血小板因子4及肿瘤坏死因子-α在慢性牙周炎发病中的相互影响

目的:探讨血小板因子4(PF4)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在慢性牙周炎(Ⅲ期C级)发病中的相互影响。方法:收集慢性牙周炎(Ⅲ期C级)患者22例和牙周健康者22例,ELISA测定牙周治疗前、后龈沟液(GCF)和血清中PF4及TNF-α的浓度和脂多糖(LPS)体外刺激患者治疗前、后外周血的血小板后血小板释放PF4的量;流式细胞仪计算治疗前、后GCF内血小板数量。结果:患者GCF、血清中PF4和TNF-α的浓度高于牙周健康组(P<0.05),治疗后较治疗前GCF中的PF4和TNF-α降低明显(P<0.05)、血清中的PF4和TNF-α无变化(P>0.05)。LPS刺激治疗前、后血液中的血小板后,血小板释放PF4的浓度均远远高于健康对照组(P<0.01),牙周治疗后较治疗前降低明显(P<0.01)。牙周治疗前的GCF中CD41/CD61双阳性血小板数和CD45阴性细胞数分别是牙周健康者的85倍和87倍(P<0.01)。结论:PF4与TNF-α在慢性牙周炎的发病中具有协同效应。

血小板因子4经Toll样受体4上调巨噬细胞基质金属蛋白酶9表达

目的观察血小板因子4（PF4）对THP-1单核源性巨噬细胞基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达的影响,并初步探讨其机制。方法佛玻酯诱导THP-1细胞分化成巨噬细胞。巨噬细胞经不同浓度PF4（0-200μg/L）处理一定时间后,RT-PCR和Western blot检测MMP-9和Toll样受体4（TLR4）表达。为了研究TLR4在其中的作用,细胞经TLR4阻断剂预处理30 min后,再与PF4孵育特定时间,检测MMP-9表达。结果与对照组比较,50μg/L PF4即可显著上调巨噬细胞MMP-9 mRNA和蛋白水平,至100μg/L时,MMP-9 mRNA和蛋白表达达到最大效应水平,分别较对照组增高约3.8倍（P〈0.001）和1.5（P〈0.01）倍。PF4（100μg/L）也较对照组显著上调TLR4 mRNA和蛋白水平。而加入TLR4阻断剂后可逆转PF4诱导的巨噬细胞MMP-9表达上调,其mRNA和蛋白水平分别较PF4单独孵育组降低约26%和21%（P均〈0.05）。结论 PF4可能通过TLR4上调巨噬细胞MMP-9的表达。

肝素／血小板因子4抗体与肝素诱导的血小板减少症

肝素诱导的血小板减少症(heparin-induced thrombocytopenia,HIT)是肝素治疗引起的严重并发症,可导致血栓形成和栓塞。HIT的发病机制主要与肝素/血小板因子4抗体介导的免疫反应有关,IgG类是主要的致病抗体,能与肝素和血小板因子4结合形成复合物,引起血小板凝集和凝血反应增强,同时抗体还通过作用于血管内皮细胞和单核细胞参与HIT的形成。抗体相关的实验室检测包括功能性血小板试验和免疫学试验,临床表现结合实验室检测有助于本病的早期诊断和治疗,但是在检测方面目前尚没有理想的方法。本文就AHPF4抗体、HIT发病机制、临床实验室检测和免疫学试验检测等问题进行了综述。

人血小板因子4在大肠杆菌中的高效表达及活性研究

为了提高人血小板因子 4(humanplateletfactor 4,hPF4)的表达 ,在PT7 7 hPF4表达质粒的基础上 ,采用PCR定位突变技术 ,改造人血小板因子 4(hPF4)cDNA基因片段 ,去除cDNA 3′端非翻译区AT富含序列 ,改用大肠杆菌强串联终止密码子TAATAA ,成功构建了高效表达质粒pBV2 2 0 hPF4。摇瓶发酵重组人血小板因子 4的产量达 1 60mg L较原表达质粒PT7 7 hPF4表达量提高了近 80倍。经包涵体的洗涤、变性、复性后 ,采用鸡胚绒毛尿囊膜血管生成抑制实验测定复性后rhPF4的生物学活性 ,结果显示 :rhPF4具有抑制血管生成活性。

载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块中血小板因子4和Toll样受体2的表达

目的观察高脂饲养的载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块表达Toll样受体2和血小板因子4的情况,探讨血小板因子4对内皮细胞Toll样受体2表达的影响。方法高脂饲料喂养载脂蛋白E基因敲除小鼠12周,建立动脉粥样硬化模型。安乐死处死动物,原位灌流固定,取主动脉于10%中性缓冲福尔马林中固定,石蜡包埋连续切片,HE染色观察动脉粥样硬化斑块形态,免疫组织化学检测斑块中Toll样受体2和血小板因子4的表达。结果载脂蛋白E基因敲除小鼠血脂水平明显增高,主动脉HE染色可见态动脉粥样硬化病变。在载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉富含脂质斑块中Toll样受体2表达上调,其中血管内皮细胞、巨噬细胞表达Toll样受体2明显增多。载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉斑块中也发现有血小板因子4表达,主要在内皮细胞和动脉粥样硬化斑块肩部。结论1.载脂蛋白E基因敲除小鼠粥样斑块中Toll样受体2表达上调,并且Toll样受体2主要表达在粥样斑块的内皮细胞和巨噬细胞上。2.载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块中可见血小板因子4表达。

血小板因子4基因转染对肺癌细胞中血管生成因子基因表达的影响

目的 :进一步探讨人血小板因子 4(hPF4)抑制血管生成的作用机制。方法 :构建含全长hPF4cDNA重组真核表达载体pcDNA3 hPF4,将其转染到人肺巨细胞癌细胞系PLA80 1D细胞内 ,应用RT PCR及免疫组化法观察肿瘤细胞自分泌的血管内皮生长因子 (VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)、白细胞介素 8(IL 8)等的mRNA和蛋白表达水平的变化。结果 :导入pcDNA3 hPF4,PLA80 1D细胞能稳定表达hPF4mRNA ,其VEGF、bFGF、IL 8的mRNA和蛋白表达水平均明显降低 ,表明hPF4可直接调控VEGF、bFGF、IL 8等基因转录 ,影响其蛋白质生物合成。结论 :提示hPF4可直接下调肿瘤细胞自分泌的VEGF、bFGF及IL 8等血管生成因子基因转录 ,抑制肿瘤细胞释放肿瘤血管生成因子 。

血小板因子4的辐射防护作用(英文)

目的 :研究血小板因子 4 (PF4 )对全身照射小鼠的辐射防护作用 .方法 :实验分为两部分 ,第一部分 ,小鼠随机分为 4组 ,第二部分分为 3组 ,小鼠总数为 70只 .照射组和PF4保护组接受 7.5Gy60 Coγ射线全身照射 .观察小鼠 30d存活率和存活天数 .用自动细胞计数仪计数外周血细胞 .测定骨髓单个核细胞数和CFU GM的形成能力 .用紫外分光光度计测定骨髓细胞内DNA的含量 .用流式细胞仪测定细胞周期的变化 .测定小鼠的体、脾脏和胸腺的质量 .结果 :PF4能够增加照射小鼠的生存率 .增加骨髓细胞内DNA的含量及骨髓单个核细胞数 ,提高CFU GM的形成能力 ,降低造血细胞的增殖指数 ,增加照射小鼠的脾体比和胸体比 .结论 :PF4在小鼠全身照射前使用能够减少骨髓和淋巴组织的辐射损伤 ,可作为辐射防护剂 .

膀胱癌患者血清血小板因子4的表达及临床意义

目的探讨血清血小板因子4(PF4)与膀胱癌、血清缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)水平的关系。方法选取2014年1月—2015年12月宁波市医疗中心李惠利医院泌尿外科收治的膀胱癌患者130例作为膀胱癌组,选取同期该院健康体检者130例作为对照组。测定血清PF4及HIF-1α、VEGF水平。结果膀胱癌组血清PF4、HIF-1α及VEGF水平均高于对照组(P<0.05)。肿瘤分期T2~T4患者血清PF4水平高于Ta、T1(P<0.05)。单因素分析结果显示,肿瘤大小、肿瘤分期、淋巴结转移、PF4、HIF-1α及VEGF水平与膀胱癌的预后有关(P<0.05);多因素分析结果显示,肿瘤分期、淋巴结转移、PF4、HIF-1α及VEGF水平为膀胱癌预后的独立危险因素(P<0.05)。膀胱癌患者血清PF4与血清HIF-1α、VEGF水平均呈正相关(r=0.591、0.624,P<0.05)。结论膀胱癌患者血清PF4水平升高,血清PF4水平与膀胱癌分期、预后及其新生血管生成关系密切。

流式细胞术在血小板因子4保护环磷酰胺损伤小鼠骨髓中的应用价值

目的 探讨流式细胞术在研究血小板因子 4 (PF 4 )保护环磷酰胺 (CTX)损伤小鼠骨髓造血细胞中的应用价值。方法 腹腔一次性注射CTX 2 0 0mg/kg ,造成药物损伤模型。给CTX前予以PF 4预处理 ,于给药后第 5天、第 8天分别用流式细胞仪测定骨髓有核细胞DNA含量及细胞周期变化。结果 第 5天PF 4保护组的骨髓有核细胞中 ,G0 /G1期细胞百分率较CTX组明显提高 ,坏死、凋亡率下降 (P <0 0 1) ,而与对照组基本相同 (P >0 0 5 )。第 8天各组间比较无明显差异 (P >0 0 5 )。结论 PF 4对CTX损伤的小鼠骨髓造血细胞有保护作用。通过流式细胞仪测定DNA含量及细胞周期变化可阐明其化疗保护作用机制 ,表明流式细胞术具有重要的应用价值。

血液透析患者体内肝素-血小板因子4抗体的检测及其临床意义

目的检测89例维持血液透析的患者体内IgG型抗肝素-血小板因子4(H-PF4)抗体发生率,并探讨该抗体的作用。方法取血液透析患者透析前的血清,应用酶联免疫吸附法检测IgG型抗H-PF4抗体。结果8例(8.9%)患者IgG型抗H-PF4抗体阳性,其中3例发生血栓性并发症,抗体阳性组中动静脉血栓性并发症的发生率明显高于抗体阴性组(3/8vs8/81,P<0.05)。结论IgG型抗H-PF4抗体可能是血液透析患者发生血栓性并发症的危险因素。

肝素/血小板因子4抗体在维持性血液透析患者中的临床意义

目的分析维持性血液透析(MHD)患者肝素/血小板因子4(H/PF4)抗体的阳性率,并探讨其临床意义。方法选择54例海军军医大学(第二军医大学)长征医院肾内科收治的MHD患者作为研究对象,所有患者以普通肝素/低分子肝素抗凝透析≥3个月,排除感染及其他活动性疾病。收集MHD患者透析前血清,采用颗粒免疫过滤法检测IgG型H/PF4抗体。比较H/PF4抗体阳性与阴性患者的一般情况、血红蛋白水平、血小板计数、抗凝方式(普通肝素/低分子肝素)、抗凝剂剂量及透析方式(常规血液透析/夜间延长血液透析)的差异。随访3年比较H/PF4抗体阳性与阴性患者血小板变化趋势、血管通路血栓形成发生率、心血管事件、脑血管事件、住院率及死亡率等的差异。结果所有MHD患者H/PF4抗体阳性率为63.0%(34/54)。H/PF4抗体阳性和阴性患者在性别、年龄、透析龄、血红蛋白水平、血小板计数方面的差异均无统计学意义(P均>0.05)。H/PF4抗体阳性与原发病、抗凝方式、抗凝剂剂量及透析方式均无关(P均>0.05)。经过3年的随访,H/PF4抗体阳性和阴性患者的血小板变化趋势无差异(P>0.05)。H/PF4抗体阳性患者与H/PF4抗体阴性患者比较,血管通路血栓形成发生率差异无统计学意义[14.7%(5/34)vs 25.0%(5/20),P>0.05],心血管事件、脑血管事件、住院率及死亡率差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论MHD患者H/PF4抗体阳性率高。H/PF4抗体的产生与使用肝素的种类、剂量及透析方式均无关。H/PF4抗体阳性对血小板计数及不良事件包括血栓形成、心脑血管事件等均无明显影响。

血小板因子4对人肺巨细胞癌细胞系尿激酶和其受体表达的影响

目的 探讨人血小板因子 4 (hPF4 )抑制血管生成的作用机制。方法 构建含全长hPF4cDNA重组真核表达载体pcDNA3 hPF4 ,将其转染到人肺巨细胞癌细胞系PLA80 1D细胞内 ,应用RT PCR及免疫组化法观察肿瘤细胞自分泌的尿激酶(uPA)及其受体 (uPAR)等的mRNA和蛋白表达水平的变化。结果 导入pcDNA3 hPF4 ,PLA80 1D细胞能稳定表达hPF4mRNA ,其uPA及uPAR的mRNA和蛋白表达水平均明显降低 ,表明hPF4可直接调控uPA及uPAR基因转录 ,影响其蛋白质生物合成。结论 hPF4可直接下调肿瘤细胞自分泌的uPA及uPAR基因转录 ,抑制肿瘤细胞释放uPA及uPAR 。

青年抑郁障碍患者的血浆血小板因子4浓度

目的 :探讨青年抑郁障碍患者是否存在血小板异常激活。方法 :用酶联免疫吸附法测定 5 0例青年抑郁障碍患者和 30例正常青年对照的血浆血小板因子 4 (PF4 )浓度 ,比较二者是否存在差异 ,并探讨抑郁障碍的严重程度与血浆PF4浓度的相关性。结果 :抑郁障碍患者的血浆PF4浓度为 7.6 1± 1.6 2ng/ml,正常对照的血浆PF4浓度为 5 .4 5± 0 .94ng/ml,P <0 .0 1;抑郁障碍的严重程度与血浆PF4浓度没有相关性 (Pearson相关系数为 - 0 .4 8,P >0 .0 5 )。结论

肾病综合征血浆血栓球蛋白β、血小板因子4、纤维蛋白原、D-二聚体水平的临床意义

目的观察肾病综合征血浆血栓球蛋白β、血小板因子4、血浆纤维蛋白原及D-二聚体水平变化。方法分别测定35例肾病综合征（NS）患者治疗前后、32例慢性肾功能不全代偿期（CRF）患者治疗前、35名健康成年人血浆血栓球蛋白β（β-TG）、血小板因子4（PF4）、血浆纤维蛋白原（Fib）及D-二聚体水平（D-dimer），并予以统计分析。结果①NS组及CRF组治疗前患者β-TG、PF4、Fib、D-dimer均显著高于正常对照组（P〈0．01），NS组患者β-TG、PF4、Fib、D-dimer显著高于CRF组（P〈0．05）.②在糖皮质激素、血管紧张素转换酶抑制剂治疗基础上，予以低分子肝素、双嘧达莫治疗后NS组患者病情好转，β-TG、PF4、Fib、D-dimer显著下降（P〈0．05）。结论肾病综合征存在血小板异常活化、凝血纤溶异常，抗血小板、抗凝治疗是肾病综合征中的重要环节。

酶联免疫吸附法检测抗肝素/血小板因子4复合物抗体的临床意义

目的:评价酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗肝素/血小板因子4复合物抗体对临床诊断肝素诱导的血小板减少症(HIT)的敏感性及特异性。方法:选取应用肝素制剂患者197例(男120例、女77例),ELISA法进行HIT抗体检测,并根据临床4Ts评分法分析其敏感性和特异性。结果:临床诊断HIT患者6例,ELISA法检测HIT抗体对诊断HIT的敏感性为83.3%,特异性为90.0%,阳性预测值为20.8%,阴性预测值为99.4%。结论:4Ts评分系统仍是目前临床诊断HIT的重要依据,HIT抗体的检测对HIT诊断的敏感性及特异性较好、可用于辅助诊断HIT。

青年抑郁障碍患者5-羟色胺载体基因多态性与血浆血小板因子4水平的关系

目的:探讨青年抑郁患者是否存在血小板异常激活以及5-羟色胺载体基因多态性(5-hydroxytryptaminetransporterlinkedpolymorphicregion,5-HTTLPR)在血小板异常激活中的的作用。方法:以酶联免疫吸附实验测定50名青年抑郁患者及30名正常对照的血浆血小板因子4(plateletfactor4,PF4)浓度,以聚合酶链反应检测上述实验对象的5-羟色胺载体的基因多态性,进行对比。结果:抑郁患者的血浆PF4(IU/mL)比正常对照高,差异有显著性意义(7.61±1.62和5.45±0.94,t=4.68,P<0.01);抑郁患者的5-羟色胺载体的基因型构成比与正常对照差异无显著性意义;(χ2=0.16,0.02,P均>0.05);基因型为l/l的抑郁患者的血浆PF4浓度犤(9.09±1.01)IU/mL犦较其他两型的血浆PF4浓度犤(7.44±1.39)IU/mL犦高,两者差异有显著性意义(t=4.15,P<0.05)。结论:抑郁患者存在血小板的异常激活;5-HTTLPR应该不是这种异常激活的启动因素之一,但5-HTTLPR对抑郁障碍的血小板异常激活有促进作用。

血小板因子4对环磷酰胺损伤小鼠骨髓细胞增殖能力的影响

目的探讨血小板因子4(PF4)对环磷酰胺(CTX)诱导的化学损伤小鼠骨髓细胞增殖能力的影响。方法36只小鼠随机分为PF4组、CTX组和对照组。小鼠腹腔注射CTX 200 mg/kg制备化学药物损伤小鼠模型。在注射CTX前26 h和20 h,PF4组和CTX组各注射PF4(40μg/kg)和等体积的PBS缓冲液,对照组只注射等体积的PBS缓冲液。通过体外双层琼脂培养法测定PF4对CTX损伤小鼠骨髓细胞粒-巨噬细胞集落(CFU-GM)形成的影响,流式细胞仪测定细胞周期的变化。结果注射CTX后第5天CTX组骨髓细胞数(BMK)较对照组显著减少(P<0.01);第8天PF4组BMK较CTX组显著增多(P<0.01)。注射CTX后第5天CTX组骨髓CFU-GM数量较对照组和PF4组显著减少(P<0.01);第8天PF4组与CTX组的骨髓CFU-GM数量均有不同程度的上升,但两组间差异仍有统计学意义(P<0.05)。注射CTX后第5天PF4组骨髓有核细胞G0/G1期细胞百分率比CTX组显著提高,且细胞坏死、凋亡率显著下降(P<0.01),而与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。第8天各组间G0/G1期细胞百分率、细胞坏死/凋亡率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论PF4使处于G0/G1期的骨髓细胞数增多,降低了其坏死和凋亡率,增加骨髓细胞CFU-GM集落形成率。

血小板因子4对巨核细胞的保护作用及其在肿瘤化疗中的意义

目的：研究血小板因子４对造血细胞的保护作用及其机制。方法：用液体或半固体培养法及流式细胞术测定血小板因子４对ＣＤ３４阳性脐血细胞的增殖与分化的作用。结果：血小板因子４可逆性地抑制ＣＤ３４阳性细胞向巨核细胞的发育。这种抑制可保留更多的巨核系干细胞并使其对５氟尿嘧啶具有更强的抗性。血小板因子４还可抑制由血小板生成素诱导的巨核细胞生长。结论：血小板因子４通过调控血小板生成素的作用而使一些巨核细胞祖细胞保持在发育的早期阶段，这些细胞具有较高增殖潜力并对细胞周期特异性化疗药物相对不敏感。

一种合成人血小板因子4基因的简便有效方法(英文)

目的:用一种简便有效的方法合成hPF4基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行高效表达。方法:根据hPF4基因的序列,用touch-down PCR的方法合成hPF4基因,将合成的基因片断克隆到表达载体pGEX-4T-1中,构建了重组质粒pGEX-4T-1-hPF4,并将之转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达由谷胱甘肽转移酶和hPF4组成的融合蛋白。结果:用touch-down PCR的方法成功合成了hPF4基因。融合蛋白形成包含体,表达量约为全菌体蛋白的30%。结论:Touch-down PCR方法可作为合成其它目的基因的简便有效方法。BL21(DE3)/pGEX-4T-1表达系统能高效表达合成的hPF4基因,为下一步hPF4的纯化与生物学活性研究打下了基础。

谷胱甘肽转硫酶-血小板因子4融合蛋白表达载体的构建、鉴定与表达

目的 构建谷胱甘肽转硫酶－血小板因子４ （ＧＳＴ－ＰＦ４）融合蛋白表达载体，并研究其编码的蛋白质在大肠杆菌中的表达。方法通过ＲＴ－ＰＣＲ方法，从ＨＬ－６０细胞中克隆ＰＦ４ ｃＤＮＡ，然后克隆至载体ｐＵＣ１９中，序列测定后把ＰＦ４基因重组入谷胱甘肽转硫酶融合基因表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－３中，并用ＩＰＴＧ诱导其在大肠杆菌中表达。结果获得了ＰＦ４ ｃＤＮＡ。序列分析表明，该序列与ＧｅｎＢａｎｋ数据库中的序列一致。重组质粒酶切鉴定表明，ＰＦ４基因已正确插入到ｐＧＥＸ－４Ｔ－３中。重组融合蛋白表达载体ＧＳＴ－ＰＦ４经ＩＰＴＧ诱导表达，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后得到１条蛋白表达带，相对分子质量（Ｍｒ）约为３６ ０００。结论成功地构建融合蛋白表达载体ＧＳＴ－ＰＦ４，并在大肠杆菌中获得有效表达，为进一步研究打下良好的基础。