血管性血友病因子裂解酶间隔区结构域突变对酶生物学功能的影响

目的:探讨血管性血友病因子裂解酶ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1型13(ADAMTS13)间隔区结构域在血管性血友病因子(vWF)裂解过程中的生物学功能,阐明ADAMTS13在血栓性血小板减少性紫癜(TTP)发病机制中的作用。方法:将ADAMTS13间隔区结构域中的氨基酸残基TEDRLPR以点突变技术逐个基因突变(突变体M1~M7),将构建的ADAMTS13与其突变体质粒转染至人胚肾HEK293细胞,稳定表达后提纯重组蛋白。观察野生型和突变型ADAMTS13在变性条件、剪切应力作用和ADAMTS13抗体处理后裂解vWF的能力。结果:荧光共振能量转移(FRET)实验,与野生型ADAMTS13比较,ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)对FRET-vWF73剪切能力降低(P<0.05)。变性条件下,野生型ADAMTS13可以将vWF多聚体裂解,与野生型ADAMTS13比较,ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)的裂解活性明显降低(P<0.01)。在体外剪切应力作用下,与野生型ADAMTS13比较,ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)裂解vWF多聚体的能力明显降低(P<0.01)。与野生型ADAMTS13比较,ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)与vWF之间的结合力差异无统计学意义(P>0.05),表明ADAMTS13的C末端与vWF之间存在多个结合位点。ADAMTS13抗体处理可在一定程度上抑制野生型和突变型ADAMTS13裂解vWF的能力。结论:间隔区突变后ADAMTS13的活性降低。ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)可能是ADAMTS13在底物识别时的重要作用位点。

无流体剪切力条件下ADAMTS13裂解内皮细胞上特大血管性血友病因子的研究

目的:研究血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)在无流体剪切力下裂解内皮细胞上特大血管性血友病因子(ULVWF)的分子机制,为探明血栓性血小板减少性紫癜(TTP)和其他血栓性疾病的发病机理提供理论依据。方法:通过免疫荧光显微镜观察ADAMTS13在无流体剪切力下裂解内皮细胞表面上ULVWF的情况,采用ELISA测定不同条件下培养基中VWF抗原量的变化。ELISA和Western blot分别测定有无流体剪切力或凝血因子VIII(FVIII)条件培养基中的VWF和蛋白水解片段的数量。多聚体分析评估ADAMTS13裂解内皮细胞上ULVWF的情况。将组胺刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)与ADAMTS13和各种N-和C-末端截断的突变体一起孵育,通过免疫荧光显微镜观察与细胞保持结合的ULVWF,ELISA测定内皮细胞释放出的ULVWF,确定降解内皮细胞上ULVWF所需的ADAMTS13结构域。结果:在无流体剪切力下,重组ADAMTS13和血浆ADAMTS13迅速降解了内皮细胞表面上新形成的ULVWF。ULVWF的蛋白水解过程依赖于培养时间、ADAMTS13浓度和剪切力。ADAMTS13介导的蛋白水解释放的VWF分布与组胺刺激下内皮细胞分泌的VWF分布非常相似,提示ULVWF在内皮细胞表面发生裂解。裂解内皮细胞上ULVWF需要ADAMTS13半胱氨酸富集区(Cys-rich,Cys R)结构域和间隔区结构域,但不需要ADAMTS13的7个TSP1重复序列(TSP12-8)和2个补体结合区(CUB)结构域。结论:内皮细胞上ULVWF聚合物在无流体剪切力下也对ADAMTS13的裂解敏感,这为ADAMTS13裂解内皮细胞结合的ULVWF的分子机制提供了新见解,并可能有助于理解TTP和其他血栓性疾病的发病机理。

血清血管性血友病因子在急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征患者中表达的meta分析

目的系统评价血清血管性血友病因子(vWF)在急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)患者中的表达水平。方法检索中国知网、万方、维普、PubMed、Embase、Web of Science、Cochrane central register of controlled数据库,收集建库至2024年4月之前关于血清vWF在ALI/ARDS患者中表达的原始文献,依标准筛选文献,评价文献质量,运用STATA17和Revman5.3对收集的原始数据进行meta分析。结果在分析血清vWF表达与ALI/ARDS发病风险的关联时,共纳入6篇文献,包括260名ALI/ARDS患者,合并标准化均值差为[SMD=0.95,95%CI(0.64,1.25),P<0.01];在分析血清vWF表达对ALI/ARDS患者预后预测时,共纳入8篇文献,包括3198名ALI/ARDS患者,汇总比值比为[OR=1.61,95%CI(1.44,1.80),P<0.01]。结论血清vWF高表达与ALI/ARDS发病风险及预后预测具有显著相关性,作为一种便捷的检验方法,在临床实践中具有良好的应用价值。

非小细胞肺癌患者血管性血友病因子和微小RNA-497表达水平与肿瘤血管生成关系

目的:探究血管性血友病因子(vWf)和微小RNA-497(miRNA-497)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的表达情况及与肿瘤血管生成的关系。方法:收集102例接受手术根治治疗的NSCLC患者,免疫组化法测定患者癌变组织和对应癌旁组织(正常组织)中vWf表达情况和微血管密度(MVD),实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测微小RNA-497(miRNA-497)表达情况。比较不同组织中vWf、miRNA-497表达水平,探究其表达水平与NSCLC患者MVD的关系。结果:癌变组织中vWf表达水平和MVD计数明显高于癌旁组织,miRNA-497表达水平明显低于癌旁组织(均P<0.05)。vWf在TNMⅢ-Ⅳ期、肿瘤细胞中低分化及出现淋巴转移的NSCLC癌变组织中表达水平明显提高,miRNA-497在该类患者癌变组织中表达水平明显下降(均P<0.05)。相关性分析显示,NSCLC癌变组织中vWf表达水平与MVD计数呈正相关(r=0.554),miRNA-497表达水平与MVD计数呈负相关(r=-0.707,P<0.01)。结论:vWf在NSCLC病灶组织中上调表达,miRNA-497下调表达,且其表达均与肿瘤细胞分化、侵袭、转移和血管新生有关。

沙库巴曲缬沙坦联合阿司匹林在急性心肌梗死患者经皮冠状动脉介入治疗术后心律失常中的应用及血清血管性血友病因子裂解酶、鸢尾素水平变化研究

目的探究沙库巴曲缬沙坦联合阿司匹林在急性心肌梗死(AMI)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后心律失常中的应用效果。方法依据随机数字表法按1∶1比例将92例AMI行PCI术后心律失常患者分为试验组和基础组,每组各46例。基础组采用口服依那普利联合阿司匹林治疗,试验组采用口服沙库巴曲缬沙坦联合阿司匹林治疗,两组患者均治疗1个月。收集所有患者基线资料、疗效、治疗前后心功能指标及不良反应发生情况并进行组间比较。结果试验组患者总有效率高于基础组(P<0.05)。治疗后两组患者心功能指标、校正QT间期(QTc)、QRS时限、心肌酶谱指标及血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS-13)水平均较同组治疗前降低,QT离散度(QTd)、氨基末端B型钠尿肽原(NT-proBNP)及鸢尾素(Irisin)水平均较同组治疗前升高;试验组患者治疗后心功能指标、心电图指标、心肌酶谱指标及ADAMTS-13水平均较同期基础组降低,NT-proBNP及Irisin水平均较同期基础组升高(P<0.05)。两组患者不良反应发生率比较差异无统计学意义(P=0.503)。结论沙库巴曲缬沙坦联合阿司匹林治疗AMI患者PCI术后心律失常安全有效,可调节血清Irisin、ADAMTS-13水平,减轻心肌损伤,提高心功能,促使心电图恢复。

血管性血友病因子、肾损伤分子-1、肝细胞生长因子在急性肾损伤患者中的表达及与预后相关性

目的:分析血管性血友病因子(vWF)、肾损伤分子-1(KIM-1)、肝细胞生长因子(HGF)在急性肾损伤患者中的表达及与预后相关性。方法:选取2020年01月—2022年12月我院收治的125例急性肾损伤患者为研究对象,作为研究组,另外选取70例健康无疾病的体检者作为对照组。观察各组vWF、KIM-1、HGF水平,分析与预后的相关性。结果:与对照组相比,研究组APACHEⅡ评分、SOFA评分较高(P<0.05)。与Ⅰ期患者相比,Ⅱ期、Ⅲ期患者vWF、KIM-1、HGF表达水平逐渐升高(P<0.05)。与存活患者相比,死亡患者vWF、KIM-1、HGF表达水平较高(P<0.05)。vWF、KIM-1、HGF与预后呈正相关(P<0.05)。Logistic回归分析显示,肺部感染、APACHEⅡ评分、SOFA评分、氧合指数、Scr、BUN、eGFR、动脉血乳酸、vWF、KIM-1、HGF为影响急性肾损伤患者预后的危险因素。结论:vWF、KIM-1、HGF在急性肾损伤患者体内表达水平较高,且随着病情严重程度的增加,KIM-1、HGF水平逐渐升高,KIM-1、HGF与不良预后呈正相关,为急性肾损伤的危险因素。

通痹汤对冠状动脉粥样硬化性心脏病心绞痛患者白细胞分化抗原40、白细胞分化抗原154、血管性血友病因子的影响

目的:观察通痹汤对冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)稳定型心绞痛气虚血瘀证患者白细胞分化抗原40(Cluster of Differentiation 40,CD40)、白细胞分化抗原154(Cluster of Differentiation 154,CD154)、血管性血友病因子(von Willebrand Factor,vWF)的影响。方法:将90例气虚血瘀型冠心病心绞痛患者随机分为试验组和对照组,每组45例。对照组给予常规临床治疗(包括抗血小板聚集、降低血脂稳定斑块、抑制心室重构、营养心肌、扩张动脉、减少心肌耗氧等治疗),试验组在对照组基础上加用通痹汤口服治疗。一个疗程为2周,2个疗程后评估患者的心绞痛症状、6 min步行距离(6-minute Walking Distance,6MWD)、血浆D-二聚体、CD40、CD154、vWF变化。结果:试验组总有效率为82.2%(37/45),对照组为46.7%(21/45),差异有统计学意义(P<0.01)。治疗后,试验组心绞痛发作次数少于对照组[(3.54±0.51)(次/周)VS.(4.94±0.59)(次/周),P<0.05)]、6MWD大于对照组[(544.17±51.54)m VS.(516.79±36.28)m,P<0.05]。治疗后,试验组硝酸甘油停减率为66.7%(30/45),对照组硝酸甘油停减率为26.7%(12/45),差异有统计学意义(P<0.01)。治疗后,试验组CD40[(146.69±40.23)ng/L VS.(223.60±91.34)ng/L,P<0.01]、CD154[(10.62±7.17)ng/L VS.(14.20±6.73)ng/L,P<0.01]、vWF因子[(427.29±91.79)U/L VS.(513.63±101.81)U/L,P<0.01]、血浆D-二聚体[(1.06±0.73)ng/L VS.(1.63±0.83)ng/L,P<0.01]水平均低于对照组。结论:通痹汤能够改善冠心病患者心绞痛发作次数,增加6MWD,降低CD40、CD154、vWF因子、D-二聚体水平。

高血压病患者血浆血管性血友病因子及其裂解酶的变化

目的:探讨高血压病患者血浆血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)水平及血管性血友病因子裂解酶(von Willebrand factor-cleaving protease,vWF-cp)活性变化和临床意义。方法:高血压病患者分为合并高脂血症组32例和单纯高血压病组48例,健康成人组60例。应用免疫比浊法和免疫印迹发光绘图法分别检测血浆vWF水平和vWF-cp活性。结果:高血压病患者血浆vWF水平显著高于健康成人(P<0.01),而vWF-cp活性显著低于健康成人(P<0.01);高血压病合并高脂血症组血浆vWF水平高于单纯高血压病组(P<0.05),而vWF-cp活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论:血浆vWF水平升高,vWF-cp活性降低可能与高血压病发生、发展、内皮损伤有关,而且高血压病合并高脂血症其内皮损伤程度更重。

血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)单克隆抗体的鉴定以及生物学功能的研究

目的:构建并鉴定血管血友病因子裂解酶(ADAMTS13)单克隆抗体,并研究其生物学功能。方法:利用真核表达的重组血浆金属蛋白酶ADAMTS13截断型蛋白(ADAMTS13-T7)纯品免疫BALB/c小鼠,经标准单克隆抗体技术制备单克隆抗体。用ELISA方法鉴定单克隆抗体的特异性;应用免疫印迹技术确定单克隆抗体与全长ADAMTS13的识别能力;观察单克隆抗体对ADAMTS13水解v WF的影响。结果:最终获得6株抗ADAMTS13的单克隆抗体,克隆号分别为1G11、2F11、6G3、9E1、10A8、10B4。经ELISA鉴定,纯化后的单克隆抗体1G11和2F11的效价最高,与截断型ADAMTS13-T7蛋白结合能力比较,明显高于全长ADAMTS13蛋白。Western blotting结果显示,6个单克隆抗体都能与全长ADAMTS13结合,其中1G11和2F11条带最亮。功能实验表明,在变性条件下1G11和2F11能够明显抑制ADAMTS13水解v WF,并随着单克隆抗体浓度的增加而抑制作用增强。结论:成功获得针对ADAMTS13的单克隆抗体,其中两株为抑制性功能抗体。

PCI术前 术后血管性血友病因子及其蛋白裂解酶水平分析

目的通过检测经皮冠状动脉介入(PCI)术前、术后冠心病患者血浆中血管性血友病因子(vWF)及其裂解酶(vWFcp)水平,了解其与冠心病及PCI术的关系。方法根据冠脉造影结果将研究对象分对照组(造影正常)及PCI组(经造影确诊为冠心病并行PIC术),通过酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆vWF浓度和及血浆vWF-cp活性水平并进行统计分析。结果术前、术后PCI组血浆vWF水平明显高于对照组,PCI术后血浆vWF水平明显高于PCI术前(P<0.05)。PCI组vWF-cp活性水平较对照组降低,而PCI术后低于PCI术前(P<0.05)。血浆vWF水平随冠心病变严重程度而升高,vWF-cp活性水平随之降低。结论 vWF及vWF-cp水平随冠脉病变严重程度及血栓风险不同呈增高和减低趋势,在急性冠脉综合征的发病过程中可能起重要作用。PCI术后vWF及vWF-cp水平变化,提示介入治疗一定程度上可增加血栓形成风险。

血管性血友病因子、vWF-cp与老年人冠心病、动脉粥样硬化斑块的关系

血管性血友病因子（vWF）及其蛋白裂解酶对血栓形成有重要作用。vWF一裂解酶（cp）可以通过对vWF多聚体大小的调控来调节vwF多聚体与内皮下胶原和血小板的黏附能力，从而影响血栓的形成，在冠心病的发病过程中发挥重要作用，急性冠状动脉综合征（ACS）的发生是由于不稳定斑块的破裂及其表面的血栓形成而导致冠状动脉管腔的不完全性或完全性闭塞。而不稳定斑块如经积极有效的治疗，可转变为稳定斑块，从而降低其危险性。因此及时准确地鉴别不稳定斑块并进行干预治疗对预防ACS的发生有着十分重要的意义。

抗血管性血友病因子抗体对特发性血栓性血小板减少性紫癜的影响

目的探讨抗血管性血友病因子(vWF)抗体在特发性血栓性血小板减少性紫癜(TTP)发病中的意义。方法选择广西壮族自治区人民医院2010年1月至2013年6月间收治的特发性TTP患者28例,同时选取同期门诊体检健康者30例作为健康对照组,检测两组对象血浆抗血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)和vWF相关指标。结果 (1)28例特发性TTP患者中有3例患者vWF抗体阳性(vWF抗体阳性组),其余患者vWF抗体阴性(vWF抗体阴性组)。vWF抗体阳性组血浆ADAMTS13抗体均为阴性。(2)vWF抗体阳性组血浆ADAMTS13含量明显低于vWF抗体阴性组和健康对照组,3组血浆ADAMTS13水平比较差异有统计学意义(P<0.01)。vWF抗体阳性组血浆vWF抗体A值明显高于vWF抗体阴性组和健康对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。(3)28例特发性TTP经过血浆置换(PE)后ADAMTS13抗原含量明显升高,vWF抗体A值明显降低(P<0.05)。结论 vWF抗体在特发性TTP发病中起到重要的作用,vWF抗体可能通过影响患者血浆ADAMTS13,促进vWF复合物形成,影响疾病发生。

外周血血管性血友病因子裂解酶水平对急性心肌梗死的诊断效能

目的观察外周血血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)水平对急性心肌梗死(AMI)的诊断效能。方法接受冠状动脉造影检查的患者374例,根据AMI诊断标准和冠状动脉造影检查结果分为AMI组(218例)和对照组(156例)。采用酶联免疫吸附实验检测两组患者外周血ADAMTS13,并作比较。收集两组患者的年龄、性别、BMI、高血压病史、糖尿病史、吸烟史、饮酒史等一般资料,肌酸激酶同工酶(CK-MB)、左心室射血分数(LVEF)、脑钠肽(BNP)、左室舒张期内径、D-二聚体、纤维蛋白原、血小板计数、血小板平均体积、血小板比积、空腹血糖、糖化血红蛋白、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、总胆固醇、甘油三酯等实验室检测指标,并作比较;将两组差异有统计学意义的指标作为自变量,以AMI为因变量,采用二分类Logistic回归分析法分析AMI的影响因素。采用受试者工作特征曲线(ROC)评价外周血ADAMTS13水平对AMI的诊断效能。结果AMI组患者外周血ADAMTS13水平为749.44(340.66,1395.31)ng/m L,对照组患者外周血ADAMTS13水平为1251.15(561.80,2431.81)ng/m L,两组相比,P<0.001。两组患者的平均年龄、男性占比、有糖尿病史、有吸烟史、有饮酒史、CK-MB、LVEF、BNP、左室舒张内径、D-二聚体、纤维蛋白原、血小板平均体积、血小板比积、空腹血糖、糖化血红蛋白、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、总胆固醇、甘油三酯等指标相比,P均<0.05。外周血ADAMTS13水平、甘油三酯水平、空腹血糖水平、纤维蛋白原水平、血小板比积是AMI的独立影响因素。外周血ADAMTS13水平诊断AMI的曲线下面积为0.64,取截断值为993.26 ng/m L时,外周血ADAMTS13水平诊断AMI的敏感度为62.6%、特异度为60.8%。结论AMI患者外周血ADAMTS13水平降低;外周血ADAMTS13水平、甘油三酯水平、空腹血糖水平、纤维蛋白原水平、血小板比积是AMI的独立影响因素;检测外周血ADAMTS13水平有助于AMI的诊断。

血管性血友病因子裂解酶在脓毒性休克患者中低表达且对其预后有评估价值

目的:探讨血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)在脓毒性休克患者中的表达意义。方法:选取脓毒症患者150例,按严重程度分为单纯脓毒症组(43例)、重度脓毒症组(48例)、脓毒性休克组(59例)。另外选取同期体检的健康志愿者60例作为健康对照组。检测脓毒症组患者确诊后第1、3、5、7天及健康对照组血浆ADAMTS13水平,并行急性生理与慢性健康状况评估(APACHEⅡ)评分,随访患者28 d预后情况,分析上述指标对患者预后的预测价值。结果:脓毒症组不同时间点血浆ADAMTS13水平均低于健康对照组(P均<0.05)。脓毒症3个亚组ADAMTS13、血管性血友病因子(vWF)、抗凝血酶(AT)、白细胞介素(IL)-6水平、APACHEⅡ评分比较,差异有统计学意义(P均<0.05)。单纯脓毒症组ADAMTS13、AT高于重度脓毒症组和脓毒性休克组且重度脓毒症组高于脓毒性休克组(P均<0.05),vWF、IL-6水平、APACHEⅡ评分低于重度脓毒症组和脓毒性休克组,且重度脓毒症组低于脓毒性休克组(P均<0.05)。单纯脓毒症组和重度脓毒症组患者均无死亡病例。脓毒性休克组中存活29例,死亡30例,死亡率为50.85%。脓毒性休克死亡患者血浆ADAMTS13、AT水平低于存活者,vWF、IL-6水平、APACHEⅡ评分高于存活者(P均<0.05)。血浆ADAMTS13、vWF、AT、IL-6水平、APACHEⅡ评分为脓毒性休克患者预后的危险因素(P均<0.05)。ADAMTS13、vWF、AT、IL-6水平、APACHEⅡ评分对脓毒性休克患者预后死亡的预测价值较高,其中以ADAMTS13预测价值最高(P均<0.05)。结论:脓毒性休克患者血浆ADAMTS13水平明显降低,降低程度与患者疾病严重程度及预后有关,可能与调控vWF、AT、IL-6水平表达,介导炎症、凝血障碍的发生相关。

血管性血友病因子裂解酶活性域的表达及其单克隆抗体的制备

血管性血友病因子裂解酶(vWF-cp)是一种新发现的金属蛋白酶,与血栓性微血管病的发生密切相关。本研究应用IPTG从pET28a(+)-vWF-cp/MD质粒中诱导表达了vWF-cp的金属蛋白酶域,重组蛋白经Ni-NTA柱纯化,复性后免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得了稳定分泌抗vWF-cp金属蛋白酶域抗体的细胞株,进一步对其单克隆后,收集细胞接种于小鼠腹腔产生腹水,鉴定所获得的单克隆抗体,同时,利用单克隆抗体确定vWF-cp在组织细胞中的位置及其在各种正常组织中的表达情况。结果表明,重组蛋白主要以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的28%。利用杂交瘤技术制备出3株抗vWF-cp单克隆抗体,对其中2株单克隆抗体作了进一步的鉴定。免疫双扩散和竞争ELISA结果显示,它们均属IgG1亚类,腹水中的含量约为4mg/ml,效价达1×10-5,而且识别vWF-cp金属蛋白酶域不同的表位。Westernblot和免疫沉淀结果表明,2株单克隆抗体能够识别重组蛋白和正常血小板中200kD的蛋白。在组织细胞中,2株单克隆抗体识别的蛋白位于细胞胞质内,而且在多种正常组织如肝、前列腺和卵巢等组织中表达,但脑组织中无该蛋白的表达。结论:本研究为了解vWF-cp在组织中的分布以及进一步研究该蛋白酶的结构和功能奠定了基础,并且可用所制备的单克隆抗体建立vWF-cp抗原的检测方法。

血管性血友病因子裂解蛋白酶活性的检测方法及评估

血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13,vWF-CP)裂解血浆中具有高黏附能力的超大分子量血管性血友病因子(UL-vWF),防止血小板因其引起聚集形成血栓。ADAMTS13活性异常是临床上血栓性血小板减少性紫癜(TTP),特别是遗传性TTP和特发性TTP发病的基础。其活性的检测在TTP临床诊断和治疗上具有日益重要的意义。目前报道的一些用于检测ADAMTS13活性的方法有十余种,本文对此进行综述。

急性冠状动脉综合征血浆血管性血友病因子及其裂解酶

目的观察急性冠状动脉综合征病人血浆血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)及血管性血友病因子裂解酶(von Willebrand factor cleaving protease,vWF-cp)含量变化及临床意义。方法急性冠状动脉综合征病人分不稳定型心绞痛组17例和急性心肌梗死组17例,分别于急性期(入院后即刻)和恢复期(4周)采血。稳定型心绞痛组和对照组各17例,入院次日空腹采血。应用酶联免疫吸附试验测定血浆vWF活性水平,残余胶原结合力试验测定血浆vWF-cp活性水平。结果①血浆vWF活性水平:不稳定型心绞痛组110%±25%、急性心肌梗死组急性期131%±25%,均高于稳定型心绞痛组84%±19%和对照组72%±13%(P<0.01);亦高于恢复期(不稳定型心绞痛组恢复期为77%±9%,急性心肌梗死组恢复期76%±11%)(P<0.01﹚;②急性期血浆vWF-cp活性水平:不稳定型心绞痛组为53%±12%、急性心肌梗死组46%±12%,均低于稳定型心绞痛组77%±10%和对照组81%±17%(P﹤0.01);亦低于该组恢复期(不稳定型心绞痛与急性心肌梗死组恢复期分别为80%±7%和81%±7%,P﹤0.01);③恢复期各项指标与稳定型心绞痛病人和对照组相比差异无统计学意义(P﹥0.05)。结论血浆vWF水平升高、vWF-cp活性降低在急性冠状动脉综合征血栓形成中可能起重要作用。

维生素D对脓毒症大鼠血清血管性血友病因子血管性血友病因子裂解蛋白酶表达的影响

目的观察维生素D（VD）对脓毒症大鼠血清血管性血友病因子（vWF）、血管性血友病因子裂解蛋白酶（ADAMTS13）表达的影响。方法采用腹腔注射内毒素的方法制备脓毒症大鼠模型，随机分为五组：正常对照组、脓毒症组、骨化三醇组（分别给予骨化三醇1mg／kg、5mg／kg、25mg／kg），观察大鼠一般情况，肺组织病理及肺湿／干质量比变化，血小板计数变化，血清vWF、ADAMTS13变化。结果脓毒症组大鼠病态表现明显，骨化三醇组病态表现优于脓毒症组，骨化三醇各组肺组织病理改变较脓毒症组明显减轻；脓毒症组及骨化三醇组（1mg／kg、5mg／ks）血小板计数低于正常对照组，骨化三醇组（25mg／ks）血小板计数与正常对照组比较差异无统计学意义，但低于脓毒症组；脓毒症组血清vWF较正常组显著增高，骨化三醇各组较正常组亦显著增高，但低于脓毒症组；脓毒症组及骨化三醇各组血清ADAMTSl3水平较正常对照组显著下降，骨化三醇各组血清ADAMTS13水平与脓毒症组比较差异无统计学意义。结论VD抑制vWF表达，改善内皮细胞损伤进而影响脓毒症发病进程，而这一作用并不是通过提高ADAMTS13的表达实现。脓毒症发生时循环中血小板降低主要与内皮细胞损伤、vWF增加有关。

血管性血友病因子抗原及其活性检测对急性心肌梗死患者辅助诊断的临床价值

目的分析急性心肌梗死(AMI)患者血浆血管性血友病因子(von Willebrand factor,VWF)抗原(VWF:Ag)和活性(VWF:GPIbR和VWF:CB)水平,并探讨其在早期AMI辅助诊断中的临床价值.方法回顾性分析2015年1月至2017年12月在苏州大学附属第一医院急诊科就诊的AMI患者105例为AMI组,同期体检正常的101例志愿者为对照组.测定受试者血浆VWF:Ag、VWF:GPIbR和VWF:CB水平,采用Spearman秩相关法分析VWF与AMI传统凝血和心肌梗死检测项目之间的相关性.通过ROC曲线评估VWF指标单独检测及联合检测对AMI的预测价值.结果AMI组血浆VWF:Ag、VWF:GPIbR和VWF:CB水平明显高于对照组(Z值分别为9.419、11.589和8.121,P均<0.01),AMI组术前和术后VWF:Ag、VWF:GPIbR和VWF:CB的比较差异无统计学意义(P>0.05).AMI患者的VWF:GPIbR水平与其Gensini评分之间呈正相关(r=0.193,P=0.048).在凝血指标中,AMI患者的VWF:GPIbR与血小板水平呈正相关(r=0.241,P=0.013);VWF:Ag、VWF:CB与APTT呈负相关(r分别为-0.308、-0.297和-0.289,P<0.05);在心肌梗死检测项目中,AMI患者仅有血浆VWF:GPIbR水平与肌酸激酶呈正相关(r=0.212,P=0.030).当VWF抗原或活性单独检测时,VWF:GPIbR(ROC=0.967)的诊断效能明显高于VWF:Ag(ROC=0.880;Z=4.551,P<0.01)和VWF:CB(ROC=0.828;Z=5.249,P<0.01);当VWF抗原或活性任意两项指标联合检测时,VWF:Ag+VWF:CB(ROC=0.881)对AMI的诊断效能明显低于VWF:Ag+VWF:GPIbR(ROC=0.967;Z=4.393,P<0.01)和VWF:GPIbR+VWF:CB(ROC=0.967;Z=4.405,P<0.01),而VWF:Ag+VWF:GPIbR和VWF:GPIbR+VWF:CB的诊断效能差异无统计学意义(P>0.05).VWF抗原和活性三项指标联合检测(ROC=0.967)同样明显高于VWF:Ag+VWF:CB两项检测(Z=4.399,P<0.01),而与VWF:Ag+VWF:GPIbR和VWF:GPIbR+VWF:CB之间的差异无统计学意义(P>0.05).结论AMI患者血浆VWF:Ag、VWF:GPIbR和VWF:CB水平均高于健康对照组,VWF:GPIbR水平与冠脉狭窄程度呈一定的相关性.VWF检测对AMI具有辅助诊断价值,其中VWF:GPIbR优于VWF:Ag和VWF:CB,诊断效能最高.对于任意两项VWF指标的联合检测,将VWF:GPIbR纳入系统有助于获得较高的预测效能,而三项联合检测并不能明显提高对AMI的诊断价值.

脂多糖对大鼠肺微血管内皮细胞血管性血友病因子血管性血友病因子裂解蛋白酶表达影响及维生素 D 的干预作用

目的：观察脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）对体外培养大鼠肺微血管内皮细胞（pulmonary microvascular endothelial cells，PMVEC）内血管性血友病因子（von willebrand factor， VWF）、血管性血友病因子裂解蛋白酶（A disintegrin-like andmetalloproteinase with thrombospond in type-1 domain 13，ADAMTS13）表达的影响，以及维生素 D（vitamin D，Vit D）的干预作用。方法体外原代培养大鼠 PMVEC，随机分为6组：NC 组、LPS 组（给予100μg/mL LPS）、骨化三醇（Calcitriol，Cal）组（给予100 nmol/L Cal）及LPS＋Cal 1、2、3组（分别给予100μg/mL LPS 和5 nmol/L、20 nmol/L、100 nmol/L Cal），分别检测细胞裂解液中VWF、ADAMTS13 mRNA和蛋白表达情况。结果 LPS 组和 Cal 组 VWF、ADAMTS13 mRNA 和蛋白表达均无显著变化，LPS 组和 LPS＋ Cal 各组VWF mRNA、蛋白表达较NC组显著增高，LPS＋ Cal各组VWF mRNA、蛋白表达较LPS组显著降低， LPS 组和 LPS＋ Cal 各组 ADAMTS13 mRNA、蛋白表达较 NC 组显著降低，LPS＋Cal 三组 ADAMTS13 mRNA、蛋白表达较 LPS 组显著增高。结论 Vit D 在生理状态下并不能改变 PMVEC 中 VWF 和ADAMTS13的表达，但在受到LPS刺激后可使已增高的VWF表达降低，已降低的ADAMTS13表达增加，在脓毒症或急性肺损伤（acute lung injury，ALI）发病过程中，补充 Vit D 可能通过对 PMVEC中VWF、ADAMTS13表达的影响对疾病的转归起作用。