1株血清10型副猪嗜血杆菌的分离鉴定与生物学特性分析

【目的】阐明引起荆州某猪厂仔猪疑似副猪嗜血杆菌病的病原生理生化特性、毒力与药物敏感性,为今后对该病的防治提供科学依据。【方法】从患病仔猪中分离培养病原菌,通过形态学观察、生理生化鉴定、PCR鉴定、16S rRNA基因测序、血清型鉴定、多序列位点分型(MLST)对分离菌株进行鉴定。通过毒力基因检测、小鼠致病性、药敏试验、中药治疗试验等对分离株进行致病性、耐药性分析。【结果】通过形态学观察、生理生化试验、16S rRNA序列比对、系统进化树分析确定分离菌株为副猪嗜血杆菌。通过血清型与MLST分析确定分离菌株为血清10型、ST型为299。毒力基因检测发现,分离菌株具有CapD、vta 1、vta 2等15种毒力基因。将分离菌株腹腔注射感染小鼠,可导致小鼠多个脏器发生明显病变,具有较强致病性。耐药基因检测试验发现,分离菌株具有β-内酰胺类耐药基因bla OXA和氟喹诺酮类耐药基因gyrA。药敏试验结果显示,分离菌株对头孢他啶、新霉素、米诺环素等10种抗菌药物敏感,同时对明雄黄、款冬花、全蝎3种中药敏感。中药治疗试验结果表明,明雄黄和全蝎对分离菌株感染小鼠有较明显的治疗作用。【结论】试验成功分离1株血清10型副猪嗜血杆菌,侵染小鼠可致多个器官出血坏死,该菌株对10种抗菌药物及3种中药敏感,且明雄黄和全蝎对分离菌株感染小鼠治疗效果明显。研究结果可为今后副猪嗜血杆菌的防治和临床诊疗提供参考依据。

嗜肺军团菌血清10型致军团病爆发流行并分离培养成功

１９９２年２～３月，北京市郊某宾馆发生了一起上呼吸道感染流行。流行病学调查及细菌学检查证明，这是一起嗜肺军团菌血清１０型（Ｌｐ１０）引起的宾馆军团病爆发流行，感染率为２４．３２入（９／３７），患病率为１３．５１％（５／３７）。由Ｌｐ１０引起的军团病爆发流行在世界上属首次报道，而Ｌｐ１０分离培养成功在国内尚属首次。

血清10型禽腺病毒AHFY19株全基因组序列测定与分析

禽腺病毒(Fowl Adenovirus,FAdV)是一组血清型众多及致病性多样的病原体,多数呈亚临诊性长期潜伏带毒,部分毒株可造成禽群包涵体肝炎、心包积液、肌胃糜烂症、产蛋下降、生长迟缓等病症,严重威胁养禽业健康发展。为分析血清10型禽腺病毒(FAdV-10)全基因组序列特征,本研究将分离自外表健康鸡泄殖腔拭子的FAdV-10 AHFY19株经卵黄囊途径接种8日龄SPF鸡胚扩繁,从死亡鸡胚肝组织中提取病毒基因组,采用illumina二代基因测序技术和特殊结构区二温式PCR扩增测定病毒全基因组并分析其遗传特征。结果显示,AHFY19株(103.1EID50/0.1 mL/枚)接种的鸡胚于18~21日龄全部死亡。全基因组测序显示,AHFY19株病毒基因组全长为45757 bp(GenBank登录号:MN542422),其G+C含量为54.63%,末端重复序列(ITR)长为56 bp,共有52个开放阅读框(ORF)。基因组比对分析显示,AHFY19株属I群FAdV C种FAdV-10型,与C2-B-FAdV-10株(MK572851)全基因组同源性最高(99.91%),但AHFY19株基因组多203 bp,差异位于fiber-1、fiber-2和ORF19A基因,然而这些差异并不存在于FAdV-10型C-2B株。AHFY19株与FAdV-4毒株全基因组核苷酸序列同源性在98.35%~98.58%之间。主要结构蛋白基因遗传进化分析显示,仅hexon基因发育进化树可区分C种FAdV-10型与FAdV-4型毒株。氨基酸分析显示,AHFY19株Hexon蛋白V188、Fiber-2蛋白G219和A380与FAdV-4型弱毒株一致。本研究为国内首次测定公布FAdV-10型病毒全基因组序列,其基因组分子特征为深入分析FAdV遗传演化提供了研究资料。