原发与继发免疫性血小板减少症患者血小板膜糖蛋白特异性抗体及其与出血评分关系的研究

目的探讨原发与继发免疫性血小板减少症(ITP)患者抗GPⅡb/Ⅲa及GPΙb/Ⅸ抗体的表达、抗体阳性表达与出血评分的关系,以及不同抗体类型出血评分的差异,为原发与继发ITP患者的诊治和出血严重程度提供临床依据。方法选取2013年10月—2020年8月在新疆医科大学第一附属医院诊断为原发ITP患者(42例)及继发ITP患者(42例)为研究对象,所有患者入院时采用ITP出血评分量表行出血评分。应用改良MAIPA法检测患者抗GPⅡb/Ⅲa和抗GPΙb/Ⅸ抗体。结果原发与继发组患者抗GPⅡb/Ⅲa抗体、抗GPΙb/Ⅸ抗体阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05),原发组患者抗体表达以抗GPⅡb/Ⅲa抗体为主,继发组抗体表达以抗GPΙb/Ⅸ抗体为主,两者抗体阳性构成比较,差异有统计学意义(P<0.05)。继发组患者整体出血程度较原发组重(P<0.05)。抗体阳性表达与出血程度的关系:(1)抗GPⅡb/Ⅲa抗体阳性患者出血程度较抗体阴性患者重(P<0.05)。(2)抗GPΙb/Ⅸ抗体阳性患者出血程度较抗体阴性患者重(P<0.05),双抗体阳性患者出血程度较抗体阴性患者重(P<0.05)。结论抗GPⅡb/Ⅲa抗体、抗GPΙb/Ⅸ抗体阳性表达对原发与继发ITP无鉴别意义,但原发ITP患者抗体表达以抗GPⅡb/Ⅲa抗体为主,继发ITP患者抗体表达以抗GPΙb/Ⅸ抗体为主。继发ITP患者临床出血程度较原发ITP患者重。抗GPⅡb/Ⅲa抗体、抗GPΙb/Ⅸ抗体及抗体双阳性患者出血程度较抗体阴性患者重。

血小板膜糖蛋白特异性抗体在ITP患儿中的表达及其与疗效、出血程度的关系分析

目的分析血小板膜糖蛋白(GP)特异性抗体在免疫性血小板减少症(ITP)患儿中的表达情况及其与疗效、出血程度的关系。方法选取2018年2月至2020年12月于唐山市妇幼保健院儿科就诊的102例ITP患儿为研究对象,并将其纳入病例组,另选取同期同院进行体检的110例健康儿童纳入健康组。病例组患儿均接受糖皮质激素冲击疗法,以4周为1个疗程,共治疗5个疗程,并随访3个月。检测并比较两组GP特异性抗体表达情况,统计ITP患儿出血部位并分析不同GP特异性抗体出血程度、疗效及预后。结果病例组抗GPⅠb/Ⅸ抗体、抗GPⅡb/Ⅲa抗体表达水平高于健康组,差异有统计学意义(t值分别为16.521、51.718,P<0.05);102例ITP患儿抗GPⅠb/Ⅸ抗体阳性、抗GPⅡb/Ⅲa抗体阳性、双抗体阳性、双抗体阴性检出率分别为15.69%、4.90%、30.39%、49.02%,0级、1级、2级出血率分别为16.67%、50.00%、33.33%;且0级出血以双抗体阳性占比(0)最低,1级出血以抗GPⅡb/Ⅲa抗体阳性占比(80.00%)最高,2级出血以抗GPⅠb/Ⅸ抗体阳性、双抗体阳性占比(62.50%、48.39%)较高,差异有统计学意义(H=38.237,P<0.05);102例ITP患儿治疗5个疗程后有效率为78.43%,随访3个月后完全缓解率为68.63%;双抗体阴性ITP患儿有效率、完全缓解率均高于抗GPⅠb/Ⅸ抗体阳性、抗GPⅡb/Ⅲa抗体阳性、双抗体阳性ITP患儿,差异有统计学意义(χ^(2)值分别为19.866、27.709,P<0.05)。结论ITP患儿抗GPⅠb/Ⅸ抗体、抗GPⅡb/Ⅲa抗体表达水平较高,且其不同表达水平与患儿出血程度、疗效及预后均有密切关系,临床可通过监测GP特异性抗体来对ITP患儿进行早期诊断,并对其出血程度、疗效、预后等进行预测。

登革热患者血小板减少与血小板膜糖蛋白特异性抗体相关

【目的】了解登革热患者血小板膜糖蛋白特异性抗体(抗GPIIb/IIIa和抗GPIb/IX)的表达,探讨登革热患者血小板减少是否与血小板膜糖蛋白特异性抗体相关。【方法】用改良的血小板抗原单抗特异性固相化法(MAIPA法)检测51例登革病毒1型(DENV-1)登革热患者和50例健康者血清的抗GPIIb/IIIa和抗GPIb/IX特异性抗体,分析血小板膜糖蛋白特异性抗体水平和血小板计数的相关性。【结果】51例DENV-1登革热患者血清中血小板膜糖蛋白特异性抗体抗GPIIb/IIIa、抗GPIb/IX和双抗体总体阳性率分别为35.3%(18/51)、37.3%(19/51)和43.1%(22/51);与50例健康者的阳性率8.0%(4/50),6.0%(3/50)和10.0%(5/50)相比,差异有统计学意义(P<0.001)。重度血小板减少登革热患者(PLT<50×109/L)血清中,抗GPIIb/IIIa和抗GPIb/IX抗体检出率为100%(6/6)和83.3%(5/6),血小板计数无减少登革热患者血清中抗体阳性率为14.8%(4/27)和29.6%(8/27),差异有统计学意义(P=0.0001,P=0.015)。在登革热血小板计数减少患者血清中,抗GPIIb/IIIa和抗GPIb/IX抗体水平与血小板计数呈负相关(r=-0.58,P<0.001;r=-0.44,P<0.05)。【结论】登革热患者血小板减少与血小板膜糖蛋白特异性抗体抗GPIIb/IIIa和抗GPIb/IX相关;免疫因素参与登革热患者血小板减少的破坏过程。

血小板膜糖蛋白特异性抗体与免疫性血小板减少症患者疗效及出血程度的关系

目的探讨血小板膜糖蛋白(GP)特异性抗体与原发免疫性血小板减少症(ITP)患者临床疗效及出血程度之间的关系。方法 2013年10月至2015年6月40例新诊断ITP患者纳入研究,所有患者均接受口服大剂量地塞米松(40 mg/d×4 d)治疗。应用改良单克隆抗体俘获血小板抗原技术(MAIPA)检测患者体内抗血小板GPⅡb/Ⅲa和GPⅠb/Ⅸ抗体,分析抗体与ITP患者疗效及出血程度的关系。结果大剂量地塞米松治疗后,血小板膜糖蛋白特异性抗体阴性的患者疗效(95.0%)明显优于抗体阳性的患者(60.0%)(P<0.05),抗GPⅠb/Ⅸ抗体阴性的患者疗效(90.9%)优于抗GPⅠb/Ⅸ抗体阳性的患者(61.1%)(P<0.05)。抗体阳性患者2级出血(55.0%)高于抗体阴性患者(20.0%)(P<0.05)。1级出血时抗GPⅡb/Ⅲa抗体阳性(9.5%)、抗GPⅡb/Ⅲa与抗GPⅠb/Ⅸ双抗体阳性(28.6%)出血程度均高于抗GPⅠb/Ⅸ阳性,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。2级出血时抗GPⅠb/Ⅸ抗体阳性(33.3%)、抗GPⅡb/Ⅲa与抗GPⅠb/Ⅸ双抗体阳性(40.0%)出血程度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论抗GPⅠb/Ⅸ抗体阳性的ITP患者对大剂量地塞米松治疗的反应差,血小板膜糖蛋白特异性抗体阳性的患者较抗体阴性患者临床出血程度重。

血小板糖蛋白抗体的差异性分布对儿童原发免疫性血小板减少症临床疗效的影响

目的探讨3种血小板糖蛋白(platelet glycoprotein,GP)特异性抗体(抗GPIb/Ⅸ、GPⅡb/Ⅲa和GPIa/Ⅱa抗体)在儿童原发免疫性血小板减少症(primary immune thrombocytopenia,ITP)患者中的差异分布对其一线治疗后疗效的影响。方法回顾性分析2019年12月至2023年12月于绵阳市中心医院住院的儿童ITP患者54例,根据抗体检测结果将其分为:A1组(抗GPⅠb/Ⅸ抗体阳性,18例)和A2组(抗GPⅠb/Ⅸ抗体阴性,36例),B1组(抗GPⅡb/Ⅲa抗体阳性,30例)和B2组(抗GPⅡb/Ⅲa抗体阴性,24例),C1组(抗GPⅠa/Ⅱa抗体阳性,16例)和C2组(抗GPⅠa/Ⅱa抗体阴性,38例)。所有患儿均给予标准一线方案治疗。分析抗体分布与治疗后血小板(platelet,PLT)计数变化趋势及疗效的关系。结果治疗后,各组患儿的PLT计数均随时间推移而显著升高(P<0.05);治疗后24h、72h、7d,A1组患儿的PLT计数均显著低于同期A2组(P<0.05);B1组和B2组患儿不同时间点的PLT计数比较差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后7d,C1组患儿的PLT计数显著低于C2组(P<0.05)。治疗后1个月,A1组和C1组患儿的疗效分别显著低于A2组和C2组(P<0.05),B1组和B2组患儿的疗效比较差异无统计学意义(P=0.081)。结论不同抗体分布的ITP患儿一线方案治疗后的疗效存在差异,抗GPⅠb/Ⅸ抗体和抗GPⅠa/Ⅱa抗体阳性的患儿疗效更差,抗GPⅡb/Ⅲa抗体阳性和阴性患儿的疗效无差异。

免疫性血小板减少症儿童外周血miRNA-150及血小板膜糖蛋白特异性抗体的表达及临床意义

目的分析免疫性血小板减少症(imumune thrombocytopenia,ITP)儿童外周血中miRNA-150以及血小板膜糖蛋白(glycoprotein,Gp)特异性抗体表达情况和临床意义。方法选择2020年1月至2022年12月济宁医学院附属医院儿科收治的ITP患儿总共98例设为观察组,另选择同时间济宁医学院附属医院儿科健康体检儿童100例设为对照组,采用实时荧光定量反应检测并比较两组研究对象外周血miRNA-150以及Gp特异性抗体水平,分析观察组不同疾病分期和不同疗效患儿外周血中miRNA-150水平及有关抗体表达情况。结果观察组患儿外周血miRNA-150水平高于对照组[(1.14±0.30)比(0.39±0.05),t=24.65,P<0.05]。观察组中新发ITP组的miRNA-150水平、抗GPIIb/Ⅲa抗体阳性率高于持续性ITP组以及慢性ITP组[(1.24±0.22)比(1.15±0.20)、(0.88±0.16),75.00%比54.05%、61.90%,F/χ^(2)值为14.35、11.38,P值均<0.05]。观察组中治疗后显效56例,有效21例,无效21例。显效组的miRNA-150水平、抗GPIIb/Ⅲa抗体阳性率均低于有效组以及无效组(0.66±0.14)比(0.98±0.23)、(1.20±0.35),12.50%比47.62%、80.95%,F/χ^(2)值为10.68、6.50,P值均<0.05),抗GPIIb/Ⅲa、抗GPIb/Ⅸ均为阴性的比例高于有效组以及无效组[83.93%比(38.10%、4.76%),P<0.05]。结论ITP儿童外周血中miRNA-150呈高表达状态,且新发患者miRNA-150、抗GPIIb/Ⅲa抗体阳性率更高,miRNA-150以及在Gp特异性抗体在评估ITP患儿疾病分期以及疗效中具有重要价值。

血小板膜糖蛋白特异性抗体在儿童免疫性血小板减少症中的表达及临床意义

目的:研究血小板膜糖蛋白特异性抗体在儿童免疫性血小板减少症中的表达及临床意义。方法:本研究为横断面调查,选择2018年3月~2019年10月在本院就诊的儿童免疫性血小板减少症患儿120例作为研究对象,另选取同期健康体检的健康患儿120例作为对照组,比较观察组以及对照组、不同出血程度、不同预后患儿的GPⅡb/Ⅲa以及GPⅠb/Ⅸ抗体水平之间的差异。分析GPⅡb/Ⅲa以及GPⅠb/Ⅸ联合诊断对儿童免疫性血小板减少症诊断效能。结果:观察组患儿的GPⅡb/Ⅲa以及GPⅠb/Ⅸ抗体水平显著高于对照组(t=107.778,69.879);不同出血程度患儿的GPⅡb/Ⅲa以及GPⅠb/Ⅸ抗体水平之间的差异存在统计学意义,随着患儿的出血程度的加重,患儿的GPⅡb/Ⅲa以及GPⅠb/Ⅸ抗体水平显著提升;缓解组患儿的GPⅡb/Ⅲa以及GPⅠb/Ⅸ抗体显著低于未缓解组(t=17.262,18.159);在对儿童免疫性血小板减少症诊断中,GPⅡb/Ⅲa以及GPⅠb/Ⅸ的联合诊断灵敏度显著高于单独检测,通过ROC曲线分析,在对儿童免疫性血小板减少症诊断中,GPⅡb/Ⅲa以及GPⅠb/Ⅸ的临界值分别为0.47,0.55。结论:儿童免疫性血小板减少症的血小板膜糖蛋白特异性抗体显著高于健康者,且随着患儿的疾病进展,患儿血小板膜糖蛋白特异性抗体GPⅡb/Ⅲa以及GPⅠb/Ⅸ显著升高,未来可通过对患儿的GPⅡb/Ⅲa以及GPⅠb/Ⅸ水平检测,对患儿的治疗效果进行预测。

清热凉血法对特发性血小板减少性紫癜血小板相关抗体和膜糖蛋白特异性自身抗体的影响

目的:观察清热凉血法对血小板相关抗体、血小板膜糖蛋白自身特异性抗体的影响,探讨中药疗效的作用机理。方法:将60例特发性血小板减少性紫癜患者随机分为治疗组30例、对照组30例,治疗组采用清热凉血法中药煎剂,对照组服用维血宁颗粒,两组疗程均为3个月,并检测两组治疗前后血小板相关抗体(PAIgA、PAIgG、PAIgM)和膜糖蛋白(GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ)特异性自身抗体的水平。结果:治疗组与对照组均能够有效的降低血小板PAIgA、PAIgG含量(P<0.01),且治疗组效果优于对照组(P<0.05);治疗后两组PAIgM均下降,但与治疗前相比无明显差异(P>0.05);治疗后两组膜糖蛋白特异性自身抗体阳性率均降低,治疗组治疗后与治疗前对比有明显差异(P<0.05),对照组治疗后与治疗前对比无显著差异(P>0.05)。结论:清热凉血法能够有效地降低血小板表面PAIgA、PAIgG的含量及血浆中血小板膜糖蛋白特异性抗体。

双重膜滤过式血浆置换联合脱敏治疗单倍体相合造血干细胞移植供者特异性抗体的临床研究

目的探讨分析双重膜滤过式血浆置换(double filtration plasmapheresis,DFPP)联合脱敏治疗单倍体相合造血干细胞移植供者特异性抗体(donor specific antibody,DSA)的疗效。方法采用DFPP联合丙种免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)、利妥昔单抗脱敏治疗DSA阳性患者,检测移植前后DSA水平,主要评估分析其植入情况。结果8例DSA性患者7例获得供者细胞稳定植入,嵌合率均为100%,1例血小板植入不良。经过DFPP、IVIG、利妥昔单抗脱敏处理后为平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)(3911±2499),均明显降低,差异均有统计学意义(t=2.101,P<0.001),8例患者中有3例转为弱阳性。干细胞回输第3天复测MFI(907士997),较干细胞回输前再次减低,差异均有统计学意义(t=2.145,P=0.002)。8例患者仅1例发生重度急性移植物抗宿主病。结论双重膜滤过式血浆置换脱敏联合大剂量IVIG和利妥昔单抗,尽量输注高剂量的干细胞,可以降低DSA水平促进供者干细胞植入。

血小板特异性糖蛋白(GPⅡb/Ⅲa)及HLA-Ⅰ类混合抗体引起血小板输注无效的检测

目的探讨血小板混合抗体引起的血小板输注无效(PTR)的检测方法。方法提取1名骨髓增生异常综合征PTR患者的DNA 200μL,通过PCR-SSP方法做血小板特异性抗原(HPA)和人类白细胞抗原(HLA)基因分型,以ELISA法检测患者血浆中的血小板特异性糖蛋白(GPⅡb/Ⅲa)和HLA抗体,用Luminex试剂盒检测HLA-Ⅰ类抗体特异性,以MAIPA法鉴定HPA抗体特异性。结果患者HPA基因型为1aa、2ab、3bb、4aa、5aa、6aa、9aa和15bb;HLA-Ⅰ类抗原为HLA-A*02、A*33,HLA-B*46、B*58;从患者血浆中检出GPⅡb/Ⅲa及HLA-Ⅰ类抗体。该患者的PTR是由GPⅡb/Ⅲa及HLA-Ⅰ类混合抗体引起。结论对于反复输血的患者,输注ABO、Rh(D)同型、HLA和HPA交叉配型相合的相容性血小板,可有效减少PTR的发生。

血小板糖蛋白特异性抗体在骨髓增生异常综合征患者中的表达及其意义

本研究探讨血小板糖蛋白特异性抗体在骨髓增生异常综合征(MDS)患者发病中的作用。采用改良的MAIPA法检测血浆血小板糖蛋白特异性抗体(抗GPⅡb/Ⅲa抗体和抗GPⅠb/Ⅸ抗体)。若患者的OD值大于正常OD值的均数+3倍标准差则为阳性。结果表明:MDS组总阳性率为16.67%(5/30),ITP组总阳性率为46.67%(14/30),两者之间差异有显著性(P<0.05)。结论:部分MDS患者的糖蛋白特异性抗体为阳性,这表明部分MDS患者的血小板减少与免疫因素有关;血小板糖蛋白特异性抗体所致的血小板破坏在MDS患者的血小板减少中可能具有一定作用,这为MDS患者的免疫抑制剂治疗提供了新的依据。

血小板输注无效患者血小板特异性糖蛋白抗体表达的实验研究

目的探讨血小板输注无效(PTR)患者血小板特异性糖蛋白抗体的表达情况。方法采用ELISA方法检测56名临床上确诊为PTR患者的血小板特异性糖蛋白抗体、应用PCR方法检测其血小板特异性抗原(HPA)1-6,15基因分型。结果 56名PTR患者检出血小板特异性糖蛋白抗体,8例表达阳性(占14.3%),包括血小板特异性糖蛋白GPⅡb/Ⅲa阳性7例,GPⅠa/Ⅱa阳性1例、GPⅠb/Ⅰx阳性1例、GPⅣ阳性1例。结合8例患者的抗体检测反应格局和HPA抗原基因型结果分析抗体的特异性为:4例存在抗-HPA3b、3例存在抗-HPA3a、1例存在抗-HPA5b。结论反复输血的血小板输注无效患者,应选择HPA抗原相匹配的血小板供者,以改善血小板输注效果。

血小板特异性糖蛋白抗体和HLA抗体在特发性血小板减少性紫癜的表达

本研究旨在探讨特发性血小板减少性紫癜(ITP)中血小板特异性糖蛋白抗体和HLA抗体的表达。选择45例ITP患者,运用ELISA方法检测患者的血浆和血小板洗脱物血小板特异性糖蛋白抗体和HLA抗体。使用HPA分型试剂盒检测7个抗原系统HPA-1、2、3、4、5、6、15。结果表明,有45例患者检测到血清或者血小板洗脱物中存在血小板特异性糖蛋白抗体,其中以抗GPⅡb/Ⅲa/HIa和抗GpⅠb/Ⅸ最为常见;有11例患者同时表达HLA抗体和血小板特异性糖蛋白抗体。对病例37和40进行家系调查,发现这些病例所产生的血小板特异性糖蛋白抗体和HLA抗体与父母血小板抗原及HLA抗原不相合密切相关。结论:应用ELISA检测ITP病例的血浆和血小板洗脱物,并与病人的临床表现相结合,对提高ITP的诊断具有重要价值。

血小板糖蛋白特异性抗体在AA患者中的表达及其意义

目的探讨血小板糖蛋白特异性抗体在再生障碍性贫血(AA)患者发病中的作用。方法采用改良的MAIPA法,检测血浆血小板糖蛋白特异性抗体(抗GPⅡb/Ⅲa抗体和抗GPIb/IX抗体)。若患者的OD值大于正常OD值的均数+3倍标准差则为阳性。结果AA组总阳性率为20.00%(6/30),特发性血小板减少性紫癜(ITP)组总阳性率为46.67%(14/30),正常对照组阳性率为0。总阳性率的比较:AA组与ITP组,P<0.05,两者之间有显著性差异。结论部分AA患者的糖蛋白特异性抗体为阳性,这表明部分AA患者的血小板减少与免疫因素有关,血小板糖蛋白特异性抗体所致的血小板破坏在AA患者的血小板减少中可能具有一定作用,这为AA的免疫抑制剂治疗提供了新的依据。

国际各类品种血小板膜糖蛋白单克隆抗体试剂对血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定检测技术的影响

本研究按国际输血学会第14届国际血小板免疫学研讨会和合作研究项目的要求,分析比较国际常用血小板膜糖蛋白单克隆抗体(McAb)各类品种对血小板抗原McAb特异性免疫固定检测技术(MAIPA)检测血小板抗体结果的影响。向参加该研究的30个实验室发放10份含已知血小板抗体特异性的血清和1份阴性对照血清样本,以及9份不同类别(GPⅡb/Ⅲa、GPⅠa/Ⅱa、GPⅠb/Ⅸ及GPⅣ)及克隆编号的血小板膜糖蛋白McAb和统一的实验研究技术方案,各参加实验室按方案进行检测并反馈结果数据,比较同一糖蛋白种类不同的McAb对MAIPA检测结果的影响。结果表明:GPⅡb/Ⅲa中AP2,Gi-5,PL2-73等几种McAb的平均S/CO值较高;GPⅠa/Ⅱa的McAb中MBC202.2和143.1的平均S/CO值较高;GPⅠb/Ⅸ的McAb中142.11和CLB-MB45(CD42b)的平均S/CO值较高;GPⅣ的McAb中131.4的平均S/CO值较高。结论不同的McAb品种对样本的检测结果存在差异,McAb对MAIPA的灵敏度有重要影响。用MAIPA法检测血小板抗体时应同时使用相同糖蛋白种类而不同克隆号的McAb,以防止血小板抗体的漏检。

免疫性血小板减少症时检测血小板相关抗体及血小板膜糖蛋白的意义

为探讨血小板表面血小板相关抗体 (血小板相关免疫球蛋白 )及血小板膜糖蛋白在免疫性血小板减少症中的诊断及预后评价方面的应用价值 ,采用流式细胞术 (FCM)测定了 76例血小板减少症患者及 30名正常人血小板表面血小板相关免疫球蛋白 (PAIg)及血小板膜糖蛋白 (CD4 1,CD6 1,GPIIb/IIIa)。结果发现 ,初治 38例特发性血小板减少性紫癜 (ITP)患者中血小板相关抗体 (PAIgG、PAIgM、PAIgA)在血小板表面阳性百分率均高于正常对照组 (P <0 .0 0 1) ,血小板膜糖蛋白均低于正常对照组 (P <0 .0 1) ;9例经激素治疗的ITP患者PAIgG ,PAIgM ,PAIgA与正常对照组相比差异无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ,血小板膜糖蛋白与正常对照组相比差异无统计学意义(P >0 .0 2 ) ;继发性血小板减少症患者 (慢性再生障碍性贫血、白血病、SLE、Evans综合征、甲亢、乙肝后肝硬化脾功能亢进 )血小板相关抗体在血小板表面阳性百分率均高于正常对照组 (P <0 .0 0 1) ,血小板膜糖蛋白均低于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ;12例治疗有效患者治疗后血小板相关抗体较治疗前下降 (P <0 .0 5 ) ,血小板膜糖蛋白上升 ,其差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。结论 :FCM用于免疫性血小板减少症患者的血小板相关抗体及血小板膜糖蛋白检测 ,具有灵敏、快速、简便的?

抗血小板膜糖蛋白单克隆抗体SZ-21基因克隆及单链抗体的构建和表达

目的将能与血小板膜糖蛋白 a特异结合的单克隆抗体 SZ- 2 1构建成单链抗体 ,为其临床应用奠定基础。方法通过逆转录及多聚酶链反应 ,扩增并克隆 SZ- 2 1的可变区基因 VH、VL ,经测序后构建 SZ- 2 1单链抗体 (SZ- 2 1Sc Fv) ,在大肠杆菌中进行表达。EL ISA和 Western印迹检测其与血小板的结合特性。结果 VH、VL 可变区基因符合小鼠抗体可变区特征 ,SZ- 2 1Sc Fv基因拼接正确。表达产物除少量为分泌型外 ,主要以包涵体形式存在 ,表达量占菌体蛋白的 2 1%。经过变性和复性后 ,该单链抗体保留了与血小板特异结合的能力。结论成功表达了 SZ- 2 1单链抗体 ,该小分子抗体具有特异结合血小板的能力 ,有望用于抗血栓治疗。

肿瘤患者血小板输注疗效影响因素及HLA-Ⅰ类抗体特异性分析

目的分析肿瘤患者血小板输注疗效影响因素及HLA-Ⅰ类抗体特异性。方法对四川省肿瘤医院2019年11月至2021年7月期间申请血小板输注的142名肿瘤患者筛查血小板抗体、判定输注疗效并分析其影响因素,对抗体阳性者检测并鉴定HLA-Ⅰ类抗体。结果肿瘤患者血小板抗体阳性率、HLA-Ⅰ类抗体阳性率及输注无效率为35.2%(50/142)、32.4%(46/142)及16.9%(24/142)。血小板抗体阳性者输注无效率为30.0%(15/50),高于血小板抗体阴性者[9.8%(9/92)](χ^(2)=9.428,P<0.05)。多因素Logistics结果显示性别(χ^(2)=12.608,P<0.001,OR=3.800,95%CI:1.819~7.940)为血小板抗体产生独立危险因素,血小板抗体(χ^(2)=8.648,P<0.05,OR=3.952,95%CI:1.581~9.878)为输注疗效独立危险因素。强阳性、阳性及弱阳性HLA-Ⅰ类抗体检出率为69.6%(32/46)、80.4%(37/46)及97.8%(45/46),检出率最高的抗体为抗-B*15∶12、抗-B*57∶03、抗-B*57∶01、抗-B*13∶02、抗-B*49∶01、抗-B*50∶01、抗-A*25∶01、抗-B*15∶01、抗-B*15∶02、抗-B*44∶02。MFI均值≥10000的HLA-Ⅰ类抗体共19种,包含抗-A*02∶01、抗-A*02∶03、抗-A*02∶06等。Wilcoxon检验示HLA-Ⅰ类抗体阳性者(n=46)CCI值低于HLA-Ⅰ类抗体阴性者(n=96)(P<0.05)。结论输注血小板的肿瘤患者中,女性为血小板抗体产生危险因素,血小板抗体阳性者容易发生输注无效,HLA-Ⅰ类抗体是主要的血小板抗体,提示HLA-Ⅰ基因配合型血小板能够改善输注疗效。

^(99)Tc^m标记人源化抗人血小板膜糖蛋白Ⅲa单克隆抗体SZ21F(ab)_2血栓栓塞显像

目的用动物血栓栓塞模型显像评估^(99)Tc^m 标记人源化抗人血小板膜糖蛋白(GP)Ⅲa单克隆抗体(简称单抗)F(ab)_2片段 SZ21F(ab)_2的应用价值。方法通过体外抑制二磷酸腺苷(ADP)诱导的犬血小板聚集实验,评估 SZ21F(ab)_2与血小板结合的亲和性和特异性。以2-亚氨基噻吩盐酸盐(IT)法修饰 SZ21F(ab)_2分子的亚氨基,以^(99)Tc^m-葡庚糖酸钠(GH)转换络合法进行标记。分别用快速薄层层析(ITLC)法和 ELISA 测定标记物的放化纯及生物活性。对3条肺动脉血栓和8条(包括上述3条)后肢深静脉血栓栓塞比格犬模型进行显像研究。结果 SZ21F(ab)_2抑制 ADP 诱导的犬富含血小板血浆(PRP)聚集实验的半数有效剂量(IC_(50))为(2.49±1.88)μg/ml。ITLC 法测得标记物的放化纯为90%～95%,ELISA 测定结果表明标记后抗体保留了免疫活性。注射显像剂后1 h,肺动脉血栓部位和后肢深静脉血栓部位均出现放射性浓聚。注射后3 h,在体显像肺动脉血栓和后肢深静脉血栓栓塞模型的放射性靶/本底(T/B)比值分别为3.03±1.18和3.51±0.62。肺动脉血栓部位和后肢深静脉血栓部位的每克组织百分注射剂量率(%ID/g)分别为0.083%ID/g 和0.076%ID/g。体外检测结果表明:肺动脉血栓与正常肺组织的单位质量放射性比值平均为12.8,后肢深静脉血栓与血液的单位质量放射性比值平均为5.2,与肌肉的比值平均为127.0。结论 ^(99)Tc^m-SZ21F(ab)_2与人血小板具有较高的亲和力,有潜在的血栓显像应用前景。

人源性抗血小板膜糖蛋白IIb/IIIa Fab噬菌体抗体库的构建

目的:构建人源性Fab噬菌体抗体库,为进一步从抗体库中筛选人源性抗GPIIb/IIIaFab抗体奠定基础。方法:利用RT-PCR和噬菌体表面展示技术,直接从血小板膜糖蛋白抗体(抗-GPIIb/IIIa)阳性的特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者脾细胞中提取总RNA,逆转录合成cDNA,扩增抗体轻链和重链Fd基因。经SacI/XbaI和XhoI/SpeI双酶切,依次将PCR产物插入噬粒载体pComb3H相应位点,电转化大肠杆菌XL1-blue,以辅助噬菌体VCSM13进行超感染,构建成人源性Fab噬菌体抗体库。结果:成功地构建库容量达6.2×106的抗血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIaFab噬菌体抗体库。结论:构建了人源性Fab抗体库,并达到建库标准,可进一步从中筛选人源性Fab抗体。