研究对象,对其进行分子鉴定并通过生物学特性观察,筛选其最佳培养基和培养条件。结果表明,通过ITS序列构建的系统发育树可知,菌株DJ1属于高卢蜜环菌Armillaria gallica。DJ1生长的最优培养条件为PDA培养基+木屑100 g,麸皮5 g,水1 L,pH=6,培养温度23℃。出菇结果表明,在PDA+2%/4%/6%/8%玉米面培养基与木屑培养基中均可得到子实体,其中以添加4%玉米面的培养基出菇效果最好,出菇时间最快;随着玉米面添加量的增加,蜜环菌子实体的出菇率呈先上升后下降的变化趋势。研究结果可为蜜环菌的快速培育和人工驯化提供参考。

基于AHP-熵权法的天麻共生蜜环菌质量评价研究

目的采用层次分析(AHP)-熵权法综合评价天麻共生蜜环菌质量。方法将采集到的6株天麻共生蜜环菌菌株的生理、生长、化学指标作为评价因子,通过AHP-熵权法计算各指标权重系数,构建综合质量评价体系,对蜜环菌菌株进行质量评估,并通过红天麻、杂交天麻伴播试验进行验证。结果质量评价结果显示,胞外木聚糖酶活性、胞外纤维素酶活性、总糖含量权重较大,其中菌株N6、N3排名靠前。不同变型天麻伴播试验显示,菌株N5、N4伴播红天麻效果较好,菌株N6、N3伴播杂交天麻效果较好。结论蜜环菌的胞外木聚糖酶活性、纤维素酶活性和总糖含量等指标与伴播天麻的效果相关性较强。本研究构建的质量评价体系与杂交天麻伴播试验结果基本一致,可为天麻优良共生蜜环菌的筛选提供参考。

蜜环菌菌株M6的液体深层发酵工艺研究

目的:优化蜜环菌菌株M6的发酵工艺及提高其生产效率。方法:以蜜环菌菌株M6为供试菌株,通过摇瓶液体培养,筛选该菌株的最适液体发酵培养基;以摇瓶培养结果为基础,通过多级匀浆制备高活性种子液,进行液体深层发酵,优化发酵条件。结果:筛选出蜜环菌菌株M6最佳液体深层发酵条件为转速150 r/min、接种量5%、溶氧20%及温度28℃,在此条件下使用液体发酵培养基配方1发酵180 h所得蜜环菌菌株M6生物量干重高达18.39 g/L;使用液体发酵培养基2发酵120 h所得蜜环菌菌株M6生物量干重达23.83 g/L。结论:液体培养条件优化后,蜜环菌菌株M6生物量产出较高。本研究促进了蜜环菌菌株M6的快速生产,为应用于天麻种植业提供了技术参考。

蜜环菌对玉米加工副产物中玉米赤霉烯酮降解效果

以蜜环菌Am⁃07⁃22为发酵菌株,以玉米皮和玉米黄粉为主要研究对象,以玉米赤霉烯酮的降解率为指标,考察不同发酵时间、发酵温度、料液比、接种量对玉米皮和玉米黄粉中玉米赤霉烯酮降解率的影响,并研究蜜环菌Am⁃07⁃22对玉米皮和玉米黄粉不同比例混合物的毒素降解效果及产物中蛋白质和多糖的含量变化。结果表明:蜜环菌降解玉米皮中玉米赤霉烯酮的最佳条件为发酵温度27℃、料液比1∶1.5(g/mL)、接种量10%,玉米赤霉烯酮的降解率为93.63%,蜜环菌降解玉米黄粉中玉米赤霉烯酮的最佳条件为发酵温度27℃、料液比1∶2(g/mL)、接种量12.5%,玉米赤霉烯酮的降解率为96.60%。蜜环菌Am⁃07⁃22固态发酵不同质量比的玉米皮、玉米黄粉(1∶1、1∶2、2∶1)中玉米赤霉烯酮的降解率分别为95.93%、96.62%和96.97%,质量比为2∶1的玉米皮、玉米黄粉中蛋白质和多糖含量提高,分别提高91%和52%。蜜环菌Am⁃07⁃22不仅对玉米加工副产物中玉米赤霉烯酮有良好的降解效果,同时提高产物中蛋白质和多糖含量。

基于生物学特性及分子标记的贵州蜜环菌遗传多样性分析

为研究贵州天麻主产区蜜环菌的生物种及其遗传多样性,在贵州天麻主产区采集蜜环菌样本,利用双抗培养基分离菌索或子实体、菌材,定期观察并统计蜜环菌母种及原种的生物学特性;挑取菌索提取总DNA,利用真菌通用引物ITS和延伸因子EF1-α基因扩增rDNA-ITS、rDNA-EF1-α片段并送测序及鉴定;用DNAStar软件进行GC含量分析及多序列比对,用MEGA软件构建进化树。从贵州毕节各县区、黔东南州雷山县等分离到17株蜜环菌,并与生产上普遍用的A9、京234做比较,通过生物学特性初步分析各蜜环菌的形态差异;通过rDNA-ITS、rDNA-EF1-α扩增,得到19株菌株的rDNA-ITS、rDNA-EF1-α完整序列,经GC含量分析、多序列比对、BLAST比对鉴定以及系统发育分析,将19株菌株分为3个种。通过对蜜环菌菌株生物学特性及rDNA-ITS、rDNA-EF1-α序列分析,发现贵州天麻主产区蜜环菌野生资源主要为Armillaria sp.,其次为Armillaria mellea、Armillaria gallica。

不同蒴果密度及萌发菌和蜜环菌配比对天麻零代种生产影响试验

天麻萌发菌和蜜环菌是在天麻种子萌发和生长时为其提供营养来源的共生菌和伴生菌,两者配比不同直接影响到天麻零代种的产量。本试验通过不同蒴果密度及萌发菌和蜜环菌配比,探究对零代种的产量、零代种分级产量占比的影响,结果表明萌发菌与蜜环菌配比比例为1∶3,且天麻蒴果用量为18~24个/m^(2)时,天麻零代种产量最高。

天麻蜜环菌和萌发菌的发现应用现状概述

介绍天麻“两菌”(蜜环菌、萌发菌)分离纯化的历史、重要作用及意义;介绍蜜环菌菌种、萌发菌菌种制备与应用现状,并针对目前“两菌”在生产中存在的问题,提出对策建议。

枝条蜜环菌栽培种液体培养技术

蜜环菌菌种是人工培养进行扩大繁殖和用于生产的纯菌丝体。菌种质量的好坏直接影响天麻、猪苓栽培的成败和产量的高低。总结了枝条蜜环菌形态特征、生长环境要求以及栽培种液体培养操作流程。

基于rDNA-ITS序列的不同来源蜜环菌分类及生物学特性研究

为掌握不同来源的19株蜜环菌的(Armillaria spp.)的分类地位及生物学特性,对蜜环菌的rDNA-ITS进行测序及系统发育树分析,并对菌索分枝数、生物量和总萜的含量进行测定。结果表明,19株蜜环菌中,12株为蜜环菌狭义种(A.mellea),2株为芥黄蜜环菌(A.sinapina),1株为头柄蜜环菌(A.cepistipes),1株为高卢蜜环菌(A.gallica),1株为奥氏蜜环菌(A.ostoyae);19株蜜环菌只有15株在PDA培养基上能形成菌索,其中,菌株MC1、MC8、MC4、MC7和MA2的菌索分枝较多,菌株MA2、MB1和MC7的生物量较大,菌株MC5的总萜含量最高。因此,19株蜜环菌通过rDNA-ITS序列可以区分为不同的种类,根据菌索的生长特征,MA2和MC7是较优良的菌株,而菌株MC5是提取总萜的优良菌株。

5种土壤改良剂对连作天麻和蜜环菌生长及土壤微生物的影响

目的:探究5种不同土壤改良剂对连作天麻和蜜环菌生长及根际微生物群落结构的影响,筛选缓解天麻连作障碍的土壤改良剂。方法:采用随机抽样调查法,统计各处理天麻和蜜环菌的生长情况,利用Illumina MiSeq测序平台,分析各处理土壤微生物真菌群落结构。结果:5种土壤改良剂(A.石灰;B.腐殖酸肥;C.枯草芽孢杆菌剂;D.哈茨木霉菌剂;E.抗重茬菌剂)均能降低母麻腐烂指数9.07%~63.60%,其中改良剂B、C、D和E能够提高天麻产量59.71%~424.83%,降低天麻感病指数34.29%~82.86%。改良剂B和D能促进蜜环菌的健壮程度和菌索粗度,5种改良剂能增加蜜环菌干重4.49%~83.06%,提升蜜环菌侵染指数4.90%~24.82%。5种改良剂对连作天麻生长的改善效果为D>E>C>B>A,促进连作天麻窝穴中蜜环菌生长由强到弱的顺序为D>B>C>A>E。天麻根际微生物研究中,改良剂A和E施用后土壤中真菌多样性增加,改良剂A、B和D可以增加真菌的丰富度,改良剂D和E与天麻正茬的真菌群落结构相似度高,改良剂C和E能降低天麻根际土壤中致病菌的丰富度,5种改良剂对天麻根际土壤真菌群落结构的改善效果为D>E>B>C>A。结论:5种土壤改良剂中,哈茨木霉菌剂对缓解天麻连作障碍效果最佳,其次是抗重茬菌剂,石灰效果最差。

中药材蜜环菌的基原和拉丁学名考证

通过系统整理中药材蜜环菌标准、研究文献、相关书籍,同时依据拉丁学名规则和演变过程,发现其药用标准与研究文献之间基原和拉丁学名的不一致。以拉丁学名,特别是种加词为基础判断,可确认目前药用蜜环菌基原是一致的,仅拉丁学名书面表述不统一,涉及学名命名体系本身的沿革、文献引用和编纂问题。建议基于拉丁学名命名规范,中药材蜜环菌的拉丁学名应与之同步调整,其拉丁名为Armillaria,基原为“蜜环菌”,拉丁学名为Armillaria mellea(Vahl.)P.Kumm.。

蜜环菌菌丝体化学成分的研究——Ⅴ.蜜环菌辛素和蜜环菌壬素的分离与鉴定

从人工液体发酵培养的蜜环菌[Armillaria mellea(Vahl.ex Fr.)Quel.]菌丝体的石油醚提取物中,经硅胶柱层析,低压柱层析和制备性薄层层析分离得到两个新的原伊鲁烷型倍半萜芳香酸酯类化合物。命名为蜜环菌辛素(armillarilin)和蜜环菌壬素(armillarinia),根据光谱(UV,IR,~1HNMR,^(13)CNMR和MS)分析,推定它们的化学结构分别为Ⅰ和Ⅱ。

蜜环菌发酵液及其菌丝体的化学成分研究

蜜环菌(Armillaria mellea)是药用植物天麻(Gastrodia elata)营养生长阶段的共生真菌。为研究蜜环菌的化学成分和生物活性,本实验综合运用MCI树脂、正相硅胶、Sephadex LH-20凝胶及半制备RP-HPLC等色谱分离技术对蜜环菌发酵液及其菌丝体的95%乙醇提取物进行系统分离,得到26个化合物。根据化合物的理化性质和波谱数据,分别鉴定为十四烷酸(1)、α-亚麻酸(2)、油酸(3)、亚油酸(4)、亚油酸乙酯(5)、8(R),11(S)-二羟基-9 Z,12 Z-十八烷二烯酸(6)、2-油酰甘油(7)、1-亚油酸甘油酯(8)、二羟丙基-油酸(9)、亚油酸甲酯(10)、甘油1,3-二亚油酸酯(11)、(5 Z,9 Z)-17-甲基-非十七烯酸-5,9-二酯(12)、(2 S)-α-(9′Z,12′Z,15′Z)-十八碳三烯酸(13)、麦角甾醇(14)、(22 E,24 S)-5α,8α-环二氧-6,22-麦角甾二烯-3β醇(15)、对羟基苄基乙基醚(16)、尿嘧啶(17)、环D-脯氨酸-D-异亮氨酸(18)、环D-脯氨酸-D-亮氨酸(19)、环D-脯氨酸-D-苯丙氨酸(20)、脯氨酸(21)、环D-脯氨酸-L-缬氨酸(22)、环D-脯氨酸-D-缬氨酸(23)、4-(2-羟乙基)-5-甲基噁唑(24)、环丙氨酸-缬氨酸(25)、环丙氨酸-脯氨酸(26)。其中,化合物5~13、16和18~26是首次从蜜环菌中分离获得。体外生物活性研究表明化合物14和15对LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症反应具有抑制作用。

蜜环菌不同发育阶段甲素和戊素含量变化研究

利用高效液相色谱法，对蜜环菌不同发育阶段蜜环菌甲素、戊素的含量进行了研究。结果表明：菌丝体含甲素０．００８５％、戊素０．０００２％；发酵液中甲素０．５４ｍｇ／Ｌ、戊素未检出；菌索含甲素０．０００８％、戊素０．００１１％；子实体含甲素０．００２％、戊素０．００１１％。

蜜环菌液体培养基配方优选及其活性成分和抗氧化活性研究

目的从4种蜜环菌液体培养基配方中筛选出最佳液体培养基配方,并测量其菌丝提取物和发酵液提取物的活性成分含量及抗氧化活性。方法采用目前4种较常用的液体培养基配方在相同温度、转速、时间条件下对蜜环菌进行液体发酵,制备菌丝提取物和发酵液提取物,通过紫外分光光度法测量其主要活性成分含量和抗氧化活性。结果4种配方菌丝生物量、生物活性物质含量及抗氧化能力差异显著。其中配方1菌丝生物量最高,为1.21 g/L,显著高于其余3种配方(P<0.01,P<0.001)。4种配方菌丝提取物总黄酮、总三萜、总酚含量差异显著,均为配方2最高且显著高于子实体(P<0.001,P<0.01);发酵液提取物主要活性物质含量,配方4总黄酮和总酚含量最高,配方2总三萜含量最高,均显著高于子实体(P<0.01,P<0.001)。抗氧化能力方面,配方1菌丝提取物·OH清除率及总还原力最高;配方4发酵液提取物总还原能力表现最佳,且抗氧化能力表现更为稳定。结论针对不同目标产物筛选出了具体的最佳蜜环菌液体培养基配方,对后续蜜环菌的研究提供参考借鉴意义,也为今后蜜环菌的开发利用奠定基础1。