血红密孔菌Pycnoporus sanguineus SYBC-L12固态发酵水稻秸秆产漆酶及其对染料的脱色作用

血红密孔菌Pycnoporus sanguineus SYBC-L12能以水稻秸秆作为底物和支撑物进行固态发酵并且具有较高的产漆酶能力。以水稻秸秆为基本培养基,漆酶活力为指标,对产酶培养基和培养条件进行了单因素优化,优化后的漆酶活力约为优化前的10倍。所得漆酶在常温下对蒽醌类染料、三苯甲烷类染料、亚胺醌类染料具有较强的脱色作用,其混合物也可被漆酶大部分脱色,在较高温度下,漆酶可将偶氮类染料部分脱色。此外,科学试验使用的工业废水样品中常见金属离子大部分对脱色作用没有抑制。因此,漆酶作为一种环境友好型生物催化剂,对工业污水的处理具有广阔的应用前景。

血红密孔菌Pycnoporus sanguineusSYBC-L12固态发酵小麦秸秆产漆酶及其对小麦秸秆的降解作用

以小麦秸秆为基本培养基质,漆酶活力为指标,对其培养条件--包括碳源、氮源、起始含水量和秸秆粒度进行了初步的优化,得到了较佳产酶条件。在此过程中测定了发酵后还原糖的质量分数,探究了白腐菌在小麦秸秆降解过程中的作用。另外,测定了添加氮源发酵后的麦草秸秆与未发酵麦草秸秆的组成,并进行了比较。

血红密孔菌漆酶的活性研究

基于酶催化反应的光纤生物传感器的重要研究内容之一是酶的活性研究。分别以2 ,2’连氮双(3 乙基并噻 6 磺酸) (ABTS)和二茂铁(Fc H)为血红密孔漆酶的底物,研究影响漆酶活性的因素,获得了漆酶的最佳反应条件。酶与ABTS和Fc H的最适反应pH值分别为2 .4和3.0 ;最适反应温度分别为5 5℃和5 0℃;米氏常数Km 分别为0 .0 2 0 6mmol/L和0 .5 882mmol/L。

血红密孔菌(Pycnoporussanguineus)漆酶基因的克隆与序列分析

为克隆血红密孔菌 (Pycnoporussanguineus)漆酶基因 ,根据真菌漆酶氨基酸序列保守区设计了 1对简并引物 .以血红密孔菌基因组DNA为模板 ,PCR扩增出长 12 2 7bp的漆酶基因片段 .以此序列为基础 ,通过 5′及 3′RACE技术克隆出漆酶全长cDNA序列 ,序列长为 190 2bp ,其 5′端和 3′端非编码区长分别为 5 1bp和 2 97bp ,开放阅读框长 15 5 4bp ,编码 5 18个氨基酸的蛋白 .该蛋白具有 4个铜离子结合区域 ,预测其相对分子量为 5 6 313 2 ,等电点为 5 5 9,其氨基酸序列与Pycnoporuscinnabarinus漆酶 (lcc3 2 )的同源性最高 ,为 96 % .以该cDNA编码区的两端序列为引物 ,PCR扩增得到漆酶的长度为 2 15 4bp的全长DNA序列 ,序列中包括 10个内含子序列 ,长为 5 2～

血红密孔菌对刚果红脱色的共培养体系优化的研究

在东北林区的4个自然保护区中采集、纯化得到34种野生大型真菌,对其氧化酶系进行了定性检测,从中选出6个白腐菌菌种进行染料脱色研究,发现血红密孔菌(Pycnoporus sanguineus)对4大类染料有高效广谱脱色作用。实验结果表明,在限氮条件下培养5天,其对刚果红脱色率最高可达89.04%;添加微量元素改良培养基的实验表明,培养5天最高脱色率可达98.01%;在此基础上添加诱导剂,则对刚果红的脱色率显著降低,实验发现添加诱导剂愈创木酚是导致脱色率降低的根本原因。用海藻酸钠固定血红密孔菌并对染料刚果红脱色5天,其脱色率达90.34%

血红密孔菌漆酶催化肾上腺素氧化的研究

漆酶的催化活性和稳定性是基于漆酶催化的生物传感器的核心。用循环伏安谱和分光光度法为手段研究了血红密孔菌漆酶催化肾上腺素氧化的反应机理和最适反应条件。在磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中,漆酶催化肾上腺素氧化的最适pH值是5.0,最适反应温度是50℃,最适缓冲液浓度为0.1 mol/L,Km值为37.5μmol/L。漆酶在55℃保温150 min后保持原来活性的50%;在4℃下保存1周后,酶保持原来活性的85%。结果表明,血红密孔菌漆酶有较好的活性和稳定性。

自带介质血红密孔菌NFZH-1的鉴定及其木质素降解特性(英文)

菌株自带介质可提高其漆酶降解木质素能力,因此自带介质高产漆酶菌株的筛选、鉴定对漆酶的商业应用将起到促进作用。从南京山林地区分离出两株血红密孔菌NFZH-1和NFZH-2,并以杂色云芝为对照,研究了两株血红密孔菌发酵产漆酶和木质素降解特性。首先通过形态学特性鉴定了NFZH-1为自带介质血红密孔菌。其次以愈创木酚为反应底物,平板接种菌株,培养5天,NFZH-1颜色圈较菌丝圈大,且颜色最深;经10天固态发酵,NFZH-1所产漆酶酶活高达23 600 U/g,且未检测出木质素过氧化物酶(LiP)和锰过氧化物酶(MnP)。平板显色和固态发酵产酶结果表明自带介质血红密孔菌NFZH-1为漆酶高产菌株。麦草粉经菌株NFZH-1 30天降解,木质素降解率、综纤维素降解率分别达56.7%和36.6%,表明血红密孔菌NFZH-1为选择性高木质素降解活性菌株。

一种血红密孔菌色素提取工艺优化及稳定性研究

以一株含有大量红色色素的野生血红密孔菌子实体为试验材料,以提取温度、乙醇体积分数、提取时间3个因素为指标对其进行了色素提取工艺优化,并对该子实体色素的稳定性进行了研究.其结果表明:血红密孔菌子实体色素的最佳提取工艺条件为:提取温度为85℃,乙醇体积分数为70%,提取时间为80min,色素含量3.84 mg/g.色素稳定性研究表明,该色素对温度、氧化剂、还原剂、金属离子等的稳定性较好,在食品、工业中具有较大的开发利用价值,值得更加深入的研究.

百草枯对血红密孔菌胞外漆酶活性和胞内抗氧化酶活性的影响

研究了百草枯对血红密孔菌(Pycnoporus sp.SYBC-L3)产胞外漆酶活性和胞内抗氧化酶活性的影响,以期对提高木质素降解酶活性提供理论依据。结果表明:百草枯能够提高漆酶和抗氧化酶的活性,但对胞外漆酶活性的促进作用比对胞内抗氧化酶活性的促进作用明显。百草枯加入后,羟自由基活性和丙二醛的浓度均呈先升高后下降趋势,说明对血红密孔菌产生了氧化胁迫,但菌株的抗氧化系统能够有效地清除自由基,从而阻止氧化剂对菌体的氧化伤害。百草枯作为一种氧化胁迫剂,可以提高木质素降解酶活性,有利于木质素的降解。

血红密孔菌mk528漆酶对刚果红的脱色研究（英文）

刚果红是一种重要的难降解偶氮型染料,研究利用血红密孔菌mk528菌株产生的漆酶粗品在添加介体条件下对其进行脱色降解实验。结果表明:介体阿魏酸对刚果红脱色有抑制作用,而紫脲酸、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)和香兰素对刚果红脱色有促进作用;其中氧化还原介体紫脲酸比ABTS和香兰素更有效。通过实验确定刚果红脱色介体系统温度为40℃,p H值5.5,介体紫脲酸用量为0.05 m M,漆酶用量为5 U/m L,作用时间6 h的最佳条件。刚果红脱色的漆酶-紫脲酸介体系统表明漆酶在偶氮染料脱色降解方面将会有潜在的应用价值。

血红密孔菌(Pycnoporus sanguineus SYBC-L7)色素的提取及其理化性质

研究了一株血红密孔菌(Pycnoporus sanguineus SYBC-L7)固态发酵产色素的提取条件及色素的理化性质。结果表明:该菌株在以木屑为基质固态发酵时色素产量最高;以甲醇为提取液,在35℃水浴下40 min后可从发酵后的培养物中最大化提取该色素;所得色素溶液呈黄色,在可见光区的最大吸收波长为430 nm,该色素的热稳定性和耐酸性较好,常用的氧化剂与还原剂对其影响不大。

光照和pH对血红密孔菌生长及抗氧化活性的影响

探究不同光照和pH对药用真菌血红密孔菌(Pycnoporus sanguineus)生长及抗氧化活性的影响。分别设置了3个不同光照条件组(14d光照、光照黑暗交替和黑暗)和4个pH组(pH3、5、7和9),并在菌种培养的第2、4、6、8、10、12和14天测定其生物量、DPPH自由基清除率和总抗氧化能力(T-AOC)。血红密孔菌在14d黑暗环境中有最大生物量和最强T-AOC活性。14d黑暗条件下更利于血红密孔菌的生长,其生物量于第10~14天大量增加,并于第14天达到最高值,为4.49g/L,生物量高出光照及更替条件近1.5倍。T-AOC活性在第12天最高,为25.10U/mL。14d黑暗培养环境下DPPH自由基的清除率也较高。不同pH条件对血红密孔菌培养过程中各项指标影响不同。当pH为5时血红密孔菌生长过程中产生的生物量于第10天最高,为7.12g/L。而DPPH自由基清除率和T-AOC则在pH7时第10天最高,分别为94.99%和64.34U/mL;pH7时次之。说明偏酸环境更能适宜血红密孔菌的生长,而中性及偏碱环境则有利于提高该菌的抗氧化能力。

血红密孔菌Pycnoporus sanguineus SYBC-L10产纤维二糖脱氢酶的发酵优化

研究了血红密孔菌Pycnoporus sanguineus SYBC-L10产纤维二糖脱氢酶的发酵优化。该酶是诱导酶,微晶纤维素是其最好的诱导底物。通过对发酵培养基中培养成分的优化,添加大分子碳源微晶纤维素和小分子碳源葡萄糖作为复合碳源,发酵优化后提高到78±5.94 U/L,是未优化前的2倍(39±4.78 U/L)。通过对氮源的优化,即有机氮源黄豆粉和无机氮源磷酸氢二铵的添加,使酶活达到700±35.78 U/L,比优化前提高了近17倍。而通过四因素四水平的碳氮源正交实验之后酶活达到1245±35.78 U/L,比优化前提高了近32倍。由此,确定了当微晶纤维素为7 g/L,葡萄糖5 g/L,黄豆粉6 g/L,磷酸氢二铵2 g/L时,其他不变,此时的产酶最高,达到1 245±35.78U/L。

血红密孔菌菌丝体多糖提取条件优化及活性研究

在试验中探究了超声辅助时间、热水浸提时间、提取温度、料液比4个因素在血红密孔菌菌丝体多糖提取中的最优条件,并评估其抗氧化活性和抑菌能力。在单因素试验的基础上采用响应面法对其多糖提取工艺进行多因素试验,结果显示其提取的最优条件为超声辅助时间15 min、热水浸提时间59 min、提取温度79.7℃、料液比1∶30,此时血红密孔菌菌丝体多糖提取率为5.231%。且试验结果还表明血红密孔菌菌丝体多糖具有抗氧化活性和抑菌能力。该研究结果为进一步开发食用菌功能食品提供了基础性数据。

重组血红密孔菌漆酶在染料脱色中的应用

为考察由毕赤酵母表达的重组血红密孔菌漆酶对染料的脱色能力,采用单因素分析方法研究了不同条件下重组漆酶对活性亮蓝、活性黑以及靛红这3种典型合成染料的脱色情况,并且利用优化后的反应条件对由3种染料组成的混合染料进行了脱色处理。结果表明:在无介体时重组漆酶对染料的脱色效果较差,3种染料中丁香醛是促进重组漆酶脱色的最适介体,重组漆酶介体系统对单染料的脱色最适pH为50,温度为50℃;在最优反应条件下,重组漆酶对混合染料的脱色率达93%,表明该重组漆酶在染料废水处理中具有较好的应用前景。

产漆酶血红密孔菌对城市污泥堆肥过程中有机氯农药的降解效应

为降低城市污泥堆肥中有机氯农药对环境的影响,实验室通过外加热源提供堆肥环境温度条件,并在不同堆料中接种不同剂量的产漆酶血红密孔菌,研究不同处理下产漆酶血红密孔菌对污泥中HCH、DDT和HCB的降解性能的影响。结果表明,供试血红密孔菌对3种有机氯农药的降解有明显的促进作用。未接种菌剂情况下,高温堆肥本身对HCH、DDT和HCB的降解率分别为51.1%、43.6%和63.4%;接种1%菌剂时,HCH、DDT和HCB比未接种堆料降解率分别提高了16.2%、34.6%和21.7%;接种3%菌剂时,HCH、DDT和HCB比未接种堆料降解率分别提高了41.1%、34.6%和20.1%。供试菌剂对DDT的降解效果最好,且DDT和HCH的降解能力与接种量大小呈正相关。此外,供试菌剂剂量大小对HCH不同异构体和DDT不同衍生物降解效果也不尽相同。

一种真菌漆酶的克隆与序列分析

比较了几种不同真菌DNA提取方法对血红密孔菌基因组的提取的影响,根据GenBank中真菌漆酶氨基酸保守序列设计的简并引物,以血红密孔菌基因组总DNA为模板,扩增到一条长度为1084bp的DNA片段。通过BLAST比对,其基因序列与密孔菌属同源性最高,为99%,氨基酸同源性为88%,说明扩增的片段确为密孔菌漆酶基因。

一株用于石油污染修复的产漆酶菌种产酶条件优化及性能评价

选取血红密孔菌Pycnoporus coccineus为产漆酶菌种,通过开展单因素产漆酶条件优化研究,明确最佳液体发酵工艺参数,制备出粗酶制剂并进行原油降解性能评价。结果表明:1)漆酶最佳液体发酵工艺参数为初始pH值5～7、初始温度30℃、摇床转速200r/min,接种量1.5%、碳源为羧甲基纤维素钠20.00g/L、氮源为硝酸钠5.00g/L、磷源磷酸氢二钾为2.00g/L、Cu2+浓度为1.00mmol/L、诱导剂为蔥2.00×10-4 mmol/L;复合制剂(粗酶制剂+菌剂)TPHs降解率高于单一制剂(仅投加菌液),环境耐受性、微生物底物作用能力及原油降解速率均显著提升。

Study on Fermentation Conditions of Pycnoporus sanguineus

[Objective] The purpose was to study the optimum conditions of Pycnoporus sanguineus for producing ligninase. [Method] A strain of lignindegrading white-rot fungus was selected from 5 strains of collected fungi and its ligninase production and the optimum conditions for producing ligninolytic enzyme were measured. [Result] It could produce two kinds of ligninase with good thermal stability. Different temperatures, carbon sources, nitrogen sources, acidities, as well as the additions of surfactant had distinct influence on the development of lignin-degrading enzymes of the fungus. The optimum condition was drawn out：38℃, pH = 4.5, 10.0 g/L glucose, 1.0 g/L tartaric acid ammonium. [Conclusion] The aim of research was to provide a basis for lignin degradation in practical production.

伴生介质漆酶的生产优化及其酶学特性研究

为了缓解人工合成漆酶介质价格昂贵和环境污染的问题,利用血红密孔菌NFZH-1制备伴生介质漆酶,以实现漆酶介质体系(LMS)的工业化应用。通过优化菌株NFZH-1液态培养基和发酵条件,提高了伴生介质漆酶产量,并揭示了其酶学特性。结果表明:血红密孔菌NFZH-1为伴生介质漆酶高产菌株,经产酶优化,漆酶活力提高了91%,达26.1 U/m L。伴生介质漆酶在50～85℃和p H2.5～4.5范围内具有较高的漆酶活力,在<60℃和p H5.0～7.0范围内具有较好的漆酶稳定性,属耐热型漆酶。高产、稳定的伴生介质漆酶对LMS的工业化应用具有重要意义。