绵羊血浆外泌体中miR-485-3p、miR-154-3p/5p基因簇生物信息学分析

该文以新吉细毛羊与小尾寒羊为研究对象。使用miRBase数据库、GO功能分析和KEGG通路富集分析等生物信息学方式对miR-485-3p、miR-154-3p/5p基因簇进行靶基因预测和分析。结果表明:miR-485-3p交集靶基因72个、miR-154-3p交集靶基因29个、miR-154-5p交集靶基因23个。GO功能分析与KEGG分析提示靶基因可与小蛋白偶联进行蛋白质修饰、和蛋白质泛素化以及细胞衰老、昼夜节律和NOD样受体通路相关;转录因子预测可知共同转录因子为235个;通过TF-miRNA-mRNA调控网络图可知,miR-485-3p、miR-154-3p和miR-154-5p基因簇上游转录因子和下游靶基因共同调控生物体过程;分析提示TRIM28、ZNF92和SPI1等转录因子在mRNA上游扩大miRNA基因簇强沉默功能,使oar-miR-485-3P、oar-miR-154-3p和oar-miR-154-5p通过靶基因DYRK1A参与细胞周期、细胞增殖和细胞凋亡从而影响羊毛纤维机制的表达。

血浆外泌体源性miR-29b-3p靶向IGF1对七氟醚后处理低氧/复氧心肌细胞损伤的作用

目的探讨心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠血浆外泌体源性miR-29b-3p靶向IGF1在七氟醚(SEV)后处理的低氧/复氧(H/R)心肌细胞中的作用。方法借助GEO数据库筛选在MIRI中差异表达的miRNAs,通过H/R处理心肌细胞以构建MIRI细胞模型。干预经SEV后处理的MIRI细胞模型中miR-29b-3p和IGF1的表达,随后通过MTT检测心肌细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,ELISA检测各组心肌细胞中炎性因子(IL-1β和TNF-α)的变化。结果与Normal组比较,miR-29b-3p在MIRI大鼠血浆外泌体中表达增强(P<0.05),miR-29b-3p和IGF1的靶向结合关系被证实(P<0.05)。SEV后处理后,H/R刺激的心肌细胞中miR-29b-3p的表达降低,而IGF1的表达升高(均P<0.05)。血浆外泌体中miR-29b-3p过表达可明显抑制SEV后处理的H/R细胞存活率,加重细胞凋亡和炎性反应,敲减miR-29b-3p则相反(均P<0.05)。挽救实验数据表明,过表达IGF1可部分逆转过表达miR-29b-3p对SEV后处理的H/R细胞损伤的影响(均P<0.05)。结论血浆外泌体源性miR-29b-3p靶向IGF1促进SEV后处理的H/R心肌细胞损伤。

循环血浆外泌体及其应用研究进展

外泌体是直径为30~150 nm的磷脂双分子层细胞外小囊泡,富含蛋白质、脂质和核酸等生物活性物质。外泌体广泛分布于血浆、尿液、脑脊液等多种体液中,人体几乎所有的细胞都可分泌外泌体。越来越多的研究表明,外泌体具有重要的生物学功能,不仅参与调控多种生理和病理过程,并且在疾病的诊断、发生发展和治疗中都发挥着重要作用。来源于循环血浆的外泌体因更易于获取标本和开展实时检测,成为近年来外泌体研究中的热点研究对象。本文主要就循环血浆外泌体在相关疾病研究和临床应用等方面进展加以综述,以期为促进循环血浆外泌体的深入研究提供参考。

特应性皮炎患儿血浆外泌体LncRNA MIR155HG表达与病情严重程度的相关性

目的检测血浆外泌体长链非编码RNA(LncRNA)MIR155HG在特应性皮炎(AD)患儿中的表达并分析其与病情严重程度的关系。方法选择2021年12月—2023年1月河北省儿童医院皮肤科收治的AD患儿118例为AD组,同期医院体检健康儿童120例为健康对照组。分离受试儿童血浆外泌体并进行鉴定,检测血浆外泌体LncRNA MIR155HG表达水平。比较不同病情程度AD患儿血浆外泌体LncRNA MIR155HG表达水平及AD积分指数(SCORAD)评分;Pearson法分析AD患儿血浆外泌体LncRNA MIR155HG与SCORAD评分相关性;受试者工作特征曲线(ROC)分析血浆外泌体LncRNA MIR155HG表达水平对中度、重度AD的诊断价值。结果与健康对照组比较,AD组患儿血浆外泌体LncRNA MIR155HG表达水平显著升高(t/P=23.843/<0.001);轻度亚组、中度亚组、重度亚组AD患儿血浆外泌体LncRNA MIR155HG表达水平及SCORAD评分依次升高(F/P=41.773/<0.001、260.201/<0.001);AD患儿血浆外泌体LncRNA MIR155HG表达水平与SCORAD评分呈正相关(r/P=0.673/<0.001);ROC曲线显示,血浆外泌体LncRNA MIR155HG表达水平诊断中重度AD的曲线下面积(AUC)分别为0.831、0.802,诊断中度和重度AD的AUC比较差异无统计学意义(Z/P=1.008/0.313)。结论AD患儿血浆外泌体LncRNA MIR155HG高表达,且其可能与AD病情的严重程度有关,对AD严重程度有较高诊断价值,临床监测血浆外泌体LncRNA MIR155HG水平变化可能对靶向防治AD患儿有重要意义。

血浆外泌体淋巴细胞白血病缺失基因1水平对表皮生长因子受体/间变性淋巴瘤激酶野生型进展期非小细胞肺癌患者免疫治疗反应的预测价值

目的 探讨血浆外泌体淋巴细胞白血病缺失基因1(exoDLEU1)在预测表皮生长因子受体(EGFR)/间变性淋巴瘤激酶(ALK)野生型进展期非小细胞肺癌(NSCLC)患者免疫治疗反应中的临床意义。方法 收集2017年6月至2019年2月于浙江省湖州市第一人民医院接受免疫治疗的91例EGFR/ALK野生型进展期NSCLC患者的血液样本,根据免疫治疗后的反应将其分为反应组(53例)和无反应组(38例)。提取两组治疗前血浆外泌体,通过实时荧光定量PCR检测两组exoDLEU1表达,采用logistic回归分析EGFR/ALK野生型进展期NSCLC患者免疫治疗反应情况的影响因素,绘制受试者操作特征(ROC)曲线评估血浆exoDLEU1水平对患者免疫治疗反应情况的预测价值。结果 透射电镜下可见囊泡具有圆形或椭圆形膜,直径为30~150 nm,原始浓度为6.6×10^(10)个粒子/ml,流式细胞仪检测及蛋白质印迹法结果显示,提取物含有外泌体标志物CD63、CD9、CD81、热休克蛋白70。实时荧光定量PCR结果显示,反应组治疗前血浆exoDLEU1水平低于无反应组,差异有统计学意义(P<0.05)。影响因素分析结果显示,血浆exoDLEU1表达水平是EGFR/ALK野生型进展期NSCLC患者免疫治疗无反应的独立影响因素(OR=6.119,95%CI:2.768~13.526,P<0.05)。ROC曲线分析显示,血浆exoDLEU1表达水平预测EGFR/ALK野生型进展期NSCLC患者免疫治疗反应情况的曲线下面积为0.900 (P<0.05)。结论 EGFR/ALK野生型进展期NSCLC患者免疫治疗前的血浆exoDLEU1水平可作为预测其治疗反应的指标,有助于在临床中筛选出免疫治疗更易获益的患者。

不同预处理及分离方法提取山羊血浆外泌体效果的研究

为了探讨不同预处理及分离方法提取山羊血浆外泌体的效果,试验利用过滤膜对采集的血浆样品进行预处理后分为0.22μm过滤组、0.45μm过滤组和0.80μm过滤组,同时设置未过滤组,然后采用超速离心法和试剂盒法提取不同预处理组的血浆外泌体,通过透射电子显微镜、纳米粒径分析仪及Western-blot方法对血浆外泌体的形态、大小及标志蛋白的表达进行分析。结果表明:超速离心法和试剂盒法提取的血浆外泌体的粒径大部分分布在30~200 nm之间;外泌体的结构完整,大小不一,呈圆盘状或茶托样,并且0.22μm过滤组采用超速离心法提取的外泌体在透射电子显微镜下的形态最清晰;0.80μm过滤组采用试剂盒法提取的血浆外泌体纳米粒径显著大于超速离心法(P<0.05),未过滤组及不同过滤组采用试剂盒法提取的血浆外泌体蛋白浓度显著高于超速离心法(P<0.05);不同预处理及分离方法提取的血浆外泌体表面均有标志蛋白TSG101、CD63、CD9的表达。说明经0.22μm过滤膜预处理并结合超速离心法提取的血浆外泌体纯度最高,经0.80μm过滤膜预处理并结合试剂盒法提取的血浆外泌体产量最高。

急性冠脉综合征患者血浆外泌体NEAT1,miR-204和MMP-9的表达水平及临床意义

目的检验急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者血浆外泌体富含核富集的转录物1(Nucleraenriched autosomal transcript,NEAT1),微小核糖核酸(microRNA,miR)-204和基质金属蛋白酶(metalloproteinase,MMP)-9的表达水平,并研究其对ACS的诊断价值,分析其与冠脉病变严重程度的相关性。方法选取2020年5月~2021年5月于首都医科大学附属北京世纪坛医院诊断为ACS的120例患者作为实验组,其中急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)患者72例,不稳定心绞痛(unstable angina,UA)患者48例;另选取行冠脉造影检查无明显狭窄的108例体检者作为Control组。提取所有研究对象的血浆外泌体,并采用透射电镜和Western blot鉴定该外泌体。应用试剂盒提取血浆外泌体总RNA,采用qRT-PCR法检测外泌体NEAT1和miR-204的表达水平,采用Western blot检测外泌体MMP-9蛋白表达水平。应用Pearson相关分析明确外泌体NEAT1,miR-204和MMP-9水平与病变严重程度评分(Gensini评分)之间的相关性。Logistic回归模型判断外泌体NEAT1,miR-204和MMP-9是否可作为诊断ACS的独立危险因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,根据曲线下面积(AUC)分析三者表达水平对ACS病变严重程度的预测价值。结果透射电镜观察到,血浆外泌体呈椭圆形双层膜囊泡结构,Western blot结果显示,CD63和CD81蛋白在外泌体中呈高表达。Control组NEAT1,miR-204和MMP-9表达水平分别为0.62±0.08,1.02±0.20和0.97±0.15,UA组患者NEAT1,miR-204表达水平分别为0.65±0.11,1.05±0.18,与Control组比较差异无统计学意义(t=2.790,3.225,P>0.05),而MMP-9表达水平(1.15±0.20)较Control组明显升高,差异有统计学意义(t=13.682,P<0.05);AMI组患者血浆外泌体NEAT1,miR-204和MMP-9表达水平分别为0.98±0.15,1.22±0.23和1.37±0.25,较Control组明显升高,差异均有统计学意义(t=12.112,9.885,21.530,均P<0.05)。Pearson相关性分析显示,AMI患者外泌体NEAT1,MMP-9与Gensini评分呈中度正相关,miR-204与Gensini评分呈弱正相关,差异有统计学意义(r=0.179~0.548,均P<0.05)。UA患者外泌体NEAT1与Gensini评分呈弱正相关(r=0.207,P=0.032),MMP-9与Gensini评分呈中度正相关(r=0.574,P<0.05),但miR-204与Gensini评分无相关性(r=0.108,P=0.465)。Logistic回归分析结果显示,外泌体NEAT1,miR-204和MMP-9均可作为AMI预测的独立危险因素,但外泌体miR-204不可作为预测UA的独立危险因素。ROC结果显示,AMI组外泌体NEAT1,miR-204和MMP-9水平及联合检测对应AUC分别为0.821,0.702,0.750和0.905,UA组外泌体NEAT1,miR-204和MMP-9水平及联合检测对应AUC分别为0.776,0.682,0.718和0.883,三者对AMI的诊断价值均高于UA,且联合检测具有更高诊断价值。结论血浆外泌体NEAT1,miR-204和MMP-9具有预测冠状动脉病变严重程度的潜力,并且三者联合检测对AMI具有较高诊断价值,可作为辅助诊断AMI的潜在标志物。

慢性心力衰竭患者血浆外泌体LncRNA H19、miR-214表达与炎性因子和左心室重构的关系

目的分析慢性心力衰竭(CHF)患者血浆外泌体长链非编码RNA H19(LncRNA H19)、微小RNA-214(miR-214)表达与血清炎性因子和左心室重构的关系。方法选取2020年7月-2022年9月内蒙古自治区人民医院心血管内科收治CHF患者120例为CHF组,另选取同期医院体检健康志愿者40例为健康对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测血浆外泌体LncRNA H19、miR-214表达,酶联免疫吸附法检测炎性因子[白介素(IL)-1β、IL-6、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平,超声心动图检测左心室重构指标[左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室后壁厚度(LVPWT)、舒张末期室间隔厚度(IVST)和左心室心肌质量指数(LVMI)]。通过StarBase数据库预测LncRNA H19与miR-214的关系。采用Pearson/Spearman相关性分析CHF患者血浆外泌体LncRNA H19、miR-214表达与纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级、炎性因子和左心室重构指标的相关性。绘制受试者工作特征曲线(ROC)获得血浆外泌体LncRNA H19、miR-214预测CHF患者发生左心室重构的效能。结果与健康对照组比较,CHF组血浆外泌体LncRNA H19表达和血清IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平及LVEDD、LVPWT、IVST、LVMI升高,miR-214表达降低(t=15.837、93.717、86.669、103.761、76.500、9.953、29.647、30.652、13.832、11.256,P均<0.001)。NYHA心功能分级Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级CHF患者血浆外泌体LncRNA H19表达和血清IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平及LVEDD、LVPWT、IVST、LVMI依次升高,miR-214表达依次降低(F=247.164、182.669、259.385、298.349、235.816、196.860、171.320、182.099、179.760、138.863,P均<0.001)。经StarBase数据库预测,LncRNA H19与miR-214存在互补序列。Pearson/Spearman相关性分析显示,CHF患者血浆外泌体LncRNA H19与IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α、NYHA心功能分级、LVEDD、LVPWT、IVST、LVMI呈正相关,与miR-214呈负相关(r=0.739、0.774、0.789、0.767、0.899、0.753、0.735、0.743、0.752、-0.885,P均<0.001);miR-214与IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α、NYHA心功能分级、LVEDD、LVPWT、IVST、LVMI呈负相关(r=-0.785、-0.783、-0.779、-0.773、-0.839、-0.761、-0.767、-0.745、-0.751、-0.885,P均<0.001)。血浆外泌体LncRNA H19、miR-214及二项联合预测左心室重构的曲线下面积(AUC)分别为0.780、0.779、0.877,二项联合的AUC高于单项预测(Z=3.026、3.114,P=0.003、0.002)。结论CHF患者血浆外泌体LncRNA H19高表达,miR-214低表达,与CHF患者炎性反应和左心室重构密切相关,可能成为CHF患者病情严重程度和左心室重构的评估指标。

对肥胖小鼠血浆外泌体miRNA表达谱的分析及联合超声生物显微镜评价肥胖小鼠左室心肌收缩功能障碍的效果

目的:采用超声显微镜心肌应变技术检测肥胖小鼠左心室收缩功能的亚临床改变,应用芯片测序等方法观察肥胖小鼠与正常小鼠心脏miRNA表达的差异,探讨差异表达miRNA在肥胖心肌受损发生发展过程中的作用。方法:选择20只6周大的雄性C57BL/6小鼠(体重20~30 g),喂食高脂肪饮食。选择10只体重和Lee指数大于对照组平均值±1.5倍标准差的肥胖小鼠模型作为肥胖组,将其余10只与肥胖组年龄和性别相同的C57BL/6小鼠作为对照组。采用超声生物显微镜检测常规二维超声参数,应用斑点追踪技术分析小鼠的左室心肌应变。利用芯片检测肥胖小鼠和正常小鼠血浆中外泌体miRNA的表达谱,筛选出在肥胖小鼠中呈差异表达的miRNA。对差异表达的miRNA进行GO分析和KEGG信号通路分析。结果:(1)二维超声参数比较:对照组与肥胖组的左室收缩末期内径、左室射血分数相比,差异无统计学意义(P>0.05);肥胖组的左室间隔厚度、左室后壁厚度、左室舒张末期内径均大于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)超声生物显微镜二维斑点追踪技术测量结果显示,对照组和肥胖组的长轴应变、径向应变、圆周应变参数相比,差异具有统计学意义(P<0.05);肥胖组的长轴应变、径向应变参数均低于对照组,肥胖组的圆周应变参数高于对照组。(3)NLRP3抗体免疫荧光染色显示,肥胖组NLRP3的表达明显增多。(4)对两组血浆外泌体源miRNA的表达进行测序发现,两组样本间共检测到455个差异表达的miRNA,肥胖小鼠与正常小鼠相比有124个下调,331个上调。GO和KEGG分析检测出差异表达的miRNA与肥胖心肌收缩功能的生物学调节功能和通路相关。结论:肥胖小鼠在肥胖发生早期就已出现左心室收缩功能的受损,肥胖小鼠与对照组相比其外泌体源miRNA存在明显的差异,这些差异表达的外泌体miRNA在肥胖心肌收缩功能损伤的发生发展过程中发挥着重要的作用。

miR-296-5p在糖尿病肾病db/db小鼠血浆外泌体中的表达及功能

目的:明确miR-296-5p在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)db/db小鼠血浆外泌体中的表达并初探其在转录因子Snail1介导的上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用。方法:先后采集12只12周龄db/db小鼠(模型组)和12只12周龄db/m小鼠(对照组)血浆,提取外泌体RNA进行测序,利用生物信息学软件筛选靶向Snail1的差异miRNA;利用透视电镜、纳米颗粒跟踪分析鉴定外泌体;并通过小鼠肾组织及血浆外泌体验证获得目标miRNA,双荧光素酶实验明确其与Snail1的靶向关系,RT-qPCR和免疫组化检测db/db小鼠和db/m小鼠肾组织中Snail1、钙黏附蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)基因和蛋白的表达。结果:miR-296-5p在db/db小鼠血浆外泌体及肾组织中表达下调(P=0.011,P=0.001);双荧光素酶实验证实miR-296-5p与Snail1的靶向关系;db/db小鼠肾组织中Snail1 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.001,P=0.005),E-cadherin mRNA和蛋白表达降低(P=0.012,P=0.020),α-SMA m RNA表达增加(P=0.042)。结论:miR-296-5p在db/db小鼠血浆外泌体中低表达,进而可能通过血浆外泌体递送,靶向上调肾小管上皮细胞Snail1,诱导肾小管上皮细胞EMT,加速DN肾间质纤维化。

老年癫痫患者急性发作后血浆外泌体长链非编码RNA MIR155HG的检测水平及意义

目的检测老年癫痫患者急性发作后血浆外泌体中长链非编码RNA(LncRNA)MIR155HG表达水平,并探讨其对老年患者预后的意义。方法159例老年癫痫患者,根据随访期间是否发生预后不良将患者分为预后不良组和预后良好组。采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测患者血浆外泌体中LncRNA MIR155HG表达水平;分析预后不良组老年癫痫患者血浆外泌体LncRNA MIR155HG与血浆细胞因子水平相关性;分析血浆外泌体LncRNA MIR155HG水平对老年癫痫患者预后不良的预测价值;分析影响老年癫痫患者预后不良的因素。结果预后不良组血浆外泌体LncRNA MIR155HG及血浆白细胞介素(IL)-2、IL-6、IL-8、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平显著高于预后良好组(P<0.05);预后不良组老年癫痫患者血浆外泌体LncRNA MIR155HG与血浆IL-2、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α水平呈正相关(P<0.05);血浆外泌体LncRNA MIR155HG水平预测老年癫痫患者预后不良的曲线下面积(AUC)为0.852,截断值为1.171,特异性为79.5%,敏感度为85.5%;LncRNA MIR155HG、TNF-α是影响老年癫痫患者预后不良的独立危险因素。结论老年癫痫患者血浆外泌体LncRNA MIR155HG水平的变化与病情发展及预后密切相关。

心肌梗死患者血浆外泌体miR-590、miR-371b表达及预后相关性研究

目的通过分析心肌梗死患者血浆外泌体miR-590、miR-371b的表达研究二者与心肌梗死患者预后的相关性。方法选取2017年1月至2019年1月我院收治的67例心肌梗死患者为研究对象,选取同期健康体检对象67例为对照组。采用实时荧光定量PCR法(q RT-PCR)检测心肌梗死患者组及对照组的血浆外泌体miR-590、miR-371b的表达;分析心肌梗死患者一般临床资料、血浆外泌体miR-590、miR-371b的表达与预后的相关性;对心肌梗死患者出院后随访12个月,分析血浆外泌体miR-590、miR-371b的表达对心肌梗死患者预后的影响;COX回归分析影响心肌梗死预后不良的危险因素。结果与对照组相比,心肌梗死患者血浆外泌体miR-590表达显著降低,miR-371b表达显著升高(P<0.05);与预后良好组相比,预后不良组年龄≥55岁、吸烟例数、梗死部位为前壁者比例以及梗死面积、外泌体miR-371b表达显著升高(P<0.05);外泌体miR-590表达显著降低(P<0.05) miR-590高表达组预后不良比例(22.6%)低于低表达组(52.8%),miR-371b高表达组预后不良比例(52.9%)高于低表达组(24.2%)(P<0.05);多因素COX回归分析表明,梗死部位、梗死面积与外泌体miR-590低表达、miR-371b高表达是影响心肌梗死预后不良的危险因素(P<0.05)。结论血浆外泌体miR-590、miR-371b可能参与心肌梗死的发生,影响患者预后,有望成为心肌梗死潜在的治疗靶点。

肺癌患者血浆外泌体蛋白质组分析

目的:探究肺癌患者与肺部良性结节病人血浆外泌体中蛋白质组的差异。方法:收集肺癌与肺部良性结节病人的术前血浆,随机选取肺腺癌病人血浆15例、肺鳞癌病人血浆10例作为实验组,肺部良性结节病人血浆5例作为对照组,采用超速离心法分离得到外泌体,定量质谱鉴定分析肺癌病人与肺部良性结节病人血浆外泌体蛋白质表达的差异性,SDS-PAGE和蛋白质免疫印迹法检验提取到的蛋白质。结果:共检测到血浆外泌体蛋白质253个,并初步确定其中18个在肺癌病人血浆外泌体中表达上调,8个在肺癌病人血浆外泌体中表达下调,免疫印迹法验证了上调蛋白质中的补体蛋白C4a。结论:鉴定出26个外泌体差异表达蛋白质,为肺癌早期诊断提供了新的候选分子。

血浆外泌体S100P蛋白对中暑患者的诊断价值

目的探讨中暑患者血浆外泌体S100P蛋白含量的变化,并评价其诊断价值。方法选取2016年6月-2018年6月于南部战区总医院就诊的中暑患者30例,选取本院体检中心健康人群15例作为对照。采集静脉血,采用聚乙二醇沉淀法提取血浆外泌体并进行鉴定;采用ELISA法检测血浆外泌体S100P蛋白的含量;分析患者血浆外泌体S100P水平平均值与临床指标以及病情严重程度的相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,评估血浆外泌体S100P评价中暑及其病情严重程度的效能。结果与健康人群比较,中暑患者血浆外泌体S100P水平明显升高[(195.89±131.97) pg/mlvs.(1163.62±747.15) pg/ml,P<0.001],且重度中暑患者较轻度中暑患者升高更明显[(553.63±311.85) pg/ml vs.(1570.28±672.03) pg/ml,P<0.001]。血浆外泌体S100P水平与中暑严重程度具有明显相关性,其与APACHEⅡ评分、SOFA评分、MODS评分的相关系数r分别为0.888(P<0.001)、0.901(P<0.001)、0.887(P<0.001)。血浆外泌体S100P诊断中暑的ROC曲线下面积为0.931(95%CI0.857~1.000,P<0.001),评估中暑严重程度的ROC曲线下面积为0.956(95%CI 0.890~1.000,P<0.001)。结论血浆外泌体S100P可作为中暑诊断的潜在标志物,且能够反映中暑的严重程度。

血浆外泌体通过微小RNA-25-3p对心肌纤维化影响的初步研究

目的:初步明确血浆外泌体及其内容物微小RNA-25-3p(microRNA-25-3p,miR-25-3p)对心肌纤维化的影响。方法:分别提取10只健康C57BL/6小鼠(对照组)和10只心肌梗死术后小鼠(心肌纤维化模型组)的血浆外泌体。利用电镜、纳米跟踪颗粒分析、标志物蛋白检测鉴定外泌体;实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,q PCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测两种外泌体对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导下的小鼠心脏成纤维细胞纤维化水平的影响;q PCR检测两种外泌体内miR-25-3p的水平;Western blot和免疫荧光染色检测miR-25-3p模拟物和抑制物对心脏成纤维细胞增殖和向肌成纤维细胞分化能力的影响。结果:对照组血浆外泌体可使AngⅡ诱导增加的纤维化相关指标下调,而心肌纤维化模型组外泌体则失去这一功能且其内miR-25-3p含量更高;miR-25-3p模拟物上调纤维化相关指标,而miR-25-3p抑制物则表现相反作用。结论:健康小鼠血浆外泌体可改善心肌纤维化;血浆外泌体内的miR-25-3p上调可促进心肌纤维化发生。

病毒性心肌炎儿童112例血浆外泌体微小RNA-148a水平的观察

目的观察病毒性心肌炎(VMC)病儿血浆外泌体微小RNA(miR)-148a的水平并分析其意义。方法选择2017年9月至2019年6月郑州大学附属儿童医院收治的VMC病儿112例纳入研究组,另选取同期门诊健康体检正常儿童112例为对照组,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测血浆外泌体miR-148a水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血浆外泌体心肌肌钙蛋白I(cTnI),采用自动化生化仪检测血浆外泌体肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平、超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平。采用Pearson相关性分析检验VMC病儿血浆外泌体miR-148a与cTnI、CK-MB、hs-CRP水平的相关性。绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析血浆外泌体miR-148a对VMC的诊断价值。结果血浆外泌体在透射电镜下呈大小不等、直径约100 nm典型圆形或椭圆形囊泡结构。与对照组比较,研究组血浆外泌体miR-148a水平[(1.01±0.12)比(5.34±1.06)]、血浆cTnI、CK-MB、hs-CRP水平均增加(均P<0.001)。VMC病儿血浆外泌体miR-148a与血浆cTnI、CK-MB、hs-CRP水平均呈正相关(r=0.62、0.64、0.49,均P<0.001)。血浆外泌体miR-148a及血浆cTnI、CK-MB、hs-CRP诊断早期VMC的曲线下面积(AUC)分别为0.94、0.94、0.83、0.86,截断值分别为1.87、0.19μg/L、56.45 U/L、2.06 mg/L,灵敏度分别为94.60%、92.90%、84.80%、83.90%,特异度分别为92.90%、94.60%、83.90%、83.90%。血浆外泌体miR-148a与血浆cTnI诊断早期VMC的效能一致,均优于血浆CK-MB、hs-CRP。结论VMC病儿血浆外泌体miR-148a水平上调,可能对VMC有一定诊断价值。

胰腺癌患者血浆外泌体circ-BCAS3的水平和临床意义

目的探讨胰腺癌患者血浆外泌体环状RNA-BCAS3(circ-BCAS3)的水平及临床意义。方法通过生物信息学网站exoRBase筛选胰腺癌患者血浆外泌体中异常表达的circRNAs。收集2018年1月至2020年2月年龄、性别相匹配的胰腺癌患者与健康体检者的血浆各20例,通过试剂盒分离、提取外泌体并通过电子显微镜检测验证分离效果。实时荧光定量PCR(qPCR)对血浆外泌体中的circRNAs定量检测并结合临床信息和随访数据分析circ-BCAS3水平与胰腺癌临床病理特征和预后的关系。使用circ-BCAS3小干扰RNA(si-circ-BCAS3)和无义核酸序列(si-NC)转染胰腺癌细胞PANC-1和BxPC3,采用CCK-8和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况。结果通过肿瘤外泌体数据库exoRBase在胰腺癌患者血浆外泌体中筛选出3个高表达的circRNAs(circ-CMTR1、circ-SP1和circ-BCAS3),表达验证发现胰腺癌患者血清外泌体circ-BCAS3水平为16.98±2.33,高于健康对照的6.37±1.18(P<0.05)。circ-BCAS3水平与胰腺癌患者的TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤大小和分化程度无关(P>0.05)。circ-BCAS3高水平患者中位总生存期为5.6个月,低于低表达患者的13.4个月(P<0.05)。细胞实验结果显示,与转染si-NC的细胞相比,转染si-circ-BCAS3后,PANC-1和BxPC3细胞株的增殖活力降低而凋亡率升高(P<0.05)。结论circ-BCAS3异常高表达于胰腺癌患者血浆外泌体中,影响胰腺癌细胞的增殖与凋亡,与胰腺癌患者的预后有关,可作为潜在的诊断以及预后标志物。

大鼠血浆外泌体源性mir-22-5p在短暂性脑缺血中的表达变化及其作为诊断标志物的研究

目的短暂性脑缺血发作(transient ischemic attack, TIA)是临床中常见的一种缺血性脑血管病。本研究主要将探讨血浆外泌体源性rno-miR-22-5p在大鼠短暂性脑缺血发作中潜在的诊断价值。方法设置假手术组及大制造大脑中动脉栓塞模型,建立缺血5 min、10 min、2 h组。并通过HE染色法对缺血后脑组织受损的程度进行评估。按照试剂盒说明书步骤,提取大鼠血浆外泌体以及外泌体源性RNA,并通过透射电子显微镜进行鉴定。使用q RT-PCR方法验证miR-22-5p的表达量。采用单因素方差分析进行统计学分析,并通过ROC曲线评估miR-22-5p作为诊断大鼠短暂性脑缺血发作标志物的价值。结果与假手术组对比,脑缺血5 min和10 min组的血浆外泌体源性rno-miR-22-5p的表达显著升高(P<0.05)。而且与脑缺血5 min和10 min组对比,脑缺血2 h组的大鼠血浆外泌体源性rno-miR-22-5p表达显著下调(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示:与假手术组相比,rno-miR-22-5p在脑缺血5 min的大鼠展现出了极高的诊断价值,其ROC曲线下面积分别为0.880。结论血浆外泌体源性miRNA-22-5p有可能成为诊断大鼠短暂性脑缺血发作的一种诊断生物标志物。

血浆外泌体miRNA⁃221对非小细胞肺癌的诊断价值

目的探讨miRNA-221(miR-221)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆外泌体中的表达水平及其诊断价值。方法选取2018年12月至2019年12月来湖北省十堰市国药东风总医院就诊的72例NSCLC患者为肺癌组,选取同期体检健康人群52例为对照组。全血离心后采用试剂盒分别提取血浆外泌体及其RNA,通过透射电子显微镜、蛋白印迹技术及纳米粒径技术对血浆外泌体进行鉴定。采用实时定量聚合酶链反应检测miR-221在肺癌组和对照组中的表达水平,比较分析其与肺癌患者临床病理参数关系。选择受试者工作特征曲线(ROC)分析血浆外泌体miR-221对NSCLC的诊断价值。结果成功分离了血浆外泌体,并进行了鉴定符合公认的外泌体特征。NSCLC组血浆外泌体miR-221的表达水平显著高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。ROC曲线下面积(AUC)为0.758(95%CI:0.672~0.844,P<0.001),敏感度为86%,特异度为66%。结论血浆外泌体miR-221可作为诊断NSCLC的潜在生物学标志物,对NSCLC的临床诊断具有辅助价值。

血浆外泌体源性lncRNAH19和lncRNAMALAT1与膀胱癌的相关性研究

目的:探讨外泌体中lncRNAH19,MALAT1在膀胱癌中的表达水平及其诊断价值。方法:收集首次确诊且未接受手术、放化疗等任何处理的膀胱癌患者50例,选取同期在本院的健康体检者50例。分离并提取膀胱癌患者及正常体检者中的血浆外泌体,运用实时荧光定量(qRT-PCR)检测其血浆外泌体中lncRNAH19、MALAT1的表达情况,分析膀胱癌血浆外泌体中lncRNAH19、MALAT1的表达水平与临床病理参数的相关性,绘制ROC受试者工作曲线评价血浆外泌体中lncRNAH19、MALAT1对于膀胱癌的诊断价值。结果:膀胱癌患者组中lncRNAH19、MALAT1的表达水平显著高于健康对照组(P<0.05);膀胱癌外泌体中lncRNAH19、MALAT1的表达水平与年龄,性别,临床病理分级,临床病理分级,有无转移均无相关性。ROC受试者工作曲线lncRNAH19、MALAT1的曲线下面积(AUC)分别为0.971,0.878,lncRNAH19特异性为72%,敏感度为98%;lncRNAMALAT1特异性为84%,敏感度为92%。结论:血浆外泌体中lncRNAH19和lncRNAMALAT1的联合诊断可以提高早期膀胱癌诊断的特异性,具有较高的诊断价值,可作为早期膀胱癌筛查的一项比较理想的指标。