白喉毒素突变体CRM197在大肠杆菌中优化表达及人群血清抗体水平分析

目的 构建白喉毒素突变体CRM197的原核表达载体,在大肠杆菌中表达CRM197蛋白。分析健康人群血清中的CRM197抗体水平。方法 对CRM197基因进行大肠杆菌密码子优化并克隆至pET28a(+)中,经表达条件优化后采用镍柱亲和层析和离子交换层析对重组蛋白CRM197进行纯化,对纯化的CRM197进行Western blot鉴定。最后,经纯化后的CRM197蛋白与健康人群血清进行反应,检测人群血清中针对该蛋白的抗体水平。结果 CRM197蛋白进行了密码子及表达条件优化后,获得了可溶性表达蛋白。经镍柱亲和层析和离子交换层析后其纯度可达95%以上,Western Blot鉴定后能得到单一的特异性条带。经纯化的CRM197蛋白与不同年龄阶段健康人群血清均发生不同程度的抗原抗体反应。结论 利用本研究的策略,CRM197得到高效的可溶性表达,但人群血清中含有高水平的CRM197抗体,这些抗体的存在可能会影响到应用CRM197结合多糖作为抗原进行特异免疫效果的评价以及作为诊断抗原的应用。

重庆市万州区重点人群布鲁氏菌病血清抗体监测结果分析

目的:对重庆市万州区2017—2020年重点人群布鲁氏菌病(简称布病)血清抗体监测结果进行分析,了解该人群感染状况,为布病防控提供科学依据。方法:选定畜牧业较发达的乡镇为监测点,调查牛、羊养殖户,屠宰户以及畜牧兽医人员等重点职业人群,并对其进行布病抗体监测,实验数据采用SPSS 22.0软件进行统计分析。结果:1 085份血清标本检出布病抗体阳性13份,阳性率约为1.20%,不同监测年度阳性率,差异无统计学意义(χ^(2)=1.097,P>0.05)。其中,羊饲养人群检出阳性3人、牛饲养人群7人、牛/羊混合养殖人群2人、畜牧兽医检出1人;不同性别、年龄组阳性率,差异无统计学意义(χ^(2)=0.029、1.333、P>0.05);不同职业阳性率,差异有统计学意义(χ^(2)=9.057,P<0.05),其中畜牧兽医人群最高,羊饲养人群最低。结论:加强重点职业人群布病防控知识宣传,做好个人防护,持续开展人群布病抗体监测及预警工作。

血清抗体监测在猪疫病防控中的应用

常见猪疫病问题大多具有传播速度快、传播范围广的特点。实际的日常防控管理难度相对较高,需要在饲养阶段密切观察生猪的状态,并要采取技术手段对各种疾病采取临床监控措施。据了解,目前使用频率较高的技术方法就是血清抗体监测。但由于该技术的操作流程比较复杂,本文着重对技术基本原理展开介绍,找到技术的具体应用方向。并深入分析疾病防控工作应遵循哪些原则,合理优化现有的技术操作思路,旨在全面提升技术应用价值,推动养殖行业的可持续健康发展。

胃癌合并Hp感染患者Hp血清抗体基因分型测定及其意义

目的 了解本地区胃癌患者幽门螺杆菌(Hp)血清抗体基因分型情况及胃癌发生与Hp血清抗体基因分型的可能影响因素。结果 Ⅰ型幽门螺杆菌在胃癌中所占比例较Ⅱ型更高,差异有统计学意义(χ2=15.2,P<0.05);非萎缩性胃炎组Ⅰ型所占比例小于Ⅱ型,差异有统计学意义;胃癌患者幽门螺杆菌抗体基因分型I型与Ⅱ型与性别、年龄差异均无统计学意义(P>0.05),幽门螺杆菌抗体基因分型I型与吸烟史、饮酒史及胃癌家族史有一定相关性。结论 幽门螺杆菌抗体基因分型在胃癌及非萎缩性胃炎中有差异,其检测结果可指导并助力临床抗幽门螺杆菌精准及个体化治疗。

血清抗体监测在猪疫病防控中的应用研究

血清学检测技术不仅可以检测猪场疾病的动态变化,还能评价疫苗效果,但其缺点是检测灵敏性没有核酸检测高,当机体抗体水平过低时,利用该项技术无法及时检测出来。但总体来说,针对大型规模养殖场,该技术是性价比较高的疫病检测技术,有利于猪场疫病防控。一、血清抗体检测血清学检测原理为抗原与相应特异性抗体结合,利用已知抗体捕捉相应抗原的原理检测血清中是否存在相应病原。常用的血清学检测方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、中和试验、血凝试验、血凝抑制试验等,ELISA包括直接法、间接法、双抗夹心法和竞争法,其中,测定蛋白等大分子时双抗夹心ELISA法是最为常用的一种。

肺炎支原体血清抗体和白细胞检测在小儿肺炎中的应用价值分析

目的在小儿肺炎诊断中应用肺炎支原体血清抗体及白细胞检测,分析临床应用价值。方法将2021年1月—2022年1月在张家港市中医医院儿科接受治疗的100例小儿肺炎患儿纳入研究组,并将同期于本院接受健康体检的100例儿童纳入参照组,均通过肺炎支原体血清抗体及白细胞检测,对诊断结果之间存在的差异展开分析。结果研究组血清抗体阳性水平[(9.05±1.24)mU/mL]低于参照组,差异有统计学意义(t=18.174,P<0.05);研究组中性粒细胞比例[(0.58±0.20)%]、中性粒细胞绝对值[(4.55±2.02)×10^(9)/L]高于参照组,差异有统计学意义(t=6.860、6.044,P<0.05);相较于参照组患儿淋巴细胞比例、淋巴细胞绝对值,研究组患儿淋巴细胞比例[(0.38±0.15)%]、淋巴细胞绝对值[(3.03±1.78)×10^(9)/L]更低,差异有统计学意义(t=7.498、5.401,P<0.05);研究组单核细胞比例[(0.08±0.03)%]、单核细胞绝对值[(0.89±0.52)×10^(9)/L]相对于参照组明显更高,差异有统计学意义(t=9.428、3.781,P<0.05)。结论肺炎支原体血清抗体和白细胞检测在小儿肺炎中的应用价值十分明显。

卵巢功能减退的血清抗体检测及卵泡功能复苏的临床治疗效果

目的探究血清抗体检测对卵巢功能减退治疗的意义,分析患者治疗前后卵泡功能复苏情况。方法选取2020年1月至2022年6月就诊于中国人民解放军联勤保障部队第九四○医院的120例卵巢功能减退患者作为观察组,同期同一医院的120例其他因素所致不孕患者作为对照组。检测两组抗卵巢抗体(AOAb)、抗心磷脂抗体(ACAb)水平,针对检测结果阳性的患者按照治疗方案不同分为治疗组与安慰剂组,各14例,分别给予地塞米松联合小剂量阿司匹林治疗与安慰剂治疗,对比患者卵泡功能复苏情况,并随访治疗效果。结果观察组AOAb、ACAb阳性共28例,占23.33%,高于对照组的4.17%,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗组与安慰剂组治疗前卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)水平差异无统计学意义(P>0.05);治疗后治疗组E2水平提高,FSH、LH水平降低,安慰剂组无明显变化,两组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗组经过治疗后,采用B超监测发现均出现优势卵泡,但安慰剂组未见优势卵泡。治疗组中9例于治疗后2~3周来月经;5例月经恢复后2个月妊娠;2例治疗后月经规律,卵泡功能恢复正常。结论卵巢功能减退患者血清AOAb、ACAb阳性率高,给予免疫抑制剂与阿司匹林治疗,有利于促进卵泡功能复苏。

从云南省蝙蝠中分离基孔肯雅病毒及血清抗体调查

1986年7月,从捕自云南省西双版纳地区的棕果蝙蝠脑组织中分离出1株病毒,经理化、生物学性状及血清学鉴定,为基孔肯雅病毒,此为我国首次报道,用血凝抑制试验测定人及动物血清基孔肯雅病毒抗体,健康人阳性率为6.93％(70/1010),恒河猴为2.45％(5/204),猪为4.08％(8/197),表明云南省人及动物中存在本病毒感染。

应用胶体金SEA-DIPSTICK法检测日本血吸虫病血清抗体的研究

目的 建立一种快速、简便、实用的检测日本血吸虫病血清抗体的Dipstick方法。方法 应用胶体金SEA -dip stick法检测日本血吸虫病血清抗体。结果 用该法检测急性血吸虫病血清 2 8人份和慢性血吸虫病血清 2 97人份 ,其阳性检出率分别为 10 0 %和 97 31%。在 5 18例正常人和 5 73例其它 4种寄生虫病人血清中有 0 19%假阳性和 2 4%交叉反应。与Dot-ELISA比较 ,经卡方检验表明两者的敏感性无显著性差异 ,而SEA -dipstick法的特异性较Dot -ELISA强。 结论 胶体金SEA -dipstick法检测日本血吸虫病血清抗体有较高的敏感性和特异性 ,并且方法快速 ,操作简便 ,不需特殊仪器设备 ,稳定性高 ,重复性好 ,具有广泛的应用前景。

NDV La Sota、V4疫苗免疫鸡及免疫攻毒鸡的主要特异性血清抗体动态变化规律比较

本研究应用间接ELISA方法对新城疫LaSota和V4疫苗免疫SPF鸡及免疫后攻毒SPF鸡的血清中新城疫病毒(NDV)特异性HI抗体、IgM和IgG抗体水平的动态变化进行了检测。结果表明 ,V4较LaSota疫苗免疫鸡HI抗体提前 3天左右出现 ,但除高峰期 (1周左右 )外 ,其HI抗体水平均低于LaSota免疫鸡。LaSota疫苗免疫鸡血清中NDV特异性IgM和IgG抗体水平高于V4免疫鸡 ,IgG抗体高峰较V4免疫鸡提前约 2周出现 ,攻毒后 ,LaSota免疫鸡血清中特异性IgG和IgG回忆应答显著 ,而V4免疫鸡IgM和IgG回忆应答不明显。

猪乙型脑炎血清抗体DIGFA检测方法的建立与应用

本试验建立了一种以固相滤膜为载体,以红色胶体金颗粒标记的兔抗猪IgG作为探针,特异性地检测猪流行性乙型脑炎病毒抗体的斑点金免疫渗滤测定法（DIGFA）。与血凝抑制试验（HI）对比检测了54份猪血清临床样本,两法的阳性符合率为71.4％、阴性符合率为65.5％、总符合率为81.4％。本法中抗原抗体通过渗滤在膜上进行反应,数分钟内即可用肉眼观查结果,具有快速,操作简单,敏感性高,特异性强,重复性好,易于判读等优点,特别适合于猪流行性乙型脑炎快速诊断和大规模血清流行病学调查。

中医药治疗HIV/AIDS血清抗体阴转8例报告

目的：报道用中药后，血清艾滋病病毒抗体阴转的艾滋病毒感染者／艾滋病（ＨＩＶ／ＡＩＤＳ）患者。方法：８例确诊的ＨＩＶ／ＡＩＤＳ患者〔无症状携带者（ＡＣ）、艾滋病（ＡＩＤＳ）各１例，艾滋病相关综合征（ＡＲＣ）６例〕，用中药方剂（８０２、８０６、８０９、８１０、生脉饮、中研一号）后，复查血清抗体和患者免疫功能，以多聚酶链反应扩增（ＰＣＲ）法检查其淋巴细胞核内的ＨＩＶ－ＤＮＡ，并长期随访观察之。结果：用上药治疗８７～４６３天后，复查患者血清艾滋病病毒抗体已转为阴性。用ＰＣＲ法证实，有５例为ＰＣＲ阳性，２例ＰＣＲ阴性，１例３个月后阳转。连续观察１１～４９个月，这种“血清阴性，核内阳性”的情况仍保持不变，这些患者属于免疫静止型ＨＩＶ感染。还发现所有阴转患者均属免疫功能良好者。结论：艾滋病是一种病程可逆转的疾病，阴转现象和免疫功能密切相关，用中药提高免疫功能，可能有助于阴转现象的出现。

青刺果多糖对鸡血清抗体和血液生化指标的影响

[目的]探讨饲喂青刺果多糖对鸡血清抗体和血液生化指标的影响。[方法]分别采用400和800mg/kg的青刺果多糖饲喂7日龄鸡(设对照组),研究青刺果多糖对鸡血清抗体水平和血液生化指标的影响。[结果]与对照组相比,21日龄时青刺果多糖480mg/kg组中鸡IgM含量极显著增加;28日龄时IgG和IgM含量显著增加;各项血液生化指标与对照组相比均无显著差异。[结论]青刺果多糖能明显提高鸡的血清抗体含量,增强鸡的免疫力,可作为免疫增强剂。

呼伦贝尔地区绵羊布鲁菌病血清抗体调查

通过对临床血清样本布鲁菌抗体检测,调查呼伦贝尔地区绵羊布鲁菌病发生与流行情况。应用虎红平板凝集试验对906份绵羊血清进行了布鲁菌血清抗体检测,结果羔羊、基础母羊和商品羊的抗体阳性率分别为5.28%、5.68%和4.22%,总的抗体阳性率为4.86%。

猪传染性胸膜肺炎血清抗体检测

应用间接血凝试验对来自甘肃、陕西、宁夏、河南、湖北、湖南和海南 7个省 (区 )的 14 70份猪血清进行猪传染性胸膜肺炎血清抗体检测和分型鉴定。结果猪传染性胸膜肺炎平均抗体阳性率为 2 0 % ,其范围为 0— 60 % ;分型鉴定表明 ,各省 (区 )的血清型不尽相同 ,主要为 1、3、7型。

海南省1株甲属虫媒病毒的分离鉴定及其血清抗体调查

1995 年,从海南省捕获的蚊虫标本中,分离到1 株病毒,编号为HYM1。该病毒以脑内感染的方式感染2～3 日龄乳鼠及3 周龄小鼠,感染后2～4 d 规律致死。在Vero-E6 细胞组织培养中可增殖,并可产生明显的病变。经理化和生物学鉴定,该病毒对酸、乙醚均敏感,抵抗5-氟脱氧尿苷和胰酶,属RNA 病毒。血清学鉴定表明,该病毒与马雅罗病毒(MAY)抗原性关系密切。从当地人血清中检到了HYM1 病毒抗体,其阳性率为3.99% 。

宫颈癌患者HPV16型E6蛋白的表达纯化及血清抗体检测

背景与目的:人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirustype16,HPV16)是宫颈癌组织中最常见的高危HPV,其相应蛋白的血清抗体与宫颈癌的发生发展相关。本研究构建HPV16E6重组表达载体并表达纯化获得HPV16E6重组蛋白,用于检测不同人群血清相应抗体,初步探讨本地区HPV16E6血清抗体反应与宫颈癌的相关性。方法:将HPV16E6基因与pRSET-A融合表达载体连接,获得E6表达重组体,转化大肠杆菌BL21(DE3)并用异丙基硫代-$-D-半乳糖苷(isopropylthio-$-D-galactoside,IPTG)诱导表达。表达的包涵体变性后经Ni柱纯化,复性并经活性鉴定后,用以包被ELISA板,检测正常女性、慢性宫颈炎患者和宫颈癌患者血清抗体。同时采用荧光偏振方法分型检测宫颈癌组织HPVDNA。结果:pRSET-16E6表达重组体的工程菌经IPTG诱导后可表达Mr24×103的HPV16E6组氨酸融合蛋白,表达量占菌体蛋白的22.3%。表达形式为包涵体,重组蛋白纯度达95%以上,其活性经ELISA法证实。80例正常女性、46例慢性宫颈炎和32例宫颈癌患者血清抗体阳性率分别为5.0%、6.5%和31.2%,宫颈癌患者HPV16E6血清抗体阳性率显著高于正常人(P<0.002)及慢性宫颈炎患者(P<0.01),而正常人与慢性宫颈炎患者间的差异无显著性。32例宫颈癌患者癌组织中,HPVDNA阳性率90.6%,HPV16DNA阳性率46.9%。HPV16DNA阳性组血清HPV16E6抗体阳性率(46.7%)高于阴性组(17.6%),但两组间的差异无显著性(P>0.05)。结论:在pRSET-A/BL21中表达获得的HPV16E6融合蛋白,可用于宫颈癌相关HPV的血清学研究;宫颈癌患者HPV16E6血清抗体阳性率明显高于正常人和慢性宫颈炎患者。

用ELISA检测猪细小病毒(PPV)血清抗体

采用差速离心、透析、聚乙二醇 (PEG)浓缩方法纯化猪细小病毒 (PPVDK7113)制备抗原。用纯化的PPV抗原包被聚苯乙烯微量反应板 ,建立了检测PPV血清抗体的间接ELISA。抗原最佳包被浓度为6.3μg/ml,被检血清最佳稀释度为1∶200。用建立的ELISA检测山东、东北、广东等地的426份血清 ,结果阳性率为36.2%。与华中农大病毒室提供的猪细小病毒乳胶凝集试验试剂盒相比 ,其结果符合率为98.6 %。通过阻断试验、交叉试验 ,说明本方法在特异性上达到了较为满意的结果 ,且易于操作 ,适用于血清学定性诊断。

间接ELISA检测鸭疫里默氏杆菌血清抗体方法的建立

应用1型鸭疫里默氏杆菌(云南株)超声粉碎物作为包被抗原,建立检测鸭疫里默氏杆菌血清抗体的间接ELISA方法。用倍比稀释法确定HRP标记羊抗鸭二抗最佳稀释倍数为1∶3500,并用棋盘测定法确定抗原的最佳包被浓度为2.7mg/mL,血清最佳稀释倍数为1∶300,阴性血清临界值为0.381;阻断试验结果表明,1型鸭疫里默氏杆菌与其抗血清阻断阳性,与鸭大肠杆菌O78、O132菌株和FJ4型鸭疫里默氏杆菌阻断阴性(无交叉反应)。重复性试验结果表明,该ELISA方法批内变异系数≤0.246,批间变易系数≤0.889。结果表明,该ELISA方法特异性强,重复性好,可用于1型鸭疫里默氏杆菌(云南株)血清抗体的检测。