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低温对红耳龟血液指标及植物血凝素反应的影响
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作者 张一帆 林涵语 +3 位作者 李崧铭 伍亮 刁迎珠 张志强 《水生态学杂志》 CSCD 北大核心 2024年第4期148-154,共7页
探究低温对红耳龟(Trachemys scripta elegans)免疫功能和应激反应能力的影响,揭示红耳龟适应低温环境的生理学和免疫学基础,为深入了解其入侵生物学提供基础资料。采用活体背甲下静脉窦采血技术,测定了6℃、17℃和26℃条件下处理1、5和... 探究低温对红耳龟(Trachemys scripta elegans)免疫功能和应激反应能力的影响,揭示红耳龟适应低温环境的生理学和免疫学基础,为深入了解其入侵生物学提供基础资料。采用活体背甲下静脉窦采血技术,测定了6℃、17℃和26℃条件下处理1、5和10 d时血液中各型白细胞百分比及嗜异性粒细胞与淋巴细胞的比值(ratio of heterophils to lymphocytes,H/L),以及第10天采血后植物血凝素(phytohemagglutinin-P,PHA-P)反应的变化。结果显示:(1)随着温度下降,第1天只有嗜碱性粒细胞的百分比显著升高(P<0.05),此差异在第5天和第10天消失(P>0.05);第5天,嗜酸性粒细胞的百分比和H/L先升后降,淋巴细胞的百分比先降后升,单核细胞的百分比下降(P<0.05);第10天,嗜酸性粒细胞的百分比上升,淋巴细胞、嗜异性粒细胞和单核细胞的百分比,以及H/L下降(P<0.05);(2)随着处理天数延长,除嗜碱性粒细胞的百分比无组内差异外(P>0.05),其他类型白细胞的百分比及H/L都有组内差异(P<0.05);(3)6℃组、17℃组和26℃组对PHA-P的反应分别在注射后48 h、24 h和48 h达到峰值,但组间差异不显著(P>0.05)。红耳龟通过调整血液中嗜酸性粒细胞等不同类型白细胞的百分比、下降的应激反应能力和提前发生反应的免疫应答来适应低温的短期胁迫。 展开更多
关键词 红耳龟 低温 淋巴细胞 嗜酸性粒细胞 植物血凝素 应激
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流感病毒血凝素表位通用疫苗设计的研究进展
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作者 郭志杰 郭春艳 徐翠香 《临床医学进展》 2024年第4期562-567,共6页
尽管流感是一个可预防性疾病,但它仍然是一个持续性的公共卫生问题,据统计每年可导致数十万人死亡。由于流感病毒的高度可变性,不可避免地存在疫苗与流行毒株抗原不一致的风险,迫切需要一种具有广泛保护作用或通用的流感病毒疫苗,以预... 尽管流感是一个可预防性疾病,但它仍然是一个持续性的公共卫生问题,据统计每年可导致数十万人死亡。由于流感病毒的高度可变性,不可避免地存在疫苗与流行毒株抗原不一致的风险,迫切需要一种具有广泛保护作用或通用的流感病毒疫苗,以预防所有季节性、人畜共患和新出现的大流行流感病毒。流感病毒表面糖蛋白血凝素具有广谱中和抗体识别的位点,被认为是通用疫苗研发的关键靶标,因此血凝素保守保护性表位及中和表位的鉴定对于设计通用流感疫苗和新的靶向治疗至关重要。在这里,本文综述了基于流感病毒血凝素保守表位及中和表位的通用疫苗设计研究进展。 展开更多
关键词 流感病毒 通用疫苗 血凝素 保守表位 中和表位
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我国乙型流感病毒血凝素基因的分子流行病学特征初步探讨
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作者 倪群琴 何付勤 +4 位作者 何君君 李娟 江春 顾秀玉 沈冬 《临床检验杂志》 CAS 2024年第3期231-236,共6页
目的初步探讨我国乙型流感病毒(IBV)血凝素(HA)基因的分子进化及基因特征,为IBV疫苗的研发提供参考价值。方法从GenBank公共数据库中获取我国完整的IBV HA基因序列,利用生物信息学软件分析其进化变异与基因特征。结果我国1996—2018年B/... 目的初步探讨我国乙型流感病毒(IBV)血凝素(HA)基因的分子进化及基因特征,为IBV疫苗的研发提供参考价值。方法从GenBank公共数据库中获取我国完整的IBV HA基因序列,利用生物信息学软件分析其进化变异与基因特征。结果我国1996—2018年B/Victoria系流感毒株主要属于V1A分支,2019—2022年属于V1A.3分支,少数属于V1A.1分支,B/Yamagata系相同年份流行株多聚集成一分支进化。Victoria系和Yamagata系的HA基因与同期疫苗株相比,其氨基酸同源性分别>92.6%和92.8%。两谱系与参考株相比,流行株在HA蛋白的120环、150环、160环及190螺旋等关键的抗原决定簇部位发生了多个氨基酸位点改变。结论我国IBV的流行株含有B/Victoria系和B/Yamagata系,且HA已发生抗原突变积累,这可能会导致IBV疫苗保护效果下降,需密切监测IBV谱系及变异情况,为疫苗株的更新提供可靠的数据。 展开更多
关键词 乙型流感病毒 血凝素 基因特征 进化 变异
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犬瘟热病毒血凝素蛋白功能研究进展
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作者 胡焱 吴姣榕 《现代畜牧兽医》 2024年第5期82-86,共5页
犬瘟热(CD)是由犬瘟热病毒(CDV)感染动物导致发病的一种烈性传染病,宿主范围广泛,感染发病的动物出现复杂的临床症状,死亡率高。血凝素(H)蛋白是CDV结构蛋白之一,具有主要的特异性抗原位点,可与信号传导淋巴细胞激活分子(SLAM)或上皮细... 犬瘟热(CD)是由犬瘟热病毒(CDV)感染动物导致发病的一种烈性传染病,宿主范围广泛,感染发病的动物出现复杂的临床症状,死亡率高。血凝素(H)蛋白是CDV结构蛋白之一,具有主要的特异性抗原位点,可与信号传导淋巴细胞激活分子(SLAM)或上皮细胞黏附蛋白Nectin-4发生相互作用,介导病毒的吸附、出芽等,还与CDV跨动物种属传播具有密切联系。文章对CDV H蛋白功能及特点进行概述,围绕H蛋白对CDV的致病性及疫苗研究进展进行了讨论,以期为H蛋白研究及CD防控提供参考。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 血凝素蛋白 信号传导淋巴细胞激活分子(SLAM) Nectin-4 跨物种传播
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长春市2016—2020监测年度甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因特征分析 被引量:3
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作者 崔薇 初秋 +5 位作者 李晨光 龚云伟 赵春艳 孙宇 隋天卓 孙炳欣 《中国实验诊断学》 2023年第6期690-695,共6页
目的分析长春市2016—2020年度甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因特征,了解其变异情况及遗传进化特征。方法选取2016—2020年度甲型H1N1流感病毒分离株109株,PCR扩增HA基因并进行序列测定;利用生物信息学软件对分离株的HA基因进行进化和... 目的分析长春市2016—2020年度甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因特征,了解其变异情况及遗传进化特征。方法选取2016—2020年度甲型H1N1流感病毒分离株109株,PCR扩增HA基因并进行序列测定;利用生物信息学软件对分离株的HA基因进行进化和变异分析。结果长春市109株分离株与疫苗株A/California/07/2009的HA蛋白相比均有S84N、S162N和I216T共同的氨基酸位点变异,且有1株发生了HA蛋白D222N位点突变,提示此毒株可引起患者下呼吸道症状。109株病毒株的HA基因之间核苷酸同源性为96.9%~100%,氨基酸同源性为97.2%~100%。在进化树分析上,都属于6B.1大分支,并且随着时间的推移,HA在基因进化树上离早期疫苗株A/California/7/2009越来越远,同一年份里也有毒株位于不同的小分支内。结论长春市2016—2020年度甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因在不断的变异中,应持续进行监测,为预防甲型H1N1流感大流行提供参考。 展开更多
关键词 甲型H1N1流感病毒 血凝素(HA) 基因特征
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新型抗原亚群H9病毒的血凝素蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
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作者 闫婉婉 李雪松 +9 位作者 宿鑫 石晓娜 陈新武 魏朋华 刘芹防 杨健美 闫大为 张志飞 李泽君 滕巧泱 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第4期158-163,共6页
H9N2亚型禽流感病毒(AIV)抗原变异迅速,相继于2009年及2013年分别出现新的抗原亚群病毒,对该病毒的防控带来了极大的挑战。目前,关于H9N2禽流感病毒形成不同抗原亚群机制,尚不清楚。流感病毒血凝素蛋白(HA)的单克隆抗体是研究该机制的... H9N2亚型禽流感病毒(AIV)抗原变异迅速,相继于2009年及2013年分别出现新的抗原亚群病毒,对该病毒的防控带来了极大的挑战。目前,关于H9N2禽流感病毒形成不同抗原亚群机制,尚不清楚。流感病毒血凝素蛋白(HA)的单克隆抗体是研究该机制的基础工具。为此,本研究通过血凝抑制(HI)实验筛选到1株新型的抗原亚群H9N2病毒H514。通过杂交瘤细胞融合技术以及间接免疫荧光的方法,筛选到5株抗H514病毒HA蛋白的单抗,均属于Ig G亚型。Western blot结果表明5株单克隆抗体中只有5E9作用的是线性表位,其余4株皆是针对构象表位。进一步地研究发现,这5株单克隆抗体对H514株皆有HI活性,最高达到2~8。这些结果为H9N2亚型禽流感病毒的抗原性分子研究提供了重要材料。 展开更多
关键词 H9N2亚型 禽流感病毒 抗原变异 单克隆抗体 血凝素
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基于甲型流感病毒H1N1亚型血凝素的mRNA疫苗制备和加强免疫策略研究
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作者 沈海浅 俞康莹 +2 位作者 陈颖盈 季萍 王颖 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1374-1383,共10页
目的制备甲型流感病毒H1N1亚型血凝素(hemagglutinin,HA)mRNA疫苗,并探讨不同加强免疫策略的免疫保护作用。方法以荧光素酶(firefly luciferase,Fluc)为报告基因,构建Fluc mRNA-脂质纳米颗粒(lipid nanoparticle,LNP)疫苗,通过小鼠活体... 目的制备甲型流感病毒H1N1亚型血凝素(hemagglutinin,HA)mRNA疫苗,并探讨不同加强免疫策略的免疫保护作用。方法以荧光素酶(firefly luciferase,Fluc)为报告基因,构建Fluc mRNA-脂质纳米颗粒(lipid nanoparticle,LNP)疫苗,通过小鼠活体成像实验鉴定Fluc mRNA-LNP疫苗肌内注射后在体内的表达情况。进一步构建H1N1亚型(A/Michigan/45/2015)HA(M15-HA)的mRNA-LNP疫苗,将20、10、5和1μg M15-HA mRNA-LNP疫苗通过肌内注射分别免疫不同剂量组小鼠2次(间隔3周),酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定小鼠第2次免疫2周和4周后血清抗体滴度,血凝抑制试验检测功能性抗体水平。第2次免疫后40 d,采用1μg mRNA疫苗或10μg HA蛋白亚单位疫苗对1μg剂量免疫组小鼠进行加强免疫,接种2周和4周后用ELISA和血凝抑制试验分别检测特异性抗体及功能性抗体水平。结果活体成像实验结果显示,小鼠接种Fluc mRNA-LNP疫苗1 d后即能在小鼠体内检测到荧光素酶活性。制备获得的M15-HA mRNA-LNP疫苗2次免疫小鼠2周和4周后,所有剂量组小鼠的特异性抗体水平均较免疫前显著上升(均P=0.000);血凝抑制试验结果显示,20μg和10μg剂量组的功能性抗体水平均较PBS对照组显著升高(均P<0.05)。对1μg低剂量组小鼠进行HA蛋白或M15-HA mRNA-LNP的加强免疫后,均诱导产生了更高水平的特异性抗体和功能性抗体,并能维持较长时间;2种不同加强免疫策略之间差异无统计学意义。结论成功制备M15-HA mRNA-LNP疫苗,显示出良好的免疫原性和抗体中和活性;低剂量mRNA疫苗免疫2次后,同源mRNA疫苗和异源蛋白疫苗加强免疫均可以诱导更强的免疫反应。 展开更多
关键词 流感疫苗 甲型流感病毒 血凝素 mRNA疫苗 加强免疫
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低温对黑斑侧褶蛙变态和植物血凝素反应的影响 被引量:1
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作者 李诺 伍亮 张志强 《水产养殖》 CAS 2023年第5期41-43,共3页
温度是影响两栖动物变态发育时长的主要环境因素之一,高温可促进蝌蚪生长发育,缩短变态时长,低温则延迟发育进程,延长变态时长[1-5]。黑斑侧褶蛙(Pelophylax nigromaculatus)是有重要经济价值的两栖动物,也是稻蛙综合种养的主要蛙种之一... 温度是影响两栖动物变态发育时长的主要环境因素之一,高温可促进蝌蚪生长发育,缩短变态时长,低温则延迟发育进程,延长变态时长[1-5]。黑斑侧褶蛙(Pelophylax nigromaculatus)是有重要经济价值的两栖动物,也是稻蛙综合种养的主要蛙种之一[6]。变态前后,蝌蚪的规格、对植物血凝素(PHA-P)的反应,受高温[3-5]。 展开更多
关键词 黑斑侧褶蛙 两栖动物 植物血凝素 变态发育 延迟发育 主要环境因素 蝌蚪
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颅脑损伤病儿血清血凝素样氧化低密度脂蛋白受体、Toll样受体4表达水平及临床意义研究 被引量:2
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作者 王文召 李娜 刘一鸣 《安徽医药》 CAS 2023年第3期546-549,I0002,共5页
目的检测颅脑损伤病儿血清血凝素样氧化低密度脂蛋白受体(LOX-1)、Toll样受体4(TLR4)表达水平,探讨二者与颅脑损伤病儿发病的关系。方法选取2020年1—12月在南京市儿童医院就诊的颅脑损伤病儿82例作为研究对象;另选取同时期保健科体检... 目的检测颅脑损伤病儿血清血凝素样氧化低密度脂蛋白受体(LOX-1)、Toll样受体4(TLR4)表达水平,探讨二者与颅脑损伤病儿发病的关系。方法选取2020年1—12月在南京市儿童医院就诊的颅脑损伤病儿82例作为研究对象;另选取同时期保健科体检的90例健康儿童作为对照组。颅脑损伤病人出院后6个月,根据治疗结果格拉斯哥预后量表(GOS)评定,分为预后不良组33例和预后良好组49例。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测所有受试者病儿血清LOX-1、TLR4表达水平,经Pearson法分析颅脑损伤病儿血清LOX-1、TLR4的相关性,受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析LOX-1、TLR4水平对颅脑损伤病儿预后不良的预测价值;logistic回归分析影响颅脑损伤病儿预后不良的有关因素。结果与对照组[(3.13±0.97)μg/L、(0.52±0.11)μg/L]相比,颅脑损伤病儿血清LOX-1[(13.24±1.69)μg/L]、TLR4表达水平[(8.83±1.57)μg/L]升高(P<0.05);预后不良病儿(功能受限、活动受限)血清LOX-1[(16.31±2.30)μg/L]、TLR4水平[(11.19±2.05)μg/L]较预后良好病儿高[(11.17±1.28)μg/L、(7.19±1.25)μg/L](P<0.05);经Pearson法分析颅脑损伤病儿预后不良血清LOX-1、TLR4水平呈正相关(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,LOX-1、TLR4的曲线下面积(AUC)及其95%置信区间(CI)分别为0.76(0.65,0.88)、0.75(0.64,0.87),二者联合诊断颅脑损伤病儿预后不良的AUC为0.91(0.84,0.98),与LOX-1、TLR4单独检测比较,二者联合诊断颅脑损伤病儿预后不良的AUC更高(Z=2.18、2.35,P=0.029、0.019);多因素logistic回归分析结果表明血清LOX-1、TLR4是颅脑损伤预后结果发生的影响因素(P<0.05)。结论颅脑损伤病儿血清LOX-1、TLR4表达水平异常升高,监测血清LOX-1、TLR4水平可能有助于判断病人病情程度以及预后情况。 展开更多
关键词 颅脑损伤 血凝素样氧化低密度脂蛋白受体 TOLL样受体4 儿童
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辛伐他汀抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体的表达 被引量:3
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作者 郝文君 白小涓 杨向红 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 2006年第4期309-312,共4页
目的观察辛伐他汀抑制氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体表达的作用。方法培养人脐静脉内皮细胞株ECV304,随机分组:对照组、低密度脂蛋白(25 mg/L)组、氧化型低密度脂蛋白(255、0和100 mg/L)组和... 目的观察辛伐他汀抑制氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体表达的作用。方法培养人脐静脉内皮细胞株ECV304,随机分组:对照组、低密度脂蛋白(25 mg/L)组、氧化型低密度脂蛋白(255、0和100 mg/L)组和氧化型低密度脂蛋白(50 mg/L)+辛伐他汀(1和10μmol/L)组,通过逆转录聚合酶链反应和Western blot蛋白印迹分析检测血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA和蛋白的表达,并在相差显微镜下观察细胞形态变化。结果氧化型低密度脂蛋白上调血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体表达(P<0.01),并呈浓度依赖性(P<0.05)。辛伐他汀明显抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体表达(P<0.05),且高浓度组较低浓度组的抑制作用更强(P<0.05)。结论氧化型低密度脂蛋白可能通过血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体导致内皮功能障碍,辛伐他汀抑制氧化型低密度脂蛋白诱导血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体的表达是其非调脂抗动脉粥样硬化机制之一。 展开更多
关键词 内科学 辛伐他汀抑制血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体的表达 逆转录聚合酶链反应 辛伐他 氧化型低密度脂蛋白 血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 人脐静脉内皮细胞
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动脉粥样硬化兔血管血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达及雷米普利的干预作用 被引量:2
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作者 刘忠志 董波 +3 位作者 刘同宝 许晓群 于永慧 刘莹 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 2006年第1期37-40,共4页
目的探讨血管紧张素转化酶抑制剂对动脉粥样硬化家兔血管血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响。方法以家兔动脉粥样硬化模型为研究对象,采用免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应方法评价动脉粥样硬化家兔血管血凝素样氧化型低密度... 目的探讨血管紧张素转化酶抑制剂对动脉粥样硬化家兔血管血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响。方法以家兔动脉粥样硬化模型为研究对象,采用免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应方法评价动脉粥样硬化家兔血管血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和信使核糖核酸表达及口服雷米普利的干预效应。结果高脂组血管血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和信使核糖核酸表达均显著增加,雷米普利组血管血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和信使核糖核酸表达水平较高脂组显著下降(P均<0.05)。结论结果提示,服用雷米普利可明显抑制动脉粥样硬化病变血管血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和信使核糖核酸表达,从而可能在动脉粥样硬化的预防中起重要作用。 展开更多
关键词 病理学与病理生理学 雷米普利对血管血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响 免疫组织化学与逆转录聚合酶链反应 血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 动脉粥样硬化 雷米普利 家兔
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单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病毒血凝素抗原的研究
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作者 汪力亚 汪美先 +1 位作者 王海涛 姜绍谆 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1989年第1期8-13,共6页
用蔗糖-丙酮法从HFRS病毒陈株感染的乳小白鼠鼠脑中提取粗制血凝素,特此粗制血箍素通过抗HFRS病毒血凝素McAb 3G1与Sepherose 4B偶联的免疫吸附柱,获得纯化HFRS病毒血凝素抗原具有较高的血凝滴度和良好的免疫原性.用SDS—PAGE和Weste... 用蔗糖-丙酮法从HFRS病毒陈株感染的乳小白鼠鼠脑中提取粗制血凝素,特此粗制血箍素通过抗HFRS病毒血凝素McAb 3G1与Sepherose 4B偶联的免疫吸附柱,获得纯化HFRS病毒血凝素抗原具有较高的血凝滴度和良好的免疫原性.用SDS—PAGE和Western-blot技术分析该纯化的血凝素抗原,并与同法纯他的正常鼠脑抗原比较,证明谊特异性血凝素抗原分子量为5×10^4道尔顿。用2株抗HFRS病毒以及10株抗HFRS病毒血凝素McAb,以ELISA阻断试验分析纯化50K血凝素,结果育10株McAb可阻断McAb3G1与其结合,其抗碌决定簇之间有部分相同或重叠,提示这些具有不同特性的抗原决定簇确实位于同一蛋白上。以上结果表明,该SOK血疑素蛋白特性及结构均较复杂,尚待进一步研究。 展开更多
关键词 单克隆抗体 亲和层析法 血凝素抗原 肾综合征出血热病毒血凝素
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1995~2005年中国H3N2亚型人流感病毒血凝素基因变异与流行相关性研究 被引量:35
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作者 董丽波 张烨 +9 位作者 温乐英 赵翔 黄维娟 蓝雨 郭俊峰 李梓 王敏 董婕 郭元吉 舒跃龙 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期339-344,共6页
为了探讨中国H3N2亚型人流感病毒血凝素基因变异与流行关系,对1995~2005年中国分离的550株H3N2流感病毒的HA1序列进行分析。HA1基因进化树显示出以很长的主干和很短的侧枝为特征。HA1的氨基酸位点变异主要位于5个已知的抗原位点及其... 为了探讨中国H3N2亚型人流感病毒血凝素基因变异与流行关系,对1995~2005年中国分离的550株H3N2流感病毒的HA1序列进行分析。HA1基因进化树显示出以很长的主干和很短的侧枝为特征。HA1的氨基酸位点变异主要位于5个已知的抗原位点及其附近,同时其它位点也有改变。通过对HA1序列资料分析发现这期间导致H3N2流行的序列改变的三种可能,第一种是同时出现多位点变化,第二种是位点变化逐渐发生累积到多个位点变化,第三种是单个抗原位点和受体结合位点同时改变,均可以引起H3N2流行。 展开更多
关键词 A型流感病毒 血凝素 变异
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禽流感病毒血凝素基因的克隆及其DNA疫苗的免疫原性 被引量:27
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作者 陈化兰 于康震 +2 位作者 田国斌 唐秀英 卢景良 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期555-558,共4页
禽流感病毒(AIV)的表面结构蛋白血凝素(HA)是其主要保护性抗原。本研究参考已发表的H7亚型AIV的HA基因序列,设计合成了1对H7HA特异引物,以AIVA/Afri.Star./Eng-Q/983/79/(H7N... 禽流感病毒(AIV)的表面结构蛋白血凝素(HA)是其主要保护性抗原。本研究参考已发表的H7亚型AIV的HA基因序列,设计合成了1对H7HA特异引物,以AIVA/Afri.Star./Eng-Q/983/79/(H7N1)(A/Afri.Star./Eng)核酸为模板,通过RT-PCR扩增出1条1.7kbcDNA片段。将这一片段定向克隆到pUC18中,对其5′端及3′端部分序列测定后,确证其为HAcDNA。将HA基因置于SV40启动子和增强子下游,构建了这一基因的真核表达质粒pSVH7。以此质粒100μg肌肉注射免疫3周龄SPF鸡6只,4周后以100倍鸡胚感染剂量(EID)的HA基因同源病毒对所有鸡进行攻毒,1周后以棉拭子进行泄殖腔病毒分离;免疫后1~6周每周对所有鸡翅静脉采血,分离血清,检测HI抗体。结果,100μg免疫组鸡病毒分离数为0/6,对照组为6/6;攻毒后1周免疫组鸡HI效价为1∶32~1∶64,对照组为1∶4~1∶16。表明所构建的HA基因表达质粒可作为基因疫苗诱导鸡产生免疫保护反应。 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素基因 RT-PCR 克隆 DNA疫苗
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我国部分地区H9亚型禽流感病毒血凝素基因序列比较与遗传发生关系分析 被引量:35
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作者 刘红旗 程坚 +3 位作者 彭大新 贾立军 张如宽 刘秀梵 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期288-297,共10页
为从分子水平掌握我国H9亚型AIV的遗传变异情况和流行规律 ,本研究汇集近年来从我国 1 2个省、市、自治区的发病鸡群中分离到的 2 3株H9亚型禽流感病毒 ,通过RT -PCR方法和核苷酸序列测定获得了 2 3个毒株的HA基因cDNA核苷酸序列。核苷... 为从分子水平掌握我国H9亚型AIV的遗传变异情况和流行规律 ,本研究汇集近年来从我国 1 2个省、市、自治区的发病鸡群中分离到的 2 3株H9亚型禽流感病毒 ,通过RT -PCR方法和核苷酸序列测定获得了 2 3个毒株的HA基因cDNA核苷酸序列。核苷酸和推导的氨基酸序列同源性比较结果表明 ,这些毒株HA基因的核苷酸序列同源性为 94.1 %~1 0 0 % ,氨基酸序列同源性为 95 .4%~ 1 0 0 % ;将这 2 3个毒株和来自亚洲及世界其它地区的另外 3 1株的HA基因cDNA序列同源性进行比较发现 ,分离自香港的HK1 70 4 99株与日本的 2个毒株关系较近 ;氨基酸序列分析发现 ,CKGS1 99、CKTJ1 96、CKTJ2 96、CKSH3 0 0和CKBJ1 97五个毒株各发生了一个潜在的糖基化位点的丢失。 5 4株H9亚型AIVHA基因 5 5bp~ 1 1 5 2bp的氨基酸序列分析发现 ,裂解位点尽管有 1 0种基序 ,但本研究中的 2 3株和近年来从我国大陆和香港地区的分离的毒株则均为RSSR↓GLF ;构成受体结合位点的 1 91位氨基酸有一个规律 ,即所有中国大陆毒株与部分香港毒株都为N ,其它毒株均为H ,1 41aa~ 1 43aa处的糖基化位点有与 1 91aa类似的规律 ,即 :凡是 1 91aa为N的毒株 ,该处均为NVS(CKBJ1 94除外 ) ,凡是1 91aa为H的毒株 ,则该处均为NVT ;遗传发生关系分析 ,中国大陆? 展开更多
关键词 H9亚型禽流感病毒 血凝素基因 遗传发生关系 同源性 序列分析 中国
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百脉根表达H5N1亚型禽流感血凝素的研究 被引量:16
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作者 张占路 唐益雄 +4 位作者 薛文通 刘建利 梁哲 卢运明 吴燕民 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期303-307,共5页
【目的】将H5N1亚型禽流感病毒血凝素(AIVHA)基因转入牧草植物中,利用豆科牧草作为植物生物反应器来生产禽流感抗原蛋白,探索研制禽流感转基因植物可饲用疫苗的可行性。【方法】以百脉根子叶柄外植体作为转化受体,通过农杆菌介导法将AI... 【目的】将H5N1亚型禽流感病毒血凝素(AIVHA)基因转入牧草植物中,利用豆科牧草作为植物生物反应器来生产禽流感抗原蛋白,探索研制禽流感转基因植物可饲用疫苗的可行性。【方法】以百脉根子叶柄外植体作为转化受体,通过农杆菌介导法将AIVHA基因导入百脉根,子叶柄外植体经过共培养、筛选分化、再生,得到抗性植株。对抗性植株进行了PCR、RT-PCR检测和Western blot分析。【结果】证明AIVHA基因已经导入到百脉根基因组中,在核酸水平和蛋白水平都得到了表达。【结论】利用百脉根表达禽流感抗原蛋白是可行的。 展开更多
关键词 禽流感 血凝素 转化 百脉根
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禽流感血凝素基因的原核表达及其在H9亚型诊断中的应用 被引量:13
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作者 张瑞华 金梅林 +5 位作者 王贵华 喻正军 赵思婷 李红超 谭亚娣 陈焕春 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期315-319,共5页
根据H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因序列设计并合成引物 ,从本室分离并保存的H9N2亚型禽流感病毒中扩增了预计约 16 83bp的血凝素基因 ,将此扩增产物克隆进pMD18_T载体 ,限制性酶切及序列测定后 ,进一步将其亚克隆到pGEX_KG中 ,与GST蛋... 根据H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因序列设计并合成引物 ,从本室分离并保存的H9N2亚型禽流感病毒中扩增了预计约 16 83bp的血凝素基因 ,将此扩增产物克隆进pMD18_T载体 ,限制性酶切及序列测定后 ,进一步将其亚克隆到pGEX_KG中 ,与GST蛋白融合表达。SDS_PAGE和Western印迹表明缺失信号肽后的HA基因在大肠杆菌中获得了表达 ,表达产物具有免疫学活性 ,融合蛋白的分子量约为 90kD ,位于包涵体中。包涵体经变性、复性处理 ,利用复性产物作为抗原包被酶标板建立了检测H9亚型禽流感抗体ELISA方法。结果表明应用HA重组蛋白作为诊断H9亚型禽流感抗原具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点 ,可用于H9亚型禽流感抗体的检测。 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素基因 原核表达 ELISA
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2009年新型甲型H1N1流感病毒血凝素基因进化分析 被引量:23
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作者 谢佳新 殷建华 +5 位作者 李淑华 鹿文英 韩一芳 韩磊 张宏伟 曹广文 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期613-617,共5页
目的:探讨2009年新型甲(A)型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因与世界各地不同年代分离的A/H1N1代表株HA基因的进化关系。方法:从NCBI数据库下载2009年新型A/H1N1亚型流感病毒的HA基因序列以及以往流行的人、猪和禽的A/H1N1亚型流感病毒参考序... 目的:探讨2009年新型甲(A)型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因与世界各地不同年代分离的A/H1N1代表株HA基因的进化关系。方法:从NCBI数据库下载2009年新型A/H1N1亚型流感病毒的HA基因序列以及以往流行的人、猪和禽的A/H1N1亚型流感病毒参考序列,采用Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 4.0(MEGA4.0)软件进行序列比对和构建系统进化树,并分别比较2009年新型甲型H1N1流感病毒HA基因与北美地区、欧洲地区、亚洲地区A/H1N1流感病毒HA基因编码蛋白的氨基酸序列。结果:不同时期人A/H1N1亚型流感病毒代表株HA基因进化分析显示:2009年新型A/H1N1流感病毒HA基因与1976~2007年北美地区分离的7株人A/H1N1亚型流感病毒具有较高的同源性,与欧洲和亚洲地区的同源性较低。不同种属间A/H1N1亚型流感病毒HA基因进化分析显示:2009年新型A/H1N1流感病毒HA基因与1998和2007年北美地区分离的A/H1N1猪流感病毒的HA基因进化关系较近,与欧洲及亚洲地区分离的A/H1N1猪流感病毒及A/H1N1禽流感病毒进化关系较远。氨基酸比对结果显示2009年新型A/H1N1流感病毒HA基因的重要抗原位点与北美地区分离的A/H1N1猪流感病毒相近,与欧洲和亚洲地区分离的A/H1N1猪流感病毒及人类流感病毒疫苗株相比变化较大。结论:2009年新型甲型H1N1流感病毒HA基因可能是北美地区甲型H1N1猪流感病毒长期进化并与该地区人A/H1N1流感病毒部分基因片段重排的结果,对人H1N1甲型流感病毒疫苗可能并不敏感。 展开更多
关键词 H1N1甲型流感病毒 血凝素基因 进化 基因重排
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保留血凝素活性的流行性出血热灭活疫苗免疫家兔的效果 被引量:17
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作者 朱智勇 唐汉英 +3 位作者 李岩金 翁景清 付桂明 俞永新 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1989年第3期225-229,共5页
以流行性出血热(EHF)病毒浙10株为毒种,沙鼠肾原代细胞为基质细胞,β-丙内酯为灭活剂,按类似于流行性乙型脑炎的生物制品规程要求,研制成EHF灭活疫苗。实验证明,此疫苗除了与福尔马林灭活疫苗一样,可用ELISA或反向被动血凝试验(RPHA)检... 以流行性出血热(EHF)病毒浙10株为毒种,沙鼠肾原代细胞为基质细胞,β-丙内酯为灭活剂,按类似于流行性乙型脑炎的生物制品规程要求,研制成EHF灭活疫苗。实验证明,此疫苗除了与福尔马林灭活疫苗一样,可用ELISA或反向被动血凝试验(RPHA)检出EHFV抗原外,还可检出较高滴度(64~1024)的血凝素抗原。将此疫苗经肌肉免疫家兔(1ml,2针),在兔血清中不仅能检出荧光(IF)抗体和反向被动血凝抑制(RPHI)抗体,还可测出一定滴度的中和抗体(空斑减少中和试验,简称PRNT,滴度为20~160)和低滴度(10~20)的血凝抑制(HI)抗体。这些结果表明,用β-丙内酯灭活的EHF疫苗与福尔马林灭活的疫苗在免疫原性上有明显区别。用β-丙内酯灭活疫苗免疫的23只家兔,经EHFV浙5株316和3 160ID50的攻击,全部获得了保护。 展开更多
关键词 流行性出血热 灭活疫苗 血凝素
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H5N1亚型禽流感病毒血凝素Th和B细胞表位预测及抗原性分析 被引量:16
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作者 南文龙 金宁一 +5 位作者 鲁会军 赵翠青 田明尧 谭磊 张金双 白靓 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期630-633,637,共5页
目的:预测H5N1亚型禽流感病毒血凝素Th和B细胞相关抗原表位,并初步分析其抗原性。方法:依据近年H5N1亚型禽流感病毒流行趋势,下载得到相关HA蛋白氨基酸序列。进行生物信息学综合分析预测,获得Th和B细胞相关抗原表位,并比较其保守性和特... 目的:预测H5N1亚型禽流感病毒血凝素Th和B细胞相关抗原表位,并初步分析其抗原性。方法:依据近年H5N1亚型禽流感病毒流行趋势,下载得到相关HA蛋白氨基酸序列。进行生物信息学综合分析预测,获得Th和B细胞相关抗原表位,并比较其保守性和特异性。通过BALB/c小鼠和SPF鸡H5N1亚型禽流感病毒阳性血清,初步鉴定候选表位抗原性。结果:综合多项预测及空间构象模拟结果,我们获得了三条候选Th和B细胞表位,分别为HA141~155、HA206~223、HA302~316。候选表位处于H5N1亚型禽流感HA1蛋白序列上相对保守的区域内,且与目前流行的H5N1亚型禽流感病毒HA相应区域具有较好的一致性。而不同候选表位在BALB/c小鼠和SPF鸡H5N1亚型禽流感病毒阳性血清反应中显示了不同抗体结合能力,预示了其成为功能表位的可能。结论:所筛选的表位具有成为H5N1亚型禽流感病毒HATh和B细胞相关抗原表位的可能。本研究为深入揭示流感病毒感染与免疫机制,H5N1亚型禽流感功能表位认知及表位疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素 H5N1 抗原表位
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