维持性血液透析患者血小板膜糖蛋白Ibα和相关标志物的表达及意义

目的研究维持性血液透析(MHD)患者外周血血小板膜糖蛋白Ibα(GPIbα)、α颗粒膜糖蛋白(CD62P)和溶酶体膜蛋白(CD63)的表达及检测血小板最大聚集率,分析其与健康对照组的差异。方法选取2015年8月至2016年12月期间在中山大学附属第八医院接受MHD的慢性肾衰竭患者49例和体检中心健康人群33例作为研究对象,采用流式细胞术检测MHD患者组和健康对照组外周血血小板膜糖蛋白GPIbα、CD62P和CD63的表达。采用电阻法检测血小板最大聚集率。结果相较于健康对照组,MHD患者组血小板膜糖蛋白GPIbα表达量降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。CD62P表达升高,差异无统计学意义(P=0.08)。CD63的表达升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。血小板最大聚集率下降,差异具有统计学意义(P<0.01)。MHD患者与健康对照组之间的血小板膜糖蛋白GPIbα、CD63表达和血小板最大聚集率的差异明显。结论MHD患者血小板GPIbα表达下降,血小板最大聚集率降低,血小板聚集功能紊乱激活血小板,而血小板CD63表达升高,血小板进一步活化导致患者高凝状态加剧,可能增加血液透析患者动静脉内瘘血栓形成等事件的发生率。

血小板膜糖蛋白Ibα基因HPA-2、Kozak序列多态性与脑梗死的相关性研究

目的探讨血小板膜糖蛋白(platelet membrane glycoprotein,GP)Ibα基因HPA-2、Kozak序列多态性与脑梗死的相关性。方法选取316例经CT/MRI证实的脑梗死患者做病例组,209例与病例组年龄、性别相匹配的无脑血管病人群做对照组。采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(polymerase chain reactionrestriction fragment lengthpolymorphism,PCR-RFLP)技术检测人类血小板抗原-2(human platelet antigen-2,HPA-2)及Kozak序列多态性在两组中的分布频率。结果病例组GPIbα基因HPA-2等位基因频率、基因型与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。病例组Kozak序列C等位基因频率为25.95%,对照组C等位基因频率为18.18%,两组间差异具有统计学意义(χ2=8.132 3,P<0.01)。结论GPIbα基因HPA-2序列多态性与脑梗死无相关性;Kozak序列多态性可能是脑梗死的遗传易感因素。

血小板膜糖蛋白Ibα基因VNTR多态性与冠心病相关性的研究

目的探讨我国河南汉族人群血小板GPIbα基因巨糖肽区串联重复序列(VNTR)多态性与冠心病的关系。方法选择404例确诊冠心病的患者和500例无心脏病史的健康体检者作对照,应用PCR方法进行VNTR多态性检测。结果扩增产物电泳显示,在中国河南汉族人群中,发现VNTR的6种基因型:AC、BC、BD、CC、CD、DD。本研究未发现VNTR各基因型及等位基因与冠心病的发生间存在明显相关性。P值均大于0.05。与其他基因型相比,在CD基因型中,Gensini冠状动脉评分≥40组与评分<40组间的差异具有显著性,P<0.05,OR=2.3(95%可信区间1.2～4.4)。结论血小板膜GPIbα基因巨糖肽区VNTR的CD基因型与冠心病的严重程度有关。

子痫前期及子痫患者血小板膜糖蛋白Ibα、Ⅱb、PLT及其相关参数的变化

目的观察子痫前期及子痫患者血小板膜糖蛋白Ibα(GPIbα)、Ⅱb(GPⅡb)、血小板计数(PLT)及其相关参数的变化。方法采用流式细胞术检测32例重度子痫前期及子痫患者、16例轻度子痫前期患者、22例孕晚期妇女剖宫产术前及剖宫产术后72h内GPIbα和GPⅡb水平的变化;同期采用全自动血细胞分析仪检测PLT及其相关参数-平均血小板体积(MPV)及血小板分布宽度(PDW)。结果剖宫产术前,与轻度子痫前期组、正常孕晚期组相比较,重度子痫前期及子痫组GPIbα及PLT明显降低(P<0.01);MPV及PDW明显升高(P<0.01),GPⅡb变化差异无显著性(P>0.05)。剖宫产术后,各组GPIbα、PLT及其相关参数均恢复至剖宫产术前正常孕晚期水平,GPⅡb变化差异无显著性。结论孕晚期重度子痫前期及子痫患者存在血小板活化、消耗状态,GPIbα、PLT及其相关参数可作为诊断监测指标。产后GPIbα、PLT及其相关参数较快恢复至正常孕晚期水平可能与胎盘娩出有关。

中国人血小板膜糖蛋白Ibα基因VNTR多态性与急性冠脉综合征的关系

目的:探讨血小板GP Ibα基因VNTR多态性与急性冠脉综合征(ACS)的关系。方法:入选135例经冠状动脉造影及临床诊断为ACS患者,PCR扩增目的DNA,采用SDS-PAGE进行VNTR多态性检测,与对照组比较有无差异。135例中39例住院期间发生心脏缺血事件,比较有事件组和无事件组VNTR多态性。结果:①VNTR多态性存在5种基因型:AB、AC、BB、BC和CC,未发现含D等位基因的个体;②基因型肺(AB+AC)和BC在ACS组中较对照组多见,但两组间无显著性差异。A等位基因频率在ACS组有较高趋势(OR:1.56),但与对照组无统计学差异。多因素Logistic回归分析发现5种基因型和3种等位基因的OR值无显著性意义;③发生院内缺血事件组AB基因型较无事件组偏多,但两组间无显著性差异。多因素逐步logistic回归分析发现各基因型不是影响缺血事件的独立变量。根据OR值可以发现重复序列数越多的等位基因,其频率在有事件组就越高的趋势(OR_C:0.72;OR_B:1.33;OR_A:1.50)但两组间无统计学差异。结论:血小板GPIbα巨糖肽区域的VNTR基因多态性与ACS间无显著相关性,对中国人ACS患者住院期间联合终点的发生无显著影响。

天津地区汉族人血小板膜糖蛋白Ib_α基因VNTR多态性的分布

目的 :探讨血小板膜糖蛋白Ibα基因VNTR多态性在天津地区汉族人群中的分布。方法 :聚合酶链反应扩增目的片断 ,根据产物的长度判断VNTR基因型。结果 :天津地区汉族人群等位基因A、B、C、D的频率分别为0.43 % ,3.33 % ,60.14%和36.10 %。结论 :天津地区汉族人群GPIbα基因VNTR多态性分布以等位基因C和D为主。

原发与继发免疫性血小板减少症患者血小板膜糖蛋白特异性抗体及其与出血评分关系的研究

目的探讨原发与继发免疫性血小板减少症(ITP)患者抗GPⅡb/Ⅲa及GPΙb/Ⅸ抗体的表达、抗体阳性表达与出血评分的关系,以及不同抗体类型出血评分的差异,为原发与继发ITP患者的诊治和出血严重程度提供临床依据。方法选取2013年10月—2020年8月在新疆医科大学第一附属医院诊断为原发ITP患者(42例)及继发ITP患者(42例)为研究对象,所有患者入院时采用ITP出血评分量表行出血评分。应用改良MAIPA法检测患者抗GPⅡb/Ⅲa和抗GPΙb/Ⅸ抗体。结果原发与继发组患者抗GPⅡb/Ⅲa抗体、抗GPΙb/Ⅸ抗体阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05),原发组患者抗体表达以抗GPⅡb/Ⅲa抗体为主,继发组抗体表达以抗GPΙb/Ⅸ抗体为主,两者抗体阳性构成比较,差异有统计学意义(P<0.05)。继发组患者整体出血程度较原发组重(P<0.05)。抗体阳性表达与出血程度的关系:(1)抗GPⅡb/Ⅲa抗体阳性患者出血程度较抗体阴性患者重(P<0.05)。(2)抗GPΙb/Ⅸ抗体阳性患者出血程度较抗体阴性患者重(P<0.05),双抗体阳性患者出血程度较抗体阴性患者重(P<0.05)。结论抗GPⅡb/Ⅲa抗体、抗GPΙb/Ⅸ抗体阳性表达对原发与继发ITP无鉴别意义,但原发ITP患者抗体表达以抗GPⅡb/Ⅲa抗体为主,继发ITP患者抗体表达以抗GPΙb/Ⅸ抗体为主。继发ITP患者临床出血程度较原发ITP患者重。抗GPⅡb/Ⅲa抗体、抗GPΙb/Ⅸ抗体及抗体双阳性患者出血程度较抗体阴性患者重。

川崎病患儿血小板膜糖蛋白Ibα基因多态性分析

目的研究血小板膜糖蛋白Ibα（GPIbot）基因HPA-2a／b多态性与KD发病及并发冠状动脉损伤（CAL）之间的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性内切酶片断长度多态性分析技术结合琼脂糖凝胶电泳技术，检测30例KD患儿和60例健康对照组儿童GPIbα基因HPA-2a／b多态性位点的基因型和等位基因分布。结果本组KD病例和健康对照组儿童GPIbα基因HPA-2a／b的基因型均只有TC型和CC型，而未发现TT型。KD组GPIbα基因HPA-2a／b多态性的CC、TC、TT基因型分布频率和C、T等位基因频率与健康对照组比较差异均无统计学意义（χ2=0．052、0．048，P均〉0．05），KD组中合并CAL组与无CAL组基因型分布频率和等位基因频率比较差异亦无统计学意义（χ2=2．672、2．481，P均〉0．05）。结论GPIba基因的HPA-2a／b多态性与KD及其CAL的发生均无明显相关性。

整合素血小板膜糖蛋白IIb、IIIa在系膜增殖性肾炎中的表达

目的 :观察整合素血小板膜糖蛋白Ⅱb、Ⅲa(GPⅡb、GPⅢa)在人类系膜增殖肾炎 (MsPGN)中肾内表达 ,探讨GPⅡb Ⅲa在MsPGN的作用。方法 :18例肾活检标本均行光镜HE、PAS、PASM Masson染色 ,电镜及免疫荧光检查 ,以SABC法测定肾组织中GPⅡb、GPⅢa、P 选择素 (P 140 )、纤维连接蛋白 (FN)、粘连蛋白 (LN)表达与正常对照组分别比较 ,并行计算机图像分析。结果 :PAS阳性物 (PAS+ )、PASM阳性物 (PASM+ )及FN、LN明显增生 ;GPⅡb、GPⅢa、P 140表达上调 ;肾小球细胞数 (n)、平均肾小球体积 (AVG)及肾小球硬化指数显著增加 ;肾小管、间质轻度受损。结论 :GPⅡb、GPⅢa在肾小球及肾小管间质表达上调与系膜细胞基质增生、细胞浸润、肾小球硬化相关 ;可能与肾小球疾病中凝血功能紊乱。

早产儿颅内出血与血小板参数变化及血小板膜糖蛋白GPIbαHPA-2基因多态性的相关性研究

目的探讨早产儿颅内出血(ICH)与外周血血小板参数变化的关系,分析血小板膜糖蛋白GPIbαHPA-2基因多态性与ICH的相关性。方法选择2005年5月至2007年5月在温州医学院附属育英儿童医院新生儿科住院的胎龄<34周、出生体重<1500g的早产儿为研究对象。按生后2周内头颅B超检查结果,分为ICH组和无ICH组。ICH组根据ICH分度结果分为轻度(Ⅰ和Ⅱ度)和重度ICH(Ⅲ和Ⅳ度)亚组。入选患儿在入院第2天检测血小板各项参数,采用PCR及限制性内切酶分析法检测血小板膜糖蛋白GPIbαHPA-2基因多态性。各组等位基因比例采用Hardy-Weinberg平衡检验。结果ICH组纳入68例,其中轻度ICH亚组53例,重度ICH亚组15例;无ICH组纳入75例。ICH组PLT和平均血小板体积(PCT)显著低于无ICH组,P<0.05;重度ICH亚组较轻度ICH亚组上述指标下降更显著,P<0.05。ICH组58/68例、无ICH组65/75例成功进行了血小板膜糖蛋白GPIbαHPA-2基因多态性检测。ICH组血小板膜糖蛋白GPIbαHPA-2的各基因型比例为:TT77.6%(45/58例),TM17.2%(10/58例),MM5.2%(3/58例);M基因频率为13.8%(16/116频次);无ICH组为TT89.2%(58/65例),TM10.8%(7/65例),MM0;M基因频率为5.4%(7/130频次)。两组M基因频率差异有统计学意义。轻度ICH亚组与重度ICH亚组M基因频率差异无统计学意义(12.5%vs20.0%)。ICH组和无ICH组各基因型比例符合Hardy-Weinberg遗传平衡。含有M等位基因患儿PLT和PCT显著低于无M等位基因患儿。结论①ICH早产儿存在血小板参数异常现象;②血小板膜糖蛋白GPIbαHPA-2基因多态性与早产儿ICH发生的关联性值得更细化的研究;③血小板膜糖蛋白GPIbαHPA-2M等位基因可能与早产儿ICH的严重程度无关。

2型糖尿病患者血小板膜糖蛋白Ib/IX/V复合物表达的研究

目的观察2型糖尿病(T2DM)患者血小板膜糖蛋白(GP)Ib/IX/V复合物及其组分GPIbα的表达。方法将51例T2DM患者分为控制良好组(WCP组)和控制不良组(PCP组),并根据有无血管病变分为伴血管病变组(VD组)和不伴血管病变组(NVD组)。同时选取23例健康体检者为正常对照组(NC组)。检测受试者的生化指标、血小板GPIb/IX/V复合物和GPIbα的表达,并采用比浊法检测血小板最大聚集率(MA)。结果(1)PCP组空腹血糖(FPG)和糖化血红蛋白(HbA1c)与NC组、WCP组比较,差别有统计学意义(P<0.01);WCP组和PCP组的空腹胰岛素(FINS)、BMI、血脂(TC、TG、HDL、LDL)与NC组比较,差别有统计学意义(P<0.01)。(2)WCP组、PCP组GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ复合物平均荧光强度(MFI)与NC组比较,差别有统计学意义(P<0.05);且PCP组GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ复合物的MFI与WCP组比较,差别亦有统计学意义(P<0.05)。WCP组、PCP组GPⅠbαMFI与NC组比较,差别有统计学意义(P<0.01);且PCP组GPⅠbαMFI与WCP组比较,差别亦有统计学意义(P<0.01)。(3)相关性分析显示,T2DM患者GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ复合物的MFI与FPG、HbA1c、FINS呈负相关(P<0.05);GPⅠbαMFI与FBG、HbA1c呈负相关(P<0.05)。结论T2DM患者不伴血管病变时即存在血小板活化,发生血管病变后活化更明显,且血小板活化与血糖呈正相关。血小板GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ复合物作为凝血酶和血管性血友病因子的受体,可能参与了T2DM血管病变的发生、发展。

人源性抗血小板膜糖蛋白IIb/IIIa Fab噬菌体抗体库的构建

目的:构建人源性Fab噬菌体抗体库,为进一步从抗体库中筛选人源性抗GPIIb/IIIaFab抗体奠定基础。方法:利用RT-PCR和噬菌体表面展示技术,直接从血小板膜糖蛋白抗体(抗-GPIIb/IIIa)阳性的特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者脾细胞中提取总RNA,逆转录合成cDNA,扩增抗体轻链和重链Fd基因。经SacI/XbaI和XhoI/SpeI双酶切,依次将PCR产物插入噬粒载体pComb3H相应位点,电转化大肠杆菌XL1-blue,以辅助噬菌体VCSM13进行超感染,构建成人源性Fab噬菌体抗体库。结果:成功地构建库容量达6.2×106的抗血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIaFab噬菌体抗体库。结论:构建了人源性Fab抗体库,并达到建库标准,可进一步从中筛选人源性Fab抗体。

脑梗死患者血小板活化与膜糖蛋白Ibα基因多态性研究

目的 观察脑梗死患者血小板表面活化标志物的表达以及血小板膜糖蛋白 (GP)Ibα基因的变异 ,探讨血栓性疾病血小板体内活化与基因多态性的关系。方法 以流式细胞术 (FCM )测定10 2例脑梗死患者血小板GPIb、P 选择素的表达及纤维蛋白原的结合 ,同时应用聚合酶链反应(PCR)技术结合限制性内切酶分析研究GPIbα基因血小板同种抗原 (HPA) 2和可变数目串联重复序列 (VNTR)多态性与等位基因频率分布特点 ,并与相应正常人结果进行比较。结果 脑梗死患者P 选择素及纤原结合明显高于正常组 (P <0 0 1) ,GPIb表达低于正常组 (P <0 0 5 ) ;而GPIbαHPA 2、VNTR基因多态性与对照组相比无明显差异。结论 脑梗死患者体内存在血小板活化 ,但与GPIbαHPA 2及VNTR基因多态性无关。

血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂在AIS中的应用进展

急性缺血性脑卒中(AIS)是脑卒中最常见的类型,具有高发病率、高致残率、高病死率、高复发率等特征。抗血小板治疗一直是AIS急性期和二级预防的重要手段。传统的抗血小板药物,如阿司匹林、氯吡格雷,治疗AIS具有较好的临床效果,但由于可增加出血风险,限制了其临床应用。血小板膜糖蛋白(GP)Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂是一类新型的抗血小板药物,可通过阻断血小板聚集的最终共同通路,发挥强效抗血栓作用。目前,阿昔单抗、替罗非班和依替巴肽三种GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂已被批准用于临床。GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂单独治疗,或联合静脉溶栓治疗,或联合血管内治疗,在预防AIS进展、抑制支架血栓形成、改善功能预后和降低病死率等方面均展现出了较好的临床效果。但GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂可能会导致血小板减少症和出血等并发症,治疗期间需密切监测血常规和凝血功能,以提高其用药安全性。

河南汉族动脉硬化性脑梗死人群血小板膜糖蛋白Iba基因VNTR多态性检测

目的:探讨河南汉族人群中血小板膜糖蛋白Iba(GPIba)基因VNTR多态性与动脉硬化性脑梗死(ABI)的相关性。方法:采用聚合酶链扩增反应检测434例河南汉族ABI患者(ABI组)和500例正常对照者(对照组)GPIba基因VNTR的多态性,比较ABI组和对照组各基因型频率的差异。结果:在河南汉族人群中,ABI组GPIba基因CD基因型频率(44.5%)和BC基因型频率(2.3%)明显高于正常对照组(37.0%和0.4%)[χ2=5.381和6.642,P<0.05;OR(95%CI)=1.364(1.049～1.773)和5.873(1.280～26.950)],DD基因型频率(13.1%)低于正常对照组(20.2%)[χ2=8.254,P=0.004;OR(95%CI)=0.597(0.419～0.851)]。结论:VNTR多态性中CD和BC杂合基因型可能是河南地区汉族人群ABI发生的遗传危险因子,而DD基因型可能是遗传保护因子。

血小板粘附率和膜糖蛋白Ib含量测定在尿毒症出血症状中的意义

对尿毒症患者血小板数目,粘附率和膜糖蛋白Ib含量进行了测定。结果表明:尿毒症组血小板数目和血小板粘附率均显著低于对照组(P<0.0I),血小板膜糖蛋白Ib含量测定也显著低于对照组(P<0.01),而且尿毒症组血小板粘附率与膜糖蛋白Ib之间呈现有意义的正相关(γ=0.46 P<0.01)。实验结果提示,尿毒症患者出血倾向的发生机制与血小板量和其他质的改变有密切关系,尤其血小板膜糖蛋白Ib含量的变化可能是主要原因之一。本实验见到了膜糖蛋白Ib与血小板粘附功能关系密切,血液中储积的毒性代谢产物可能是导致血小板膜损害和功能障碍的主要原因。

一种水解血小板膜糖蛋白GPIb的眼镜蛇毒组分的分离纯化与鉴定

目的 建立从中华眼镜蛇毒中分离、纯化可水解血小板膜糖蛋白Ｉｂ（ｐｌａｔｅｌｅｔｍｅｍｂｒａｎｅｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎＩｂ，ＧＰＩｂ）组分的方法。方法 肝素亲和层析，分子筛层析，ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳＰＡＧＥ）。结果 经ＨｅｐａｒｉｎＳｅｈｐａｒｏｓｅＣＬ６Ｂ亲和层析及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１５０分子筛层析，从中华眼镜蛇毒纯化出可降解纤维蛋白原和ＧＰＩｂ的活性组分，回收率为０－８８％，ＳＤＳＰＡＧＥ证实此组分为相对分子量约４７１００的单肽链蛋白。结论 此方法成功地从中华眼镜蛇毒中纯化出了水解ＧＰＩｂ的组分，具有高效、简便的特点。

血小板膜糖蛋白Ib(GPIb)在我国蒙古族人群中分布的多态性

血小板膜糖蛋白Ｉｂ（ＧＰＩｂ）在凝血过程中起重要作用。已有报道ＧＰＩｂ在人群中呈多态性分布，表现为分子量稍有差异。本文旨在研究ＧＰＩｂ在我国蒙古族人群中分布的多态性，以期探索不同民族之间是否存在差异。血小板分离自１０２名蒙古族健康青少年。血小板膜蛋白经ＳＤＳ┐聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ┐ＰＡＧＥ）后，再转移至硝酸纤维素膜上（ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｉｎｇ），用生物素化的麦胚凝集素（ＷＧＡ／Ｂｉｏ）偶联生物素卵白素结合的辣根过氧化酶（ＡＢＣＫｉｔ）染色，以４┐氯┐１┐萘酚显色，结果显示出硝酸纤维素膜上的ＧＰＩｂα链，分子量分别为１４１，１３６，１３２，１２８ＫＤ，即Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ四型，其出现频率分别为０．０７８，０．４６１，０．３９２及０．０６９。这一结果与我国汉族人群中ＧＰＩｂ分布的多态性极为相似，均出现有四型。各型出现的基因频率在两个民族之间无显著性差异；其所构成的表型在两个民族之间似有不同。

中国鄂温克族和达斡尔族人群中血小板膜糖蛋白Ib(GPIb)的多态性

研究旨在进一步探索同一人种的不同民族之间 GPIb的多态性是否存在差异。血小板从 84名健康鄂温克族、85名达斡尔族青年志愿者采血分离而获得。血小板样品经 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS- PAGE)后 ,再转移至硝酸纤维素膜上(Western blotting) ,用生物素化的麦胚凝集素 (WGA/ Bio)偶联辣根过氧化酶复合物试剂盒 (ABC kit)分步孵育 ,再以 4-氯 - 1-萘酚显影。膜上呈现的深灰色带即是 GPIbα链 ,其分子量分别为 141、 136、 132、 12 8k D,此即 A、B、C、D四型 ,此为基因型 ,其中每两型构成一个表型。本研究证明 ,在我国鄂温克族人群中 ,等位基因 A、B、C、D的频率分别为 0 .113、0 .375、0 381、 0 .131;在达斡尔族中 ,A型为 0 .12 4、B型为 0 .40 6、C型为 0 .35 9、D型为 0 .112。经统计学分析 ,在这两个民族的人群之间 ,其 GPIb各基因频率无显著性差异。两个民族人群的 GPIb表型经卡方检验也无显著性差异。由此结果说明 ,鄂温克、达斡尔两个民族的人群之间 。