靶向药物甲磺酸伊马替尼的分子标志物BCR-ABL融合基因定量检测平台的质量评价方法的研究

目的:使用BCR-ABL定量标准品,评价BCR-ABL融合基因检测试剂盒(数字PCR法)的性能。方法:提取BCR-ABL定量标准品的RNA,测定其浓度和纯度。使用BCR-ABL融合基因定量检测试剂盒(数字PCR法)和数字PCR仪进行检测,得到标准品的BCR-ABL融合基因的分子学反应。结果:用于准确度项目检测的标准品WS2和WS3的BCR-ABL融合基因的MR绝对偏差均不超过±0.5 log,用于检出限项目检测的标准品WS4能检出BCR-ABL融合基因突变阳性,用于重复性项目检测的标准品WS1和WS4的BCR-ABL融合基因的MR的变异系数(CV)均<3.0%。结论:BCR-ABL融合基因定量检测试剂盒(数字PCR法)的准确度、检出限和重复性的性能指标符合制定的《断裂点簇集区-艾贝尔逊白血病病毒(BCR-ABL)融合基因检测试剂盒》标准的相应要求,为标准的实施提供了技术支撑。

BCR-ABL融合基因检测在慢性粒细胞白血病诊断中的价值

目的:探讨BCR-ABL融合基因检测对慢性粒细胞白血病(CML)鉴别、诊断的价值,以及对慢性粒细胞白血病各个病程(慢性期、加速期与急变期)进行监测的临床意义。方法:应用实时荧光定量PCR方法对临床常见骨髓增殖性肿瘤(慢性粒细胞白血病、真性红细胞增多症和原发性血小板增多症)患者标本进行BCR-ABL融合基因的定量检测。结果:慢性粒细胞白血病初发患者中,BCR-ABL融合基因水平均阳性,而真性红细胞增多症和原发性血小板增多症均为阴性。在CML患者中,初发患者与加速期和急变期的患者相比,白细胞计数、血红蛋白含量和血小板计数的差异具统计学意义,P值分别为0.046、0.039和0.001,而BCR-ABL融合基因水平的差异无统计学意义;初发与缓解后患者的BCR-ABL融合基因水平相比,差异具有统计学意义(P<0.001)。结论:BCR-ABL融合基因检测可以对CML与临床常见骨髓增殖性肿瘤做鉴别诊断,并对其病程进行监测,是一个有价值的指标,可为临床用药提供依据。

线粒体融合基因多态性与中国南方客家人群原发性高血压的相关性

目的探讨线粒体融合基因多态性与中国南方客家人群原发性高血压(EH)的相关性。方法选择2022年7—8月我院心内科收治的100例中国南方客家人群EH患者作为观察组,同时选择同期46例非高血压患者作为对照组。统计两组的一般资料,检测两组外周血样本中线粒体融合基因的多态性,对等位基因频率及Hardy-Weinberg平衡性做分析;通过比值比(OR)和95%可信区间(CI)分析线粒体融合基因多态性与中国南方客家人群EH的相关性。结果观察组和对照组在年龄、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、空腹血糖(FPG)及尿素氮(UN)比较,差异无统计学意义(P>0.05);收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、总胆固醇(TC)、血尿酸(UA)、血肌酐(Cr)及低密度脂蛋白(LDL)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。基因多态位点rs 11916762和rs 7620017中的AG、rs 2336384中的TT、rs 2236057中的GG、rs 7620342中的GT、rs 11925699中的AA+AG在观察组中的表达高于对照组(P<0.05),且各位点的基因分布符合Hardy-Weinberg平衡规律(P>0.05)。线粒体融合基因的rs 11916762位点、rs 2236057位点和rs 11925699位点的AA和AG基因型、rs 7620017位点的AA和GG基因型、rs 2336384位点的GG基因型、rs 7620342位点的GG、GT和TT与中国南方客家人群EH存在相关性(P<0.05)。结论线粒体融合基因(Mfn 1、Mfn 2、Opa 1)与中国南方客家人群EH存在正相关性,线粒体融合基因作为分子标志在中国南方客家人群EH监测中具有应用价值。

TEL-AML1融合基因在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及对其疗效及预后的影响

目的探讨TEL-AML1融合基因在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及对其疗效及预后的影响。方法收集儿童急性淋巴细胞白血病106例,应用巢式PCR技术检测TEL-AML1基因表达,根据TEL-AML1基因是否表达,分为TEL/AML1+组、TEL/AML1-组。结果两组患儿年龄、发热率比较,差异有统计学意义(P<0.05),两组患儿其他临床特征比较,差异无统计学意义(P>0.05)。TEL/AML1+组与TEL/AML1-组临床疗效比较,差异具有统计学意义(χ^(2)=7.617,P=0.022)。第12周MRD水平可能为TEL-AML1融合基因阳性儿童急性淋巴细胞白血病患者预后的影响因素(P<0.05)。结论TEL-AML1融合基因阳性儿童急性淋巴细胞白血病患儿生存率更高,第12周MRD水平可能是影响患儿预后因素。

基于连接酶链式反应的EML4-ALK融合基因分型检测

针对棘皮动物微管相关蛋白样4-间变性淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因变异体V1、V2、V3a、V3b设计引物、探针,优化连接探针长度及其浓度,建立基于连接酶链式反应的qPCR法检测方案,并对该方案的特异性、检出限、抗干扰性进行验证。结果表明:基于连接酶链式反应的qPCR法能对EML4-ALK融合基因进行有效分型;连接探针长度在30 nt(nucleotide)时检测灵敏度、特异性最高;连接探针终浓度在0.1~1.0 nmol/L较为合适;设计的引物、探针特异性好,只扩增靶RNA,对其他RNA无扩增;对EML4-ALK融合基因变异体V1、V2的检出限为10 copies/μL,变异体V3a、V3b的检出限为100 copies/μL;在EML4-ALK融合基因RNA标准品检测过程中加入100 ng的肺癌样本RNA作为干扰,检测结果未受到明显干扰。

融合基因检测方法的最新研究进展

融合基因指的是由两个或多个基因片段在基因组中发生重组而形成的新序列,其在肿瘤发生、发展过程中具有重要的生物学功能和临床意义。融合基因的检测可以为肿瘤的早期诊断、风险分层和靶向治疗等提供重要指导。传统的融合基因检测方法占据主导地位,但存在灵敏度偏低,成本偏高或技术复杂,难以大规模应用的局限。随着生物新技术的迅猛发展,一系列全新的融合基因检测方法逐渐涌现,为融合基因检测提供新的思路。该文综述了融合基因检测的传统方法以及近年来发展的测序技术,旨在为融合基因的检测提供思路,为相关疾病的诊断及精准治疗提供指导。

RUNX1-RUNX1T1融合基因阳性急性髓系白血病骨髓形态学特点分析

目的探讨RUNX1-RUNX1T1融合基因阳性急性髓系白血病(AML)骨髓形态学特点。方法选取2017年1月至2023年1月该院初诊的20例RUNX1-RUNX1T1融合基因阳性AML病例作为A组,20例融合基因阴性的AML病例为B组,24例PML-RARA融合基因阳性AML病例为C组,对骨髓形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学检查进行回顾性分析,同时结合国内外文献分析类似病例骨髓细胞形态学特点。结果A组骨髓中出现不同程度增多的早幼粒细胞,早幼粒细胞数目与B组相比,差异有统计学意义(P<0.05),与C组相比差异亦有统计学意义(P<0.001)。A组部分早幼粒细胞存在形态异常且A组融合基因的表达量与骨髓早幼粒细胞数目呈正相关(r=0.478,P=0.039)。A组CD56、CD19表达及c-Kit突变情况明显高于B组(P<0.05),A、B两组1个疗程化疗缓解情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。A组易出现CD56和CD19同时表达,易伴随性染色体的缺失。结论RUNX1-RUNX1T1融合基因阳性AML在骨髓形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学方面有其独特的特点。骨髓中粒细胞系统易见不同程度的病态造血,变异性大,早幼粒细胞数目的增多及形态异常亦可作为RUNX1-RUNX1T1融合基因阳性AML骨髓形态学特点之一。

TEL/AML1融合基因儿童急性白血病的临床特点与预后

目的通过对71例TEL/AML1阳性的儿童急性白血病患儿行回顾性分析,明确该融合基因阳性白血病的临床特点,并评估其预后关系。方法2015年11月至2023年7月上海市儿童医院单中心71例TEL/AML1融合基因阳性的急性白血病患儿,男36例,女35例,年龄2~15岁,所有患儿均进行MICM的诊断,除形态、免疫分型和细胞遗传学外,均应用实时荧光探针PCR法进行56种融合基因筛选,并同步予FISH的方法行TEL/AML1探针检测。结果71例患儿PCR法和FISH结果均显示TEL/AML1融合基因阳性,符合率100%。71例患儿中位生存时间为54个月,其中持续缓解59例,放弃6例,死亡2例,复发4例,5年无事件生存率(EFS)是83.2%,5年累积复发率为5.6%。其中2例复发后放弃,另外2例复发患儿经过Car-T和造血干细胞移植后持续缓解至今。有1例患儿停药5年后复发,尽管加强化疗和移植,仍未改善预后,最后死亡;另外1例因高白细胞血症,在诱导缓解期间因感染而死亡。除放弃的6例外,将其他65例分为缓解组(59/65)和非缓解组(6/65),通过对两组多因素分析发现年龄≥6岁,危险分层以及D19d MRD≥0.1%是影响预后的危险因素。结论TEL/AML1融合基因阳性的急性白血病患儿可以获得较高的缓解率,常规化疗就可让其预后较好,诱导缓解后的MRD水平等可为后续治疗方案调整提供依据,复发后应用Car-T联合造血干细胞移植有望进一步改善其预后。

急性混合型白血病伴BCR-ABL融合基因阳性1例并文献复习

对1例BCR-ABL融合基因阳性急性混合表型白血病患者的诊治过程作回顾性分析,并复习相关文献。经骨髓细胞学及相关免疫遗传学等检查后,本例患者诊断为B淋系/髓系急性混合型白血病伴BCR-ABL1融合基因阳性,给予了针对淋系化疗方案并联合达沙替尼治疗。完全缓解后,行造血干细胞移植,疗效显著。混合表型急性白血病(mixed phenotype acute leukemia,MPAL)临床少见,预后差,根据患者自身情况综合考虑,选择合适的化疗方案并联合造血干细胞移植有可能改善预后。

TMPRSS2-ERG融合基因在前列腺癌中的研究进展

在前列腺癌中,跨膜丝氨酸蛋白酶2(transmembrane serine protease 2,TMPRSS2)-E26转化特异性相关基因[E26 transformation-specific(ETS)-related gene,ERG]融合基因由雄激素调控基因TMPRSS2(染色体21q22.2)与ERG(染色体21q22.3)融合形成。TMPRSS2-ERG可导致ERG过表达,过表达的ERG在多种因素协同作用下可引起相关靶基因表达并激活下游信号通路,从而参与前列腺癌的发生、发展过程。TMPRSS2-ERG有望成为前列腺癌的有效治疗靶点。本文对TMPRSS2-ERG在前列腺癌中的作用机制及其在前列腺癌诊疗中的研究进展进行综述。

融合基因BCR-ABL(P190、P210、P230)对ALL和CML的鉴别诊断价值

目的:研究融合基因BCR-ABL(P190、P210、P230)对急性淋巴细胞白血病(ALL)和慢性粒细胞白血病(CML)的鉴别诊断作用。方法:选取高邮市人民医院2020年1月~2023年1月收治的80例白血病患者作为研究对象。将其按照疾病类型分为ALL组(n=45)与CML组(n=35)。选用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测融合基因BCR-ABL(P190、P210、P230)表达情况。对比两组融合基因BCR-ABL(P190、P210、P230)阳性率及血清白细胞介素(IL)-6、IL-22、巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平。以Spearman相关性分析明确融合基因BCR-ABL(P190、P210、P230)阳性率与血清IL-6、IL-22、MCP-1水平的关系。此外,分析不同病程CML患者融合基因BCR-ABL(P190、P210、P230)阳性率的差异。结果:ALL组融合基因BCR-ABL P190、P210、P230阳性率均低于CML组(均P<0.05)。ALL组血清IL-6、IL-22及MCP-1水平均高于CML组(均P<0.05)。经Spearman相关性分析证实,白血病患者融合基因BCR-ABL P190、P210、P230阳性率与血清IL-6、IL-22、MCP-1水平均呈负相关关系(均P<0.05)。加速期、急变期CML患者融合基因BCR-ABL P190、P210阳性率均高于慢性期(均P<0.05)。结论:融合基因BCR-ABL(P190、P210、P230)对ALL及CML的鉴别诊断价值较高,可为CML患者病程判断提供参考依据。

基于连接PCR高灵敏度定量检测融合基因转录本

融合基因在间充质和血液系统恶性肿瘤中发挥着重要的作用.作为人类肿瘤疾病的重要生物标志物,融合基因转录本的分析检测在生物学研究、临床诊断、精准治疗和恶性肿瘤预后等方面具有广阔的应用前景.本文基于连接PCR建立了高灵敏度和高特异性检测融合基因mRNA的方法.在融合基因BCR-ABL mRNA的融合位点处设计两个特异性的寡核苷酸探针,只有当反应体系中存在相对应的靶标时,特异性的探针才会在融合位点相邻处与靶标互补配对并被连接形成新的DNA.通过对该DNA的PCR扩增可以检测低至0.1 fmolL^(-1)的mRNA,表现出了良好的灵敏度和特异性.此外,该方法还利用TaqMan探针实现在1个试管中同时检测融合基因BCR-ABL的不同亚型mRNA.

儿童混合表型急性白血病伴BCR-ABL1融合基因阳性病例分析

混合表型急性白血病(mixed-phenotype acute leukemia,MPAL)是急性白血病中淋系和髓系同时受累的一种罕见疾病,该文报道了1例儿童MPAL,此病例BCR-ABL1融合基因阳性并伴ASXL1基因突变,这种类型的遗传学改变为首次报道。该患儿接受急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)方案诱导治疗后骨髓细胞形态学及微小残留病灶(minimal residual disease,MRD)均未见明显异常。巩固治疗后进行异基因造血干细胞移植,移植后未出现急性排斥反应。移植后30 d骨髓细胞形态学、MRD、BCR-ABL1融合基因均转阴。截至目前移植术后9个月,患者仍处于无疾病进展生存期(progression-free survival,PFS)中。

间变性大细胞淋巴瘤患儿EEF1G/ALK 融合基因的鉴定与检测

目的明确1例伴少见ALK融合基因的间变性大细胞淋巴瘤患儿的分子诊断,建立该融合基因的实时荧光定量PCR检测方法。方法采用基于锚定多重PCR的二代测序技术,鉴定患儿腹股沟肿大淋巴结组织中ALK基因的伙伴基因。建立EEF1G/ALK融合基因实时荧光定量PCR方法,并对方法的重复性、灵敏度和特异性进行性能评价。在此基础上检测此患儿肿瘤组织、骨髓、外周血和脑脊液EEF1G/ALK融合基因的表达。结果经二代测序鉴定该患儿肿瘤细胞EEF1G/ALK融合基因阳性,Sanger测序验证为EEF1G Exon 6和ALK Exon 20的融合。建立的实时荧光定量PCR方法最低定量限为40拷贝/体系;弱阳性标本和强阳性标本的批内精密度CV分别为0.52%和0.17%;批间精密度CV分别为1.32%和1.14%,重复性好;检测其他ALK融合阳性标本结果为阴性,特异性好。复发时送检的淋巴结穿刺组织和外周血的融合基因定量检测结果为138.92%和0.0039%,其余检测为阴性。结论明确此例间变性大细胞淋巴瘤为少见EEF1G/ALK融合基因阳性。建立的EEF1G/ALK融合基因定量检测方法特异性、重复性好,灵敏度高,完全满足融合基因MRD监测的需要。

前列腺癌早期诊断中ERG相关融合基因表达的作用

前列腺癌早期,以ERG相关融合基因诊断,分析诊断价值。方法 165例患者,均疑似前列腺癌患者,病灶细针穿刺活检,统计ERG蛋白阳性表达率及其对前列腺癌诊断效能。结果 165例疑似前列腺癌患者中,检出阳性83例,ERG蛋白阳性17例(20.48%);82例良性前列腺疾病患者,ERG蛋白阳性率为0.00%;Logistic回归分析显示,ERG蛋白阳性、前列腺特异性抗原(PSA)阳性前列腺癌发病影响因素(P<0.05);在对前列腺癌诊断中,在对前列腺癌诊断中,PSA阳性诊断灵敏度、准确度分别为71.08%、76.97%,较ERG蛋白阳性的20.48%、60.00%高,ERG蛋白阳性特异度为100.00%,较PSA阳性的82.93%高(P<0.05)。结论 前列腺癌病理组织样本中,ERG相关融合基因阳性表达率偏低,但其对前列腺癌诊断特异性强,可用于定性诊断。

341例儿童急性淋巴细胞白血病融合基因表达及临床特点分析

目的探讨儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)融合基因表达情况及临床特点。方法回顾性分析2018年1月至2021年12月河南省儿童医院收治的341例初发ALL患儿的临床资料,根据融合基因检出情况分为融合基因阳性组和阴性组,比较不同组间的临床特点、完全缓解率、复发率、死亡率等指标。结果341例ALL患儿融合基因阳性检出率为48.1%(164/341),共检出15种融合基因,包括TEL-AML1、KMT2A重排、E2A-PBX1、BCR-ABL1、MEF2D重排、SIL-TAL1等。不同年龄组间融合基因表达差异有统计学意义(P<0.001),其中KMT2A重排多见于<1岁组,MEF2D重排多见于>10岁组。KMT2A重排+、BCR-ABL1+、MEF2D重排+和SIL-TAL1+患儿易发生高白细胞血症,且后3类患儿更易发生中枢神经系统受累。KMT2A重排(P<0.001)、BCR-ABL1(P=0.001)、MEF2D重排(P=0.001)多见于高危患者。融合基因阳性组基因突变检出率显著低于阴性组(27.9%vs 53.6%,P<0.001)。Ph-like基因仅在急性B淋巴细胞白血病患儿中检出,且以IK6亚型检出率最高,其中40%(8/20)的IK6亚型与BCR-ABL1关联。在治疗第33天和第12周评估中,BCR-ABL1+ALL患儿通过聚合酶链式反应检测的微小残留病(minimal residual desease,MRD)完全缓解率均低于对应时间点通过流式细胞术检测的MRD完全缓解率(均P<0.05)。融合基因阳性组复发率明显高于阴性组(P<0.001),但两组死亡率差异无统计学意义(P=0.080),其中KMT2A重排+患者复发率及死亡率均最高。结论初发ALL患儿因融合基因表达不同其临床特点、治疗缓解率、复发率和死亡率存在显著差异,治疗过程中监测MRD是评估危险度分层、判断预后的重要依据。

中国广东省广州市花都区α-地中海贫血融合基因及表型分析

目的:了解中国广东省广州市花都区人群α-地中海贫血融合基因的携带率、表型和基因型特征,为地中海贫血防控工作提供数据参考。方法:回顾性分析2019年7月至2020年11月广州市花都区妇幼保健院进行地中海贫血筛查的10 769例样本,进行血细胞分析、血红蛋白电泳,采用跨越断裂点PCR法(gap-PCR)、PCR-反向斑点杂交法(PCR-RDB)检测地中海贫血基因。结果:在广州市花都区10 769例样本中检出9例α-地中海贫血融合基因,检出率为0.08%。7例为融合基因杂合子,1例为融合基因复合Hb G-Honolulu, 1例为融合基因复合Hb QS。4例样本血细胞参数MCV结果在正常参考范围内,1例样本血红蛋白电泳Hb A2值降低,其他未见异常。结论:广州市花都区α-地中海贫血融合基因携带率较高,以杂合子常见,目前的筛查技术容易漏诊。

基于新生儿脐血TEL-AML1融合基因检测的儿童急性白血病筛查体系的建立及意义

目的 建立以检测新生儿脐血TEL-AML1融合基因为基础的儿童急性淋巴细胞白血病早期筛查体系,并探讨其临床意义。方法 首先通过问卷调查,筛选出具有发生儿童急性白血病高危因素的人群,随后收集高危新生儿出生时脐血,并于12~24 h内提取脐血单个核细胞mRNA,采用RT-PCR方法检测脐血TELAML1融合基因,从而构建筛查体系,并分析该筛查体系的可行性及有效率、实用性。结果 共筛选出高危人群231例,其中男118例(51.1%),女113例(48.9%);经RT-PCR方法检测TEL-AML1融合基因均为阴性,平均耗费时长为(12.3±0.6) h,平均费用为200元,患者满意度及接受率均为100%。结论 基于新生儿脐血TELAML1融合基因检测而建立的儿童急性淋巴细胞白血病早期筛查体系,在理论上具有科学性,在临床上具有可行性,为临床上开展早期筛查儿童急性淋巴细胞白血病提供依据。

融合基因在唾液腺肿瘤中的研究进展

唾液腺肿瘤是常见的口腔颌面部肿瘤且具有异质性,无法手术、复发和转移的患者治疗选择非常有限,而融合基因的发现为其诊疗开辟了新途径。融合基因编码新的融合癌蛋白或异位表达的正常/截短的癌蛋白,其主要靶标是转录辅助活化因子、酪氨酸激酶受体以及参与生长因子信号和细胞周期调节的转录因子,其中一些靶标或由这些靶标激活的途径是可靶向的。随着进一步迈入精准医疗和靶向治疗时代,更全面的分子分析将为各种唾液腺肿瘤的诊断、分子发病机制提供新的见解、为常规治疗效果不佳的患者提供更多的治疗选择。该文回顾了唾液腺良恶性肿瘤中融合基因类型、功能作用及靶向药物研究进展,旨在为融合基因在唾液腺肿瘤中的诊断、机制研究及临床治疗提供新的方向。

克唑替尼靶向治疗间变性淋巴瘤激酶与C-ros原癌基因1-受体酪氨酸激酶融合基因阳性晚期非小细胞肺癌患者的效果分析

目的分析克唑替尼靶向治疗间变性淋巴瘤激酶(ALK)、C-ros原癌基因1-受体酪氨酸激酶(ROS1)融合基因阳性晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者的效果。方法选取2020年6月至2022年6月来新疆医科大学附属肿瘤医院就诊的123例ALK阳性(ALK组)、15例ROS1阳性(ROS1组)晚期NSCLC患者为研究对象,所有患者均给予克唑替尼治疗,并纳入同期来本院进行健康检查的50名健康志愿者作为对照组。比较对照组入组时以及ALK组和ROS1组治疗前及治疗1、3个月后的循环肿瘤细胞(CTCs)、循环肿瘤DNA(CTDNA)、循环血液外泌体微小RNA-145(miR-145)、miR-200水平及ALK、ROS1阳性率。结果治疗前ALK组和ROS1组CTCs和CTDNA水平均高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。治疗1、3个月后ALK组和ROS1组患者的CTCs水平逐渐降低,CTDNA水平先升高后降低,与治疗前比较差异均有统计学意义[ALK组:(7.84±0.91)、(5.17±0.87)比(11.53±3.52),(7.19±1.13)、(4.02±0.95)比(5.49±1.17);ROS1组:(8.05±1.16)、(5.86±0.92)比(12.71±4.08),(7.42±1.24)、(4.55±1.14)比(5.66±1.32)](均P<0.05)。治疗前ALK组和ROS1组miR-145水平均低于对照组、miR-200水平均高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。治疗1、3个月后ALK组和ROS1组患者的miR-145水平均升高,miR-200水平均降低,与治疗前比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组ALK、ROS1阳性率均为0。治疗1、3个月后ALK组和ROS1组患者的ALK、ROS1阳性率均低于治疗前,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论克唑替尼靶向治疗ALK、ROS1融合基因阳性晚期NSCLC能够通过调节患者CTCs、CTDNA、miR-145、miR-200水平而降低ALK、ROS1阳性表达率。