基于PERK/ATF4/CHOP信号通路研究滋阴明目方含药血清对衣霉素诱导的ARPE-19细胞的作用机制

目的研究滋阴明目方含药血清对衣霉素诱导ARPE-19细胞的影响及其可能机制。方法构建细胞内质网应激损伤模型,将ARPE-19细胞分为空白组、模型组、空白血清组、滋阴明目方含药血清组、牛磺熊去氧胆酸组。对细胞进行形态观察,CCK-8检测细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测细胞蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、活化转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)蛋白的表达。结果选用浓度50μmol/L衣霉素干预ARPE-19细胞造模。观察细胞形态发现,滋阴明目方含药血清组和牛磺熊去氧胆酸组ARPE-19细胞较模型组细胞数量增多,生长较均匀,漂浮的死亡ARPE-19细胞及碎片减少。与空白组相比,模型组和空白血清组的细胞存活率下降(P<0.01),凋亡率明显上升(P<0.01),PERK、ATF4、CHOP蛋白表达上调(P<0.01)。与模型组相比,滋阴明目方含药血清组细胞存活率上升(P<0.01),凋亡率明显下降(P<0.01),PERK、ATF4、CHOP蛋白表达下调(P<0.01)。结论滋阴明目方含药血清可以减少ARPE-19细胞内质网应激损伤模型的凋亡,其分子机制与调控PERK-ATF4-CHOP信号通路有关。

顺铂联合衣霉素对神经母细胞瘤的抑制作用及其机制

目的探究顺铂(DDP)联合衣霉素(TM)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y及SK-N-SH细胞的抑制作用及其机制。方法将人神经母细胞瘤SH-SY5Y及SK-N-SH细胞分为对照组、TM组(0.4mg/LTM处理24h)、DDP组(4mg/LDDP处理24h)和DDP+TM组(0.4mg/LTM+4mg/LDDP共处理24h)。采用CCK-8实验、平板克隆实验、划痕实验、Transwell实验分别检测各组细胞的细胞活力、增殖能力、迁移能力和侵袭能力,采用免疫印迹法检测各组细胞中JAK2-STAT3-HIF1α通路相关蛋白JAK-2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3和HIF1α的表达水平。结果实验结果显示,DDP+TM组两种细胞的细胞活力、增殖能力、侵袭能力、第12及24小时时的迁移能力及JAK2-STAT3-HIF1α通路各蛋白表达水平均显著低于其他三组(tLSD=2.14~78.95,P<0.05)。结论DDP联合TM可通过JAK2-STAT3-HIF1α通路抑制神经母细胞瘤的增殖和迁移,该结果为神经母细胞瘤的治疗提供了新思路。

独活寄生汤调控衣霉素诱导的内质网应激减缓人髓核细胞凋亡

目的:研究独活寄生汤对衣霉素诱导的人髓核细胞内质网应激和细胞凋亡的作用及机制。方法:将30只10周龄的SD大鼠以独活寄生汤灌胃,连续灌胃14 d后经腹主动脉取血,获取含药血清。采用衣霉素和不同浓度独活寄生汤处理人髓核细胞,使用CCK-8检测髓核细胞的活力。将人髓核细胞随机分为5组:对照组(未经衣霉素和独活寄生汤含药血清处理),衣霉素组(加入10μg/mL衣霉素溶液),衣霉素+4-PBA组(加入10μg/mL衣霉素溶液和5 mmol/mL 4-PBA),衣霉素+独活寄生汤组(加入10μg/mL衣霉素溶液和10%独活寄生汤含药血清),衣霉素+生理盐水组(加入10μg/mL衣霉素溶液和等剂量生理盐水)。免疫荧光法检测各组CHOP、GRP78的表达水平;TUNEL法检测分析髓核细胞凋亡率;qRT-PCR法和Western Blot法分别检测各组CHOP、GRP78、内质网应激和凋亡相关通路mRNA和蛋白的表达。结果:独活寄生汤能够增强髓核细胞活力、降低髓核细胞凋亡率,对衣霉素可能存在拮抗作用。与对照组相比,衣霉素处理后髓核细胞中CHOP、GRP78、Cleaved-caspase3、Bax和PERK/elF2α、IREI/JNK和Caspase12等凋亡相关通路的蛋白和基因表达显著升高,BCL-2蛋白和基因表达显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);而衣霉素+生理盐水组表达与衣霉素组相当,差异无统计学意义。与衣霉素组相比,衣霉素+独活寄生汤含药血清组中的CHOP、GRP78、Cleaved-caspase3、Bax和PERK/elF2α、IREI/JNK和Caspase12等凋亡相关通路的蛋白和基因表达出现明显下降,BCL-2蛋白和基因表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);其调控效果与阳性对照衣霉素+4-PBA组相当,差异无统计学意义。结论:衣霉素能够诱导髓核细胞内质网应激,促使细胞凋亡增加;独活寄生汤对衣霉素诱导的内质网应激具有调控作用,抑制髓核细胞凋亡,从而延缓椎间盘退变。

人脐带间充质干细胞源外泌体减缓衣霉素诱导的肾小管上皮细胞凋亡的研究

目的研究人脐带间充质干细胞源外泌体(hUC-MSC-Exo)对衣霉素诱导的肾小管上皮细胞(HKC)凋亡的作用。方法利用衣霉素诱导HKC产生内质网应激,CCK-8法检测细胞增殖活性;蛋白免疫印迹法检测内质网应激相关分子抗体葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、GRP94和C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达,流式细胞术检测细胞凋亡;hUC-MSC-Exo经分离与流式细胞术表面标志物鉴定后,检测不同浓度外泌体(0、40、60、80、100、150、200μg/mL)对细胞活性的影响;resazurin法与流式细胞术分别检测外泌体与衣霉素共处理组的细胞增殖活性及细胞凋亡水平。结果1、2、4μg/mL衣霉素均能抑制HKC的细胞增殖活性并呈浓度依赖性;不同浓度衣霉素均可诱导HKC细胞内质网应激,并明显诱导细胞凋亡。100、150、200μg/mL外泌体能增强细胞增殖活性;与衣霉素2μg/mL组相比,衣霉素2μg/mL+外泌体150μg/mL组细胞增殖活性明显增强;此外,衣霉素2μg/mL组细胞凋亡率为(14.16±1.58)%,衣霉素2μg/mL+外泌体150μg/mL组细胞凋亡率为(8.18±0.58)%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论间充质干细胞源外泌体能明显减缓衣霉素诱导的HKC细胞凋亡。

衣霉素联合顺铂对人鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨糖基化抑制剂衣霉素联合顺铂对人鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响及其相关的分子机制。方法 MTT法检测药物对细胞增殖抑制的影响;集落克隆形成法检测药物对细胞集落克隆形成的影响;碘化丙啶单染流式细胞仪检测药物作用前后细胞凋亡率的变化;caspase-3活性检测试剂盒检测药物作用后24 h caspase-3的活性变化;Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白的表达及葡萄糖调节蛋白78的表达。结果不同浓度衣霉素和/或顺铂对人鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞具有显著的增殖抑制作用,3μmol/L衣霉素处理人鼻咽癌细胞的24、36、48 h后细胞的存活率分别为72.13%、51.97%、37.56%和85.61%、56.95%、43.66%,3μmol/L衣霉素与6μmol/L顺铂对人鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2 24、36、48 h的存活率低于单用衣霉素、顺铂组,分别为67.97%、47.76%、34.68%和56.89%、37.05%、29.30%。0.3μmol/L衣霉素可增强0.6μmol/L顺铂抑制人鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2的集落克隆形成的作用。3μmol/L衣霉素诱导CNE-1、CNE-2细胞48 h的凋亡率分别为8.89%、8.67%。3μmol/L衣霉素与6μmol/L顺铂联合刺激人鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2 48 h的凋亡率分别为37.02%、32.25%,分别高于顺铂本身诱导的凋亡率7.25%、6.36%。促进凋亡蛋白Bax的表达联合用药组高于单独用药组,抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达联合用药组低于单独用药组。衣霉素上调GRP-78的表达以及增强联合用药组caspase-3的活性。结论衣霉素增强顺铂对人鼻咽癌细胞的增殖抑制作用,衣霉素增强顺铂诱导人鼻咽癌细胞的凋亡作用,其机制可能是通过引起过度的内质网应激反应以及增加caspase-3的活性。

高表达Mcl-1对衣霉素诱导胃腺癌细胞凋亡的影响

目的探讨Bcl-2蛋白家族中Mcl-1在衣霉素诱导胃腺癌细胞内质网应激性凋亡中的作用。方法采用流式细胞仪PI单染法检测细胞凋亡率;Westernblot检测Bcl-2、Mcl-1、Bcl-XL在衣霉素诱导胃腺癌细胞内质网应激状态下的表达;脂质体LipofectamineTM2000转染pcDNA3.0/Mcl-1质粒;Westernblot分别检测转染前后Mcl-1蛋白的表达水平变化。结果衣霉素诱导胃腺癌细胞凋亡具有剂量和时间依赖性,但两株细胞对衣霉素诱导的凋亡都不敏感,其中SGC-7901较BGC-823对衣霉素的耐受表现更明显。由于衣霉素诱导SGC-7901和BGC-823的凋亡与线粒体凋亡途径有关,检测Bcl-2蛋白家族Mcl-1在SGC-7901中有明显上调。通过转染质粒高表达Mcl-1蛋白,衣霉素诱导的凋亡有明显下降。结论Mcl-1在衣霉素诱导胃腺癌细胞凋亡中发挥重要的抑制作用。

衣霉素诱导胃癌细胞内质网应激介导的细胞凋亡

目的:观察衣霉素(tunicamycin,TM)诱导胃癌BGC-823细胞发生内质网应激介导的细胞凋亡.方法:以浓度为10mg/L的TM分别处理胃癌BGC-823细胞0、24、36和48h,AnnexinV-PI染色法检测细胞凋亡,应用RT-PCR、Westernblot检测CHOP的表达水平.结果:PI染色法检测凋亡细胞且随时间增加凋亡细胞增多,细胞凋亡率分别为0.0%、11.8%、16.3%、20.4%,具有时间依赖性(P<0.01).RT-PCR及Westernblot结果显示,CHOP的表达明显高于对照组,随着处理时间的增加表达量呈上调趋势,差异均有统计学意义(P<0.01).结论:TM可诱导胃癌细胞内质网应激介导的细胞凋亡.

衣霉素增强胃腺癌细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性

目的探讨衣霉素对TRAIL(TNF-related apoptosis-in-ducing ligand)诱导的胃腺癌细胞的凋亡的作用。方法PI染色流式细胞仪检测衣霉素与TRAIL作用于细胞前后细胞凋亡率的变化;双抗体流式细胞仪检测药物作用前后细胞表面TRAIL受体表达情况;W estern b lot检测药物作用前后caspase蛋白水平的变化;JC-1染色流式细胞仪检测药物作用前后线粒体膜电位的变化。结果衣霉素可明显增加TRAIL诱导的胃腺癌细胞凋亡率;衣霉素作用于胃腺癌细胞后,细胞表面TRAIL-R2表达明显增高;衣霉素促进TRAIL诱导的胃腺癌细胞caspase-3、PARP活化和线粒体膜电位减少。结论衣霉素可通过上调细胞表面TRAIL受体表达来增强胃腺癌细胞对TRAIL诱导的凋亡的敏感性,这种致敏性与激活caspase级联反应和线粒体膜电位减少有关。

衣霉素联合奥沙利铂对人口腔癌KB细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨衣霉素(tunicamycin,TM)联合奥沙利铂(oxaliplatin,L-OPH)对人口腔癌KB细胞增殖和凋亡的影响及其相关分子机制。方法 MTT法检测药物对KB细胞增殖抑制的影响;集落克隆形成法检测药物对KB细胞增殖的影响;碘化丙啶(propidium iodide,PI)单染流式细胞仪检测KB细胞凋亡;半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)活性检测试剂盒检测Caspase-3的活性变化;Western blot检测:Caspase-3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(Caspase-12)及葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)的表达。结果不同浓度衣霉素和(或)奥沙利铂对人口腔癌KB细胞具有增殖抑制作用,0.125μmol.L-1衣霉素处理人口腔癌KB细胞的24、48、72 h后细胞的存活率分别为90.37%、89.44%、88.91%。0.125μmol.L-1衣霉素与1μmol.L-1奥沙利铂联合使用对人口腔癌KB细胞24、48、72 h的存活率低于单用衣霉素、奥沙利铂组,分别为50.78%、37.77%、23.24%;0.25μmol.L-1衣霉素可增强奥沙利铂抑制人口腔癌细胞KB的集落克隆形成的作用。0.5μmol.L-1衣霉素诱导KB细胞48 h的凋亡率为8.3%。0.5μmol.L-1衣霉素与1μmol.L-1奥沙利铂联合刺激人口腔癌细胞KB 48h的凋亡率为50.3%,高于奥沙利铂本身诱导的凋亡率24.6%。衣霉素上调GRP-78的表达以及增强联合用药组Caspase-3的活性及表达。结论衣霉素具有增强L-OPH抑制人口腔癌细胞增殖的作用,并增强奥沙利铂诱导人口腔癌细胞的凋亡,其机制可能是通过引起过度的内质网应激反应以及增加Caspase-3的活性。

衣霉素对顺铂诱导人宫颈癌细胞凋亡的影响

目的探讨内质网应激在顺铂诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡中的作用。方法取人宫颈癌HeLa细胞作为研究对象,实验分为衣霉素(5mg/L)组、顺铂(6mg/L)组、衣霉素(5mg/L)与顺铂(6mg/L)联合给药组、阴性对照组,处理12h后采用MTT法观察细胞生长情况,Hoechst荧光染色检测细胞核形态的变化,免疫印迹法检测凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-4活化情况,间接免疫荧光法检测蛋白质二硫键异构酶(PDI)、磷酸化H2AX组蛋白(γ-H2AX)的表达变化。结果 MTT法检测显示衣霉素组、顺铂组、联合给药组和阴性对照组的细胞增殖抑制率分别为2.65%±2.71%、19.60%±4.34%、44.69%±7.07%、0,除衣霉素组与对照组外其余各组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。Hoechst染色显示,阴性对照组荧光较弱且均匀,顺铂组和联合给药组部分HeLa细胞核明显变小并呈现致密强荧光,部分细胞核呈碎块状,联合给药组核碎裂细胞比例(44.5%±5.1%)显著高于顺铂组(22.7%±3.9%,P<0.05)。免疫印迹法检测显示,顺铂组裂解Caspase-3、Caspase-4蛋白表达明显高于对照组和衣霉素组,但显著低于联合给药组(P<0.05)。间接免疫荧光法检测显示:顺铂组胞质内无PDI表达,荧光较弱;衣霉素组、顺铂组PDI蛋白均呈颗粒状,分布于核周,荧光较强;联合给药组大部分细胞内PDI呈现明显强荧光,荧光强度明显高于衣霉素组和顺铂组。阴性对照组和衣霉素组细胞核内未见γ-H2AX表达,而顺铂组与联合给药组均可见部分细胞核内出现明显绿色荧光,但两组无明显差异。结论衣霉素可增加内质网应激水平,促进顺铂诱导HeLa细胞发生凋亡。

衣霉素诱导L02细胞内质网应激模型的构建

内质网是细胞内蛋白质翻译、合成、折叠、修饰及成熟的主要场所。各种病理情况破坏内质网稳态，非折叠和错误折叠蛋白大量蓄积，触发内质网应激（endoplasmic reticulu mstress，ERS）。

衣霉素抑制细胞周期蛋白D1表达而强化TRAIL诱发凋亡的实验研究

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合衣霉素促甲状腺未分化癌细胞株凋亡的作用机制。方法通过单用TRAIL(TRAIL组)、衣霉素(衣霉素组)、联合用药组(TRAIL+衣霉素组)对多种甲状腺未分化癌细胞株进行作用,并以正常甲状腺上皮细胞株HTori-3作对照,利用流式细胞仪分析各组细胞周期变化及各组细胞凋亡状态;采用蛋白印迹杂交法检测衣霉素处理前后各组细胞细胞周期蛋白D1蛋白表达水平;利用微小RNA干扰技术及质粒转染技术探讨细胞周期蛋白D1对依霉素增敏TRAIL效应的影响。结果 TRAIL与衣霉素单用对甲状腺癌细胞均无明显杀伤作用,最高细胞凋亡率分别为10.68%、10.14%;联合用药组细胞凋亡率最大达54.77%,与TRAIL组和衣霉素组相比,具有统计学差异(P<0.05)。与对照组相比,衣霉素组和联合用药组细胞周期蛋白D1水平明显降低。微小RNA干扰可以特异性下调细胞周期蛋白D1进而增加ARO细胞对TRAIL的敏感性;而细胞周期蛋白D1过表达ARO细胞中细胞凋亡率降低22.7%。结论在体外单用TRAIL对甲状腺癌细胞增殖无明显抑制作用,衣霉素明显增加肿瘤细胞对TRAIL敏感性,其增敏机制至少部分与下调细胞周期蛋白D1水平有关。

SREBP-2沉默抑制衣霉素诱导的软骨细胞内质网应激

目的:探究固醇调节元件结合蛋白2(SREBP-2)对衣霉素诱导的软骨细胞内质网应激(ERS)的影响。方法:分离人正常软骨细胞和骨关节炎(OA)软骨细胞培养,衣霉素和SREBP-2 siRNA分别处理正常软骨细胞。24 h后,实时荧光定量PCR检测对微小RNA-185(miR-185)表达的影响,流式细胞术检测对细胞凋亡的影响,Western blot法检测对SREBP-2、CHOP、p-e IF2α和ATF4等ERS相关蛋白,Bcl-2、Bax和caspase-3等凋亡相关蛋白水平的影响;caspase-3活性试剂盒检测对细胞caspase-3活性的影响。结果:与对照组相比,OA组和衣霉素组SREBP-2表达增加,miR-185表达降低(P<0.05)。SREBP-2 siRNA转染可明显阻断衣霉素引起的miR-185降低(P<0.05)。miR-185过表达能够下调SREBP-2蛋白水平(P<0.05)。与对照组相比,OA组和衣霉素组CHOP、pe IF2α和ATF4的蛋白水平明显上调,Bcl-2表达下调,Bax和caspase-3表达增加(P<0.05);SREBP-2沉默处理则显著逆转上述蛋白表达(P<0.05)。细胞凋亡率与上述细胞凋亡相关蛋白的变化趋势一致(P<0.05)。与衣霉素组相比,SREBP-2 siRNA转染明显下调caspase-3活性,miR-185抑制则明显逆转上述作用(P<0.05)。结论:SREBP-2沉默可通过上调miR-185抑制衣霉素诱导的软骨细胞ERS和细胞凋亡。

衣霉素诱导螺旋神经节细胞内质网应激反应性细胞凋亡的研究

目的探讨衣霉素是否可诱导螺旋神经节细胞(spiral ganglion cell,SGCs)产生内质网应激反应性细胞凋亡及其发生机制。方法采用出生3d内的SD大鼠,取出螺旋神经节细胞体外培养3d后,加入不同浓度的衣霉素24h后,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞存活率并选取适当的诱导浓度;免疫组织化学鉴定培养的螺旋神经节细胞;hochest33258检测细胞核形态;Western blot检测GRP78/BiP、Caspase-12蛋白的表达。结果可以选取2μg/ml的衣霉素作为诱导浓度;培养的细胞经免疫组化抗神经丝蛋白抗体证实为SGCs;hochest33258核染色发现衣霉素诱导后出现凋亡样改变的细胞核;Western blot检测发现经衣霉素诱导后GRP78/BiP及Caspase-12蛋白在细胞内表达更多,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01)。结论衣霉素可以诱导大鼠离体SGCs产生内质网应激反应性细胞凋亡,且具有浓度依赖性;Caspase-12可能参与其凋亡机制的发生。

衣霉素诱导牙髓细胞内质网应激模型的建立

目的:用衣霉素诱导人牙髓细胞(dental pulp cells,DPCs),构建人DPCs内质网应激模型,为进一步探讨内质网应激介导人DPCs相关疾病的分子机制提供实验基础。方法:改良组织块法体外培养人DPCs;MTT法检测不同浓度衣霉素对人DPCs活性的影响;PCR检测人DPCs内质网应激关键分子的表达。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析。结果:随着衣霉素浓度的增加,人DPCs存活率逐渐下降。衣霉素诱导后,人DPCs内质网应激关键分子剪切x盒结合蛋白1(splicing x-box binding protein-1,s XBP1)、活化转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)、葡萄糖调节蛋白质78(glucose-regulated protein 78,GRP78)以及C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)m RNA表达水平升高。结论:衣霉素诱导人DPCs内质网应激发生,模型成功建立。

黄芩苷对衣霉素诱导的内质网应激性心肌细胞损伤的影响

目的:观察黄芩苷(BC)对衣霉素(Tm)诱导的心肌细胞内质网应激(ERS)损伤的作用。方法:原代新生SD大鼠心肌细胞培养,随机分为对照组、BC组、Tm组、Tm+BC组。用MTT比色法检测心肌细胞的存活率,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测心肌细胞损伤,原位缺口末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡,Western blot检测CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的水平。结果:①Tm能够损伤心肌细胞并呈现明显的时间依赖关系,各作用时间点心肌细胞的存活率差异显著(P<0.05)。Tm可显著增加ERS的CHOP表达及细胞凋亡的水平。②相对与Tm组,50μmol/L的BC能够显著抑制Tm对心肌细胞的损伤,使心肌细胞存活率增加(P<0.05)。同时,BC能够显著抑制Tm诱导的心肌ERS损伤,使CHOP表达及细胞凋亡的水平明显下调(P<0.05)。结论:BC可通过抑制Tm诱导的心肌ERS及心肌细胞的凋亡,达到保护受损心肌细胞的作用。

过量表达内质网小分子热激蛋白增强番茄的衣霉素抗性

真核细胞内质网腔内未折叠蛋白的过度积累会引起内质网胁迫(ER胁迫),继而激活未折叠蛋白应答(UPR)信号途径,诱导内质网定位的分子伴侣的大量表达(如BiP和calnexin等)。本工作将CaMV35S启动子驱动的内质网小分子热激蛋白基因(ER-sHSP)导入番茄,发现ER-sHSP的过量表达提高了转基因番茄整株对衣霉素的抗性。衣霉素处理使未转基因番茄中BiP和calnexin基因的表达迅速升高,转基因番茄中这两个基因的表达也有增加,但表达强度明显低于未转基因番茄。说明ER-sHSP能够减轻ER胁迫,并可能参与UPR信号转导途径。

肝宁方对衣霉素诱导肝细胞内质网应激生存信号分子的影响

目的研究肝宁方对衣霉素诱导的人肝细胞内质网应激条件下的生存信号分子的影响。方法将肝细胞分正常组、模型组、治疗组:正常组给予正常大鼠血清培养基培养48h,模型组在正常组基础上给予衣霉素诱导48h,治疗组在模型组基础上给予肝宁方继续培养24h。Western blot法检测各组蛋白ATF6、IRE1α、PERK、GRP78的表达量,分析蛋白表达差异。结果肝宁方治疗组与衣霉素诱导模型组比较,治疗组内质网应激信号分子的蛋白ATF6、IRE1α、PERK的表达明显减少(P<0.05);模型组与对照组比较,模型组GRP78、内质网应激信号分子的蛋白ATF6、IRE1α、PERK的表达明显增多(P<0.05)。结论衣霉素诱导正常肝细胞后可激活ATF6、IRE1α、PERK及GRP78蛋白的表达,肝宁方对衣霉素诱导内质网应激生存信号分子蛋白ATF6、IRE1α、PERK的表达及内质网应激标记蛋白均有抑制作用,从而达到阻止未折叠蛋白的错误激活、抑制肝细胞凋亡,对肝细胞具有保护作用。

Exendin-4减轻衣霉素诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

目的探讨Exendin-4对衣霉素诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响。方法原代培养HUVECs,不同浓度衣霉素(0～20μg/mL)处理HUVECs 16～24h,或用衣霉素(10μg/mL)干预18h后加用不同浓度Exendin-4(5～150nmol/L)预处理24h,MTT比色法检测细胞存活率,Hoechst/PI双染色荧光显微镜观察细胞凋亡率。结果随着衣霉素作用浓度的增加和时间的延长,HUVECs的存活率逐渐下降,呈现一定的量效和时效关系;Hoechst/PI双染色荧光显微镜观察也证实衣霉素能够诱导HUVECs凋亡;加用不同浓度Exendin-4预处理,内皮细胞存活率较单独衣霉素处理组逐渐升高;Hoechst/PI双染色荧光显微镜观察结果显示,100nmol/L的Exendin-4预处理HUVECs后,细胞凋亡率较衣霉素单独处理组减少40%(P<0.01)。结论衣霉素能诱导HUVECs凋亡,而Exendin-4可减少衣霉素诱导的HUVECs凋亡。

衣霉素诱导的内质网应激对胃癌细胞侵袭力的影响及机制

目的:探讨衣霉素(tunicamycin,TM)诱导的内质网应激,对胃癌细胞侵袭力的影响及机制.方法:以浓度为3mol/L的TM处理胃癌SGC7901细胞24 h,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,并应用Western blot检测pPERK和GSK-3蛋白Ser9位点的表达.结果:Transwell侵袭实验显示,TM处理胃癌SGC7901细胞24 h,细胞的侵袭性明显减弱.Western blot结果显示,相对于DMSO对照组,TM处理组pPERK蛋白的表达明显高于DMSO对照组,而Ser9-GSK-3蛋白的表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01).结论:TM诱导的内质网应激,通过激活GSK-3,降低胃癌细胞的侵袭力.