EB病毒抗体联合检测在鼻咽癌血清学诊断中的价值

目的评价VCA/IgA、EA/IgA、Rta/IgG和EBNA1/IgA等EB病毒抗体联合检测在鼻咽癌血清学诊断中的价值。方法收集211例初治鼻咽癌和203例相似症状的非鼻咽癌病例的血清,采用免疫酶法检测VCA/IgA及EA/IgA,酶联免疫吸附法检测Rta/IgG和EBNA1/IgA。应用ROC曲线分析确定各抗体检测的最佳截断值,采用复合阳性判断方法评价联合检测对鼻咽癌的诊断价值。结果采用复合阳性判断方法,联合检测的敏感度及特异度比单项抗体的指标基本上均有提高。VCA/IgA+Rta/IgG+EBNA1/IgA组合的敏感度(98.1%)较其它3种组合高,特异度、准确度、约登指数及阳性预测值分别为88.7%、93.5%、0.868、90.0%;而EA/IgA+Rta/IgG+EBNA1/IgA组合的特异度(95.1%)、准确度(94.9%)、约登指数(0.899)及阳性预测值(95.2%)最高,敏感度为94.8%,显示其在鼻咽癌血清学诊断中可能具有更高的准确性。四抗体组合有最高的敏感度(98.6%),特异度、准确度、约登指数及阳性预测值分别为88.2%、93.5%、0.868、89.7%。结论抗立即早期抗原Rta/IgG抗体、抗早期抗原EA/IgA抗体、抗晚期抗原VCA/IgA和抗潜伏期抗原EBNA1/IgA抗体联合检测可更大范围地反映EB病毒溶解感染期及潜伏感染期的抗原表达,具有很好的互补作用,是鼻咽癌血清学诊断的合适组合。

重组结核分支杆菌38kD和16kD蛋白用于结核病血清学诊断的价值

目的 探讨国产重组结核分支杆菌蛋白 38kD(rTPA38)和 16kD(rTPA16)用于结核病的诊断价值。方法 以rTPA38和rTPA16为抗原 ,PPD为对照 ,用ELISA法检测血清中特异性抗结核抗体。结果 2 4 6例肺结核病组 ,rTPA38、rTPA16和PPD检测的灵敏度分别为 66.3%、63.0 %和 72 .3%。健康献血组、非结核呼吸疾病组和卡介苗接种阳转组血清同时用rTPA38、rTPA16和PPD检测 ,rTPA38特异性分别为 97.6%、96.8%、86.0 %。rTPA16特异性分别为 94 .7%、93.1%、75 .0 %。PPD特异性为93.4 %、85 .7%、67.9%。统计分析显示 ,rTPA38蛋白和PPD检测非结核呼吸疾病组 ,其阳性率有显著性差异 (P <0 .0 5 )。两者检测卡介苗接种阳转组阳性率和血清抗体滴度有显著性差异 (P <0 .0 5 )。rTPA38和rTPA16同时检测 10 8例肺结核病组血清可提高 11.1%的阳性率。结论 rTPA38蛋白抗原有较好的灵敏度和较高特异性 ,是ELISA的可靠抗原 ,与rTPA16联用可提高灵敏度 ,对结核病血清学诊断有较高参考价值。

3种梅毒血清学诊断试验的临床应用评价

目的通过比较3种梅毒血清学检测方法的敏感性、特异性,选择简单、快速、敏感性高和特异性强的检测方法。提高对梅毒(特别是妊娠期隐性梅毒)的早期诊治,控制梅毒传播。方法采用甲苯胺红不加热血清反应素试验(TRUST),梅毒螺旋体特异性抗体明胶凝集试验(TPPA),梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒(胶体金法)3种方法检测218例血清标本,TPPA法和胶体金法检测40例质控标本。结果TRUST、TPPA、胶体金法对95例梅毒血清标本和123例非梅毒血清标本对照组的敏感性分别为78.9%、97.9%、88.4%,特异性分别为84.6%、98.4%、96.7%。TPPA法的敏感性明显高于TRUST法和胶体金法,差异有统计学意义(P<0.05);胶体金法对2NCU梅毒确认抗体室内质控和低浓度室间质评标本均不能检出,其敏感性明显低于TPPA法,差异有统计学意义(P<0.05);TPPA法的特异性明显高于TRUST法,差异有统计学意义(P<0.05),TPPA法特异性高于胶体金法,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TPPA法有极高的敏感性和特异性,可作为梅毒血清抗体检测的确证方法;胶体金法简便快速,较适用于临床急诊标本检测;TRUST法适用于梅毒疗程观察和疗效判断,有助于判断梅毒复发及再感染,采用TPPA和TRUST联合检测,既可提高梅毒检出的阳性率,减少漏诊和误诊;又可作为病程观察和疗效判断的指标,以便梅毒患者能得出及时有效的诊治,对有效控制妊娠期梅毒和胎传梅毒的发生及梅毒传播都具有较大的临床价值。

结核分支杆菌MPT63抗原的表达及其血清学诊断价值的研究

获得结核分支杆菌重组MPT6 3蛋白 ,研究其免疫学特性 ,评价其在结核病血清学诊断中的价值 ,寻找更有效的结核病诊断试剂。方法 :应用基因工程技术表达、纯化MPT6 3蛋白 ,通过Westernblotting和免疫双扩散试验分析其抗原性 ,通过斑点免疫试验、结明试验和结核病一步法检测血清中抗结核抗体。结果 :重组质粒 pET2 4b -MPT6 3测序表明具有正确的编码序列 ,MPT6 3蛋白在大肠杆菌细胞内以可溶性蛋白的形式高效表达 ,表达量占菌体总蛋白的 40 %左右 ,分子量约 16kDa ,Westernblotting和免疫双扩散试验检测抗结核抗体的阳性率分别为 46 .7%和 5 0 % ,结核病一步法检测的阳性率为 70 % ,结明试验的阳性率为 80 %。在34例正常血清中 ,MPT6 3和PPD斑点免疫试验检测抗结核抗体的阳性率分别为 38.2 %和 35 .3 % ,结核病一步法检测的阳性率为 2 3 .5 %。结论 :pET2 4b -MPT6 3大肠杆菌工程菌能以可溶性蛋白的形式高效表达 ,重组的MPT6 3也许可作为结核病血清学诊断的一组抗原之一。

斯氏狸殖吸虫抗原分析和血清学诊断方法的研究

[目的 ]分析斯氏狸殖吸虫囊蚴、童虫和成虫各期抗原和建立特异性抗原的斯氏狸殖吸虫病血清学诊断方法。 [方法 ]用SDS PAGE分离斯氏狸殖吸虫的各虫期抗原 ,经免疫印迹识别成虫期特异性诊断抗原。采用电洗脱技术分离 10～ 30kDa蛋白组分 ,建立纯化抗原的dot ELISA血清学诊断斯氏狸殖吸虫病。 [结果 ]斯氏狸殖吸虫病患者血清与成虫抗原的 10～ 30kDa显示较多免疫识别带 ,主带为 2 2、2 4和 2 6kDa。与血吸虫病和华支睾吸虫病患者血清的交叉反应带出现于 6 0～ 90kDa。斯氏狸殖吸虫成虫 10～ 30kDa抗原的dot ELISA与成虫粗抗原的ELISA检测 2 8例疑诊病人血清 ,两法阳性率间差异无显著性。而检测 38例感染其它吸虫和肺部疾病患者血清 ,粗抗原的ELISA交叉反应率为 13 2 % (5 /38)。 [结论 ]斯氏狸殖吸虫成虫 10～ 30kDa抗原的dot ELISA为斯氏狸殖吸虫病高度特异和敏感的血清学诊断方法。

血吸虫病与并殖吸虫病患者血清学诊断的交叉反应

25例急性、36例慢性日本血吸虫病患者及68例斯氏狸殖吸虫病患者血清,以血吸虫卵抗原(SEA)、虫卵及狸殖吸虫成虫抗原(PAA)、后尾蚴为抗原,用生物素-亲和素系统(BAS)、ELISA、环卵沉淀反应(COPT)及后尾蚴膜反应(MCMR)等方法,同时检测各类血清与同种抗原的特异性阳性反应率及其与异种抗原的交叉反应率。结果显示,关于特异性阳性反应率:BAS及ELISA,对急血患者均为100％,慢血分别为100％及97.2％;对并殖吸虫病均为98.5％。关于交叉反应率:BAS、ELISA、MCMR对急血分别为76％、72％、20％;慢血分别为27.8％、22.2％、19.4％;BAS、ELISA、COPT对肺吸虫病血清分别为26.5％、30.9％、8.8％。结果表明,交叉反应阳性率的高低与检测方法的敏感性有关;急血患者用BAS或ELISA法的交叉反应率显著高于慢血;慢血患者的交叉反应率与感染度有关;同时采用多项检测方法,其交叉反应累积的阳性例数多于单用一种方法的例数,但如将多项方法均为交叉反应者才判为交叉反应的阳性例数,则其例数少于单用一项方法的例数,故对用一项检测出现交叉反应的患者,建议增加检测项目,并以所有项目均出现交叉反应者才判为交叉反应阳性病例,这样可降低交叉反应率。

以结核分枝杆菌38kD重组蛋白为抗原的血清学诊断

目的克隆表达结核分枝杆菌38kD抗原基因,并以此蛋白为抗原,进行分枝杆菌的血清学诊断。方法采用PCR自结核分枝杆菌基因组DNA中扩增38kD抗原基因,经测序鉴定正确后,克隆于pGEX-4T-2表达载体,转化大肠杆菌BL21进行诱导表达,利用GSTrapFF蛋白柱纯化表达产物,经ELISA检测其抗原的灵敏度与特异性。结果目的蛋白表达量约占菌体总蛋白量的28%,ELISA检测灵敏度为79.8%,特异性为99.0%。结论重组38kD抗原可用于结核分枝杆菌的诊断。

SARS冠状病毒结构蛋白在血清学诊断中潜在应用价值的比较

为了确定特异的SARS抗体检测抗原,比较了SARS冠状病毒(SARS-CoV)主要结构蛋白与SARS患者血清的反应性。从SARS死亡患者的肺组织提取的总RNA为模板,用RT-PCR技术分别扩增S、N、M和E4种结构蛋白基因,对3种S截短突变体和N、M、E的重组蛋白在大肠杆菌中进行表达。以表达的蛋白为抗原,应用Westernblot跟踪检测11例SARS患者血清54份。结果显示:SARS-CoV的重组N蛋白和S蛋白有很强的抗原性,S蛋白的3个区段的抗原性强弱存在差异,S3抗原性强于S1和S2;在患病第1周、2周、3周及3周以上,N蛋白和S3蛋白抗体检出率分别为40%、65.2%、100%、100%和40%、61%、76.2%、100%;提示SARS-CoV重组N蛋白和S3蛋白在SARS的血清学诊断中有一定的应用价值。

布鲁氏菌病血清学诊断靶点的研究进展

布鲁氏菌病是由布鲁氏菌属细菌性引起的一种全世界广泛分布的人兽共患慢性细菌性传染病。人患病后,病程长,反复发作,长期不愈;且很难通过流行病学和临床症状进行确诊。目前对于布病的诊断方法多采用血清学实验诊断,诊断方法的核心则是诊断靶点,其决定了诊断的特异性及敏感性。本文就各诊断靶点的研究进展进行综述。

绵羊群体中不同布鲁氏菌病血清学诊断方法比较研究

布鲁氏菌病(Brucellosis)是由布鲁氏菌属细菌(Brucella)引起的人畜共患传染病,在世界范围内广泛分布,造成重大经济损失和严重公共健康问题。利用菌体细胞或光滑型脂多糖(S-LPS)作抗原,检测待检动物血清中抗体血清学诊断方法,是布鲁氏菌病检疫主要手段。但目前尚无完美的单一检测方法用于动物布鲁氏菌检测。本研究针对RBT,SAT,i ELISA和c ELISA四种常用检测方法,在绵羊群体中(n=204),利用敏感性、特异性、Youden指数、AUC值等参数评估其准确性。应用单一方法检测时,i ELISA敏感性最高(93.15%);SAT特异性最高(98.47%);i ELISA的Youden指数和AUC值最大,分别达到88.75%和0.94。四种不同检测方法中,i ELISA和c ELISA之间符合率最高(87.25%),SAT和i ELISA之间Kappa值最高(0.72)。两种方法组合作平行试验时,所有组合以SAT+i ELISA的Youden指数值和AUC值最大,分别达到92.27%和0.96;系列试验时,RBT+i ELISA的Youden指数值和AUC值最大,分别达到83.70%和0.92。研究结果将为布鲁氏菌病净化过程中检测组合的筛选提供参考,从而提高诊断准确性。

脂阿拉伯甘露糖用于血清学诊断活动性结核病的评价

测定结核分支杆菌脂阿拉伯甘露糖（ＬＡＭ）抗体是国外近年来发展的一项用于诊断活动性结核病的血清学诊断技术。本次研究对有关产品进行了临床应用评价。其敏感度为７１．４％，特异度为９４．９％，具有较高的结核病临床诊断价值。

布鲁氏菌病血清学诊断研究进展

本文综述了16种布鲁氏菌病血清学诊断方法,并对其优、缺点进行了分析。

肝纤维化血清学诊断指标谱的初步探讨——附612例慢性肝病患者11项血清学检测结果分析

对慢迁肝、慢活肝、肝炎后肝硬化、日本血吸虫病早期和晚期患者共612例(其中157例经肝活检确诊)进行血清ADA、CG、β_2-M、NAG、GST、HyP、PIP、HA、LN、TNF-α、sIL-2R等11项指标的检测.检测结果用阳性(>(?)+2SD)率表示,大致与肝组织学检查结果相似,肝纤维化程度早血、迁肝<晚血<慢活肝<肝炎后肝硬化,而肝脏炎症、坏死则以慢活肝为重.我们认为肝纤维化的诊断应综合考虑.本文从反映慢性肝受损指标、细胞外间质代谢指标及细胞因子网络失调指标3方面,初步提出肝纤维化血清学诊断指标谱,供讨论。

细粒棘球蚴重组抗原B 8-kDa亚单位1对囊型包虫病的血清学诊断价值

目的通过基因工程技术获得细粒棘球蚴抗原B8-kDa亚单位1重组蛋白(rEgAgB8/1),探讨其对囊型包虫病(CE)的血清学诊断价值。方法将构建的rEgAgB8/1原核表达质粒(pET32b-rEgAgB8/1)转化至E.coli BL-21(DE3)中,用IPTG诱导表达,经亲和层析纯化获得高纯度rEgAgB8/1,以rEgAgB8/1为抗原,应用ELISA和Immuno blotting方法对31例手术确诊的囊型包虫病病人血清进行了回顾性检测与分析。结果ELISA和Immuno blotting方法检测CE病人血清阳性率均为90.3%(28/31),3例血清学检测阴性的CE病人均为初次诊断为CE及单纯性肝脏单发感染的病人;血清抗体水平随着病人棘球蚴囊数目增加而有所增加,棘球蚴囊的数目与血清抗体水平的比较用单因素方差分析有显著性差异(F=5.06,P=0.0142),1个囊与2个囊/3个囊组间血清抗体水平有显著差异,2个囊与3个囊组间差异无统计学意义。结论rEgAgB8/1重组蛋白抗原对囊型包虫病有较高的血清学诊断价值,多囊型包虫病人血清抗体水平高于单囊型包虫病人。

鱼类病原性弧菌血清学诊断芯片技术构建

针对鱼类致病性肠道弧菌(Vibrio ichthyoenteri)、鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、河流弧菌(Vibrio fluvialis)和哈维氏弧菌(Vibrio harveyi),制备了牙鲆(Paralichthys olivaceus)抗血清,提取了各弧菌的外膜蛋白、胞外产物、鞭毛蛋白和全菌蛋白,分析了牙鲆抗血清与各抗原蛋白的免疫反应,发现各弧菌抗血清与各自的抗原反应最强,与其他弧菌抗原有不同程度的交叉反应。将6种弧菌的抗原组分固定于芯片载体形成微阵列,构建了其血清学诊断抗原芯片,使用辣根过氧化物酶标记的抗牙鲆IgM单抗2D8作为检测抗体,确定了检测结果判读方法;将抗原芯片应用于牙鲆和大菱鲆(Scophthalmus maximus)的弧菌病诊断,并利用ELISA技术,验证了该抗原芯片用于弧菌病诊断的准确性。本研究为鱼类弧菌病的血清学诊断提供了有力工具。

人棘球蚴病血清学诊断试剂检测效能评价

目的了解我国现有的人群棘球蚴病血清学诊断试剂的检测效能,为全国中央转移支付地方棘球蚴病防治项目进行人群棘球蚴病血清流行病学调查与监测,筛选适宜的检测试剂提供参考。方法选择我国目前已用于防治实践或研制比较成熟的血清学诊断试剂共9种(A、B、C、D、E、F、G、H、I),对收集的400份标本血清,采用双盲法进行检测,计算并比较各试剂检测效能的有关指标。结果参评的9种血清学诊断试剂敏感性42.4%～95.8%,特异性48.6%～100.0%,阳性预测值86.7%～100.0%之间,阴性预测值27.2%～82.6%之间,正确指数0.285～0.802之间,一致性64.2%～90.1%之间。与囊虫病的交叉反应最低为25%,最高达82.5%。综合考虑各项指标,试剂A(ELISA间接法)的检测效能最高。结论我国目前人群棘球蚴病血清学诊断试剂的检测效能较低,试剂的敏感性和特异性有待进一步提高,且与囊虫病普遍存在较强的交叉反应性,需进一步加强研制灵敏、特异、便于现场应用的血清学诊断试剂,以用于棘球蚴病病人的早期诊断。

牛日本血吸虫病5种血清学诊断技术比较

为找寻特异性强、敏感性高,且操作简便、费用低廉,并能大规模应用于临床的日本血吸虫病血清学诊断方法,以疫区黄牛为研究对象,应用环卵沉淀试验(COPT)、血清法间接血凝试验(sIHA)和血纸法间接血凝试验(bpIHA)、胶乳凝集试验(PAPS)、三联斑点酶联免疫吸附试验(三联Dot-ELISA)5种血清学诊断方法与粪检方法检测牛日本血吸虫病,并对5种血清学检测结果进行评价.检测分析结果表明,用血清学方法COPT,sIHA,三联Dot-ELISA对疫区黄牛进行血吸虫病检测,与三粪九检结果符合率高,具有灵敏度高、特异性好、简捷方便、费用低等特点,特别适用于疫区家畜血吸虫病的诊断、普查,是比较理想的现场检测方法,值得推广.血清学方法bpIHA和PAPS检测血吸虫病,尽管方法简便、费用低廉,但其灵敏度、特异性与三粪九检结果符合率低于血清学方法COPT,sIHA,三联Dot-ELISA,易造成漏检,假阳性,故在普查时,不建议采用.

日本血吸虫病肝纤维化血清学诊断与超声诊断的比较研究

目的为探寻能早期、敏感、全面反映日本血吸虫病肝纤维化的非创伤性诊断指标，对血清肝纤维化诊断及超声诊断进行比较。方法采用放射免疫法对83例粪检阳性的日本血吸虫病患者和83例正常人群进行血清肝纤维化指标（HA、PCⅢ和LN）的检测和腹部超声检查。结果血清肝纤维化诊断在患者组的总阳性率为79．5％，正常人中仅为6％，两者具显著差异；超声诊断在两组中的检出率则分别为83．1％和10．8％，卡方检验亦具显著差异（P＜0．01）。比较两种诊断方法在患者组中的阳性率无显著差异（P＞0．05），其结果的符合率为74．7％，区两种诊断方法的主要参数指标与肝实质分级呈正相关。结论两种方法在日本血吸虫病肝纤维化的诊断具较高敏感性及相关性，结果与肝纤维化程度密切相关，联合运用能进一步提高检测的敏感性，全面了解肝纤维化的程度及活动情况，对早期诊断和防治具重要意义。