血清网膜素-1和血管生成素样蛋白2水平与心房颤动病人射频消融术后复发的相关性研究

目的探究血清网膜素-1(Omentin-1)和血管生成素样蛋白2(ANGPTL2)水平与心房颤动(AF)病人射频消融术后复发的相关性。方法选取2021年1月至2022年1月在郑州大学附属洛阳中心医院实施射频消融术治疗的125例AF病人,依据随访结果分为两组:未复发组(n=93)、复发组(n=32);血清Omentin-1、ANGPTL2、白细胞介素(IL)-6、IL-8、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平行酶联免疫吸附测定(ELISA);AF病人术后血清Omentin-1、ANGPTL2水平与各指标相关性采用Pearson分析;多因素logistic分析AF病人术后复发影响因素;采用受试者操作特征曲线(ROC曲线)评价血清Omentin-1、ANGPTL2水平在预测AF病人术后复发中的价值。结果复发组血清IL-6[(3.56±0.73)ng/L]、IL-8[(8.26±2.58)ng/L]、TNF-α[(7.34±2.19)ng/L]、左心房内径(LAD)水平[(37.24±5.23)mm]较未复发组[(1.41±0.26)ng/L、(3.49±1.04)ng/L、(2.67±0.63)ng/L、(31.44±4.16)mm]均显著升高,LVEF水平较未复发组显著降低(P<0.05);与未复发组比较,复发组血清Omentin-1水平显著降低,复发组血清ANGPTL2上水平显著升高(P<0.05);Pearson分析显示,AF病人术前血清Omentin-1水平与炎症因子IL-6、IL-8、TNF-α及LAD均呈负相关,与LVEF呈正相关(P<0.05);血清ANGPTL2水平与炎症因子IL-6、IL-8、TNF-α及LAD水平均呈正相关,与LVEF呈负相关(P<0.05),且Omentin-1、ANGPTL2水平呈负相关;多因素logistic分析显示,高水平Omentin-1为AF病人术后复发的独立保护因素,高水平ANGPTL2、IL-6、IL-8均为AF病人术后复发的独立危险因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,血清Omentin-1、ANGPTL2水平预测AF病人术后复发的曲线下面积(AUC)分别为0.88、0.84,两者联合预测的AUC为0.94,效能均优于两者单独预测(Z=1.93、2.10,P<0.05)。结论AF病人术后血清Omentin-1水平显著降低,血清ANGPTL2水平显著升高,与术后复发相关,且两者联合对预测AF术后复发具有一定价值。

温针灸治疗脑梗死并发下肢动脉粥样硬化症及对脂蛋白相关磷脂酶A2和血管生成素样蛋白2的影响

目的:探讨温针灸联合常规针刺治疗脑梗死并发下肢动脉粥样硬化症(Lower Extremity Atherosclerotic Disease,LEAD)的临床疗效及对脂蛋白相关磷脂酶A2(Lipoprotein-associated Phospholipase A2,Lp-PLA2)和血管生成素样蛋白2(Angiogenin-Like Protein 2,ANGPTL2)的影响。方法:将60例脑梗死合并LEAD患者随机分为试验组和对照组,每组30例。两组均接受常规药物治疗和康复治疗,对照组予以常规针刺治疗,试验组在对照组基础上给予温针灸治疗。治疗前后,通过简化Fugl-Meyer运动功能评定量表(Fugl-Meyer Assessment,FMA)和改良Barthel指数量表(Modified Barthel Index,MBI)评价运动功能;通过踝肱指数(Ankle Brachial Index,ABI)、胫前动脉内径及峰值流速、血清Lp-PLA2和ANGPTL2水平、血脂七项及血同型半胱氨酸等评价临床疗效。结果:试验组总有效率为93.33%(28/30),高于对照组的76.67%(23/30),两组之间存在显著差异(P<0.05);试验组的FMA评分和MBI评分较治疗前高(P<0.05),且高于对照组(P<0.05);试验组ABI、胫前动脉内径和胫前动脉血流峰值较治疗前高(P<0.05),且试验组高于对照组(P<0.05);试验组血清总胆固醇(Total Cholesterol,TC)、三酰甘油(Triglycerides,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(Low Density Lipoprotein Cholesterol,LDL-C)、脂蛋白a(Lipoprotein a,Lp-a)、载脂蛋白(Apo)B、同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)、Lp-PLA2和ANGPTL2水平均较治疗前低(P<0.05),且试验组低于对照组(P<0.05);试验组高密度脂蛋白胆固醇(High-density Lipoprotein Cholesterol,HDL-C)和ApoA1水平高于治疗前(P<0.05),且试验组高于对照组(P<0.05)。结论:温针灸结合常规针刺可以改善脑梗死并发LEAD患者的运动功能,促进下肢血液循环,改善血脂水平,临床疗效显著优于常规针刺,其作用机制可能与降低Lp-PLA2和ANGPTL2水平有关。

血清脂质运载蛋白2和血管生成素样蛋白2水平与甲状腺乳头状癌患者病理参数及预后的关系

目的探讨甲状腺乳头状癌(PTC)患者血清脂质运载蛋白2(LCN2)、血管生成素样蛋白2(ANGPTL2)与病理特征及预后的关系。方法选取2017年1月至2020年6月山西省肿瘤医院收治的PTC患者83例为PTC组,另选取同期83例体检健康志愿者为对照组。采用酶联免疫吸附法检测血清LCN2、ANGPTL2水平。根据PTC患者血清LCN2、ANGPTL2水平均值分为高/低LCN2、ANGPTL2组,采用Kaplan-Meier法绘制高/低LCN2、ANGPTL2水平PTC患者无病生存曲线,采用Cox回归分析影响PTC患者预后的因素。结果PTC组血清LCN2、ANGPTL2水平均高于对照组[(193±84)μg/L比(87±22)μg/L、(5.8±0.7)μg/L比(4.1±0.4)μg/L](均P<0.001)。PTC患者血清LCN2、ANGPTL2水平在不同TNM分期、淋巴结转移、远处转移患者中比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。83例PTC患者随访3年,3年无病生存率为77.1%(64/83)。Kaplan-Meier曲线分析显示,高LCN2组3年无病生存率低于低LCN2组,高ANGPTL2组3年无病生存率低于低ANGPTL2组(均P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移、远处转移、LCN2升高、ANGPTL2升高为PTC患者预后不良的独立危险因素(均P<0.05)。结论PTC患者血清LCN2、ANGPTL2水平升高,与TNM分期、淋巴结转移、远处转移和预后密切相关,可能成为评估PTC疾病进展和预后新的标志物。

磁共振成像联合血清糖类抗原125、血管生成素样蛋白2检测对乳腺癌的诊断效能

目的探讨磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)联合血清糖类抗原(CA)125、血管生成素样蛋白(ANGPTL)2对乳腺癌的诊断效能。方法2020年2月~2022年6月收治的初步诊断为乳腺病变病人152例,根据病理组织检查(乳腺癌改良根治术或穿刺活检)结果分为乳腺癌组(90例)和良性组(62例),所有病人均进行MRI检查,检测病人血清CA125和ANGPTL2水平;绘制ROC曲线分析MRI联合血清CA125、ANGPTL2对乳腺癌的临界诊断点;采用四格表分析MRI联合血清CA125、ANGPTL2对乳腺癌的诊断价值。结果乳腺癌组环形强化病人比例高于良性组,良性组均匀强化病人比例高于乳腺癌组,乳腺癌组血清CA125、ANGPTL2水平高于良性组,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清CA125诊断乳腺癌的AUC为0.870(95%CI:0.815~0.924),截断值为29.574 U/ml,血清ANGPTL2诊断乳腺癌的AUC为0.893(95%CI:0.843~0.942),截断值为6.085 ng/ml,MRI诊断乳腺癌的AUC为0.891(95%CI:0.832~0.950)。MRI、CA125、ANGPTL2及三者联合在乳腺癌诊断中准确度分别为89.47%、84.87%、82.89%、93.42%。结论MRI联合血清CA125、ANGPTL2可以提高乳腺癌的诊断效能。

血清血管生成素样蛋白2与2型糖尿病性视网膜病变的关系

目的 探讨血清血管生成素样蛋白2(angiopoietin-like protein 2,ANGPTL2)与2型糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy, DR)的关系。方法 选取2019年1-12月在宁波大学附属第一医院内分泌科就诊的2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)患者168例,其中合并DR患者84例(DR组),无DR患者84例(NDR组)。收集并比较两组一般资料和血清学指标。通过二分类logistic回归分析探究DR的危险因素,并绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线评估血清ANGPTL2、糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin, HbA1c)对DR的预测价值。结果 一般资料比较:与NDR组比较,DR组病程更长,臀围较小,差异均有统计学意义(P<0.05);血清学指标比较:与NDR组比较,DR组患者血清ANGPTL2、空腹血糖、HbA1c较高,2 hC肽水平较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。二分类logistic回归分析提示,高水平血清ANGPTL2(OR=1.766,95%CI:1.115~2.797)、HbA1c(OR=2.423, 95%CI:1.258~4.669)是DR的危险因素。血清ANGPTL2预测DR的ROC曲线下面积为0.728(95%CI:0.653~0.803),预测效能中等。HbA1c预测DR的ROC曲线下面积为0.682(95%CI:0.580~0.784),预测效能较低。结论 高水平血清ANGPTL2、HbA1c是DR的危险因素,血清ANGPTL2对预测该疾病的发生具有一定的参考意义。

急性大动脉粥样硬化型脑梗死患者的血清血管生成素样蛋白2水平与神经功能缺损程度及预后的关系

目的探讨急性动脉粥样硬化型脑梗死患者血清血管生成素样蛋白2(Angptl2)与神经功能缺损严重程度及预后的关系。方法选取123例急性动脉粥样硬化型脑梗死患者为病例组,根据患者入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将病例组分为轻度组(NIHSS评分<5分,n=61)和中重度组(NIHSS评分为5分≤~≤20分,n=62),同期纳入门诊健康对照组(n=60),收集各组受试者的性别、年龄、体质量指数(BMI)、吸烟史、饮酒史、糖尿病史、高血压史、冠心病史、临床检验值[白细胞计数(WBC)、中性粒细胞绝对值(ANC)、淋巴细胞绝对值(ALC)、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)、同型半胱氨酸(Hcy)、尿酸(UA)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、前白蛋白(PA)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹血糖(FPG)]及NIHSS评分;抽取各组受试者空腹肘静脉血,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清Angptl2含量;采用改良Rankin量表(mRS)评估病例组患者入院时及出院第3个月的预后情况[分为预后良好(0~2分)和预后不良(3~5分)];采用单因素及多因素logistic回归模型分析急性动脉粥样硬化型脑梗死严重程度的影响因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清Angptl2水平对AIS短期预后不良的预测价值。结果中重度组受试者WBC、ANC、NLR、Hcy、LDL-C及FPG均高于轻度组和对照组(P<0.05),且NIHSS及mRS评分均大于轻度组(P<0.05),ALC、PA及TG低于轻度组和对照组(P<0.05);轻度组受试者UA、Alb高于对照组及中重度组(P<0.05);病例组受试者血清Angptl2水平高于对照组,且中重度组>轻度组(P<0.05);多因素logistic回归分析显示,WBC、PA、FPG及Angptl2水平是影响急性动脉粥样硬化型脑梗死患者神经功能严重程度的独立风险因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,血清Angptl2在判定AIS患者短期预后不良时曲线下面积0.788。结论急性动脉粥样硬化型脑梗死患者Angptl2水平升高,与神经功能缺损的严重程度有关,可作为预测患者短期预后的辅助指标。

槲皮素脂质体对视网膜组织血管生成素样蛋白2及其受体表达的影响

背景糖尿病视网膜病变（DR）的特征性病理改变为微血管病变，血管生成素样蛋白2（Ang-2）是与血管发生密切相关的新蛋白，槲皮素具有多种药理作用，可改善微循环、降低毛细血管通透性，但其对DR的作用机制尚不清楚。目的探讨槲皮素脂质体对视网膜组织Ang-2及其受体（Tie2）表达的影响。方法选取60只清洁级雄性成年Wistar大鼠以随机数字表法分为6个组，其中10只大鼠作为空白对照组，其他60只大鼠采用链脲佐菌素（STZ）35mg／kg一次性腹腔内注射制作糖尿病模型。槲皮素分为50mg／（kg·d）（低剂量）、150mg／（kg·d）（中剂量）和250mg／（kg·d）（高剂量），并用脂质体包裹，分别对模型鼠进行灌胃3—5ml共12周，其他模型鼠分别用生理盐水和羟苯磺酸钙混悬液灌胃作为阴性对照和阳性对照。给药12周后处死各组大鼠并分离视网膜，用ELISA法检测视网膜组织中Ang-2的吸光度（A450）值，并用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测视网膜中Tie2mRNA的A值（Tie2mRNA／GAPDHmRNA）。结果ELISA检测表明，槲皮素中剂量组、高剂量组Ang-2的A450值分别为0．796±0．057和0．8424±0．043，较生理盐水组的1．012±0．046明显下降，差异均有统计学意义（q=2．95、2．698，P〈0．05）。RT—PCR检测表明，槲皮素中剂量组、高剂量组的Tie2mRNA在视网膜中的表达量分别为0．712±0．092和0．821±0．087，均明显低于阴性对照组的1．182±0．098，差异均有统计学意义（q=3．497、2．852，P〈0．05）。Ang-2蛋白及Tie2mRNA表达量的下降均以中剂量组最为明显。结论槲皮素脂质体对视网膜中Ang-2及其受体Tie2的表达有抑制作用，可对糖尿病大鼠的视网膜微循环异常有改善作用。

血管生成素样蛋白2在下肢动脉粥样硬化闭塞症血浆中的变化及其意义

目的探讨血管生成素样蛋白2(Angptl2)在下肢动脉粥样硬化闭塞症患者血浆中的水平,以及其在下肢动脉粥样硬化闭塞症不同阶段的变化及其意义。方法分析75例下肢动脉粥样硬化闭塞症患者(病例组)及65例健康体检者(对照组)血浆Angptl2水平。常规检测血生化指标及超敏C反应蛋白,采用酶联免疫分析法测定血浆Angptl2、脂联素水平。结果下肢动脉粥样硬化闭塞症患者血浆Angptl2水平较健康对照显著升高[(13.55±9.17)μg/L比(9.04±4.79)μg/L,P=0.010]。糖尿病人群中,下肢动脉粥样硬化闭塞症患者的血浆Angptl2水平(18.67±9.84)μg/L较对照组(13.01±3.47)μg/L升高(P=0.021)。在重症下肢缺血组Angptl2水平较间歇性跛行组更高[(17.01±10.20)μg/L比(10.53±6.97)μg/L,P=0.003]。Angptl2>13.67μg/L诊断效果最好,敏感性为60.34%,特异性为81.25%。在病例组中,血浆Angptl2水平与踝-肱指数呈负相关(斯皮尔曼相关系数=-0.244,P=0.035)。结论下肢动脉粥样硬化闭塞症患者的血浆Angptl2水平升高。当疾病进展为重症下肢缺血时,Angptl2水平的升高更为明显,可以作为判断疾病进展程度的潜在生物学标志物。

胃癌组织中血管生成素样蛋白2和miR-211表达水平与其预后的关系

目的探讨胃癌组织中血管生成素样蛋白2(ANGPTL2)和miR-211表达水平与其预后的关系。方法采用免疫组化法检测胃癌根治术治疗的62例患者胃癌组织及其相应癌旁组织中ANGPTL2和miR-211的表达水平,并分析其对胃癌患者预后的影响。结果胃癌组织中ANGPTL2和miR-211阳性表达率分别为88.71%和83.87%,均显著高于其癌旁正常组织的3.23%和8.06%(P<0.05)。62例患者随访3年的复发率、无病生存期(DFS)和3年生存率分别为45.16%、(16.62±4.78)个月和62.90%,且ANGPTL2和miR-211阳性表达患者的复发率高于阴性表达患者,DFS短于阴性表达患者,3年生存率则低于阴性表达患者(P<0.05)。logistic线性回归分析结果显示,胃癌组织中ANGPTL2和miR-211阳性表达率均可明显影响其预后情况(P<0.05)。结论胃癌组织中ANGPTL2和miR-211阳性表达率较高且可影响其复发率、DFS和3年生存率等预后情况,胃癌组织中ANGPTL2和miR-211阳性表达可能作为其不良预后评估的参考指标。

慢性乙型肝炎患者血清血管生成素样蛋白2和高尔基体蛋白73水平变化及其诊断显著肝纤维化的效能分析

目的评价血清血管生成素样蛋白2(ANGPTL2)和高尔基体蛋白73(GP73)诊断慢性乙型肝炎(CHB)患者肝纤维化程度的价值。方法2015年3月~2017年10月我院收治的117例CHB患者,采用ELISA法检测血清ANGPTL2和GP73水平,采用受试者工作特征曲线(ROC)下面积(AUC)评价血清ANGPTL2和GP73诊断CHB患者肝纤维化和肝硬化的效能。结果15例CHBS3~S4期患者血清ANGPTL2和GP73水平分别为(9.1±2.4)ng/ml和(84.9±15.2)ng/ml,显著高于78例S1~S2期[分别为(6.7±2.3)ng/ml和(65.1±14.8)ng/ml,P<0.05]或24例S0期患者[分别为(4.4±1.4)ng/ml和(53.7±14.3)ng/ml,P<0.05];以肝组织纤维化大于等于S3为严重肝纤维化,分别以血清ANGPTL2水平等于8.6 ng/mL和9.6 ng/ml或血清GP73水平等于75.6 ng/ml和103.5 ng/ml为诊断严重肝纤维化和肝硬化的截断点,结果ANGPTL2诊断慢性乙型肝炎患者严重肝纤维化和肝硬化的AUC与GP73比,差异无统计学意义(Z=1.872,P=0.061;Z=0.328,P=0.743);ANGPTL2与GP73联合诊断慢性乙型肝炎患者严重肝纤维化的效能显著高于单指标诊断,即AUC联合检测>AUCANGPTL2(Z=3.310,P=0.001)或AUC联合检测>AUCGP73(Z=2.004,P=0.045),血清ANGPTL2与GP73联合诊断乙型肝炎肝硬化的效能与单指标诊断的效能比,差异无统计学意义(Z=1.471,P=0.141;Z=1.575,P=0.115);采用血清ANGPTL2与GP73联合诊断肝纤维化的效能与基于4因子模型(FIB-4)或天门冬氨酸氨基转移酶/血小板指数(APRI)比,差异无统计学意义(Z=0.869,P=0.386;Z=0.492,P=0.623);血清ANGPTL2与GP73联合诊断肝硬化的效能与FIB-4或APRI比,差异也无统计学意义(Z=1.834,P=0.067;Z=0.610,P=0.512)。结论慢性乙型肝炎患者血清ANGPTL2和GP73水平有一些变化规律,应用两者诊断肝纤维化分期有一些有意义的苗头,值得进一步探讨。

血管生成素样蛋白2在糖尿病肾病小鼠肾组织中的表达定位

目的:血管生成素样蛋白2是近年来发现的与血管发生密切相关的新蛋白,在既往研究中已发现血管生成素样蛋白2在肾中的表达水平与糖尿病肾病的病理过程相关,但未对血管生成素样蛋白2在肾脏中的表达进行精确定位。文中分析血管生成素样蛋白2在糖尿病肾病小鼠肾小球和肾小管中的表达情况,并对其在糖尿病肾病小鼠肾脏细胞中进行准确定位。方法:利用激光微分离技术分离糖尿病肾病小鼠肾脏组织中的肾小球和肾小管,以半定量RT-PCR方法分析血管生成素样蛋2 mRNA在肾小球和肾小管中的表达情况;利用免疫组化、免疫荧光双套色染色和免疫电镜方法对血管生成素样蛋白2在肾中的表达进行准确定位。结果:半定量RT-PCR分析结果显示血管生成素样蛋白2 mRNA仅表达于肾小球,而不在肾小管表达,且db/db糖尿病肾病小鼠肾小球中的血管生成素样蛋白2 mRNA水平明显高于正常对照;免疫组化分析结果显示血管生成素样蛋白2分布位置与足细胞位置重叠;免疫荧光双套色染色观察到,血管生成素样蛋白2分布与足细胞特异性标记蛋白WT1一致;免疫电镜分析结果显示,血管生成素样蛋白2主要分布于足细胞的细胞体和足突。结论:在糖尿病肾病小鼠肾,血管生成素样蛋白2基因只在肾小球表达,足细胞是血管生成素样蛋白2的特异性产生细胞。

血管生成素样蛋白2单克隆抗体的制备和分析

目的:研制抗人血管生成素样蛋白2(ANGPTL2)单克隆抗体,为进一步进行ANGPTL2的表达分析和功能研究,揭示其在糖尿病肾病发生发展过程中的可能作用创造条件。方法:以纯化的ANGPTL2重组蛋白皮下多点注射免疫BALB/c小鼠,分离脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,经HAT选择性培养基筛选,克隆和亚克隆化培养,ELISA鉴定,得到能稳定分泌抗人ANGPTL2的杂交瘤细胞;以硫酸铵沉淀法从杂交瘤细胞培养上清中初步纯化、制备抗人ANGPTL2单抗,以Western blot、细胞免疫染色和免疫组化染色相结合的方法对制备的单抗进行滴度和特异性鉴定。结果:得到1株能稳定分泌抗ANGPTL2的杂交瘤细胞,从其培养上清中制备的抗ANGPTL2单克隆抗体具有较好的特异性和较高的滴度,可用于Western blot、细胞免疫染色和免疫组化染色。结论:成功地研制了抗ANGPTL2单克隆抗体,为进一步进行ANGPTL2的表达分析和功能研究,揭示ANGPTL2的功能及其在糖尿病肾病发生发展过程中的可能作用创造了条件。

血管生成素样蛋白2在糖尿病肾病小鼠肾脏中的表达研究

利用半定量RT-PCR和免疫组化的方法同时从mRNA水平和蛋白质水平对血管生成素样蛋白2在不同病理阶段的2型糖尿病肾病模型小鼠——db/db小鼠肾脏中的表达情况进行了较为系统的分析.结果发现:a.在糖尿病前的db/db小鼠(4周龄的db/db小鼠),血管生成素样蛋白2与作为正常对照的db/m小鼠相比,差异不是很大,随着肥胖的加剧,高血糖、蛋白尿的出现,血管生成素样蛋白2在db/db小鼠肾脏中的表达无论从mRNA水平还是从蛋白质水平均显著升高.b.从免疫组化的分析结果来看,血管生成素样蛋白2主要分布于小鼠肾脏的肾小球部分,主要是沿毛细血管袢呈线性分布,其位置与足细胞的位置重叠,足细胞是小鼠肾脏中血管生成素样蛋白2的主要分泌细胞.c.小鼠肾脏血管生成素样蛋白2的表达水平似乎还与鼠龄相关:虽然变化幅度不是很大,但在周龄较大的小鼠(如20周龄以上),其表达水平相对较高.上述工作不仅印证了先前对2型糖尿病肾病患者肾小球基因表达谱的分析结果,更加明确了血管生成素样蛋白2与糖尿病肾病的相关性,同时揭示了血管生成素样蛋白2在正常小鼠和糖尿病肾病小鼠肾脏中的表达、分布和变化规律,有利于进一步揭示血管生成素样蛋白2的功能及其在糖尿病肾病发生、发展过程中的可能作用,探讨糖尿病肾病的分子机制.

血管生成素样蛋白2促进ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化内膜钙化

目的探讨血管生成素样蛋白2(Angptl2)对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化内膜钙化的影响。方法 12只6周龄雄性ApoE-/-小鼠随机分为对照组与干预组,每组6只,对照组小鼠予以高脂饮食,干预组小鼠在高脂饮食的基础上在第8周予以静脉注射人重组Angptl2蛋白,每周一次,持续1个月。两组小鼠高脂饮食喂养至16周龄时处死,测定血清脂质水平,HE染色观察主动脉组织形态学变化;von Kossa染色观察主动脉钙化,测定血管钙含量和碱性磷酸酶活性判断血管钙化程度;分别用免疫组织化学法、Western Blot、实时定量PCR(qRT-PCR)检测血管Runx2(核心结合因子α1)蛋白和mRNA的表达。结果干预组小鼠血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)及低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)水平显著高于对照组(P<0.05);血管壁Runx2表达水平较对照组显著升高(P<0.05);对照组小鼠主动脉可见粥样硬化斑块,von Kossa染色斑块内未见明显黑色钙盐沉积,而干预组小鼠主动脉HE染色可见内膜较对照组显著增厚,有典型的动脉粥样硬化斑块形成,且von Kossa染色斑块灶状黑色钙化团块较对照组显著增强;干预组小鼠主动脉血管壁钙含量和碱性磷酸酶活性均明显高于对照组(P<0.05)。结论 Angptl2会使高脂饮食ApoE-/-小鼠主动脉血清TG、TC、LDLC水平及Runx2的表达水平增高,同时增加小鼠主动脉中钙含量及血清中碱性磷酸酶活性,促进小鼠主动脉粥样硬化内膜的钙化。Angptl2可促进动脉粥样硬化内膜的钙化,控制和降低血浆中Angptl2的水平似乎可以抑制动脉粥样硬化的钙化,从而为临床预防冠心病的发生发展及治疗提供了一种新的靶标。

血管生成素样蛋白2与炎症相关性疾病的研究进展

血管生成素样蛋白2属于血管生成素样蛋白家族（angiopoietin-like proteins,ANGPTLs）,该类蛋白是近年来发现的新一类血管发生相关蛋白因子,属于分泌性糖蛋白。目前已知的ANGPTLs共有7个成员,分别为ANGPTL1～7。

心力衰竭患者血浆CTRP3、血管生成素样蛋白2、sST2的浓度及预后价值

目的探讨心力衰竭患者血浆补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白3(C1q tumor necrosis factor related proteins-3,CTRP3)、血管生成素样蛋白2(angiopoietin like protein 2,angptl2)、可溶性致癌抑制因子2(soluble suppression of tumorigenicity 2,sST2)的浓度及预后价值。方法选择2014年8月到2018年2月在北京市垂杨柳医院心内科收治的心力衰竭患者122例作为心力衰竭组,并分为收缩性心力衰竭组62例和舒张性心力衰竭组60例两个亚组;对照组为非心力衰竭人群122例。采用酶联免疫吸附法检测混杂血浆CTRP3、angptl2、sST2浓度,随访调查患者的预后并进行相关性分析与预测价值分析。结果心力衰竭组的左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)低于对照组,左心室舒张末期内径(left ventricular end diastolic dimension,LVEDD)及血尿素、肌酐浓度高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两亚组心功能与生化指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。心力衰竭组的血浆angptl2、sST2浓度高于对照组,CTRP3浓度低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两亚组CTRP3、angptl2、s ST2浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。随访至今,心力衰竭组患者中预后不良16例,发生率为13.1%。Pearson相关分析结果显示CTRP3、angptl2、sST2、LVEF、LVEDD、尿素、肌酐都与心力衰竭患者预后显著相关(P<0.05)。Cox回归模型分析显示CTRP3、angptl2、sST2为影响心力衰竭患者预后的主要因素(P<0.05)。结论心力衰竭患者血清CTRP3、angptl2、sST2浓度呈现异常表达情况,具有预测预后不良的价值,是心力衰竭预后评估的生物学标志物。

血管生成素样蛋白2真核表达载体的构建及在内皮细胞中的稳定表达研究

目的:构建血管生成素样蛋白2(ANGPTL2)真核表达载体和稳定过表达ANGPTL2的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)。方法:以PCR的方法从载体phrGFP-C中扩增人源化绿色荧光蛋白基因hrGFP克隆到载体pIRES的B多克隆位点,构建成载体pIRES-hrGFP;利用合成的寡核苷酸在pIRES-hrGFP的骨架上引入一个便于载体线性化的多种限制性内切酶酶切位点,构建成载体pIRES-hrGFP-MS;以RT-PCR方法从人肾脏总RNA中扩增人ANGPTL2 cDNA,将其克隆到载体pIRES-hrGFP-MS的A多克隆位点,构建成ANGPTL2真核表达载体pIRES-hrGFP-MS-ANGPTL2。将线性化后的pIRES-hrGFP-MS-ANGPTL2以脂质体转染的方法导入HUVEC,利用药物筛选、绿色荧光观察以及ANGPTL2表达分析鉴定稳定过表达ANGPTL细胞株。结果:成功构建便于稳定转染的ANGPTL2真核表达载体pIRES-hrGFP-MS-ANGPTL2;得到了2个过表达ANGPTL2的HUVEC株GFP/ANGP1和GFP/ANGP2。光镜观察发现,ANGPTL2过表达细胞株GFP/ANGP1和GFP/ANGP2的形态由内皮细胞典型的铺路石状变为极度伸展的长梭形,提示ANGPTL2对内皮细胞可能有重要影响。结论:成功地构建了便于稳定转染的ANGPTL2真核表达载体;得到了稳定过表达ANGPTL2的内皮细胞株,为进一步揭示ANGPTL2的功能,探讨其在糖尿病肾病发生发展过程中的可能作用创造了条件。

血管生成素样蛋白2纤维蛋白原样功能域多克隆抗体制备及分析

目的:克隆血管生成素样蛋白2(angiopoietin like protein2,ANGPTL2)cDNA;构建ANGPTL2纤维蛋白原样功能域原核表达载体;表达得到ANGPTL2纤维蛋白原样功能域融合蛋白;制备针对ANGPTL2纤维蛋白原样功能域的多克隆抗体,为全面分析研究ANGPTL2的功能及其与糖尿病肾病微血管病变的关系创造条件。方法:利用RT-PCR方法从肾脏总RNA中扩增ANGPTL2全长cDNA;以其为模板扩增编码ANGPTL2纤维蛋白原样功能域的cDNA片段,并进而将其克隆至原核表达载体pET-15b上,构建成ANGPTL2纤维蛋白原样功能域的原核表达载体pET-ANGPTL2;将pET-ANGPTL2导入BL21(DE3)菌内,通过IPTG诱导表达重组蛋白;利用重组蛋白5'端带有Histag的特点,采用含Ni的树脂进行亲和吸附纯化,获取高纯度的重组蛋白;将重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔抗ANGPTL2多克隆抗体;利用ELISA法测定和免疫组化分析对此多抗的效价和特异性进行分析。结果:取得了带有完整阅读框的ANGPTL2全长cDNA;构建成与预先设计完全一致的原核表达载体pET-ANGPTL2;成功地在大肠杆菌中进行了ANGPTL2纤维蛋白原样功能域融合蛋白的表达,纯化获取纯度很高的重组蛋白;经免疫兔获取高效价的针对ANGPTL2纤维蛋白原样功能域的多克隆抗体;ELISA检测和免疫组化分析表明,此抗体不仅具有很高的效价,而且具有很好的特异性。结论:我们成功地克隆了ANGPTL2cDNA,构建了其原核表达载体,进行了原核表达,成功取得高纯度的重组蛋白,并得到了高效价、高特异性针对ANGPTL2纤维蛋白原样功能域的多克隆抗体,为全面分析研究ANGPTL2功能及其与糖尿病肾病微血管病变的关系创造条件。

食管鳞状细胞癌中血管生成素样蛋白2的表达及其临床意义

目的:探讨血管生成素样蛋白2(angiopoietin-like protein2,ANGPTL2)在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell cancer,ESCC)组织中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化检测ESCC组织中ANGPTL2的表达水平;通过酶联免疫吸附法检测食管癌患者和健康对照人群血清中ANGPTL2浓度。结果:与癌旁组织相比,ESCC组织中ANGPTL2的表达明显升高(P<0.001);与健康对照人群相比,食管癌患者血清中ANGPTL2浓度明显升高。通过分析临床数据发现高表达的ANGPTL2与肿瘤体积、淋巴结转移、TNM分期紧密相关。血清ANGPTL2浓度也与淋巴结转移、TNM分期等呈正相关。结论:ANGPTL2在ESCC的增殖和侵袭过程中有重要作用。血清ANGPTL2可以作为诊断ESCC潜在有效的血清标志物。

非小细胞肺癌患者血清血管生成素样蛋白2水平的临床意义

目的探索非小细胞肺癌患者血清血管生成素样蛋白2水平的临床意义。方法收集我院收治的47例非小细胞肺癌(non-small cell lung carcinoma,NSCLC)患者,同时选取同期健康体检者为对照,检测两组人群的血清血管生成素样蛋白2(angiopoietin-like protein2,ANGPTL2)水平。并应用ROC/AUC分析其诊断的敏感性和特异性。结果 NSCLC患者血清ANGPTL2水平显著高于健康对照组(6342±2048对3600±1748 pg/m L,P<0.0001)。ANGPTL2水平的升高与临床分期、淋巴结转移密切相关。结论血清ANGPTL2是临床上潜在有效的诊断NSCLC的生物标记物。